胆汁酸测定试剂盒(循环酶法)标准化操作规程TBA-SOP
总胆汁酸(TBA)试剂盒标准操作程序
总胆汁酸（TBA）试剂盒标准操作程序1.摘要本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人血清或血浆样本中总胆汁酸（TBA）的含量。
2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清或血浆样本中总胆汁酸（TBA）的含量。
3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定直接胆红素浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行，室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的总胆汁酸（TBA）试剂盒采用的是循环酶法。
5.原理血清中微量的胆汁酸（3α-羟甾醇）会被3α-羟甾醇脱氢酶（3α-HSD）及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）特异性氧化生成3α-酮甾醇，同时Thio-NAD被还原成β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）。
新生成的3α-酮甾醇在3α-HSD及β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还化型（NADH）存在下，还原成胆汁酸，同时NADH氧化为β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（NAD）。
这样，血清中微量的胆汁酸在多次酶循环的过程中被放大，同时可使生成的Thio-NADH扩增。
在405nm处测定Thio-NADH吸光度的变化值，可以求得血清中胆汁酸的含量。
胆汁酸THio−NAD3α−HSD→THio−NADHNAD←NADH3α−铜羟甾醇6.仪器日立7600自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2注册号：沪食药监械（准）字2011第2400009号7.3试剂瓶内主要成分：R1： -硫烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（THio-NAD）、Good’s缓冲液；R2 ：β-硫烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（NADH）、3α-羟甾醇脱氢酶（3α-HSD）、Good’s 缓冲液、叠氮钠7.4试剂稳定性：试剂于2℃-8℃避光保存，有效期为一年；开瓶后2-8℃避光保存，可稳定一个月8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用某某公司的校准品对自动分析仪进行校准。
血清总胆汁酸测定标准操作规程
血清总胆汁酸测定（循环酶法）标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：血清总胆汁酸测定(缩写TBA)；组合项目申请：血生化中肝功能测定加选本项目。
临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。
2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定一周，在冰箱中（2～8℃）稳定一个月。
为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。
2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。
2.3.2不建议采集抗凝血标本，如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。
3 方法原理循环酶法。
胆汁酸被3a-羟基类固醇脱氢酶（3a-HSDH）及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）氧化，生成3酮类固醇及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NAD）。
