生物技术概论复习资料
《生物技术概论》课程总复习
2 根据目的基因转录产物（mRNA）鉴定重组子
Northern杂交 RT-PCR：
3 根据目的基因翻译产物（蛋白质、酶、多肽）鉴 定重组子Western
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基因工程的一般步骤(目的基因未知）
生物材料
mRN工合成 克隆载体
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制作过程
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•第三节 动物细胞工程
•1. 动物细胞、组织培养技术
•生长特点：贴壁生长，接触抑制 •细胞株 •细胞系
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• 2. 动物细胞融合技术
•动物细胞融合的途径： • 病毒诱导、化学诱导、电激诱导
•淋巴细胞杂交瘤产生单克隆抗体技术： • 单克隆抗体 • 单克隆抗体的制备过程
重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留 复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成 一个循环需2～4分钟， 2～3小时就能将待扩目的基因扩增放 大几百万倍。
电泳
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目的基因导入受体细胞
•方法：
•转化：通过生物学、物理学和化学等方法使外源裸露 DNA进入受体细胞，并整合到受体染色体组，在受体 内稳定维持和表达的过程。
•酶的制备技术(破碎细胞、溶剂抽提、离心分离、过滤 、浓缩、 干燥); •纯化与精制的方法（酶分子大小、电荷性质、专一性结合特 性）；
•第三节 酶分子的改造 •酶分子的修饰方法
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•第四节 酶的固定化技术
•固定化酶（细胞）的优点（不溶于水，便于分离；能回收、 反复使用；稳定性；生产自动化；但不会持续维持生产能力逐 渐提高） •酶固定化方法（载体结合、共价交联、包埋） •细胞固定化方法（直接法，包埋法，物理吸附法）
(高考生物)生物技术概论
（生物科技行业）生物技术概论第二章《基因工程》复习题一、选择题1.限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是（ D ）A 修复自己的遗传缺点B 促进自己的基因重组C 加强自己的核酸代谢D 提升自己的防守能力2.生物工程的上游技术是（ D ）A 基因工程及分别工程B 基因工程及发酵工程C 基因工程及细胞工程D 基因工程及蛋白质工程3.基因工程操作的三大基本元件是:(I 供体 II 受体 III 载体 IV 抗体 V 配体 )（A）A.I+II+IIIB.I+III+IVC.II+III+IVD.II+IV+V4.多聚接头（ Polylinker）指的是（ A ）A. 含有多种限制性内切酶辨别及切割次序的人工DNA 片段B.含有多种复制开端区的人工DNA 片段C.含有多种 SD 次序的人工DNA 片段D. 含有多种启动基因的人工DNA片段5.以下五个 DNA 片段中含有回文构造的是（D）6.若将含有 5' 尾端 4 碱基突出的外源DNA 片段插入到含有3' 尾端 4 碱基突出的载体质粒上，又一定保证连结地区的碱基对数目既不增添也不减少，则需用的工具酶是（ D ）IT4-DNA聚合酶IIKlenowIIIT4-DNA连结酶IV碱性磷酸单酯酶A.IIIB.I+IIIC.II+IIID.I+II+III7.以下有关系结反响的表达，错误的选项是（A ）A. 连结反响的最正确温度为37 ℃B.