维生素E含量测定方法
实验六 维生素E的含量测定-液相色谱
实验六高效液相色谱法分离和测定α-ＶE一、实验目的1. 了解高效液相色谱仪的基本结构，掌握液相色谱仪的基本操作方法。
2. 掌握液相色谱分析的定性及外标定量方法。
二、原理1. 高效液相色谱的特点高压泵输送流动相，梯度洗脱，可在柱后直接检测流出液成分，通过改变溶剂极性或强度进而改变色谱柱效能，分离选择性和组分的容量因子，实现改善色谱系统分离度的目的。
2. 高效液相色谱仪(1) 高压输液系统，是提供足够恒定的高压，使流动相以稳定的流量快速渗透通过固定相。
(2) 进样系统，一般采用旋转式六通阀在高压下进样。
(3) 分离系统，在液相色谱柱中完成。
(4) 检测系统，液相色谱常见检测器有：紫外光度检测器，示差折光检测器、荧光检测器电化学检测器。
3. 高效液相色谱的类型根据固定相和分离机理的不同，高效液相色谱如下几种类型(1) 液—固吸附色谱：基于各组分在固体吸附剂表面上具有不同吸附能力而进行分离。
(2) 液—液分配色谱：组分在两相间经过反复多次分配各组分间产生差速迁移，从而实现分离。
(3) 化学键合相色谱：通过共价键将有机固定液结合到硅胶载体表面得到各种性能的固定相。
(4) 离子交换色谱：离子交换树脂上可电离的离子与流动相中带相同电荷的组分离子进行可逆交换，由于亲和力的不同彼此分离。
(5) 离子色谱：用离交换树酯作为固定相，电解质溶液为流动相，用电导检测器检测。
(6) 凝胶色谱：基于试样中各组分分子的大小和形状不同来实现分离。
4. 实验原理反向色谱与正相色谱组成相反，是以非极性或弱极性的固定液制成的固定相，以极性或相对强的极性溶剂作为流动相组成的液—液分配色谱。
但目前多是采用化学反应的方法将非极性或弱极性的有机物分子键合到载体表面，制成键合相的固定相，所以也称键合相色谱。
这种色谱的分离机理比较复杂，一般认为是液—固吸附和液—液分配并存。
在反向HPLC中常用的键合相有十八烷基硅烷(Ｃ18）、辛基硅烷(Ｃ8)氰基硅烷、氨基硅烷等。
维生素E的含量检验方法
维生素E的含量检验方法一、目的：建立维生素E含量标准检验方法，保证分析结果的准确性。
二、依据：GB/T5009.82-2003三、范围：本规程适用于本公司维生素E含量检验操作四、职责：质量检验员对本标准的实施负责五、正文：1、试制和溶液1.1 无水乙醚：:不含有过氧化物。
1.1.1 过氧化物检查方法:用5 mL乙醚加1mL10%碘化钾溶液，振摇1 min，如有过氧化物则放出游离碘，水层呈黄色或加4滴0.5%淀粉溶液，水层呈蓝色。
该乙醚需处理后使用。
1.1.2 去除过氧化物的方法：重蒸乙醚时，瓶中放人纯铁丝或铁末少许。
弃去10%初馏液和10%残馏液。
1.2 无水乙醇：不得含有醛类物质1.2.1 检查方法：取2mL银氨溶液于试管中，加人少量乙醇，摇匀，再加人氢氧化钠溶液，加热，放置冷却后，若有银镜反应则表示乙醇中有醛。
1.2.2 脱醛方法：取2g硝酸银溶于少量水中。
取4g氢氧化钠溶于温乙醇中。
将两者倾人1L乙醇中，振摇后，放置暗处两天(不时摇动，促进反应)，经过滤，置蒸馏瓶中蒸馏，弃去初蒸出的50 mL。
当乙醇中含醛较多时，硝酸银用量适当增加。
1.3 无水硫酸钠。
1.4 甲醇：重蒸后使用。
1.5 重蒸水：水中加少量高锰酸钾，临用前蒸馏。
1.6 抗坏血酸溶液(100 g/L)：临用前配制。
1.7 氢氧化钾溶液(1+1),1.8 氢氧化钠溶液(100 g/1)。
1.9 硝酸银溶液((50 g/L)o1.10 银氨溶液：加氨水至硝酸银溶液(3. 9)中，直至生成的沉淀重新溶解为止，再加氢氧化钠溶液(3.8)数滴，如发生沉淀，再加氨水直至溶解。
1.11 维生素E标准液：a一生育酚(纯度95%)>Y一生育酚(950o),S一生育酚(纯度95%)。
用脱醛乙醇分别溶解以上三种维生素E标准品，使其浓度大约为1 mL 相当于1 mg。
临用前用紫外分光光度计分别标定此三种维生素E溶液的准确浓度。
1. 12 内标溶液：称取苯并「e」芘(纯度98%)，用脱醛乙醇配制成每1 mL相当10 ug苯并「e」芘的内标溶液。
简述铈量法测定维生素e的原理
简述铈量法测定维生素e的原理摘要：1.铈量法测定维生素E的原理简介2.维生素E测定方法的背景和重要性3.铈量法的实验步骤和操作流程4.铈量法测定维生素E的优点和局限性5.维生素E测定在营养学和医学领域的应用正文：铈量法测定维生素E的原理：维生素E是一种脂溶性维生素，对人体健康具有重要作用。
铈量法是一种灵敏、准确地测定维生素E含量的方法。
