大鼠皮质脊髓束LuxolFastBlue染色
Luxol Fast Blue髓鞘染色液(伊红法)使用说明书
Luxol Fast Blue髓鞘染色液（伊红法）使用说明书货号：G3240有效期：12个月有效。
产品内容：产品名称规格Storage试剂(A):Luxol Fast Blue染色液50ml RT避光试剂(B):Luxol分化液50ml RT试剂(C):伊红染色液50ml RT避光产品简介：髓鞘（myelin sheath）是包裹在神经细胞轴突外面的一层膜，即髓鞘由髓鞘细胞和细胞膜组成，是神经细胞的质膜沿着轴索的轴心螺旋缠绕形成的多层脂双层结构，髓鞘上有郎飞氏结，可使神经冲动跳跃传递。
髓鞘染色在病理诊断中有一定意义，髓鞘的病理变化分为早期、中期和晚期。
在早期着色较深；病变中期阶段的髓鞘变性形成脂滴，可用脂质染色加以显示，后期彻底溃变并被吞噬细胞清除，故不再有髓鞘的阳性结果。
很多疾病都可以引起髓鞘的变化，Luxol Fast Blue髓鞘染色可以显示病理情况下髓鞘是否完整、变性、坏死程度及修复情况，对神经组织的病理诊断和研究均有意义，例如神经纤维受损时，髓鞘可出现膨胀、曲折成球形、断裂或脱鞘完全消失等改变。
操作步骤（仅供参考）：1.石蜡切片5～8μm，脱蜡至水；2.95%乙醇稍洗；3.入Luxol Fast Blue染色液，室温过夜（冰冻切片染色时间不超过16h）；4.入95%乙醇洗去多余染色液；5.蒸馏水冲洗；6.入Luxol分化液分色15s；7.入70%乙醇分色30s至灰白质清晰；8.蒸馏水冲洗。
（如果分色不足，可重复6～7步骤）；9.入伊红染色液，复染30s～2min，水洗；10.用95%、100%乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
染色结果：髓鞘呈蓝色，背景呈红色。
注意事项：1.分化这一步很关键，应严格控制分化时间，可在镜下观察分化程度。
2.固定液以10%的福尔马林为佳。
3.切片不宜太厚，应控制在8～9μm以内，否则易出现脱片或过染等现象。
4、如室温染色效果不佳或者缩短染色时间，可在56℃下染色。
神经通路示踪技术 尼式染色
其它固定剂： 酒精（alcohol） ： 使蛋白质脱水而致不可逆性的凝固变性。对组织有固定、硬化兼 脱水的作用 醋酸（acetic acid）： 对核蛋白有明显的沉淀作用，不能单独使用，常与酒精联合使用 苦味酸（picric acid）： 沉淀蛋白并溶解粘蛋白，使组织柔软。 铬酸（chromic acid） ： 强氧化剂，能沉淀所有蛋白。重铬酸钾是氧化剂，对蛋白和脂类 有固定作用，尤其是脂类。对核蛋白有溶解作用。 氯化汞（mercury chloride） ： 沉淀各种蛋白。但必须脱汞 锇酸（osmium tetroxide） ： 强氧化剂。蛋白的固定作用较好，不发生沉淀，组织几乎不收缩。 但渗透力弱。 丙酮（acetone）
⒊ Weigert 氏髓鞘染色法 有髓神经纤维的髓鞘主要组成成分是磷脂，如 以铬盐或铁钒媒染使之与苏木精结合，再藉分 色处理，就能着色清晰，并在中枢神经系统显 示其分布状态。髓鞘染色除可用于显示神经纤 维干、束外，更多用于中枢神经系统纤维束的 追踪。因为，尚未髓鞘完全的纤维束（如婴儿 皮质脊髓侧束），或髓化受到损害而产生溃变 的纤维束，在与正常已髓化的纤维对比之下可 以区别。用劳克坚牢蓝（Luxol fast blue）类 染料染色也可显示髓鞘，操作时也较容易。但 染色作用较慢，染色也较浅。
5．冷冻干燥切片(freezing drying sectioning)： 将新鲜组织放入经液氮预冷（-160℃）的异戊 烷中骤冷后，入真空内干燥，已干燥的组织块 进行真空包埋后切片。其特点是细胞在骤冷的 同时立即停止一切生物化学变化，可研究骤冷 时细胞内的物质变化状况。 6．超薄切片(ultrathin sectioning)：通过固定、 脱水、包埋、切片和染色等步骤。固定分预固 定和后固定。包埋剂多为环氧树脂。切片用醋 酸铀及枸橼酸铅进行电子染色，在电子显微镜 下观察。
髓鞘染色液使用说明
髓鞘染色液使用说明
规格：100ml×2
有效期：室温保存，6个月有效。
产品简介：
本产品是运用固蓝（luxol fast blue）染色法染脑和髓鞘。
髓鞘（myelin sheath）是一层脂肪组织，包裹在某些神经元的轴突外，具有绝缘作用并提高神经冲动的传导速度，在中枢和外周神经系统中起保护轴突作用。
本染色法可显示正常的髓鞘。