连结反响缓冲系统的甘油浓度应低于10%C.连结反响缓冲系统的ATP 浓度不可以高于1mMD. 连结酶往常应过度2-5 倍8.T 4 -DNA连结酶是经过形成磷酸二酯键将两段DNA 片段连结在一同，其底物的重点基团是（ D）A.2'-OH和5'–PB.2'-OH和3'-PC.3'-OH和5'–PD.5'-OH和3'-P9.载体的功能是(I 运送外源基因高效进入受体细胞II 为外源基因供给复制能力III 为外源基因供给整合能力)（ D ）A.IB.I+IIIC.II+IIID.I+II+III10.克隆菌扩增的目的是 (I 增殖外源基因拷贝 II 表达标记基因 III 表达外源基因 )（ D ）A.I+IIB.I+IIIC.II+IIID.I+II+III11. 以下各组用于外源基因表达的受体细胞及其特色的对应关系中，错误的选项是（C）A. 大肠杆菌－生殖快速B.枯草杆菌－分泌体制健全C.链霉菌－遗传稳固D. 酵母菌－表达产物拥有真核性12. 考斯质粒（ cosmid）是一种（B）A.天然质粒载体B.由λ-DNA的cos区与一质粒重组而成的载体C.拥有溶原性质的载体D.能在受体细胞内复制并包装的载体13.某一重组 DNA （ 6.2kb ）的载体部分有两个 SmaI酶切位点。
生物技术概论的期末复习总结范文
生物技术概论的期末复习总结范文第一章生物技术总论1.生物技术的应用包含哪些领域？答：生物技术现已广泛应用于化工、农业、食品、医药、环境、能源等众多领域，主要的应用有：（1）农业方面：改善农业生产、解决食品短缺，主要有：A.提高农作物产量及其品质①培育抗逆的作物优良品系；②植物种苗的工厂化生产；③提高粮食品质；④生物固氮，减少化肥使用量。
B.发展畜牧业生产①动物的大量快速无性繁殖;②培育动物的优良品系:采用基因打靶技术培育转基因克隆羊;利用乳腺生产药用蛋白的转基因羊;用于人体器官移植的转基因猪.（2）提高生命质量，延长人类寿命A.开发制造奇特而又贵重的新型药品:1977年，美国首先采用大肠杆菌生产了人类第一个基因工程药物--人生长激素释放抑制激素。
B疾病的预防和诊断:1998年初，美国食品和药物管理局（FDA）批准了首个艾滋病疫苗进入人体试验。
DNA探针，主要用来诊断遗传性疾病和传染性疾病。
C基因治疗:1990年9月，美国FAD批准了用AIJA(腺昔脱氨酶)基因治疗严重联合型免疫缺陷病(一种单基因遗传病)，并取得了较满意的结果。
标志着人类疾病基因治疗的开始。
D．人类基因组计划（HGP）:1986年美国生物学家诺贝尔奖获得者Dulbecco首先倡议，全世界的科学家联合起来从整体上研究人类的基因组，分析人类基因组的全部序列以获得人类基因所携带的全部遗传信息。
该项工作的完成，将使人们深入认识许多困扰人类的重大疾病的发病机理；阐明种族和民族的起源与演进；进一步揭示生命的奥秘。
1990启动，2003年完成，美、英、日、法、德、中六国共同参加。
这些领域的广泛应用必然带来经济上的巨大利益。
第二章基因工程1.基因工程的研究理论依据是什么？（1）不同基因具有相同的物质基础：地球上几乎所有的生物的基因都是具有一个遗传信息的DNA片段，而所有生物的DNA的组成和基本结构都是一样的。
因此，不同生物的基因原则是可以重组互换的。
《生物技术概论》课程总复习
固定化酶 (细胞)的优点、固定化方法
酶分子的改造技术
酶反应器基本类型、生物传感器
酶工程的概念和基本过程（酶的分类）
*
第一节 酶的发酵生产
1
提高酶产量的措施 诱导物 阻遏物 表面活性剂 产酶促进剂
2
第三节 酶分子的改造
4
酶分子的修饰方法
5
第二节 酶的分离纯化
1
酶的制备技术(破碎细胞、溶剂抽提、离心分离、过滤 、浓缩、干燥);
杂合体的鉴别与ห้องสมุดไป่ตู้选
完全杂合、核质异源 酶解（纤维素酶）、分离、洗涤、鉴定
*
2.3 人工种子 用人工种皮包被植物胚状体或芽、营养成分、激素以及其他成分的人工胶囊。
人工种子
解决有些植物结子困难、发芽率低、繁殖困难等问题
