液相色谱柱的使用常识1版
色谱柱的使用注意事项及维护 色谱柱如何操作
色谱柱的使用注意事项及维护色谱柱如何操作在日常分别分析工作中，色谱柱的正确使用和维护特别紧要，色谱柱使用是否得当，直接影响色谱柱的寿命，稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。
在色谱操作过在日常分别分析工作中，色谱柱的正确使用和维护特别紧要，色谱柱使用是否得当，直接影响色谱柱的寿命，稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。
在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护色谱柱。
（1）柱子在装卸、更换时，动作要轻，接头拧紧要适度。
必需防止较强的机械振动，以免柱床产生空隙。
（2）假如仪器用来做仪器分析，样品种类有限，但分析次数多，则不妨为每一类常规分析配置一根专用柱，这样有助于延长柱子的寿命。
（3）避开压力和温度的急剧变化及任何机械震动。
温度的蓦地变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充情形；柱压的蓦地上升或降低也会冲动柱内填料，因此在调整流速时应当缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。
（4）应渐渐更改溶剂的构成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂更改为全部是水，反之亦然。
（5）如使用柱温掌控装置时，应注意在通人流动相后才能升温。
（6）一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。
否则反冲会快速降低柱效。
（7）选择使用适合的流动相，以避开固定相被破坏。
有时可以在进样器前面连接一个预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避开分析柱中的硅胶基质被溶解。
（8）避开将基质多而杂的样品尤其是生物样品直接注人柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一个保护柱。
保护柱一般是填有相像固定相的短柱。
保护柱可以而且应当常常更换。
（9）常常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。
在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂渐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50—75mL。
（10）保存色谱柱时应将柱内充分乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。
液相色谱柱的使用
液相色谱柱的使用1、Hamilton离子排斥色谱柱中应封存淋洗液保管，保管温度4—10摄氏度，使用温度20—60摄氏度。
2、Hamilton离子排斥色谱柱应在pH2—12范围内使用，淋洗液及样品浓度均不能超出此范围。
进口ShodexIC色谱柱应在pH3—12范围内使用，淋洗液及样品浓度均不能超出此范围。
3、Hamilton离子排斥色谱柱大使用压力不能超出15MPa。
4、拆下Hamilton离子排斥色谱柱时，应在色谱柱温度降至室温后拆下，拆下后立刻以堵头密封。
5、含有重金属的样品，应以阳离子交换树脂处置后，去除重金属才略进样。
6、含有有机物的样品，应过C18固相萃取柱后进样。
7、样品硬度较高时，应先去除样品中的钙镁离子。
8、样品进样前必须以0.22m微孔滤膜过滤或一次性针头过滤器过滤。
9、室温保管色谱柱时，应每周通淋洗液一次。
10、杭州亚莱博为您供给Hamilton离子色谱柱的售前售后服务。
液相色谱柱的使用色谱柱在使用前，可以进行柱的性能测试，并将结果保管起来，作为今后评价柱性能变更的参考。
但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是依照色谱柱出厂报告中的条件进行（出厂测试所使用的条件是较佳条件），只有这样，测得的结果才有可比性。