生成的3酮类固醇在3a-羟基类固醇脱氢酶及β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NAD）存在下，生成胆汁酸及β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）。
如此进行循环反应，最后测定生成的β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NAD）的吸光度，求得胆汁酸浓度值。
胆汁酸测定试剂盒(循环酶法)标准化操作规程TBA-SOP
胆汁酸测定试剂盒（循环酶法）标准化操作规程1 目的规范实验室操作，保证检验工作顺利有效进行特制定此规程。
2 授权操作人经培训且考核通过的实验室检验人员。
3 适用范围本试剂适用于体外定量检测人血清或血浆中胆汁酸的含量。
4 检验方法本试剂盒采用循环酶法测定胆汁酸的含量。
5 检验原理本试剂采用酶分析法测定血清总胆汁酸。
3α-羟基类固醇脱氢酶特异性作用于3α-羟甾族化合物，使之转化为相应的酮类固醇，反应中thio-NAD被还原为thio-NADH。
通过在405nm波长处测定单位时间内吸光度的变化值，可以计算出样品中总胆汁酸的含量。
6 标本要求6.1 样本为空腹患者血清。
样本应及时离心分离，不得使用溶血或被污染的样本。
6.2 样本应避免微生物污染，在2℃～8℃可稳定数月。
7 试剂及配套品7.1试剂来源长春迪瑞医疗科技股份有限公司胆汁酸试剂盒（循环酶法）7.27.3试剂的稳定性与贮存：7.3.1 试剂在2℃~8℃条件下，干燥、避光、密封贮存，有效期为12个月。
7.3.2 试剂开封后在2℃~8℃条件下可稳定30天。
8 实验仪器及性能指标8.1 实验仪器迪瑞CS系列全自动生化分析仪8.2试剂性能指标8.2.1 试剂空白：试剂空白吸光度：A≤0.800。
试剂空白吸光度变化率：△A/min≤0.040。
8.2.2 分析灵敏度：测试1μmol/L被测物时，吸光度变化率（△A/min）＞0.0002。
8.2.3 线性范围：1μmol/L～180μmol/L；线性相关系数r≥0.9900；[1,36]μmol/L区间内，线性绝对偏差应不超过±7.2µmol/L；（36,180]μmol/L区间内，相对偏差不超过±15％。
8.2.4 准确度：比对试验：r≥0.9900；[1，36]μmol/L区间内，绝对偏差不超过±7.2μmol/L，（36，180]μmol/L区间内，相对偏差不超过±15%。
总胆汁酸(TBA)测定试剂盒(循环酶法)产品技术要求科方
1外观性状
1.1试剂盒各组分应齐全、完整、无液体渗漏；中文包装标签应清晰，准确、牢固；
1.2R1 组分应为澄清透明、无絮状物、无肉眼可见颗粒及沉淀的液体。
1.3R2 组分应为澄清透明、无絮状物、无肉眼可见颗粒及沉淀的液体。
2
试剂盒装量
试剂净含量应不小于标示值。
3准确度
与比对试剂盒做比对试验，两组结果的相关系数 r 应≥0.975，相对偏差应≤10%。
4灵敏度
测定TBA含量为50.0μmol/L的样品时，平均每分钟吸光度变化值（△A/min）≥0.08。
5试剂空白
在温度37℃、波长405nm条件下检测，试剂空白吸光度≤0.40（比色杯光径1.0cm）；试剂空白吸光度变化率（△A/min）≤0.1（比色杯光径1.0cm）。
6线性范围
a）线性范围（0.5-150）μmol/L，相关系数 r 应≥0.990； b）（0.5～5.0）μmol/L范围内偏差绝对值不大于1.0μmol/L；（5.0以上
～150）μmol/L范围内线性偏差应≤15%。
7测量精密度
7.1重复性
CV%应≤5%。
7.2批间差
相对偏差（R）应≤8%。
8特异性
胆红素≤342μmol/L，甘油三酯≤5.6mmol/L，血红蛋白≤2.0g/L，维生素
C≤0.3g/L 对测定结果造成的干扰，偏倚在±15％内。
总胆汁酸测定试剂盒(酶循环法)产品技术要求jiuqiang
总胆汁酸测定试剂盒（酶循环法）适用范围：用于体外定量测定人血清或血浆中的总胆汁酸（TBA）的含量。
1.1 包装规格包装规格见表1。
表1 包装规格1.2 主要组成成分主要组成成分见表2。
表2 主要组成成分注：不同批号的校准品赋值有差异，具体赋值详见靶值单。
2. 性能指标2.1 外观试剂1为黄色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂2为无色或淡黄色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；校准品为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损。
