植物多酚氧化酶活性测定方法的改进

ＵＮＩＣ－－２０００分光光度计于波长４００～５５０ｎｍ
下每隔２ｎｍ扫描光密度，得到图１（Ａ）的吸收光谱图。从图１（Ａ）可以看出，邻醌的最大吸收光谱
位于蓝紫光区域，４１０ｎｍ处有最大吸收峰，与文献报道［１］的５２５ｎｍ差异较大。因此，后面的酶活性测定于４１０ｎｍ下进行，反应时间为３ｍｉｎ。
中国科学技术出版社，１９９３，６６—６８．
所以，ＰＰＯ测定中最好在反应１０ｒａｉｎ内计算酶
（下转第４９页）
万方数据
第１期
郭秒，等：高原湖泊紫色非硫细菌质粒研究
。４９・
ＳｔｕｄｉｅｓｏｆＰｌａｓｍｉｄＤＮＡｏｆＰｕｒｐｌｅＮｏｎｓｕｌｆｅｒＢａｃｔｅｒｉａ（ＰＮＳＢ）ｉｎＰｌａｔｅａｕＬａｋｅ
ＫＥＹ
ＷＯＲＤＳ：
ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ；ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｏｘｉｄａｓｅ；ｋｉｎｅｔｉｃｓ
ｃｕｒｖｅ
万方数据
第２５卷第１期２００５年１月
云南师范大学学报
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＹｕｎｎａｎＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
Ｖ０１．２５Ｎｏ．１Ｊａｎ．２００５
植物多酚氧化酶活性测定方法的改进＋
李忠光，龚明
（云南师范大学生命科学学院，云南昆明６５００９２）
摘要：
文章介绍了多酚氧化酶反应产物邻醌的吸收光谱和酶测定反应的动力学分析，确定了邻醌的
ｒａｔｅ
ｏｆｐｌａｓｍｉｄ－－ｃａｒｒｙｉｎｇｓｔｒａｉｎｉｎＲｈｏｄｏｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓＳｐ．ｗａｓｔｈｅ
ｈｉｇｈｅｓｔ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔｏｆｐｌａｓ—
ｍｉｄｉＳａｂｏｕｔｌＯＯＯＯｂｐｉｎｔｈｅｓｅｔｗｏｌａｋｅｓ．Ｔｈｅｒａｔｅｏｆｐｌａｓｍｉｄ－－ｃａｒｒｙｉｎｇＰＮＳＢｓｔｒａｉｎｉｎＤｉａｎｃｈｉＬａｋｅｉＳｍｏｒｅｔｈａｎ３ｔｉｍｅｓｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎＹａｎｇｚｏｎｇｈａｉＬａｋｅ．ＫＥＹ
子，以０．１％ＨｇＣＩｚ消毒１０ｒａｉｎ后，漂洗干净，于
２６．５＂Ｃ下吸涨１２ｈ，播于垫有６层湿润滤纸的带盖白磁盘（２４ｃｒｕｘ
１６
物体内普遍存在的一种非线粒体内的末端氧化酶［２’３］，它包括单酚氧化酶［酪氨酸酶（ｔｙｒｏｓｉ— ｎａｓｅ），ＥＣ．１．１０．３．２］、双氧化酶［儿茶酚氧化酶
９
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图２玉米幼苗和马铃薯块茎中ＰＰＯ活性
Ｆｉｇ．２
ＰＰＯａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｍａｉｚｅｓｅｅｄｌｉｎｇｓａｎｄｐｏｔａｔｏｔｕｂｅｒ
枷４∞蛳４８０
为了进一步检验我们这一方法的有效性，我
４∞５∞５∞！ＳＬＩＯ５∞
Ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ
们测定了苗龄为１２．５天的玉米幼苗根系和Ｈ一６
Ｒｅａｃｔｉｏｎ
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
ｔｉｍｅ（ｒａｉｎ）
社，２００２．６６．
图１苯醌的吸收光谱及ＰＰ０反应的动力学曲线
Ｆｉｇ．１Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｓｐｅｃｔｒｕｍｏｆｏ—ｑｕｉｎｏｎｅａｎｄｋｉｎｅｔ—
ｉｃｓ
Ｃｕｒｖｅ
［３］潘瑞炽．植物生理学（第四版）［Ｍ］．北京：高等教育
出版社，２００１．１１２．
ｏｆＰＰＯｒｅａｃｔｉｏｎ
・收稿日期：２００４－－０４－－０６基金项目：国家自然科学基金（３９８６０００），云南省自然科学基金（９８Ｃ００２Ｚ）