本文将简要介绍铈量法测定维生素E的原理、实验步骤、优点及局限性，并在最后探讨维生素E测定在营养学和医学领域的应用。
维生素E测定方法的背景和重要性：维生素E在食品、饲料和制药等领域具有广泛应用。
然而，天然维生素E易受热、光和氧的影响，使其含量测定具有一定难度。
为保证产品质量和安全，研究维生素E的准确测定方法具有重要意义。
铈量法作为一种高效、可靠的维生素E测定方法，得到了广泛关注。
铈量法测定维生素E的原理：铈量法是基于维生素E还原性强、能与铈离子发生氧化还原反应的特性而设计的。
在铈量法中，维生素E与铈离子在酸性条件下反应，生成维生素E醇和铈醇。
通过测定反应前后铈离子的浓度变化，即可计算出维生素E的含量。
铈量法的实验步骤和操作流程：首先，将样品处理成均匀的溶液，然后加入适量的铈离子溶液，并调节溶液酸度。
接下来，将混合溶液在一定温度下反应一段时间。
反应完成后，用标准溶液滴定过量的铈离子，根据铈离子消耗量计算维生素E含量。
铈量法测定维生素E的优点和局限性：铈量法具有较高的灵敏度和准确度，能测定不同来源的维生素E含量。
此外，该方法操作简便、成本较低。
然而，铈量法也存在一定的局限性，如受样品基质、溶液酸度等因素影响，且不能测定维生素E类似物。
维生素E测定在营养学和医学领域的应用：维生素E测定方法在食品、饲料、制药等行业有广泛应用。
通过准确测定维生素E含量，有助于确保产品质量和安全。
此外，维生素E测定在医学领域也有重要意义，有助于评估人体维生素E摄入情况和研究维生素E与疾病的关系。
维生素e的测定方法
维生素e的测定方法
维生素E是一种重要的脂溶性维生素，具有抗氧化、抗衰老等作用。
对于维生素E的测定，目前主要有以下方法：
1.高效液相色谱法：该方法通过色谱分离、检测维生素E的吸收峰来确定维生素E的含量。
该方法操作简便、准确度高、灵敏度较好，适用于各种样品的测定。
2.比色法：该方法将维生素E与少量2,2'-二联苯酚在酸性条件下反应，生成具有紫色的吸收峰，根据吸光度测定维生素E的含量。
该方法操作简单、易于推广，但是因为受到其他物质的干扰较大，准确度较低。
3.氧化法：该方法将样品与氧气或过氧化氢反应，将维生素E氧化为各自二烯酸，再通过比色法或荧光法测定各自二烯酸的含量来确定维生素E的含量。
该方法准确度高、灵敏度好，但是操作相对复杂，需要一定的实验技巧。
总之，不同的测定方法适用于不同的样品和实验要求，应根据具体情况选择合适的方法进行测定。
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项目：气相色谱法测定维生素E软胶囊的含量
w 1 标示量%=Cx实验数据的记录与计算 2.原始数据记录表
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二、 任务实施
（三）. 实验结果与检验报告
1. 采用内标法时，通常配制相当于80%、100%和120%的对 照品溶液，加人规定量的内标溶液，配成3 种不同浓度的溶 液，分别至少进样2 次，计算平均校正因子，其相对标准偏 差应不大于2. 0 % 。 2.结论： 应为标示量的 90. 0%〜110. 0% 。
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（通则0521）
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2 .系统适用性试验 除另有规定外，应照高效液相色谱 法（通则0512)项下的规定。
（通则0521）
4 样品的测定 5 仪器系统适用性试验应符合药典或 部颁标准各品种项下的要求。
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P101
二、 任务实施
校正因子的测定 取正三十二烷适量，加正己烷溶解并 稀释成每lml中含l.0mg的溶液，作为内标溶液。另取维生 素E 对照品约20mg，精密称定，置棕色具塞瓶中，精密加 内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解，作为对照品溶液，取1 〜3μ l注入气相色谱仪，计算校正因子。 测定法 取装量差异项下的内容物，混合均匀，取适量 （约相当于维生素E 20mg)，精密称定，置棕色具塞瓶中， 精密加内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解，作为供试品溶 6 液；取1〜3μ l注人气相色谱仪，测定，计算，即得。