2.2 净含量试剂的净含量应不少于标称量。
2.3 试剂空白2.3.1 试剂空白吸光度A405nm下测定空白吸光度应≤0.8000。
2.3.2 试剂空白吸光度A405nm下测定的空白吸光度变化率（ΔA/min）应≤0.0400。
2.4 准确度与已上市的产品进行比对试验：在[5，180]μmol/L区间内，相关系数r ≥0.975，在[5，40]μmol/L区间内测定的绝对偏差应不超过±6μmol/L，在(40，180]μmol/L区间内测定的相对偏差应不超过±15%。
2.5 分析灵敏度样本浓度为40μmol/L时，其吸光度变化在0.0200～0.0800之间。
2.6 线性区间在[5，180]μmol/L区间内，线性相关系数r≥0.99，在[5，20]μmol/L区间内测定的绝对偏差应不超过±2μmol/L，在（20，180]μmol/L区间内测定的相对偏差应不超过±10%。
2.7 测量精密度2.7.1 重复性对高、低不同浓度的同一血清样本或质控品重复测定10次，其测定值的变异系数（CV％）应不大于5％。
2.7.2 批间差随机抽取三批试剂盒的批间相对极差（R）应不大于10%。
2.8 稳定性试剂盒在2℃～8℃密封避光保存，有效期为18个月。
在试剂盒有效期满后一个月以内，应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7.1的要求。
总胆汁酸测定试剂盒(酶循环法)产品技术要求meigaoyi
总胆汁酸测定试剂盒(酶循环法)适用范围：用于定量检测人血清中总胆汁酸（TBA）浓度。
1.1包装规格a) 试剂1：2×45ml，试剂2：2×15ml；b) 试剂1：4×45ml，试剂2：4×15ml；c) 试剂1：6×60ml，试剂2：2×60ml；d）试剂1：3×60ml，试剂2：3×20ml；e）试剂1：2×300ml，试剂2：2×100ml；f）试剂1：12×16.8ml，试剂2：12×5.6ml；g）试剂1：2×54ml，试剂2：2×18ml；h）试剂1：1×30ml，试剂2：1×10ml。
1.2试剂主要组成成分试剂1主要组成成分甘氨酸缓冲液25 mmol/Lβ-硫烟酰胺腺嘌呤二核苷氧化型（Thio-NAD） 1 mmol/L试剂2主要组成成分Tris缓冲液25 mmol/L烟酰胺腺嘌呤二核苷还原型（NADH）10 mmol/L3α-羟类固醇脱氢酶（3α-HSD）12500 U/L2.1 外观和性状2.1.1 试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；外包装完好、无破损，标签完好、字迹清晰。
2.1.2 试剂1应为淡黄色透明溶液；试剂2应为无色或淡黄色透明溶液。
2.2 净含量应不低于试剂瓶标示装量。
2.3 试剂空白2.3.1 试剂空白吸光度测定试剂空白吸光度，应＜0.5。
2.3.2 试剂空白吸光度变化率试剂空白吸光度变化率△A/min≤0.04。
2.4 分析灵敏度测试150umol/L的被测物时，吸光度变化率（ΔA/min）应不低于0.02。
2.5 准确度回收率90%～110% 范围内。
2.6 精密度2.6.1批内精密度批内变异系数应不大于5％。
2.6.2批间精密度批间相对极差应不大于10％。
2.7 线性区间2.7.1在[2,180)umol/L区间内，线性回归的相关系数（r）应不低于0.990；2.7.2在（50，180）umol/L区间内，相对偏差不超过±15%；2.7.3在[2,50]umol/L区间内，绝对偏差不超过±5umol/L。
总胆汁酸(TBA)测定试剂盒(酶循环法)产品技术要求derui
总胆汁酸（TBA）测定试剂盒
（酶循环法）
2.1外观和性状
外观和性状应符合表2要求。
表2 试剂盒内各组分的外观性状
2.2试剂空白
2.2.1试剂空白吸光度
试剂以蒸馏水为空白时，在波长 405nm，光径 1.0 cm，温度 37℃条件下，吸光度≤0.80。
2.2.2试剂空白吸光度变化率
试剂以蒸馏水为空白时，在波长 405nm，光径 1.0 cm，温度 37℃条件下，吸光度变化率≤0.02。
2.3分析灵敏度
试剂盒测试浓度为10 μmol/L被测物时，吸光度变化率≥0.005。
2.4线性范围