作者简介：李忠光（１９７１一），男（彝族），云南省永德县人，实验师，主要研究方向为植物逆境生物学．
通讯作者：龚明
万方数据
第１期
李忠光，等：植物多酚氧化酶活性测定方法的改进
・４５・
ＡＢＳＴＲＡＣＩ’：
ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｔｈｏｄｗａｓａｐｐｌｉｅｄｉｎＰＮＳＢｐｌａｓｍｉｄｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｉｎＹａｎｇｚｏｎｇｈａｉＬａｋｅ（ｄｅｅｐｗａｔｅｒ，ｏｌｉｇｏｔｒ— ｏｐｈｉｃａｔｉｏｎ）ａｎｄＤｉａｎｃｈｉＬａｋｅ（ｓｈａｌｌｏｗｗａｔｅｒ，ｅｕｔｒｏｐｈｉｃａｔｉｏｎ）．Ａ１１ｔｈｅｐｌａｓｍｉｄ—ｃａｒｒｙｉｎｇＰＮＳＢｓｔｒａｉｎｓｃａｍｅｆｒｏｍｗａｔｅｒｌｅｓｓｔｈａｎ１３ｍｉｎｄｅｐｔｈａｎｄｔｈｅｒａｔｅｏｆｐｌａｓｍｉｄ—ｃａｒｒｙｉｎｇＰＮＳＢｓｔｒａｉｎｉｎＲｈｏｄｏｂａｃｔｅｒｓｏ．ｗａｓｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔｉｎＹａｎｇｚｏｎｇｈａｉＬａｋｅ；Ｔｈｅｒａｔｅｏｆｐｌａｓｍｉｄ－－ｃａｒｒｙｉｎｇｓｔｒａｉｎｉｎｈｅａｖｙｐｏｉｌｕｔｅｄｌｅｖｅｌｓｉｔｅｉＳｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｍｏｄｅｒａｔｅａｎｄ１ｉｇｈｔｐｏｌｌｕｔｅｄ１ｅｖｅｌｓｉｔｅｉｎＤｉａｎｃｈｉＬａｋｅ．Ｔｈｅ
ｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄｆｏｒｔｈｅｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｏｆｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｏｘｉｄａｓｅｒｅａｃｔｉｏｎ．Ｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄｅｎｈａｎｃｅｄｔｈｅ
ａｃｃｕｒａ－
ｃｙ，ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙａｎｄｃｏｍｐａｒａｂｉｌｉｔｙｆｏｒｔｈｅｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｏｘｉｄａｓｅｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔａｎｄｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｅｎｈａｎｃｅｄｆｉｖｅ—ｆｏｌｄｗｉｔｈｏｒｉｇｉｎａｌｍｅｔｈｏｄ．
ＰＰＯ常用的测定方法有比色法［１３和氧电极
酶液的提取按朱广廉［１］方法。
１．３
ＰＰＯ反应产物吸收光谱分析
马铃薯块茎ＰＰＯ与底物反应后，加入２０％三氯乙酸终止反应。反应产物用ＵＮＩＣ一２０００分光光度计于波长４００～５５０ｎｍ下每隔２ｎｍ测
定光密度。
１．４
ＰＰＯ测定反应的动力学分析
马铃薯块茎ＰＰＯ与底物反应后，在不同时间段检测两个波长４１０ｎｍ和５２５ｎｍ下的光密度。
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：Ｔｈｉｓｐａｐｅｒｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｓｐｅｃｔｒｕｍｏｆｏ—ｑｕｉｎｏｎｅａｎｄｋｉｎｅｔｉｃｓ
ｃｕｒｖｅ
ｏｆｐｏｌｙ—
ｐｈｅｎ０１ｏｘｉｄａｓｅｒｅａｃｔｉｏｎ，ｔｈｅｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｏｆｍａｘｉｍｕｍａｂｓｏｒｂａｎｃｅｓｐｅｃｔｒｕｍａｎｄｔｈｅｓｕｉｔａｂｌｅｐａｒａｍｅｔｅｒｓ
ＷＯＲＤＳ：ＰｌａｔｅａｕＬａｋｅ；ＰＮＳＢ；Ｐｌａｓｍｉｄ
ＤＮＡ