1、样品的前处置：a、可以使用流动相溶解样品。
b、使用予处置柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。
c、使用0.45？m的过滤膜过滤除去微粒杂质。
2、流动相的配制：液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而实现分别的目的，因此要求流动相具备以下的特点：a、流动相对样品具有肯定的溶解本领，保证样品组分不会沉淀在柱中（或长时间保管在柱中）。
b、流动相具有肯定惰性，与样品不产生化学反应（特别情况除外）。
c、流动相的黏度要尽量小，以便在使用较长的分析柱时能得到好的分别效果；同时降低柱压降，延长液体泵的使用寿命（可运用提高温度的方法降低流动相的黏度）。
常用液相色谱柱使用与保养
常用液相色谱柱使用与保养液相色谱（Liquid Chromatography，简称LC）是一种分离和分析物质的方法，广泛应用于化学、生物化学、环境科学、食品科学等各个领域。
在液相色谱系统中，色谱柱是其中最为重要的组成部分之一，对色谱分离的效果和分析结果有着重要影响。
因此，正确的使用和保养色谱柱是保证色谱实验质量和延长色谱柱寿命的关键。
一、色谱柱的选择1.根据分析需要选择合适的色谱柱类型，如反相、离子交换、凝胶、手性等。
选用的色谱柱应能实现样品分离的目标。
2.考虑色谱柱尺寸，如柱径和柱长。
柱径越小，理论板高度越高，分离效果越好，但同时也容易增大柱后压力。
柱长则决定了分离时间，通常根据样品的复杂程度和实验要求进行选择。
3.考虑色谱柱填充物，如C18、C8、C4等反相填料。
填充物的理化性质不同，会对分离效果产生影响。
根据样品性质和分离目标选择填料。
二、使用色谱柱的注意事项1.在使用前检查色谱柱外观，确保柱壁完好无损，无裂缝或损坏。
同时检查柱头端口是否干净，无污物残留。
2.进行柱前的处理，如样品预处理和溶剂预处理，保证样品的稳定性和纯度，避免对色谱柱产生不利影响。
3.操作时避免剧烈振荡、震动或摇晃色谱柱，以免对柱填料产生机械损伤。
4.在柱温控制装置的帮助下，保持色谱柱运行温度的稳定，以确保分离结果的重复性和再现性。
三、色谱柱的保养1.使用前、使用后和中间暂停使用时需正确保管色谱柱。
使用前，色谱柱应存放在干燥、阴凉的地方，避免阳光直射。
使用后，将色谱柱用保护帽覆盖，防止灰尘、气体和湿气进入柱内。
中间暂停使用时，用适当的主流溶液保养柱床，避免干燥。
保养柱床时需将色谱柱倒放，使柱床保持湿润状态。
2.避免在色谱柱上溢液，以免引起柱床断裂或填料活化。
使用前，尽量将样品溶液过滤或超声处理，避免样品中存在大颗粒杂质。
3.保证洗涤液和贮存液的纯度和质量，避免因杂质和离子引起色谱柱填料的损坏。
对于需要多次使用的色谱柱，洗涤液需要选择与柱填料相容的溶剂进行洗脱。
液相色谱柱的使用和维护保养
液相色谱柱的使用和维护保养液相色谱柱是一种广泛使用的分离技术，可用于分离和测定复杂混合物中的组分。
由于液相色谱柱具有精确分离、操作简便、分离效率高等特点，因此，越来越多的实验室都开始使用该技术。
在使用液相色谱柱时，正确的维护保养非常关键。
本文将介绍液相色谱柱的使用方法和维护保养技巧，以便确保您的分离实验能够得到最佳的结果。
一、液相色谱柱的使用1. 准备工作使用液相色谱柱之前，必须先进行预备工作。
这包括：清洗和准备液相色谱柱以免携带有污染物。
准备需要分离和测定的样品。
准备适当的流动相。
流动相必须符合样品的性质。
液相色谱柱的流动相应该是无色的，纯净的水或相应的缓冲液，并具有必要的缓冲能力。
根据柱的尺寸来选择适当的样品注射量。
2. 柱的装配通常情况下，液相色谱的柱是由管状的柱壳、填充柱节、柱端固定件和柱段之间的密封件组成。
在对柱进行装配的时候，对组件应该加强检查以保证每一个元件的质量。
柱被放置在可控压力的色谱装置中，直到达到设定的温度，流动相通过柱床高度。
在样品通过柱床的过程中，要确保流动相的速度恰好足够将所有的组分都分开并在规定的时间内溶出。
3. 分析过程准备工作完成后，可以开始进行样品的分离实验。
在整个过程中，以下措施应予以注意：在样品从样品室进入色谱柱之前，流动相必须在柱中流动。
否则，在注入样品时，将有空气囤积在柱床中，会在透射检测器处产生噪音。