2.4.1试剂盒在2～180 μmol /L区间（范围）内，其回归系数r≥0.9900。
2.4.2相对偏差或绝对偏差应符合表 3 要求。
表3 相对偏差或绝对偏差
2.5精密度
2.5.1试剂盒批内精密度 CV 值应≤5.0%。
2.5.2试剂盒批间相对极差（R）应≤10.0%。
2.6准确度
相对偏差（Bias%）应在参考物质靶值±10%以内。
2.7液体装量
试剂盒不同规格的净含量应不少于其标示量。
试剂标准操作规程(SOP)-TBA
试剂标准操作规程目录1.检测原理2.标本采集与处理2.1 受检者的准备2.2 静脉采血2.3 抗凝剂2.4 标本处理3. 试剂3.1 试剂3.2 校准血清3.3 试剂与校准血清的稳定性4. 仪器5. 操作6. 计算7. 操作性能7.1 精密度7.2 准确度7.3 灵敏度7.4 可报告范围7.5 特异性7.6 干扰8. 参考值9. 临床意义附录A: 参数1. 检测原理胆汁酸与3a-羟基类固醇脱氢酶（3a-HSDH）及氧化型b-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）发生反应，生成3-酮类固醇以及还原型b-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸（Thio-NADH）。
3-酮类固醇在3a-HSDH和Thio-NADH作用下，生成胆汁酸及Thio-NAD。
通过循环酶而使微量的胆汁酸量得到放大。
通过测定生成物Thio-NADH在405nm吸光度的变化，可测量样品中胆汁酸的浓度。
2．标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂：血浆使用肝素或EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。
2.4 标本处理：血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，置洁净试管加盖低温保存。
3．试剂3.1 试剂：威特曼生物科技（南京）有限公司TBA试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：3.2：校准血清使用威特曼生物科技（南京）有限公司提供的校准血清或使用TBA的专用标准液。
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胆汁酸测定试剂盒（循环酶法）标准化操作规程
1 目的
规范实验室操作，保证检验工作顺利有效进行特制定此规程。
2 授权操作人经培训且考核通过的实验室检验人员。
3 适用范围本试剂适用于体外定量检测人血清或血浆中胆汁酸的含量。
4 检验方法
本试剂盒采用循环酶法测定胆汁酸的含量。
5 检验原理
本试剂采用酶分析法测定血清总胆汁酸。
3α-羟基类固醇脱氢酶特异性作用于3α-羟甾族化合物，使之转化为相应的酮类固醇，反应中thio-NAD被还原为thio-NADH。
通过在405nm波长处测定单位时间内吸光度的变化值，可以计算出样品中总胆汁酸的含量。
6 标本要求
6.1 样本为空腹患者血清。
样本应及时离心分离，不得使用溶血或被污染的样本。
6.2 样本应避免微生物污染，在2℃～8℃可稳定数月。
7 试剂及配套品
7.1试剂来源
长春迪瑞医疗科技股份有限公司胆汁酸试剂盒（循环酶法）
7.2
7.3试剂的稳定性与贮存：
7.3.1 试剂在2℃~8℃条件下，干燥、避光、密封贮存，有效期为12个月。
7.3.2 试剂开封后在2℃~8℃条件下可稳定30天。
8 实验仪器及性能指标
8.1 实验仪器
迪瑞CS系列全自动生化分析仪
8.2试剂性能指标
8.2.1 试剂空白：
试剂空白吸光度：A≤0.800。
试剂空白吸光度变化率：△A/min≤0.040。
8.2.2 分析灵敏度：测试1μmol/L被测物时，吸光度变化率（△A/min）＞0.0002。
8.2.3 线性范围：1μmol/L～180μmol/L；线性相关系数r≥0.9900；[1,36]μmol/L区间内，线性绝对偏差应不超过±7.2µmol/L；（36,180]μmol/L区间内，相对偏差不超过±15％。
8.2.4 准确度：比对试验：r≥0.9900；[1，36]μmol/L区间内，绝对偏差不超过±7.2μmol/L，（36，180]μmol/L区间内，相对偏差不超过±15%。
8.2.5 测量精密度：
重复性：CV≤5.0%。
批间差：R≤6.0%。
9 校准程序
