氯霉素眼药水的高效液相色谱分析法.ppt

三 操作方法
(三) 内标法测定氯霉素的含量
2. 样品含量测定 精密吸取眼药水适量 (约相当于氯霉素500 mg，标示量为2.5 mg/ mL)，
置l0 mL容量瓶中，并加入对硝基苯酚的贮备液2.5 mL，用甲醇稀释至刻度， 摇匀，进样20 μL，得色谱图。按下式计算标示量的百分含量
三 操作方法
(四) 外标法测定氯霉素的含量 1. 标准曲线的绘制
原料名称
规格
对硝基苯酚
AR
氯霉素
AR
甲醇
GR
氯霉素眼药水
普通市售
用量 200 mg 100 mg 适量
1支
三实验原理
1. 内标法 其方法是精密称取一定量的样品和内标物，制成适当溶液后进样分析，根据样品和
内标物的重量及其相应的峰面积（或峰高），求出某组分的含量。原理如下： 根据物质的重量与其峰面积（或峰高）成正比，有
分别吸取氯霉素标准贮备液1、2、3、4、5 mL，置5个l0 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，各进样20 μL，以峰面 积或峰高对浓度作图，得标准曲线。
三 操作方法
(四) 外标法测定氯霉素的含量 2. 样品的测定
精密吸取眼药水适量(约相当于氯霉素2.5 mg)，置l0 mL容量瓶中，用 甲醇稀释至刻度，摇匀，进样20 μL，得色谱图，根据峰面积或峰高从标准
四 操作方法
（一）实验条件 色谱仪 高效液相色谱仪 色谱柱 反相C18柱 温度 室温 流动相 内标法 甲醇: 水(60: 40)
外标法 甲醇: 水(80: 20) 流速 0.7 mL/min 检测器 UV检测器
三 操作方法
（二）标准贮备液的制备 1. 1mg / mL氯霉素标准贮备液的配制
精密称取氯霉素约100 mg置100 mL容量瓶中，以甲醇溶解，并稀释至刻 度，摇匀，即得。 2. 2mg/ mL对硝基苯酚 (内标)标准贮备液的配制
在绝对校正因子法( )中：
在相对校正因子（ ）法中：
当峰形对称，峰窄时还可以用峰高代替峰面积来定量。 内标法可以消除仪器与操作或制备样本时带来的误差。
三 实验原理
2. 外标法 又称校正法或定量进样法。该法要求能准确地定量进样。其方法
是配制一系列已知浓度的标准液，在同一操作条件下，取相同量注入 色谱仪，测量其峰面积(或峰高)，作峰面积(或峰高)与浓度的标准曲 线。然后在相同条件下，注入同量样品溶液，测量待测组分的峰面积( 或峰高)，根据标准曲线，计算样品中待测组分的浓度。
曲线上查得相应的浓度，并计算标示量的百分含量。
四 注意事项
1. HPLC使用的流动相必须经滤膜过滤及脱气处理。 2. 严格防止气泡进入色谱系统。 3. 色谱分析完成后，必须马上清洗柱子。本实验的流动相中含有醋酸盐缓冲液， 故测定完毕后，要先用水冲洗柱子至基线平稳（约0~60min以上），再用含水的 甲醇溶液或纯甲醇溶液冲洗30~60min。 4. 标准贮备液的配制应精密称定重量，先用少量甲醇溶解后，再用甲醇稀释至刻 度，否则因部分未溶导致浓度不准确。
五 思考题
1. 怎样选择流动相？ 2. 内标物应具备哪些条件？ 3. 变换溶剂时，直接将一种互不相溶的溶剂替换前一种溶剂，对色谱行为有 何影响?如何消除这种影响?
谢 谢！
氯霉素眼药水 高效液相色谱分析法
课程：药品检验技术
一 实验目的
1.学习掌握内标法测定组分含量的原理与操作方法； 2.熟悉外标法在测定组分的含量中的应用； 3.学习高效液相色谱仪的结构及正确使用方法； 4.了解氯霉素眼药水的含量测定方法。
二仪器与试药
1.仪器
容量瓶，移液管，高效液相色谱仪。
2. 试药
精密称取对硝基苯酚约200mg置l00 mL量ห้องสมุดไป่ตู้中，以甲醇溶解，并稀释至 刻度，摇匀，即得。
三 操作方法
(三) 内标法测定氯霉素的含量 1. 相对校正因子的测定
分别精密加入氯霉素标准贮备液1，2，3，4，5 mL，置5个l0 mL容量 瓶中，再分别精密吸取对硝基苯酚标准贮备液各2.5 mL用甲醇稀释至刻度， 摇匀。待色谱仪基线平稳后，分别进样20 μL，得色谱图。测量对硝基苯酚 及氯霉素峰面积或峰高，按公式计算相对校正因子，本实验中，由于峰形较 窄，可采用峰高法。