自备材料：
产品名称规格
髓鞘染液A100ml
髓鞘染液B100ml
操作步骤（仅供参考）：
1、石蜡切片脱蜡至水；
2、无水乙醇5min；
3、浸入髓鞘染液A在58-60℃条件下染色14h；
4、流水冲洗10min；
5、放入70%乙醇中（无固定时间）
6、浸入髓鞘染液B中，至分色完全（可见中间灰质部分颜色变淡）；
7、第5步、6步交替进行；
8、流水冲洗5min；
9、伊红复染数秒（可选）；
10，梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封片。
染色结果：
正常髓鞘呈蓝色，脱髓鞘无色，余呈淡红色。
注意事项：
1、髓鞘染液常温密封放置，可保存6个月；100ml髓鞘染液染150张片子为宜，染液可重复利用。
因髓鞘染液中含有酒精所以加温染色时宜密封，不然溶液蒸发，影响染色效果；
2、酒精和髓鞘染液B分化为关键步骤，应交替分化，镜下观察，控制分色；
3、伊红复染可选，如选，宜浅染。
大鼠皮质脊髓束Luxol Fast Blue染色
[文章编号]1000-2057(2008)01-0005-03南通大学学报(医学版)Journal of Nantong University (Medical S ciences)2008∶28(1)长期以来,脊髓损伤后皮质脊髓束的再生修复研究一直是神经科学研究的热点。
最近有人尝试运用微电子芯片技术重建皮质脊髓束功能[1]。
此项研究中一个关键指标就是皮质脊髓束在脊髓内定位和走行情况。
常用的组织学染色方法不能显示皮质脊髓束,本实验采用Luxo l Fast Blue 染色法对大鼠皮质脊髓束进行形态学研究,取得良好效果。
1材料和方法1.1材料选用健康成年SD 大鼠6只,清洁级,体重250~300g,雌雄不拘,由南通大学实验动物中心提供。
0.1%L ux ol Fast Blue 液(Sigma 公司),L eicaCM 1900冰冻切片机,显微镜为Leica DM R 显微镜(L 公司,德国)。
1.2方法切片制备:给予大鼠复合麻醉剂(0.2ml/100g 体重),腹腔注射麻醉后开胸,穿心脏经升主动脉灌注,先用温(37℃)生理盐水200ml 冲净血液,再用预冷(4℃)的含4%多聚甲醛的磷酸盐缓冲液500ml 快速灌注固定,1h 后取脑和脊髓放入含4%多聚甲醛的PB 溶液中后固定4~6h,再移入30%蔗糖的PB 溶液中4℃过夜,待组织沉底后取脑(延髓)和脊髓颈、胸、腰、荐段行连续横切面冰冻切片,切片厚度为30μm ,直接贴于预先涂有明胶的载玻片上,置室温下晾干待用。
L ux ol Fast Blue 染色:(1)将切片放入乙醇∶氯仿溶液(无水乙醇和氯仿的体积比为1∶1)中5min ;(2)将切片置入95%乙醇溶液中5min ;(3)0.1%L ux olF B 液中56℃过夜;()5%乙醇溶液5;大鼠皮质脊髓束Luxol Fast Blue 染色*1吕广明**,1吴辉群,2栗卓,3刘苏,1韩笑,1季达峰(1南通大学人体解剖学教研室,神经生物学研究所,江苏省神经再生重点实验室南通226001;2北京朝阳区第二医院耳鼻喉科;3南通大学附属医院康复医学科)[摘要]目的:探讨显示大鼠皮质脊髓束的特殊染色方法。
实验性自身免疫性脑脊髓炎鼠模型建立及其病理特点
实验性自身免疫性脑脊髓炎鼠模型建立及其病理特点张健;曾育琦;张静;康德勇;黄天文;陈晓春【摘要】目的：建立髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽（MOG35‐55）诱发的实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠模型，并观察其病理特点。
方法应用M OG35‐55多肽加福氏完全佐剂皮下注射免疫雌性C56BL／6小鼠，观察其临床症状、病理改变及影像学变化。
结果模型组小鼠发病时间为免疫后（12±4）d （8～16d ），发病率83．3％，呈慢性单向过程；H‐E染色模型鼠脊髓白质见大量炎症细胞浸润；罗克沙尔坚牢蓝染色显示，脊髓白质呈片状髓鞘脱失；电镜显示，髓鞘内层呈板层剥脱，轴索肿胀，结构疏松；脊髓M RI检查可见髓内斑片状T2异常高信号。
结论慢性EAE模型具有发病率高、死亡率低、模型稳定、重复性高、制作方便的特点，模型病理改变接近多发性硬化（MS），是研究MS较为理想的动物模型。