9.1校准品来源
长春迪瑞医疗科技股份有限公司生产的临床化学校准血清
9.2校准品的组成：人血清
9.3校准品使用
9.3.1 小心打开瓶盖，避免内容物的任何损失；
9.3.2在20-25℃的室温下，准确量取5ml蒸馏水复溶1瓶校准血清；
9.3.3拧紧瓶盖，避光放置30分钟，使之完全溶解；
9.3.4轻轻混匀，确保溶液均一性。
勿摇晃小瓶，避免泡沫产生；
9.3.5使用时，移取所需的体积后，把校准血清盖紧瓶盖放回冰箱中保存；
9.3.6复溶后的校准血清可用于手工测试，也可用于全自动生化分析仪
9.4校准品使用注意事项
9.4.1 若该复溶血清受细菌污染，将会降低许多成分的稳定性。
9.4.2 不同批号的校准血清不能交叉使用，因为批号于批号之间的赋值不同。
9.4.3 请勿用嘴直接吸取试剂，避免接触皮肤、眼睛及粘膜，一旦接触，应立即用大量水冲洗。
9.5 校准程序
建议使用试剂盒配套的校准品，以纯化水和校准品进行2点校准测定。
测定后仪器自动拟合成校准曲线。
当试剂批号更换或质控失控时，需要重新校准。
10 质量控制
10.1质控品来源
长春迪瑞医疗科技股份有限公司生产的临床化学质控血清(水平I和水平II) 10.2质控品组成：人血清
10.3质控品存贮
未复溶的校准血清在避光条件下，2～8℃可稳定至标签失效期。
复溶后校准血清在避光条件下，2～8℃可稳定7天；15～25℃可稳定1天；-20℃可稳定30天。
10.4质控品使用注意事项
10.4.1若该复溶血清受细菌污染，将会降低许多成分的稳定性。
10.4.2请勿用嘴直接吸取试剂，避免接触皮肤、眼睛及粘膜，一旦接触，应立即用大量水冲洗。
10.4.3 因批与批之间的质控血清赋值不同，所以不同批号的质控血清不能当做校准血清使用。
10.5 质量控制
建议使用迪瑞公司的质控品，进行质量控制。
实验室应自行建立质控区间和限值。
若质控值失控，每个实验室应采取纠正措施。
11操作程序 11.1试剂配制
试剂1和试剂2均为液体试剂，可直接使用。
11.2
11.3 样本测试步骤：
11.4计算方法
）校准液浓度（校准管样本管）＝
总胆汁酸浓度（L A A L /mol min
/min
//mol μμ⨯∆∆
11.5注意事项
11.5.1本品仅用于体外诊断。
11.5.2避免测试中途添加试剂。
11.5.3试剂和样本用量可根据不同仪器的要求按比例改变。
11.5.4测定过程中应保持恒温。
11.5.5试剂使用前需进行校准。
12结果判断
12.1 当样本中胆汁酸含量大于180μmol/L时，样本应用生理盐水稀释后再进行测定，计算结果时乘以稀释倍数。
12.2 人血清中胆汁酸含量的检测只是临床医师对患者进行诊断的指标之一，临床医师还要根据患者的体症、病史以及其它的诊断项目、诊断手段进行综合判断。
13 参考区间
1～12 μmol/L
引用的参考值范围代表本法的期望值，仅供参考，建议各实验室验证这一参考范围或建立自己的参考值范围。
14 临床意义
人体总胆汁酸库日—日间是相对平衡的。
每日胆汁酸主要从粪便排出，平衡是通过肝脏以胆固醇为原料进行的胆汁酸净合成实现的。
当患有肝脏疾病和胆汁酸吸收作用损害时，随着溢出增加，血清胆汁酸浓度增高，这是肝病加重的反应。
血清总胆汁酸测定常用于肝病的检查，在急性肝炎、慢性肝炎等各类病症中总胆汁酸有不同程度的升高。
15复检操作程序
按仪器使用说明书进行复查操作。
16方法局限性
16.1 检验结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
16.2 当样本中黄疸＞855μmol/L、甘油三脂＞2.8mmol/L、血红蛋白＞1.5g/L、抗坏血酸＞5.7mmol/L时可能会影响检测结果。
17 注意事项
样本、废液等有潜在生物传染性，操作者应遵守实验室安全操作规定，并按当地医疗废弃物、感染性废弃物、产业废弃物等规定处理废液。
18 个人防护
18.1 请把标本当作可能感染HIV、HBV、HCV等的危险物质处置。
为了避免或减少相关的传染风险，请使用一次性手套。
18.2若本试剂误入眼内或口中、或接触到皮肤时，请迅速用水冲洗，必要时请
接受医生治疗。
19 当检测系统不能工作时，所采取的补救措施
当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。
20参考文献
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