（上接第４５页）Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｏｆｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｍｅｔｈｏｄｏｆ
ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｏｘｉｄａｓｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｉｎｐｌａｎｔＣＫ）ＮＧＭｉｎｇ
，
（Ｓｃｈｏｏｌｏｆｌｉｒｅｓｃｉｅｎｃｅ，ＹｕｎｎａｎＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ６５００９２）
ＧＵＯＭｉａ０１…，ＣＨＥＮｄｉｎ—ｑｕａｎｌ，ＭＯＹｕｅ—ｌｉｎｌ，ＨＵＡＮＧＺｕｎ—ｘｉｌ
（（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，ＹｕｎｎａｎＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ６５００９２，Ｃｈｉｎａ；（２．ＭｅｄｉｃａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＳｅｎｅｓｃｅｎｃｅ，ＣａｐｉｔａｌＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＸｕａｎｗｕＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００５３，Ｃｈｉｎａ））Ｆｏｒｏｂｔａｉｎｉｎｇｔｈｅｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｐｌａｓｍｉｄｃａｒｒｙｉｎｇｏｆｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙｉｎｄｅｅｐｐｌａｔｅａｕｌａｋｅ，
［４］贺立红，宾金华．高等植物中的多酚氧化酶［Ｊ］．植物
生理学通讯，２００１，３７（４）：３４０－－３４５．
ＰＰＯ与底物反应后，在不同时间段检测两个波长４１０ｎｍ和５２５ｎｍ下的光密度变化，得到图１（Ｂ）。从图中可以看出，ＰＰＯ酶促反应在０～３
［５］许传俊，李玲．植物多酚氧化酶研究进展［Ｊ］．２００２，６
（ｃａｔｅｃｈｏｌｏｘｉｄａｓｅ），ＥＣ．１．１０．３．２］、漆酶（１ａｃｅａ－ｓｅ，ＥＣ
ｃｍ）中，于２６．５℃下黑暗中
萌发６０ｈ。随后，于同样的温度下继续培养１０天，每天光照１６ｈ和不断补充蒸馏水。苗龄为１２．５天的玉米幼苗根系作为ＰＰＯ测定材料。另一种材料为马铃薯块茎，品种为Ｈ一６，购自昆明市种子公司。
（１）：４５—５５．
ｒａｉｎ内呈现很好的线性关系，所以取０～３ｍｉｎ时间段，即３ｒａｉｎ反应时间来计算酶活性。但是，当酶促反应达到ｉ０ｒａｉｎ时，光密度开始下降，即邻醌被还原。因为在反应体系中存在抗坏血酸等抗氧化剂时，邻醌被抗坏血酸还原为邻苯二酚［１活性，其中以反应３ｒａｉｎ为最佳时间。
最高吸收光谱和酶测定的适宜参数。这一测定方法与原方法ｍ相比，提高了多酚氧化酶测定的准确性、重复性和可比性，使灵敏度提高了５倍。关键词：改进；多酚氧化酶；动力学曲线中图分类号：０９４６．５文献标识码：
Ａ
文章编号：
１００７—９７９３（２００５）０１—００４４一０２
多份氧化酶（Ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｏｘｉｄａｓｅ，ＰＰＯ）是植
０‘。
［７］张志良，瞿伟菁．植物生理学实验指导（第三版）［Ｍ］．北京：高等教育出版社，２００３．１２０一１２１．［８］戴亚，施春华，唐宏，等．烟草多酚氧化酶分离提纯及性质研究［Ｊ］．中国烟草学报，２００１，７（４）：７－－１２．［９］黄建韶，张洪，田红现．苹果中多酚氧化酶的性质［Ｊ］．食品与机械，２００１，８３：２１—２２．［１０３白宝璋，汤学军．植物生理学测试技术［Ｍ］．北京：
马铃薯块茎的ＰＰＯ活性，得到图２的结果。从图２可以看出，在波长４１０ｉｌｍ下测定ＰＰ０活性比
ｏＵｆ
在５２５ｎｍ下测定ＰＰＯ活性提高了５倍。