（通则0521）
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二、 任务实施
（二）. 实验数据的记录与计算 1. 公式
AS / CS f AR / CR
高效液相色谱法测定维生素E乳中维生素E的含量
高效液相色谱法测定维生素E乳中维生素E的含量目的建立测定维生素E乳中维生素E含量测定的方法。
方法采用SHISEIDO CAPCELL PAK MGⅡC18色谱柱，以甲醇为流动相；流速：1.0 ml/min；检测波长：285 nm。
结果维生素E在浓度在0.133～0.931 mg/ml内与峰面积具有良好的线性关系，平均回收率为100.5%，RSD = 1.0%。
结论本方法测定维生素E乳中维生素E含量简便、快速、准确。
标签：维生素E乳；高效液相色谱法；含量测定市售的维生素E乳由维生素E和其他基质组成，具有治疗皮肤干燥及因季节变化所引起的皮肤瘙痒的作用。
原标准中维生素E的含量测定分别采用紫外分光光度法和气相色谱的方法。
为了更有效地控制该药品的质量，本研究采用了反相高效液相色谱法测定维生素E乳中維生素E的含量，方法准确、简便。
1 仪器与试药1.1 仪器岛津高效液相色谱仪（SPD-10Avp检测器，岛津LC-10ATvp泵，LC-Solution 色谱数据工作站）；XS105型电子分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）。
1.2 试药维生素 E 标准品（中国药品生物制品检定所，批号：100062-201008），维生素E乳（北京吉康利通医药科技有限公司自制，批号：20110302，20110303，20110304）。
甲醇为色谱纯，水为纯化水，无水乙醇为分析纯。
2 方法与结果2.1 色谱条件与系统适用性试验色谱柱：SHISEIDO CAPCELL PAK MGⅡC18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱温：室温；流动相：甲醇；流速：1.0 ml/min；检测波长：285 nm；进样量：20.0 μl。
理论塔板数按维生素E峰计算应大于2400。
2.2 供试品溶液的制备精密量取本品5 ml（样品标示量为10 mg/ml），置100 ml量瓶中，加入无水乙醇至刻度，振摇使充分溶解后过0.45 μm有机滤膜滤过，作为供试品溶液。
维生素E的含量检验方法
维生素E的含量检验方法一、目的：建立维生素E含量标准检验方法，保证分析结果的准确性。
二、依据：GB/T5009.82-2003三、范围：本规程适用于本公司维生素E含量检验操作四、职责：质量检验员对本标准的实施负责五、正文：1、试制和溶液1.1 无水乙醚：:不含有过氧化物。
1.1.1 过氧化物检查方法:用5 mL乙醚加1mL10%碘化钾溶液，振摇1 min，如有过氧化物则放出游离碘，水层呈黄色或加4滴0.5%淀粉溶液，水层呈蓝色。
该乙醚需处理后使用。
1.1.2 去除过氧化物的方法：重蒸乙醚时，瓶中放人纯铁丝或铁末少许。
弃去10%初馏液和10%残馏液。
1.2 无水乙醇：不得含有醛类物质1.2.1 检查方法：取2mL银氨溶液于试管中，加人少量乙醇，摇匀，再加人氢氧化钠溶液，加热，放置冷却后，若有银镜反应则表示乙醇中有醛。
1.2.2 脱醛方法：取2g硝酸银溶于少量水中。
取4g氢氧化钠溶于温乙醇中。
将两者倾人1L乙醇中，振摇后，放置暗处两天(不时摇动，促进反应)，经过滤，置蒸馏瓶中蒸馏，弃去初蒸出的50 mL。
当乙醇中含醛较多时，硝酸银用量适当增加。
1.3 无水硫酸钠。
1.4 甲醇：重蒸后使用。
1.5 重蒸水：水中加少量高锰酸钾，临用前蒸馏。
1.6 抗坏血酸溶液(100 g/L)：临用前配制。
1.7 氢氧化钾溶液(1+1),1.8 氢氧化钠溶液(100 g/1)。
1.9 硝酸银溶液((50 g/L)o1.10 银氨溶液：加氨水至硝酸银溶液(3. 9)中，直至生成的沉淀重新溶解为止，再加氢氧化钠溶液(3.8)数滴，如发生沉淀，再加氨水直至溶解。
1.11 维生素E标准液：a一生育酚(纯度95%)>Y一生育酚(950o),S一生育酚(纯度95%)。
用脱醛乙醇分别溶解以上三种维生素E标准品，使其浓度大约为1 mL 相当于1 mg。
临用前用紫外分光光度计分别标定此三种维生素E溶液的准确浓度。
1. 12 内标溶液：称取苯并「e」芘(纯度98%)，用脱醛乙醇配制成每1 mL相当10 ug苯并「e」芘的内标溶液。
维生素E含量测定方法