更换液相色谱柱的流动相时需要小心，因为对于一些化学品来说，即使是微量的杂质也会对结果产生影响。
如果发现柱床粘住或困住，不应使用力量来拉动柱子，而应该使用相反方向的流动相，以使样品回到某一个位置，并反向流动一会，这样可以避免样品损坏柱子床。
二、液相色谱柱的维护保养液相色谱分析的成功与否，除了预备工作和分析过程外，还与样品的制备、取样位置以及样品进入液相色谱柱中的流动相的条件等因素有关。
因此，经常做好液相色谱柱的保养工作，可以有效防止柱子损坏，延长其寿命并保证实验结果的准确。
色谱柱的使用
如色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度最好是室温。
3 、色谱柱的再生因为色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的增加，会出现色谱峰高降低，峰宽加大或出现肩峰的现象，一般来说可能是柱效下降。
（1 ）、反相柱的再生：依次采用20-30 倍的色谱柱体积的甲醇：水=10 ：90 （V/V），乙腈，异丙醇作为流动相冲洗色谱柱，完成后再以相反顺序冲洗色谱柱。
（2 ）、正相柱的再生：依次以20-30倍色谱柱的体积的正己烷、异丙醇、二氯甲烷、甲醇作为流动相冲洗色谱柱，然后再以相反的顺序冲洗色谱柱。
要注意上述溶剂必须严格脱水。
4 、色谱柱在使用过程中易出现的问题和解决办法色谱柱在使用中最常见的问题就是柱压升高，如果柱压是在长时间使用过程中缓慢增加，属于正常现象。
但柱压在使用过程中突然升高（系统管路堵塞及压力传感器故障除外），可能的原因有如下几点：（1 ）、色谱柱头的过滤筛板堵塞或污染；（2 ）、色谱柱头的填料被样品污染；（3 ）、色谱柱内缓冲液中的盐遇到高浓度的甲醇或其他有机溶剂，形成结晶析出；（4 ）、流动相PH 值过大或过小使固定相结构破坏或溶解。
解决办法如下：（1 ）、如确定是色谱柱头的过滤筛板被污染，可以将色谱柱反方向用甲醇冲洗至正常压力，或者卸下色谱柱头，将其放在10％的稀硝酸内超声清洗10 分钟，后再用纯水超声10 分钟，重新装入色谱柱。
（2）、如确定色谱柱头的填料被污染，将柱头螺丝卸下，挖出柱内前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔细修复后，重新安装上柱头螺丝。
（3 ）、如确定定是盐结晶，用10% 的甲醇/ 水冲洗色谱柱使柱内盐全部溶解，再换高浓度甲醇。
（4 ）、如果因PH 值使用不当，很难恢复。
液相色谱柱使用说明
液相色谱柱使用说明液相色谱柱是一种常见的色谱技术应用于分离和分析化合物的工具。
本文将为您详细介绍液相色谱柱的使用说明，包括如何选择合适的柱子、柱子的安装步骤、样品的准备和加载、柱子的使用注意事项以及柱子的保养和储存方法。
1.选择合适的液相色谱柱在选择液相色谱柱之前，需要考虑以下几个因素：-样品的性质和分离要求：不同的柱子对不同性质的化合物有着不同的分离效果。
根据样品的极性、大小和稳定性等因素，选择合适的柱子（例如反相柱、正相柱、离子交换柱等）。
-流动相的选择：根据样品溶解度和分离要求，选择合适的流动相（溶剂、缓冲液等）。
2.液相色谱柱的安装步骤-将柱床冲洗干净：使用纯溶剂（如甲醇、乙醇等）反复冲洗柱床，直至流出的溶液无色透明。
-将液相色谱柱连接至色谱仪：在连接针嘴前，先用一根塑料贴纸封住柱子的两端，然后将针嘴旋入液相色谱柱的出口。
-将柱子连接到色谱仪：将柱子放入色谱仪的支架上，并确保柱子的连接口与色谱仪的进样器连接正确。
3.样品的准备和加载-样品的准备：将样品溶解在适当的溶剂中，使其达到合适的浓度，并在必要时进行过滤或稀释。
-样品的加载：使用自动进样器或手动进样器，将样品加载到液相色谱柱中。
避免过量的样品装载和过高的进样速度。
确保样品溶液完全进入柱子，并记录样品加载的详细信息。
4.液相色谱柱的使用注意事项-避免干涸：始终保持柱子中的液相色谱柱湿润，避免出现干涸和损坏的情况。
在使用完毕后，必要时用合适的溶剂进行洗脱，然后用空气或氮气进行保护。
-遵循柱子的使用范围：柱子通常有推荐的温度和压力范围。
超出这些范围可能会导致柱子性能下降或甚至损坏。
-避免高浓度的盐类溶液：高浓度的盐类溶液可能对柱子产生不良影响，导致柱子的损坏或压力升高。