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小麦多酚氧化酶活性检测方法的比较分析

8　制粉工业2007,No.7收稿日期:2007-03-07基金项目:国家自然科学基金资助项目(30270825);安徽省高校青年教师项目(2006jql123);安徽农业大学SRF 资助(005)作者简介:司红起(1972-),男,博士研究生,作物遗传育种专业。

通讯作者:马传喜。

小麦多酚氧化酶活性检测方法的比较分析司红起,马传喜,何克勤,周　娜,胡　娜(安徽农业大学农学院,安徽合肥　230036)摘　要:L 2DOP A 法是检测小麦多酚氧化酶(Polyphenol Oxidase,PP O )活性的标准方法(AACC 22-85),但L 2DOP A 试剂昂贵。

为了寻求成本较低且准确的小麦PP O 活性批量检测方法,以L 2DOP A 法为对照,采用了比色皿反应法和邻苯二酚法分别对24个小麦品种PP O 活性进行了检测,并以196份小麦核心种质和部分应用核心种质为试材,对邻苯二酚法进行了验证。

通过相关分析和方差分析,结果表明:比色皿反应法所测吸光度值在仪器误差范围内,可重复性较差,不能准确地反映品种间差异,故不宜采用;邻苯二酚法能准确地反映品种间差异,且可重复性好,是检测小麦PP O 活性的理想方法。

验证试验表明,邻苯二酚法和L 2DOP A 法的相关系数为0.984,且达极显著水平。

以邻苯二酚代替L 2DOP A,降低了小麦PP O 活性检测费用,故邻苯二酚法是一种成本较低的、准确可靠的小麦PP O 活性检测方法。

关键词:小麦;多酚氧化酶;L 2DOP A;邻苯二酚中图分类号:S512.1 文献标识码:A 文章编号:1003-6202(2007)07-0008-03Co m para ti ve Ana lysis on D etecti on M ethods for Acti v ity of Polyphenol O x i da se i n W hea tABSTRACT:L 2DOP A is a standard method (AACC 22-85)f or detecti on of activity of polyphenol oxidase (PP O )in wheat,but L 2DOP A reagent is very expensive .I n order t o find out one l ow 2cost detecting method by which PP O in wheat is tested accurately,L 2DO 2P A method was taken as contr ol,reacti on in cell method and catechol method were used t o detect the activity of PP O in 24wheat culti 2vars,and catechol method was verified by detecting the activity of PP O in 196wheat core collecti ons and part of app lying wheat core collecti ons .Thr ough analysis of variance and correlati on,the results showed that the value of abs orbency by reacti on in cellmethod was in the range of instru ment err or,but the repeatability was very bad,and could not reflect the difference exactly a mong cultivars,s o this method could not be used;catechol method could reflect the difference a mong cultivars exactly and the repeatability was very good,s o it was an ideal method t o detect PP O in wheat .The experi m ent indicated that the correlati on coefficient bet w een L 2DOP A method and catechol method was 0.984,and reached the extremely significant level .The cost for detecti on of PP O by catechol method could be l owered when substituting catechol f or L 2DOP A,s o catechol method was a l ow 2cost and accurate method for detecting activity of PP O in wheat .KE YWO R D S:wheat;polyphenol oxidase,L 2DOP A,catechol 多酚氧化酶(Polyphenol Oxidase,PP O ),又名酪氨酸酶(Tyr os in ase )、儿茶酚酶、酚酶、氯原酸酶,是一类广泛存在于植物体中的含Cu 2+的结合酶,含有Cu A 和Cu B 两个Cu 2+结合区,故又称金属蛋白。

金针菇中多酚氧化酶活性测定及其护色研究

《食品工业》2011年第11期68由上表可知：由极差R 值分析可知，各因素对果胶提取率的影响大小顺序为A ＞C ＞D ＞B ，即：料液比＞微波时间＞微波火力＞pH 。

通过极差分析最佳组合为A 3B 2C 1D 3，因此，樱桃李果胶提取的最佳工艺组合为：料液比1∶25 g/mL ，pH 值为2，微波时间为3 min ，微波功率为650 W 。

按此条件提取樱桃李果胶，重现性良好，提取率达8.43%。

3 结论本试验采用微波辅助提取樱桃李中的果胶，通过单因素试验和正交试验，确定了微波辅助提取樱桃李果胶的最佳工艺为∶料液比1∶25 g/mL ，微波功率650 W ，微波提取时间3 min ，pH 为2。