高效液相色谱法对维生素E粉、E油含量的测定色谱条件色谱柱：采用C18柱(长150 mm，内径4.6mm，粒径4-5μm)流动相：甲醇(色谱醇)+水(去离子水) 比例：(98 + 2 )流速：1.2 ml/min检测波长:285 nm柱温: 25±2 ℃进样量：20 μL溶液制备标准溶液的制备：本实验室的标准品为液体油状物，因此用注射器抽取直接滴加到容量瓶中称量，把容量瓶放在分析天平托盘上然后滴加，称取维生素E标准品约0.1g(准确至0.0002),置50mL棕色量瓶中,加甲醇适量溶解并稀释至刻度,摇匀。
绘制标准曲线把制成2.008 mg/mL的溶液作为贮备液。
分别准确移取0.5、1.25、2.5、3.75、5mL 至10mL 的棕色量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀；得到浓度分别为0.1004、0.251、0.502、0.753、1.004mg/ml的五种溶液，分别经0.45μm 滤膜滤过,滤液作为标准溶液。
用100μL的进样针分别从制备的不同浓度的标准溶液抽取60μL溶液，注意不能带有气泡，注入液相色谱仪,按色谱条件操作,从0.1004——1.004mg/ml依次进样，记色谱峰面积以标准品溶液浓度(C)为纵坐标,峰面积(A)为横坐标,按照外标法过5点绘制标准曲线。
样品溶液的制备：维生素E粉样品溶液的制备制备步骤为：研磨→称量→水浴溶解→定容→过滤1.研磨把试样E粉倒入研钵中适量，用研磨棒轻度研磨至颜色有变化为止。
2.称量把称量纸放到分析天平上然后置零，把研磨好的试样用药匙转移到称量纸上，称取维生素E 粉约1g(约相当于维生素E 0.5g，准确至0.0002g),置50mL棕色量瓶中。
3.水浴溶解加甲醇适量,置超声波水浴器中助溶20 min。
4.移取定容冷却至室温,用甲醇稀释至刻度,充分摇匀，从制备好的溶液中移取1mL到10mL的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度,充分摇匀;再从制备好的10mL容量瓶中的溶液中移取2.5mL放置到10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度,充分摇匀。
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维生素E（Vitamin E）是一种脂溶性维生素，其水解产物为生育酚，是最主要的抗氧化剂之一。
溶于脂肪和乙醇等有机溶剂中，不溶于水，对热、酸稳定，对碱不稳定，对氧敏感，对热不
敏感，但油炸时维生素E活性明显降低。
含量测定
方法名称：维生素E的测定—气相色谱法。
应用范围：该方法采用气相法测定维生素E的含量。
该方法适用维生素E。
方法原理：供试品和内标均制成甲醇溶液，进入气相色谱仪进行色谱分离并检测维生素E和
内标正三十二烷的吸收值，计算出其含量。
试剂：正己烷
仪器设备：仪器气相色谱仪
色谱柱：以硅酮（OV-17）为固定相，涂布浓度为2%，或以HP-1毛细管柱（100%二甲基聚
硅氧烷）为分析柱；理论塔板数按维生素E峰计算不低于500（填充柱）或5000（毛细管柱），维生素E峰与内标物质峰的分离度应符合要求。
色谱柱和典型色谱条件：柱长30 m，柱内径0.53 mm 或0.32 mm，固定液为100%甲基聚硅
氧烷
柱温：265℃
检测器：氢火焰离子化检测器，温度300℃
进样口：温度290℃；分流进样，分流比1：20；进样量1μL
载气：氮气，流速5 mL/min
试样制备：
1、称取供试品
精密称取该品20mg，放置在棕色具有塞子的瓶中。
2、对照品溶液的制备
精密称取维生素E对照品和维生素E对照品25mg，置100mL棕色量瓶中，加异辛烷80mL，避免加热，超声处理1分钟使完全溶解，并加异辛烷至刻度，摇匀，冲氮密塞，避光，0℃以下保存。
3、内标溶液的制备
4、供试品溶液的制备
该供试品精密加内标溶液10mL，密塞，振摇使溶解，即得供试品溶液。
5、校正因子的测定
另取维生素E对照品20mg，精密称定，置棕色具塞中，精密加内标溶液10mL，密塞，振摇
使溶解，取1~3μL注入气相色谱仪，计算校正因子。
注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。
“精密量取”系指量取体积的准
确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。
操作步骤：
分别精密吸取上述供试品溶液与对照品溶液1~3μL 注入气相色谱仪测定、计算，即得。