5.液相色谱柱的保养和储存方法-定期清洗：根据使用频率，定期清洗液相色谱柱。
使用纯溶剂进行冲洗，以去除残留的样品和杂质。
-保持柱子湿润：柱子在存储期间应保持湿润。
用合适的溶剂进行洗脱，并用盖子密封柱子的两端，以避免柱床干燥。
液相色谱柱使用注意事项
液相色谱柱使用注意事项在使用液相色谱柱时，需要注意以下事项以保证柱子的性能和使用寿命。
1.流动相流动相是液相色谱分离的基础，应选择与样品相容、纯度高、稳定性好的流动相。
在使用前，应进行过滤和脱气处理，以避免对柱子造成损害。
2.柱子选择根据不同的样品和分离要求，应选择合适的液相色谱柱。
选择时需要考虑柱子的类型、粒径、孔径、填料等参数。
对于复杂的样品，建议使用具有更强分离能力的反相柱。
3.柱子清洁在使用前，应对液相色谱柱进行清洁，以去除柱子内部的杂质和污染物。
清洁时应使用温和的清洁剂，如甲醇、乙醇等，并避免使用强烈的清洁剂或酸碱溶液。
4.操作温度液相色谱柱应在规定的操作温度下使用。
过高的温度可能导致柱子的性能下降或损坏，而过低的温度则可能导致样品分离效果不佳。
在使用过程中，应密切关注柱温的变化。
5.压力变化压力变化是液相色谱分离的关键参数之一。
在使用过程中，应密切关注压力的变化情况。
若出现压力波动或异常升高，应立即采取措施解决问题，以免对柱子造成损害。
6.流动相流速流动相流速是影响液相色谱分离效果的重要因素之一。
应根据分离要求和样品性质选择合适的流速。
过快的流速可能导致柱子的性能下降或损坏，而过慢的流速则可能导致样品分离效果不佳。
7.样品处理在进样前，应对样品进行处理，以去除杂质和干扰物质。
处理方法包括样品萃取、净化、浓缩等。
处理时应避免对样品造成污染或损失。
8.柱子储存在使用完毕后，应对液相色谱柱进行妥善的储存。
储存时应避免阳光直射、高温、潮湿等不利环境条件。
同时，应定期对柱子进行检查和维护，以保证其性能和使用寿命。
(完整版)色谱柱的使用及维护
前言液相色谱的分离原理是,在色谱柱流动相中样品的不同组分与固定相发生吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和等作用,由于作用力的大小、强弱不同,各种组分在固定相中滞留的时间也不同,因而先后从以固定相中流出而得到分离。
因此液相色谱分离的关键之一是色谱柱中的固定相。
柱效的好坏直接影响目标化合物的分析和检测。
但在液相色谱运行过程中,色谱柱极易发生问题,因此掌握正确使用和维护色谱柱的知识非常必要。
色谱柱使用过程中容易发生柱堵塞引起系统压力过高;柱效低引起峰拖尾、变宽;柱污染、损坏导致鬼峰等问题。
引起这些问题的内在原因有:(1) 硅羟基的死吸附。
色谱柱的基材硅胶粒子表面存在硅胶羟基。
任何物质在色谱柱中都存在双分配效应,即在流动相与固定相之间进行分配,又在流动相与硅羟基之间进行分配。
被分析物质被硅羟基吸附称为非特异性吸附,或称死吸附。
当硅羟基对被分析物质的吸附趋近于饱和状态时,色谱柱柱效下降,峰形出现拖尾、变宽。
(2) 重金属。
色谱柱的基材硅胶粒子无论纯度多高,无论怎样处理,都会有不少于5 ×10- 6 的重金属以金属氧化物的形式残存在硅胶粒子的表面,这些金属氧化物很容易与其它化合物形成螯合物,使其被氧化,产生不对称峰或拖尾峰。
例如儿茶素和大多数中药,因含有多酚结构,极易被金属氧化物氧化,影响其分离效果。
(3) 碳流失。
固定相经长期使用,会有部分碳链被流动相洗脱下来,随流动相一起流出色谱柱外, 造成碳流失。
(4) 缓冲液中盐的析出。
在做色谱分析时,有时流动相中会含有缓冲盐溶液。
分析结束后,如果没有先用含一定配比的水相流动相冲洗,而直接用纯有机相冲洗,瞬间柱子中的微环境是高有机相、低水相。
这时流动相中的缓冲盐溶液极易析出盐,将柱子堵塞,使柱压升高,柱效下降。
(5) 色谱柱变干。
如果对色谱柱保存不当,使色谱柱中的保存液全部挥发,柱子内部变干,造成色谱柱的损伤,影响分离效果。
2 色谱柱的使用新柱使用前应先检查产品包装、外观是否完好。
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液相色谱柱的使用常识
色谱柱信息 (1)
安装色谱柱 (2)
平衡色谱柱 (2)
平衡色谱柱的意义（反相柱、硅胶柱、极性柱） (2)
平衡色谱柱的方法 (2)