参考文献：[1] 兰士波.樱桃李的研究进展及开发利用前景[J].中国林副特产,2008, (10): 89-91.[2] 刘影,赵玉,张相锋.新疆珍稀濒危植物野生樱桃李的研究进展[J]. 安徽农业科学, 2010, 38(22): 11754-11756.[3] 纵伟,梁茂雨,张世涛.微波辅助提取西番莲果皮中果胶的研究[J]. 中国食品添加剂, 2007(2): 63-65.[4] 黄永春,何仁,马月飞,等.微波辅助提取西番莲果皮中果胶的研究[J]. 食品科学, 2007(28): 161-164.[5] 游新侠,仇农学.咔唑比色法测定苹果渣提取液果胶含量研究[J]. 四川食品与发酵, 2007(1): 19-22.表1 正交试验设计与结果试验号因素提取率/%A料液比/ (g·ml -1)B pH C 微波时间 /h D微波功率/W 11(1∶15)1(1.5)1(3)1(550)8.23212(2)2(4)2(600)7.34313(2.5)3(5)3(650)7.6542(1∶20)123 6.99522317.38623127.6773(1∶25)1328.12832138.43933218.24K 123.2223.3424.3323.85K 222.0423.1522.5723.13K 324.7923.5623.0623.07k 17.747.788.117.95k 27.357.727.527.71k 38.267.857.697.69R0.910.130.590.26徐州工程学院食品学院（徐州 2210088）金针菇中多酚氧化酶活性测定及其护色研究孙月娥，张俊韬，王卫东摘要研究了温度、pH 值对金针菇中多酚氧化酶(PPO)活性的影响，设计了不同的护色方案，以确定金针菇的护色条件。

9个牡丹品种叶片、叶柄中总酚含量及多酚氧化酶活性的测定

9个牡丹品种叶片、叶柄中总酚含量及多酚氧化酶活性的测定刘会超;贾文庆;尤扬【摘要】对9个牡丹品种的叶片外植体进行水冲洗处理,测定了其总酚含量和PPO 活性.结果表明:牡丹不同品种间的总酚含量存在显著差异,叶柄的总酚含量比叶片低,经水冲洗1.0 h后总酚含量最低;不同品种间PPO活性无显著差异,经水冲洗0.5,1.0、2.0、6.0 h后,牡丹外植体的PPO活性比未冲洗的对照明显降低;外植体材料经水冲洗处理0.5～1.0 h时PPO活性最低,此时材料适合进行组织培养.【期刊名称】《广东农业科学》【年(卷),期】2010(037)008【总页数】2页(P170-171)【关键词】牡丹;水冲洗时间;总酚含量;PPO活性【作者】刘会超;贾文庆;尤扬【作者单位】河南科技学院园林学院,河南,新乡,453003;河南科技学院园林学院,河南,新乡,453003;河南科技学院园林学院,河南,新乡,453003【正文语种】中文【中图分类】S685.11牡丹（Paeonia suffruticosa）为芍药科芍药属木本花卉，是我国特产的传统名花。

牡丹的组织培养已经取得了很大进展，但迄今为止获得完整组培苗的报道极少[1]。

已有研究表明，愈伤组织的褐化问题是影响组培苗分化与成活的关键，而褐化与愈伤组织中的酚类物质有关。

高国训[2]和Mager[3]进行花卉组织培养时发现，酚类物质的含量与其褐变率成正相关、与成活率成负相关。

本试验测定了不同牡丹品种不同组织中的总酚含量和多酚氧化酶（PPO）活性，探讨了不同品种间总酚含量和PPO活性的差异，以期为牡丹的组织培养提供参考。

1 材料与方法供试牡丹包括金星雪浪、丹皂镏金、金玉良缘、洛阳红、似荷莲、如花似玉、白雪塔、萍实艳和十八号等9个品种，均采自河南科技学院牡丹园。

从牡丹植株东、西、南、北4个方位采取当年生的叶片和叶柄，经自来水冲洗后，再用蒸馏水分别冲洗0.5、1.0、2.0、6.0 h，然后测定总酚含量和PPO活性。

多酚氧化酶活性测定及控制[文献综述]

毕业论文文献综述生物工程多酚氧化酶活性测定及控制1 前言多酚氧化酶（PPO）广泛存在于自然界，在果实和蔬菜收获后，PPO所引起的反应常常会使果肉发生褐变、产生异味和损失营养。