%Objective To establish mouse models of experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) induced by peptide myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG35‐55 ) and study their pathological characterization . Methods The female EAE model of C57BL/6 mice (10~12 weeks) were immunized subcutaneously at four sites into the flanks with 300 μg of myelin oligodendrocyte glycoprotein peptide (MOG35‐55 ) with the assistance of Complete Freund's Adjuvant(CFA) and Pertussis toxin (PTX) . We observed the clinical symptoms , histopathologic changes and changes on magnetic resonance scan . Results The experimental group developed the typical symptoms of EAE on (12 ± 4) days after immuniza‐tion with the incidence of 83 .3% and showed a chronic monophasic course . There was a large number of inflammatory cells infiltration and demylination inthelum bar spinal cord . Electron micrographs demon‐strated a considerable amount of the myelin sheaths displayed loose ,vacuoles and splitting . Intramedul‐lary spinal MRI study showed patchy T2 hyperintensityin EAE mice . Conclusion Our study reports a MOG‐indu ced EAE model that has a high incidence and its pathologic changes were similar to multiple sclerosis (MS) ,so it might be an ideal model for the research on MS .【期刊名称】《福建医科大学学报》【年(卷),期】2015(000)001【总页数】4页(P16-19)【关键词】少突神经胶质/免疫学;髓鞘;糖蛋白类/免疫学;脑脊髓炎,自身免疫性,实验性;模型,动物【作者】张健;曾育琦;张静;康德勇;黄天文;陈晓春【作者单位】福建医科大学附属协和医院神经内科，福州350001; 福建医科大学附属协和医院老年病科，福州350001; 福建省老年医学研究所，福州 350001;福建医科大学附属协和医院神经内科，福州350001; 福建医科大学附属协和医院老年病科，福州350001; 福建省老年医学研究所，福州 350001;福建医科大学附属协和医院老年病科，福州350001; 福建省老年医学研究所，福州 350001; 福建省高校老化与变性病重点实验室，福州350001;福建医科大学附属协和医院病理科，福州 350001;福建医科大学附属协和医院神经内科，福州350001; 福建医科大学附属协和医院老年病科，福州350001; 福建省老年医学研究所，福州 350001;福建医科大学附属协和医院神经内科，福州350001; 福建省老年医学研究所，福州350001; 福建省高校老化与变性病重点实验室，福州350001【正文语种】中文【中图分类】R-332;R341.32;R392.11;R744.3;R9712. 福建医科大学附属协和医院老年病科，福州350001；3. 福建省老年医学研究所，福州350001；4. 福建省高校老化与变性病重点实验室，福州350001；5. 福建医科大学附属协和医院病理科，福州350001多发性硬化(multiple sclerosis，MS)是一种病因不明的、主要累及中枢神经系统白质的慢性炎性脱髓鞘疾病。