*
制作过程
胚乳与褐藻酸钠混合后，加入胚状体，滴入到硝酸钙或CaCl2中， 2０分钟后，表面聚合，形成人工种子
03
*
重组子的筛选
筛选方法： 根据载体选择标记基因筛选
抗性筛选、蓝白斑筛选 gus 基因、荧光素酶基因luc、绿色荧光蛋白基因gfp， 根据报告基因筛选转化子 根据形成噬菌斑筛选转化子
*
重组子的鉴定
根据重组DNA分子特征鉴定重组子 根据重组DNA分子大小鉴定重组子、根据重组DNA分子酶切图谱鉴定、PCR法、DNA杂交、应用DNA芯片鉴定重组子、根据DNA核苷酸序列鉴定重组子
基因进行定点诱变并分离其突变体，引入表达载体生产并纯化大量突变性蛋白质，分析其性质指导进一步分子设计，以最终获得所预期性质的分子
1
2
蛋白质组学（Proteomics）
“Proteome”最终概念是指：一个基因组，一种生物或一种细胞或组织所表达的全套蛋白质。
生物技术概论重点
1.什么是生物技术也称生物工程，是人们以现代生命科学为基础，结合先进的工程技术手段和其他基础科学的科学原理，按照预先的设计，改造生物体或加工生物原料，为人类生产出所需产品或达到某种目的的一门新兴的、综合性的学科。
我：广泛地定义为通过一些技术利用生物体的组织或细胞来制造或改良生物产品、改良植物或动物、为特殊的用途开发微生物。
生物系统微生物结构和功能的材料开发也包括其中。
2.什么是克隆克隆是指生物体通过体细胞进行的无性繁殖，以及由无性繁殖形成的基因型完全相同的后代个体组成的种群。
通常是利用生物技术由无性生殖产生与原个体有完全相同基因组织后代的过程。
3.克隆的一般步骤"分"是指分离制备合格的待操作的DNA，包括作为运载体的DNA和欲克隆的目的DNA；"切"是指用序列特异的限制性内切酶切开载体DNA，或者切出目的基因；"连"是指用DNA连接酶将目的DNA同载体DNA连接起来，形成重组的DNA分子；"转"是指通过特殊的方法将重组的DNA分子送入宿主细胞中进行复制和扩增；"选"则是从宿主群体中挑选出携带有重组DNA分子的个体。
我：提取目的基因，目的基因与运载体结合，将目的基因导入受体细胞，目的基因的检测和表达4.诺贝尔奖得主的主要贡献格里菲思：转换因子Beetle：一个基因一个酶Chase and Hershey：DNA的主要遗传载体,DNA是主要遗传物质沃森和克里克：DNA双螺旋Kornberg:DNA复制Jacob-Monod 乳糖操纵子尼伦伯格：遗传密码史密斯：DNA的限制酶贝尔格＆科恩：1stcloning案例桑格和吉尔伯特：DNA测序罗伯特：英国。
Interupted基因5.遗传材料双链DNA:折叠成染色体，多态性，拓扑的（线形、圆形、超螺旋形）单链DNA：通常在病毒中单链RNA：在细胞中不同分子有不同功能，也许是一些病毒的基因组双链RNA：某些病毒的基因组6.附加型DNA:非染色体DNA，质粒体（线粒体DNA，叶绿体DNA，微体细胞DNA，质粒）7.DNA是双链的碱基ATCG RNA单链AUCG8.什么是质粒质粒是独立于染色体之外能自我复制的环状双链DNA分子。
生物技术概论复习题
生物技术概论复习题一、名词解释1、细胞融合:两个或多个细胞相互接触后,其细胞膜发生分子重排,导致细胞合并、染色体等遗传物质重组的过程。
P552、干细胞:动物胚胎及某些器官中具有自我复制和多向分化潜能的原始细胞,是重建、修复病损或衰老组织、器官功能的理想种子细胞。
P813、原生质体:脱去细胞壁的细胞叫原生质体P604、目的基因:在基因工程设计和操作中,被用于基因重组、改变受体细胞性状和获得预期表达产物的基因。
P375、固定化酶技术:将酶素服在特殊的相上,让它既保持酶的特有活性,又能长期稳定反复使用,同时又可以实现生产工艺的连续化和自动化。
方法大致可以分为三类,即载体结合法、共价交联法和包埋法。
P1266、工程菌:用基因工程的方法,使外源基因得到高效表达的菌类细胞株系一般称为“工程菌”。