本文总结了多酚氧化酶的活性测定方法以及对其活性的控制，主要研究了抑制剂对其活性的影响，为果蔬贮藏和加工中酶促褐变的防治提供思路。

多酚氧化酶（PPO）作为一种植物酶类，是引起果蔬褐变的主要因素。

鲜切果蔬因组织被切分使PPO与酚类底物的接触机会增加，酚类物质被氧化成棕褐色的醌，导致产品褐变。

抑制PPO活性取决于抑制剂的性质和浓度、底物的可利用性、pH值和温度。

一些还原剂、酶类、螯合剂和蜂蜜等均已被用于防止果蔬酶褐变。

本文主要总结了抑制剂对于控制果蔬PPO活性的研究。

2 主题部分2.1 从果蔬中提取PPO（以莲藕为例）2.1.1 丙酮法（丙酮法提取所得酶液比活力最高。

适合需大量制样时使用）将莲藕洗净，去皮，切碎，加4倍量预冷至．18。

C的丙酮(w／v为1：4)捣碎，搅拌3min，抽滤，冷风吹干残渣后，混匀，得丙酮粉。

称取丙酮粉O．5 g，加入0．2 mol／L，pH为5．4的预冷磷酸二氢钠．柠檬酸缓冲液20ml，搅拌3min，8 000r／min离心10min，所得上层清液即为粗酶液。

【1】2.1.2 匀浆法（匀浆法提取的酶液没有活性）将莲藕洗净，去皮，切碎，加入0．05mol／L，pH5．4的预冷磷酸氢二钠．柠檬酸缓冲溶液(含5％的PVPP)，料液比为1：2．2，捣碎，搅拌，抽滤。

向滤渣中加入0．05mol／L，pH5．4磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲溶液(W／V为1：1)再次搅拌，抽滤，两次滤液合并，8 000r／min离心10rain，所得上清液即为粗酶液。

【2】2.2.3 匀浆浸提法（匀浆浸提法提取所得粗酶液活性最高，操作简便，提取所得粗酶液活性高，且可以直接用于研究）（1）将莲藕洗净，去皮，切碎，加入0．05mol／L，pH5．4的预冷磷酸氢二钠．柠檬酸缓冲溶液(含5％的PVPP)，料液比为1：2．2，捣碎，搅拌，4。

实验四、多酚氧化酶的活性的测定及酶学性质

实验四、多酚氧化酶的活性的测定及酶学性质(总3页)-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除实验四、马铃薯块茎多酚氧化酶（PPO）活性测定及酶学性质一、实验目的1掌握分光光度法测定多酚氧化酶活性的一般原理及操作技术方法。

2了解酶的活性与植物组织褐变以及生理活动之间的关系。

二、实验原理马铃薯不耐储藏，在加工过程中去皮切分后非常容易发生酶促褐变，使外观品质和营养价值大为降低，制约着马铃薯的开发利用。

酶促褐变是马铃薯加工产业必须解决的难题。

其中多酚氧化酶是导致马铃薯等果蔬发生酶促褐变的重要酶类。

多酚氧化酶活性大小直接影响酶促褐变程度。

多酚氧化酶(polyphenol oxidase，PPO)又称酪氨酸酶、儿茶酚酶、酚酶等．是自然界中分布极广的一种含铜氧化酶．普遍存在于植物、真菌、昆虫的质体中。

植物受到机械损伤和病菌侵染后，PPO催化酚与O2氧化形成醌，使组织形成褐变．以便损伤恢复，防止或减少感染，提高抗病能力。

研究多酚氧化酶的特性对食品的加工与保藏工艺有非常重要的意义。

因此，检测食品中多酚氧化酶具有重要意义。

多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶，在一定的温度、pH条件下，有氧存在时，能使催化邻苯二酚氧化生成有色物质，单位时间内有色物质在410nm处的吸光度与酶活性强弱成正相关，在分光光度计410nm处使反应体系的OD值产生变化，通过OD值的变化确定PPO的酶活大小。

多酚氧化酶?邻苯二酚（儿茶酚）＋1∕2?O2——————→邻醌＋H2O?三、试验材料、试剂及试验用品1．材料：马铃薯块茎。

2．仪器：分光光度计；离心机；恒温水浴；研钵；试管；移液管；容量瓶3．试剂：0.1mmol/L 磷酸缓冲液（pH=7.0）；0.01mol/L邻苯二酚；0.1mol/L 磷酸氢二钠；0.1mol/L磷酸二氢钠；10mmol/L柠檬酸；10mmol/L抗坏血酸；10mmol/L乙二胺四乙酸二钠（EDTA）；10mmol/L亚硫酸钠四、实验方法：1.多酚氧化酶的提取取0.5g马铃薯块茎样品，加入预冷的磷酸缓冲液（pH7.0）3ml，研磨匀浆，转移到离心管中，再用7mL磷酸缓冲液冲洗研钵，合并提取液，在４℃下离心（8000r/min）5min，取上清液为多酚氧化酶提取液，并量取粗酶液体积。