LFB髓鞘染色
LFB髓鞘染色一、LFB髓鞘染色实验简介劳克坚牢蓝(LuxolFastBlueLFB)属于铜－酞箐染料，在酒精溶液中具有与髓鞘磷脂结合的染色特性。
应用LFB髓鞘染色可以很好地显示出神经组织的髓鞘结构。
二、染色步骤1、切片经蒸馏水清洗后，入0.1% LFB溶液，于60℃密封浸染8-16h2、经蒸馏水清洗后，入95%酒精3、以0.05%碳酸锂水溶液分色10s以上4、经70%酒精继续分色，直至显微镜下观察灰、白质区分清晰为止5、蒸馏水洗片后，用0.25%焦油紫溶液加数滴冰醋酸染液复染10min6、70%酒精将复染颜色分至细胞核及尼氏体呈红色三、样本说明1、石蜡切片取材：1、组织离体后需及时固定；2、组织标本不宜过大、过厚。
固定：1、固定液：10%福尔马林（4%多聚甲醛）或10%中性甲醛；2、用量：一般固定液的量与组织体积比为10:1～20:1；3、固定：适宜的固定时间，主要根据材料的大小、松密程度及固定液的穿透速度而定。
保存：切片经60℃烤片3-5小时后，可于常温或4℃干燥保存。
2、冰冻切片取材：取材后需立即置于超低温冰箱或液氮中保存。
固定：样本冰冻切片后，应立即放入甲醇、丙酮、95%酒精、4%多聚甲醛等固定液中固定。
保存：固定好的切片自然风干，密封后置于-80℃、-20℃保存，尽快用于后续实验。
3、细胞块石蜡切片细胞量较多的样品，可离心分离所需细胞，用中性甲醛固定后制作成琼脂细胞块，然后按照制作石蜡切片的操作流程进行切片。
4、细胞爬片在孔板里做的细胞爬片，爬片取出后，用PBS洗涤2次（根据研究目的，PBS洗涤可选择不做），用4%多聚甲醛4℃固定15分钟，将表面液体吹干，置于-20℃保存。
若在短时间内即开展实验，可在加固定液后，于4℃冰箱中放置一段时间。
5、细胞涂片细胞涂片常用的固定液有95%酒精（最为常用）、酒精-冰醋酸液、乙醚-酒精液和Carney’s液等。
四、注意事项1、常用的固定液为中性甲醛和4%多聚甲醛，能使大多数抗原保存良好，适用于免疫组织化学。
Luxol Fast Blue 简易流程
luxol fast blue染色简易流程( 适用于石蜡、冰冻切片)（1）石蜡切片脱蜡，脱水至95%酒精，同时将LFB放置56度预热。
（冰冻切片可能需要脱脂：将切片放入乙醇：氯仿溶液（无水乙醇和氯仿的体积比1：1，现配）中2h，冰冻切片为了防止掉片，可以在37度烘烤2小时）；（2）将切片置入95%乙醇溶液中5min；（3）0.1%luxol fast blue溶液中56℃过夜；（冰冻切片不超过16小时，或者45度过夜为好！可以62度左右1-2h）（4）95%乙醇溶液5min；（5）双蒸水3min；（6）0.05%碳酸锂溶液（现配）分化3-5min，70%乙醇溶液继续分化30s；（7）双蒸水洗片；（8）镜下观察脊髓灰、白质分界是否清晰，若分界不清晰，则重复（6）、（7）两个步骤，直至分化清晰为止；（9）70%乙醇溶液3min；（10）0.5%伊红溶液30s；（9，10省略）（11）双蒸水洗片；（12）0.1%焦油紫溶液复染1min；焦油紫复染也可以省略，这样白质灰质分化更清晰。
（13）双蒸水洗片；（14）95%乙醇溶液5min；（15）常规脱水（100%乙醇）、透明（二甲苯）、中性树胶封片。
试剂配方：0.1%LFB（100ml）LFB ：0.1g （luxol fast blue：solvent blue 38 （Sigma,S3382））95% ETOH：100ml10%醋酸（冰醋酸）：500ul 过滤，避光，室温保存0.1% Cresyl violet solution（结晶紫，100ml）Cresyl violet ：0.1gddH2O:100ml10%醋酸（冰醋酸）：500ul 过滤0.05%LiCO3溶液（碳酸锂，200ml）：LiCO3: 0.1gddH2O:100mlResults:Myelin, including phospholipids ------------------ blue to greenNeuron ---------------------------------------------- pink to violet Positive Controls:Brain, spinal cord.。
脊髓损伤模型大鼠软脊膜下注射2型腺相关病毒免疫荧光染色分析