P1147、转化:通过生物学、物理学和化学等方法使外源裸露DNA进入受体细胞,并在受体细胞内稳定维持和表达的过程。
P438、胚胎分割;借助显微操作技术或徒手操作方法切割早期胚胎成二、四等多等份再移植给受体母畜,从而获得同卵双胎或多胎的生物学新技术。
1739、限制性内切核酸酶:是一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列,并在合适的反应条件下使每条链一定位点上的磷酸二脂键断开,产生具有5’-磷酸基(-P)和3’-羧酸(-OH)的DNA片段的内切脱氧核糖核酸酶。
P2110、SCP :单细胞蛋白,生产蛋白质的生物大都是单细胞或丝状微生物个体,而不是多细胞复杂结构的生物。
P18411、外植体:即能被诱发产生无性增殖系的器官或组织切段。
P5612、生物传感器:用生物活性物质做敏感器件,配以适当的换能器所构成的分析工具。
P13613、基因芯片:利用反相杂交原理,使用固定化的的探针阵列样品杂交,通过荧光扫描和计算机分析,获得样品中大量基因及表达信息的一种高通量生物信息分析技术。
又称为DNA 芯片P49 14、脱毒植物:用脱毒剂除去寄生病毒的植物。
生物技术概论复习重点
1、生物技术：生物技术有时也称生物工程，是指人们以现代生命科学为基础，结合其他基础学科的科学原理，采用先进的工程技术手段，按照预先的设计改造生命体或加工生物原料，为人类生产出所需的产品或达到某种目的。
2、基因工程：（DNA体外重组技术）应用人工的方法把生物的遗传物质（通常是DNA）分离出来，在体外进行切割、拼接和重组，然后将重组DNA导入某种宿主细胞或个体，从而改变它们的遗传品性，有时还使新的遗传信息在新的宿主细胞或个体中大量表达已获得基因产物。
3、细胞工程：是指以细胞为基本单位，在体外进行培养、繁殖，或人为地使细胞的某些生物学特性按人们的意愿发生改变，从而达到改良生物品种或创造新品种；或加速繁育动植物个体；或获得某些有用的物质的过程。
（包括动植物细胞的体外培养技术、细胞融合技术、细胞器移植技术、克隆技术和干细技术等）4、发酵工程：利用微生物生长速度快、生长条件简单以及代谢过程特殊等特点，在适合的条件下，通过现代化工程技术手段，由微生物的某种特定功能生产出人类所需的产品。
5、酶工程：（包括酶的固定化技术、酶反应器的设计及应用、酶制剂的制备）是利用酶、细胞器或细胞所具有的特异催化功能，对酶进行修饰改造，并借助生物反应器来生产人类所需产品的一项技术。
6、蛋白质工程：是指在基因工程的基础上，结合蛋白质结晶学、计算机辅助设计和蛋白质化学等的学科基础知识，通过对基因的人工定向改造等手段，对蛋白质进行修饰、改造和拼接以生产能满足人类需要的新型蛋白质的技术。
7、连接酶：能够催化双链DNA片段3’、5’末端形成磷酸二酯键的酶。
8、目的基因：在基因工程设计和操作中，被用于基因重组、改变受体细胞性状和获得预期表达产物的基因成为目的基因。
9、细菌质粒载体：是存在于细菌细胞质中的一类独立位于染色体外的能够进行自主复制的遗传成分。
10、噬菌体载体：把专门感染了细菌的病毒称为噬菌体载体，由DNA（头部）和蛋白质（尾部）组成。
生物技术概论期末复习资料
生物技术概论复习资料第二章基因工程1、基因工程 按照人们的愿望，进行严密的设计，通过体外DNA重组，和转基因技术，有目的地改造生物种性，使现有的物种在较短的时间内趋于完善，创造出符合人们意愿的产品。
是在分子水平上对基因进行操作的复杂技术。
是将外源基因（通过体外重组后导入受体细胞内，使这个基因能在受体细胞内复制、转录、翻译表达的操作）2. 基因工程研究的理论依据（1）不同基因具有相同的物质基础。
（2）基因是可以切割的。
（3）基因是可以转移的。
（4）多肽与基因之间存在对应关系。
（5）遗传密码是通用的。
（6）基因可以通过复制把遗传信息传递给下一代。
3.基因工程基本操作路线p164.DNA变性 当溶解在溶液中的双链DNA处于较高温度时,，氢键断开而解链成单链DNA，此过程称为DNA变性。