色谱柱的保存 (3)
色谱柱的再生 (4)
色谱柱的维护 (4)
液相色谱工作中和色谱柱有关的故障及解决办法 (5)
色谱柱信息
从色谱柱上的标签可以至少获得以下一些信息：
1）生产商、商品名称、规格、货号（Part No.）、填料类型、批次、柱号。
其中，生产商、商品名称、规格和货号，方便下次采购同样产品，对于药物质检这是常见的需求。
而填料类型、批次和柱号，是发现新柱存在质量问题时联系销售商或生产商时重要和必需的信息之一。
原因：批次，往往与填料信息密切相关，填料是一批批生产出来的，重现性上的严重缺陷可能是某个批次填料的整体问题，提供批次信息，可以帮助技术服务人员在第一时间查询全球是否有同样批次的投诉报告；柱号，是这根柱子的“身份证”，换柱和退柱时的必需信息，也是实验室器材管理应当记录存档的必要信息。
2）流向。
绝大部分色谱柱都有方向的要求。
应当仔细检查，按流向标志将色谱柱接入HPLC 系统。
注意在使用此色谱柱的过程中不要遗失、毁坏或沾污这个标签，以便在使用过程中出现问题时我们可以对该柱子的生产过程进行追溯。
为方便管理，还可以自行在柱上贴一些管理标签，如购入时间、负责人员，等。
贴心提示：
①当您接到一根新的色谱柱时，要阅读并保存好使用说明书（使用前应当至少阅读一遍）、
出厂技术证书或分析测试报告（Certificate of Analysis），有时为两份，一份是该批次填料
选择性测试报告，一份是该柱的柱效测试报告。
②您可以为色谱柱建立技术档案，其中包括：厂方提供的技术指标、复核验收指标、使用情况记录、使用过程中难免出现的各种问题及处理方法。
便于追踪事故原因。
尽可能专柱专用，并固定操作人员。
质检部门，还可以根据使用档案估算柱寿命，提前进行申请和购买。
安装色谱柱
液相色谱仪由高压液体泵、检测器及液相色谱柱等三部分组成，其中液相色谱柱的正确安装和使用，是液相色谱工作的关键；也是液相色谱工作者获得正确可靠的实验数据的必经之路。
根据标签上的方向将色谱柱连接到泵（箭头指向检测器的方向），请使用PEEK材料的接头，以避免不锈钢接头对柱子的PEEK材料的接口造成磨损。
当色谱柱使用一段时间后，应将色谱柱反向冲洗，以洗去柱头的杂质或颗粒。
注意：清洗时断开检测器。
平衡色谱柱
平衡色谱柱的意义（反相柱、硅胶柱、极性柱）
由于色谱柱在储存或运输过程中，保存色谱柱的溶剂有可能挥发而造成固定相部分干掉，这会引起键合相的空间结构发生变化。
因此，新的色谱柱在用流动相分析样品之前，请一定要充分平衡色谱柱。
平衡色谱柱的方法
☆反相色谱柱：
在经过出厂测试后是保存在乙腈/水的流动相体系中的，
①在平衡之前，请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶；
②新柱应先以10－20倍柱体积的5％甲醇或纯乙腈作流动相冲洗色谱柱。
③如果您所使用的流动相中含有缓冲盐或离子对试剂，应注意在乙腈冲洗后用高比例水"过渡"。
即每天分析开始前必须先用高比例水冲洗30分钟以上（防止盐析出），再用缓冲盐流动相平衡；分析结束后必须先用高比例水冲洗30分钟以上，除去缓冲盐之后再用甲醇冲洗30分钟（保护柱子）。
☆硅胶柱或极性色谱柱
在经过出厂测试后是保存在正己烷的流动相体系中的，相对于反相色谱柱来说，需要更长的时间来平衡。
如果极性色谱柱需要使用含水的流动相，请在使用流动相平衡之前用异丙醇平衡。
即每天分析开始前必须先用异丙醇冲洗10-20倍柱体积，再换用流动相平衡；分析结束后必须先用异丙醇冲洗10-20倍柱体积后再用正己烷冲洗30分钟（保护柱子）。
贴心提示：
①在确定分析样品的流动相时，要确保您使用的流动相和保存色谱柱的流动相互溶
②平衡过程中，将流速缓慢地提高，首先用低流速0.2ml/min将色谱柱平衡过夜（注意：断开检测器）；然后，将流速增加到1ml/mol冲洗30分钟，以便将色谱柱的填料充分平衡至最佳状态。
可以保证色谱柱的使用寿命，并且保证在以后的使用中，获得分析结果的重现性。
③再用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂的流速如果较低，则需要较长的时间来平衡）
④请注意将预柱和分析柱一起平衡