小麦粉多酚氧化酶活性测定方法的改进

小麦粉多酚氧化酶活性测定方法的改进周小玲;杨代明;李娜【摘要】选取3个小麦粉作为试验材料,对国家标准征求意见稿《粮油检验小麦粉多酚氧化酶测定》的方法进行检验,发现该法因缺少PPO粗酶提取过程,参加反应的酶量较少,不能反映小麦粉真实的PPO活性;其次PPO与底物的反应温度不是最适宜的,导致酶反应不充分;第三酶反应后再离心,使得一部分酶反应产物被沉淀截留,导致检测数据小且不准确.文章在该基础上对其进行改进,考察浸提时间、最适反应温度、底物邻苯二酚添加时间对PPO活性检测的影响,优化该检验方法.结果表明:优化后的检验方法测得的结果较为理想,采用浸提4h、离心后添加邻苯二酚、反应温度70℃,测得的PPO活性数值大大提高,重复性好,稳定可靠.并采用改进后的方法检测了50种小麦粉,得出不同等级的小麦粉PPO的范围.【期刊名称】《食品与机械》【年(卷),期】2015(031)006【总页数】4页(P84-87)【关键词】多酚氧化酶;最佳条件;小麦粉等级与PPO范围【作者】周小玲;杨代明;李娜【作者单位】湖南省振华食品检测研究院,湖南长沙410000;湖南省振华食品检测研究院,湖南长沙410000;湖南省振华食品检测研究院,湖南长沙410000【正文语种】中文存在于多种植物中的多酚氧化酶（polyphenol oxidase，PPO）是近年来谷物化学研究的热点之一［1－2］。

小麦中多酚氧化酶催化细胞内的酚类物质氧化生成醌类物质，醌类物质进一步与其它醌、氨基酸以及蛋白质聚合生成色素类物质，从而降低了小麦粉的经济价值［3－4］。

尽管小麦粉中PPO含量仅占籽粒PPO含量的3%左右，但SvihusB等［5］研究发现PPO是加工储藏过程中面制食品发生褐变的主要原因之一。

葛秀秀等［6］研究发现籽粒和面粉PPO活性与鲜面片和挂面24h亮度（L＊）的变化显著相关。

因此，对籽粒和面粉PPO活性的抑制应作为面制品品质改良的主要措施之一［7－8］。

植物多酚氧化酶研究综述_代丽

多酚氧化酶（ＰＰＯ）是动物、植物、真菌体内普遍存在的一类铜结合酶。

早在１８８３年Ｙｏｇｈｉｄ就发现日本漆树树汁变硬可能与某种活性物质有关。

１８９４年Ｂｅｔｒａｎｄ首次研究了这种物质，发现它是一种酶蛋白。

１９３７年Ｋｕｂｏｗｉｔｚ在Ｗａｒｂｕｒｇ实验室中第１次分离出多酚氧化酶［１，２］。

随着研究的不断深入，对多酚氧化酶各方面都有了更深一步的认识。

笔者就多酚氧化酶的生理作用、功能、定位分布做简要介绍。

１多酚氧化酶的分布和定位多酚氧化酶广泛存在于植物体的各种器官或组织中，如花器官、分生组织、叶片、块茎、根中，一般在幼嫩部位含量高，而成熟部位较少［２］。

番茄的茎杆的韧皮部、叶片的表皮细胞、花蕾的分生组织、种子和果实中均有积累，在靠近顶端幼叶的ＰＰＯ主要积累在表皮细胞和毛状体中，成熟叶片中的ＰＰＯ主要积累在分化的叶肉、韧皮部、毛状体中［３］。

马铃薯芽、根的多酚氧化酶的活性最高，幼叶和成熟块茎中活性中等，成熟叶和茎叶活性最低［４］。

烟叶在苗期时ＰＰＯ的活性较高，叶片进入旺盛生长期后ＰＰＯ逐渐升高，在叶片定长时ＰＰＯ达最大，进入成熟期后ＰＰＯ活性开始下降，并且同一生育期烟叶ＰＰＯ活性比较上部叶＞中部叶＞下部叶［５］。

Ｋｒｕｇｅｒ等研究了小麦籽粒发育和成熟过程中ＰＰＯ活性变化，指出在籽粒早期就有ＰＰＯ存在，未成熟籽粒的ＰＰＯ主要存在于胚乳中，随籽粒的发育成熟，籽粒中的双酚氧化酶活性很高，在成熟后降至很低［６，７］。