5.DNA的复性在高温变性的DNA逐渐冷却时，分开的两条单链DNA有重新组合成双链DNA的过程6.获得目的DNA片段的主要途径（1）限制性内切核酸酶酶切法。
（2）PCR扩增法。
（3）DNA片段的化学合成。
7.限制性内切核酸酶是一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列，并在合适的反应条件下使每条链一定位点上的磷酸二酯键断开，产生具有5‘-磷酸基（-P）和3'-羧基（-OH）片段的内切脱氧核糖核酸酶8.识别序列；限制性内切核酸酶早双链DNA上能识别的核苷酸序列一般由4-6个核苷酸对组成9. PCR的基本原理PCR反应是模仿细胞内发生的DNA复制过程进行的 以DNA互补链聚合反应为基础 通过靶DNA变性、引物与模板DNA一侧的互补序列复性杂交、耐热性DNA聚合酶催化引物延伸等过程的多次循环 产生待扩增的特异性DNA 片段。
10.DNA连接酶催化双链DNA 或RNA中并列的5′-磷酸和3′-羟基之间形成磷酸二酯键的酶。
11. DNA连接酶化学合成（1）合成引物（2）合成DNA寡核苷酸连杆（3）合成基因片段12.基因克隆载体 能够承载外源基因 并将其带入受体细胞得以稳定维持的DNA分子。
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一、名词解释1.代换系：是指受体材料的染色体被外源染色体取代后形成的个体。
2.基因工程：是根据预先设计要求，借助实验室技术，将某种生物的基因转移到另一个体中，使后者定向获得新的遗传性状或者生产某种产品。
3.遗传标记：是指可遗传的、特定的、易于识别的生物体特性。
4.细胞全能性：是指生物体的每个细胞都具有该物种的全部遗传信息，离体细胞在一定的培养条件下具有发育成完整个体的能力。
5.不对称杂交：在原生质体融合前，利用X 射线等处理其中的一个亲本，使其核基因组失活，然后用这种失活的原生质体与正常或者经过化学处理的原生质体进行融合。
这种原生体融合方式叫不对称杂交。
6.异附加系：是指添加了外源染色体的个体。
7.遗传工程：是根据预先设计要求，借助实验技术，将某种生物的基因或者基因组转移到另一个体中，使后者定向获得新的遗传性状或者生产某种产品。
8.细胞学标记：是指某个体或者物种特有的染色体数目、核型、带型特性。
9.外植体：是指从特定生物体上切取下来、用于组织培养的离体材料。
10.不对称杂种：在不对称杂交交时，供体原生质体只给受体原生质体提供其基因组中的少量染色体或染色体片段，并与受体原生质体的完整基因组染色体共存。
这种不对称杂交所产生的融合细胞，叫不对称杂种。
11.共抑制：当受体被导入一个与受体内某基因同源的基因时，导入的基因及受体中与外源同源的基因的表达都可能减弱的现象。
12.遗传累赘：当一条载有目的基因的外源染色体导入受体后，受体往往表现出供体亲本的某些不良特性的现象。
13. 愈伤组织：是指在培养或自然条件下植物细胞经脱分化不断增值形成的由薄壁细胞组成的不定组织。
14.染色体组：维持某一物种生命活动所需的最低数目的一套染色体，也是该物种发生数目变异时所所需的最低数的一套染色体。
15.原生质体：是指去掉纤维素外壁的具有生活力的裸露细胞。
二、简答题1. 请你说明互补选择(杂种体细胞选择方法)的原理。
互补选择法是利用天然或者人工诱发的营养缺陷型及抗性突变细胞对异核体进行选择。
以烟草双突变体杂种体细胞选择为例，该双突变体（硝酸还原酶缺陷突变、链霉素抗性突变）在含有还原态氮和链霉素的培养基上能正常生长。
如果利用这个双突变体的原生质体与另一无选择性标记的亲本原生质体融合，融合产物置于加有链霉素、但不加还原态氮的培养基上。
双突变体的同核体由于缺乏硝酸还原酶不能正常生长；另一亲本的同核体由于不抗链霉素，也不能生长；只有同时含有双方遗传物质的异核体才能正常生长，从而可达到筛选异核体的目的。
2. 请你用一简单的示图说明分子标记辅助选择的原理。