《中国组织工程研究》Chinese Journal of Tissue Engineering Research文章编号:2095-4344(2019)31-04979-074979www.CRTER .org·研究原著·柏秋实，男，1997年生，山东省济南市人，汉族，吉林大学白求恩医学部临床医学院在读本科。
并列第一作者：苏胜，男，1997年生，吉林省吉林市人，汉族，吉林大学白求恩医学部临床医学院在读本科。
通讯作者：池光范，博士，博士生导师，副教授，吉林大学基础医学院病理学系，吉林省长春市130021文献标识码:B稿件接受：2019-05-17Bai Qiushi,School of Clinical Medicine,Bethune Medical College,Jilin University,Changchun 130021,JilinProvince,China;Department of Pathology,College of Basic Medical Sciences,KeyLaboratory of Pathophysiology,Ministry of Education,JilinUniversity,Changchun 130021,Jilin Province,ChinaSu Sheng,School of Clinical Medicine,Bethune Medical College,Jilin University,Changchun 130021,JilinProvince,China;Department of Pathology,College of Basic Medical Sciences,KeyLaboratory of Pathophysiology,Ministry of Education,JilinUniversity,Changchun 130021,Jilin Province,ChinaBai Qiushi and Su Shengcontributed equally to this work.Corresponding author:Chi Guangfan,MD,Doctoral supervisor,Associate professor,Department of Pathology,College of Basic Medical Sciences,Key Laboratory of Pathophysiology,Ministry of Education,Jilin University,Changchun 130021,Jilin Province,China脊髓损伤模型大鼠软脊膜下注射2型腺相关病毒免疫荧光染色分析柏秋实1，2，苏胜1，2，王亮佳1，2，郑洋洋2，康娟娟2，徐金影2，池光范2(1吉林大学白求恩医学部临床医学院，吉林省长春市130021；2吉林大学基础医学院病理学系病理生物学教育部重点实验室，吉林省长春市130021)DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.1481ORCID:0000-0001-5022-4115(柏秋实)；0000-0001-9107-079X(苏胜)文章快速阅读：文题释义：软脊膜：软脊膜是一富有血管的薄膜，由2层组成。
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大鼠皮质脊髓束Luxol Fast Blue染色
作者：吕广明，吴辉群，栗卓，刘苏，韩笑，季达峰
【摘要】目的：探讨显示大鼠皮质脊髓束的特殊染色方法。
方法：选用正常成年SD大鼠延髓和脊髓冰冻切片，应用Luxol Fast Blue 染色法进行染色。
结果：Luxol Fast Blue染色后，在延髓和脊髓切片中可见灰质呈淡红色，白质呈蓝色，延髓锥体染成深蓝色。
锥体中Luxol Fast Blue标记的深蓝色阳性纤维，经锥体交叉后至脊髓灰质后连合背侧，沿脊髓后索腹侧深层下行，至荐段后逐渐消失。
在延髓锥体和脊髓颈、胸、腰段后索中，深蓝色的Luxol Fast Blue阳性纤维边界清晰，与周围结构区分明显。
结论：运用Luxol Fast Blue 染色可清楚显示大鼠皮质脊髓束在脊髓内的定位，是一种简便可靠的皮质脊髓束形态学研究方法。
【关键词】皮质脊髓束；Luxol Fast Blue；髓鞘染色；大鼠