Ｔｈｙｇｅｓｅｎ等［８］报道，马铃薯匍匐茎、块茎、根和花中ＰＰＯ活性高，而叶和茎中的低，在块茎发育过程中块茎的ＰＰＯ活性不断升高。

基因水平同样证明，植物多酚氧化酶研究综述代丽１，宫长荣１，史霖１，陈付军１，巩培智２（１河南农业大学农学院，河南郑州４５０００２；２湖北襄樊市烟草公司，湖北襄樊４４１００３）摘要：多酚氧化酶（ＰｏｌｙｐｈｅｎｏｌＯｘｉｄａｓｅ简称ＰＰＯ）是一类广泛分布于植物体中的一种铜结合酶。

茶叶中多酚氧化酶提取的响应面优化_刘琨

Abstract: The extraction technique of polyphenol oxidase from green tea was optimized to provide theoretical parameters for further purification. On the basis of single-factor experiments, the effects of different pH value of buffer, the amount of polivinpolypyrrolidone (PVP) and ratio of buffer to material on the extraction of polyphenol oxidase were investigated with a three-factor CCD design. The extraction parameters were optimized with response surface methodology. The results indicated that polyphenol Oxidase activity increased to max as pH value rose to 5.6, the amount of PVP rose to 0.16% and the ratio of buffer to material rose to 4.5:1. Extraction model of polyphenol oxidase established by CCD method can precisely predict the experiment results. In the best conditions deduced from the mode, the extraction activity of polyphenol oxidase is high. Key words: tea; polyphenol oxidase; extraction; response surface

多酚氧化酶的活性测定的报告

朴东日：多酚氧化酶活性的测定。

一、试验目的本试验的目的在于掌握多酚氧化酶活性测定的一般原理及操作技术。

二、试验原理酚氧化酶（PPO）催化各种酚与O2氧化为醌。

本实验是采用邻苯二酚为底物，在0.2M磷酸氢二钠－0.1M柠檬酸缓冲液PH6.0的反应体系中，PPO催化邻苯二酚形成褐色的醌，在分光光度计410nm处使反应体系的OD值产生变化，通过OD值上升的读数变化确定PPO的酶活大小。

三、试验材料、试剂及试验用品材料：李子样本80个（按照80个预算药品）李子处理：果实发育早期、果实发育中期、果实发育后期、发育中期果实用1-MCP处理、发育中期果实用乙烯处理。

药品：预冷的磷酸缓冲液（ｐＨ６．４）２０ｍＬ１ｍＬ（０．１ｍｏｌ／Ｌ）邻苯二酚４ｍＬ磷酸缓冲液（ｐＨ６．４）四、实验方法：1.ＰＰＯ的提取取１ｇ李子果肉样品，冰浴研磨，加入预冷的磷酸缓冲液（ｐＨ６．４）２０ｍＬ，在４℃下离心（４２００ｒ／ｍｉｎ）１０ｍｉｎ，取上清液为蜜柚果肉ＰＰＯ酶提取液。

2.ＰＰＯ活性测定采用比色法测定。

将１ｍＬ（０．１ｍｏｌ／Ｌ）邻苯二酚加入４ｍＬ磷酸缓冲液（ｐＨ６．４）中，加入１ｍＬ酶液，立即于波长４２０ｎｍ下测定吸光度的变化，每隔２０ｓ记录１次，共记录３ｍｉｎ。

以不加酶提取液的反应液做对照，以每分钟吸光度变化０．０１为１个ＰＰＯ酶活性单位。

3.最后作吸光度A与反应时间的关系曲线图，依据曲线最初直线段的斜率(ΔA/t)计算PPO活力。

(注意空白为：2.5 mL缓冲液和0.5 mL 0.01 mol/L邻苯二酚溶液)一个酶活力单位定义为：以每分钟每毫升增加吸光值0.001的酶量为一个酶活力单位U。

4.多酚氧化酶酶活的计算公式：E=M×60/V (式1)式中：M—每秒钟增加的吸光值V—粗酶液的体积/mL。

实验四多酚氧化酶的活性的测定及酶学性质

实验四多酚氧化酶的活性的测定及酶学性质This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020实验四、马铃薯块茎多酚氧化酶（PPO）活性测定及酶学性质一、实验目的1掌握分光光度法测定多酚氧化酶活性的一般原理及操作技术方法。