3. 请你简要说明，目前基因工程所面临的主要问题。
b. 由于插入位点不适合或者共抑制等原因，目的基因在受体中的，特别是小麦等多倍体五种中的表达能力下降，甚至失去表达能力；c. 目前安全选择标记和无标记转化技术的应用还有限，转基因安全性仍然不能忽视；d. 目的基因随机整合到受体中，一方面可能引起目的基因表达下降，另一方面也可能导致受体本身的基因发生突变。
4. 请你说明α-互补筛选(筛选阳性克隆)的原理。
a.当载体与目标基因重组时，可能获得载体与目标基因的重组分子或者没有发生重组的空载体。
b.利用载体与目标基因重组反应产物转化宿主细胞，主要会出现三种情况，即重组分子进入宿主、空载体进入宿主、没有获得重组分子和空载体分子的宿主细胞。
c.在载体中连接上β-半乳糖苷酶基因的调控序列、N-端146个氨基酸的编码序列和选择性标记基因（如：氨苄青霉素抗性基因）。
转化宿主细胞为含有β-半乳糖苷酶基因C端序列的宿主细胞，将转化细胞反应液至于含有IPTG/X-gal和氨苄青霉素的培养基上培养。
d.没有获得重组分子和空载体分子的宿主细胞不能在该培养基上生长；含有空载体的宿主细胞可通过载体产生β-半乳糖苷酶的N-端序列，也可通过宿主细胞产生β-半乳糖苷酶的C-端序列。
这两种β-半乳糖苷酶序列可互补，形成有活性的β-半乳糖苷酶，从而降解培养基中的IPTG/X-gal，使菌落呈蓝色。
当外源基因插入到β-半乳糖苷酶基因的调控序列、N-端146个氨基酸的编码序列之间（构建载体时，在此设计了多克隆位点）时，破坏此酶N-端的阅读框，从而不能行有活性的β-半乳糖苷酶，菌落呈白色。
5. 请你简单说明分子标记辅助选择的基本条件。
a．分子标记与目标基因共分离或者紧密连锁（遗传距离＜5厘摩尔根)；b. 具有快捷、简单的DNA自动化提取和检测方法，检测标记最好是PCR标记；c. 检测技术具有较高的重复性、经济适用；d. 有一套能准确进行数据分析的计算机软件。
6. 请你说明常用的基因工程载体必须具备那些条件？a．选择性标记，如四环素抗性基因等b.多克隆位点；c.易于回收；d.在宿主细胞中能自我复制，稳定遗传保存。
7. 请你简要说明分子标记的主要共同特点.a.直接以DNA的形式表现，不受生物体的组织、器官、发育时期的限制，不受季节、环境条件的限制，不存在是否表达的问题；b.数量多，遍及整个基因组，检测为点近乎无限；c.多态性高，自然存在许多等位变异，不需要专门创造特殊的遗传材料；d.表现“中性”，即不影响目标性状的表达，与不良性状无必然的联系；e.有许多分子标记表现为共线性，能够辨别纯合基因型和杂合基因型，可提供完整的遗传信息。
8.请你简要说明DNA电击转化的基本原理。
在电击后，细胞膜上形成一些可逆的微孔，这些微孔直径约30nm，一般需要几分钟才能恢复，DNA、RNA或其它大分子物质可以通过细胞膜上的这些微孔进入细胞。
在电击过程中，如果细胞核刚好位于电极区域，则DNA还可以穿过核膜进入细胞核，从而躲过细胞质中的核酸酶的作用、并通过DNA重组插入受体基因组中形成转化体。
9.请你举例说明融合细胞的生长差异选择原理。
利用亲本双方原生质体在特殊培养条件下生长能力的差异设计一种只能使杂种细胞生长的培养基。
如拟矮牵牛原生质体在MS培养基上能分裂成小细胞团，但不能进一步形成愈伤组织，其生长不受1mg/L的放线菌素-D的抑制；矮牵牛原生质体在MS培养基上能分裂形成愈伤，当在上述浓度的放线菌素-D的培养基上不能分裂。
将两者融合的产物培养在MS加1mg/L的放线菌素-D的培养基上，结果只有同时具有双亲基因组的杂种细胞才能长成愈伤组织并分化发育成植株。
10. 请你简要说明RFLP标记的主要原理。
特定生物类型的基因组DNA经限制性内切酶消化后，产生数万条DNA片段，通过琼脂糖凝胶电泳将这些片段按大小顺序分离开来。
然后将它们按原来的顺序和位置转移到易于操作的尼龙膜或醋酸纤维膜上。
用同位素或非放射性物质标记的DNA作为探针，与膜上的DNA分子杂交。