[Abstract] Objective: To explore the special staining method for revealing the localization of corticospinal tract in rats. Methods: Luxol Fast Blue staining method was utilized to stain the sections of medulla oblongta and spinal cord of the normal adult Sprague-Dawley rats. Results: In Luxol Fast Blue
staining sections, the gray matter of medulla oblongta and spinal cord was stained in light red, while the white matter around the gray matter was dyed in blue. The dark blue stained Luxol Fast Blue labeled fibers in the pyramid passed through the pyramidal decussation to the contralateral side, descended at the ventral part of posterior funiculus just dorsal to the gray commissure throughout most of the length of the spinal cord and progressively diminished to end at the sacral spinal segments. The Luxol Fast Blue positive fibers in the pyramid and the ventral part of posterior funiculus at cervical, thoracic, lumbar spinal segments were easily discriminated from the surrounding structures. Conclusion: Using Luxol Fast Blue staining method may demonstrate the localization and distribution of corticospinal tract in the spinal cord of rats, which is an easy and effective method in morphological study of corticospinal tract.
[Key Words] Corticospinal tract；Luxol Fast Blue；Myelin stain；Rat
长期以来，脊髓损伤后皮质脊髓束的再生修复研究一直是神经科学研究的热点。
最近有人尝试运用微电子芯片技术重建皮质脊髓束功
能[1]。
此项研究中一个关键指标就是皮质脊髓束在脊髓内定位和走行情况。
常用的组织学染色方法不能显示皮质脊髓束，本实验采用Luxol Fast Blue染色法对大鼠皮质脊髓束进行形态学研究，取得良好效果。
1 材料和方法
1.1 材料选用健康成年SD大鼠6只，清洁级，体重250~300g,雌雄不拘，由南通大学实验动物中心提供。
0.1 % Luxol Fast Blue 液（Sigma公司），Leica CM1900冰冻切片机，显微镜为Leica DMR 显微镜（Leica公司，德国）。
1.2 方法切片制备：给予大鼠复合麻醉剂（0.2 ml/100g体重），腹腔注射麻醉后开胸，穿心脏经升主动脉灌注，先用温（37℃）生理盐水200 ml冲净血液，再用预冷（4℃）的含4%多聚甲醛的磷酸盐缓冲液500 ml快速灌注固定，1 h后取脑和脊髓放入含4%多聚甲醛的PB溶液中后固定4~6 h,再移入30%蔗糖的PB溶液中4℃过夜，待组织沉底后取脑（延髓）和脊髓颈、胸、腰、荐段行连续横切面冰冻切片，切片厚度为30 μm，直接贴于预先涂有明胶的载玻片上，置室温下晾干待用。
Luxol Fast Blue 染色：（1）将切片放入乙醇∶氯仿溶液（无水乙醇和氯仿的体积比为1∶1）中5 min；（2）将切片置入 95%乙醇溶。