⑤每天用足够的时间以流动相来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的"补偿"，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长！
色谱柱的保存
A．几天之内的短期放置，应先用溶剂冲洗好色谱柱(如凝胶柱则用蒸馏水来冲洗) ，再把色谱柱的两头用密封螺丝密封好即可。
B．如果色谱柱长期不用，应使用色谱柱使用说明书中所指明的溶剂来充满色谱柱，再把色谱柱的两头用密封螺丝密封好即可。
C．色谱柱应贮存在4℃-室温下，如果放置于0℃以下的环境里，柱内就会结冰，这也将导致柱效的降低。
D．注意溶剂的PH值，一般硅胶基质的色谱柱控制在2～8范围内。
贴心提示：
①首先柱子必须清洗干净后才能贮存，柱子不能贮存在水或水性溶剂中，否则会引起微生物的滋生。
②如果您使用的流动相中含有盐，请首先用高比例水冲洗（3%-5%有机相，1ml/min流速，冲洗30至40分钟），然后再用纯乙腈冲洗30分钟
③一定要将色谱柱的两端封严, 以防止由于溶剂挥发而造成的柱填料干缩现象，引起柱子结构的几何学改变，这可导致柱效的严重降低。
色谱柱的再生
色谱柱在使用一段时间后柱效会下降，这时可以考虑对色谱柱进行再生。
进行色谱柱再生时，应使用一个廉价的泵，我们建议最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。
再生处理包括活化(右→左) 和净化(左→右) 两种。
请根据下表选择您的再生方法：
极性固定相（如Si，NH2*，DIOL基色谱填料）的再生：
正庚烷←→氯仿←→乙酸乙酯←→丙酮←→乙醇←→水** 非极性固定相（如反相色谱填料RP－18，RP－8，CN等）的再生：
水←→乙腈←→氯仿（或异丙醇）←→乙腈←→水
0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱
注意：
*在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能成铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。
**如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。
色谱柱的维护
1.请使用专用的整体化预柱
2.使用预柱保护分析柱（硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度）
2．大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2－7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围
3．避免流动相组成及极性的剧烈变化
4．流动相使用前必须经脱气和过滤处理
5．如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，保存在乙腈中贴心提示：
①使用时请把两端用该色谱柱专配的“封堵”封好，以防止保存固定相的溶剂的挥发。
②色谱柱的PH稳定范围是2.0-7.5，过高的PH值会导致色谱柱柱床产生空洞；过低的PH值会导致键合相的流失。
这些问题都会降低色谱柱的重现性和分离度。
③色谱柱的寿命很大程度取决于待分析的样品和操作条件，因此请做好样品的前处理工作，并保证样品溶液和流动相中不含有固体颗粒杂质。
液相色谱工作中和色谱柱有关的故障及解决办法
贴心提示：
①保留时间没有规律的变化说明色谱柱没有充分平衡。
随着色谱柱使用时间的增加，保留时间会前移，特别是当流动相的pH值为酸性时（pH≤2）。
如果突然发生明显变化，一般由于
系统的问题。
②以上的问题只是工作中常见的部分问题，如有未提及的问题出现，请咨询您的供应商或厂家技术服务人员。
③液相色谱故障排除时不应以问题的表征消失而告终，应该着重于在众多可能的因素中找出问题的根源、每次仅改变一个因素，系统地将问题定位，直至最终筛选出真正产生故障的因素
④将换下来的有问题的部件扔掉，以免和其他好的混淆。
保留的旧部件请用标签做好标记。
⑤实验室应该具有优良的预防性的维护措施合严格周密的记录。
对于常规分析，我们应该大致了解一根柱子/预柱可以进样多少针，这样可以将问题发生的频率最小化。