若某一位置上的DNA酶切片段与探针相似，或者说同源程度较高，则标记号的探针就结合于这个位置上。
经放射性自显影或酶学检测，即可显示出不同材料对该探针的限制性酶切片段多态性。
三、实验设计题1.某人获得了小麦的特定单体和二体附加系，并希望利用这些材料培育异代换系。
请根据他具有的材料，设计一个培育异代换系的实验方案（可用示图表示）。
2. 请你设计一个鉴定小麦白粉病抗性候选基因重组体的实验方案（可用示图表示）。
a.将该候选基因连接到质粒载体pUC19 的多克隆位点，形成重组分子；b.以含有β-半乳糖苷酶基因C端序列的大肠杆菌细胞为宿主细胞，利用重组产物转化宿主细胞。
c.将转化产物置于含有IPTG/X-gal和氨苄青霉素的培养基上培养。
d.经过一段时间的培养，从中挑选白色菌落，根据a-互补选择的原理，白色菌落为含有目的基因的阳性克隆。
3. 请你设计一个培育小麦—簇毛麦异附加系的实验方案（可用示图表示）。
4.请你设计一个筛选杂种体细胞的实验体系。
利用在特定培养基上生长分化能力有差异的两种原生质体，如拟矮牵牛原生质体和矮牵牛原生质体，前者在MS 培养基上能分裂成小细胞团、不受放线菌素-D抑制、但不能进一步形成愈伤组织，后者在MS 培养基能形成愈伤组织，但受放线菌素-D抑制。
当这两种原生质体融合时，可设计如下实验体系筛选杂种体细胞：将两者的融合产物培养在加1mg/L 的放线菌素-D的MS 培养基上，结果只有具备双亲基因组的杂种细胞才能长成愈伤组织并分化发育成植株，从而达到筛选杂种体细胞的目的。
5.请你设计一个以小麦幼胚为材料、诱导愈伤组织的实验方案。
选择适宜土地种植、并精心管理实验材料。
取开花后10-12天幼穗，剥出幼嫩种子、置于干净的培养皿中。
在4℃低温预处理48小时。
之后，在无菌操作台上，用9%-10%的次录酸钙消毒30分钟，然后用无菌水清洗3次。
利用解剖刀小心剥出幼胚，置于已配好的加入10mg/L IAA（吲哚乙酸）的MS培养基上，幼胚正面朝上。
利用玻璃纸密封盛有培养基和幼胚的培养皿，将培养皿置于25℃、2000Lx光照、以12小时为光暗交替培养条件，恒温培养直，至长出幼苗或所需的愈伤组织。
6.请你设计一个分离和纯化水稻原生质体的实验方案。
在10cm培养皿中加入10-15mL原生质体分离酶液和大约1-1.5g除去培养液的悬浮细胞。
石蜡封口。
在25℃暗培养条件下，以20r/min振摇4h。
在一个漏斗中放上孔径为30µm的滤网，让保温后的分离酶液通过滤网收集到离心管中。
以600r/min离心5min，去除上清液，将沉淀用原生质体洗液CPW 6M洗涤2次，每次用600r/min 离心3min，去除上清液。
用1-2mLCPW 6M重新悬浮原生质体。
用吸管在离心管底部缓慢注入0.6mol/L的蔗糖溶液5mL。
以500r/min离心10min。
原生质体漂浮在蔗糖溶液和CPW 6M液的界面之间。
用吸管收集原生质体，加5mL CPW 6M液稀释。
600r/min离心3min，去除上清液。
加入PEG反应基液，使原生质体密度为2x105个/mL。
按10µg/mL质粒DNA和50µg/mL小牛胸腺DNA 的浓度加入DNA。
加入DNA之前可以将原生质体置45℃水浴中热击5min，再在水浴中迅速冷却。
逐步加入1/2体积的40%的PEC，每次加入后温和摇匀。
6000分步加入5倍体积的CPW 6M，每次间隔1-2min。
以600r/min离心5min，去除上清液。
用CPW 6M 重新悬浮原生质体，计数，去除上清液，准备培养。
四、填空题1.目的基因、工具酶、载体、宿主细胞2.5.5-5.8、250C、123.平末端、粘性末端4.125.形态标记、细胞学标记、生化标记6.染色体组操作、单条染色体操作、染色体片段操作7.果胶酶、纤维素酶8. 叶片、愈伤组织9.基因转化、农杆菌介导转化、电击转化、PEG介导转化10.致癌区、毒性区、致癌区、毒性区11.SSR、STS、EST12.42。