发酵豆粕中抗原蛋白和不良寡糖的检测
发酵豆粕中抗原蛋白的定性检测
——SDS-PAGE法
1．适用范围
本标准适用于测定发酵豆粕中抗原蛋白的定性检测。
2．仪器设备
2.1蛋白电泳仪：
2.1.1 电泳仪；（建议使用：北京六一仪器DYY-2C型）
2.1.2 电泳槽；（建议使用：美国伯乐公司的mini型）
2.2 25μl微量进样器；
2.3 制胶装置；（与电泳槽配套出售，包括玻璃板(厚度分别为1.0 mm和 1.5mm各一套)，梳子，拨胶板）
2.4 移液枪(1000μl,200μl,10μl)以及其配套枪头；（属于常规实验耗材）
3．试剂
3.1 丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、过硫酸铵、TEMED；（建议购至上海申能博彩，Chemisonic 进口分装，必须要进口的产品！国产做出来的结果很差）；分析纯；
3.2 无水酒精，分析纯；
3.3 甘氨酸，分析纯；
3.4 Tris，分析纯；
3.5 考马斯亮兰R250，分析纯；
3.6甲醇，分析纯；
3.7 冰醋酸，分析纯；
3.8 甘油（丙三醇），分析纯；
3.9 β-巯基乙醇，分析纯；
3.10 溴酚蓝，分析纯；
3.11 HCl，分析纯；
4.试剂的配置
4.1 SDS-PAGE溶液的配制：
30%丙烯酰胺的配制：丙烯酰胺 30.0g
N’N-甲叉双丙烯酰胺 0.8g
去离子水定容至100ml
4.2 10%过硫酸铵：将1g过硫酸铵溶于10.00ml去离子水中。
2.00mol/L Tris-HCl(pH=8.8)：称取Tris 121.14g溶于500mL蒸馏水中，用浓盐酸
调节pH至8.8(要求准确)。
1.00mol/L Tris-HCl(pH=6.8)：称取Tris 60.57g溶于500mL蒸馏水中，用浓盐酸
调节pH至6.8(要求准确)。
10%SDS：称取5gSDS溶于50ml蒸馏水中。
1.0% 溴酚兰：称取0.05g溴酚兰溶于5ml蒸馏水中。
4.3 染色液：考马斯亮兰R250 0.25g
甲醇 45.40ml
冰醋酸 9.20ml
水 45.40ml
4.4 脱色液：甲醇 456.0ml
冰醋酸 72.0ml
水 472.0ml
4.5 4×分离胶缓冲液：2.00mol/L Tris-HCl(pH=8.8) 75ml
10%SDS 4ml
蒸馏水 21ml
10%过硫酸铵 5ml
4.6 4×堆积胶缓冲液：1.00mol/L Tris-HCl(pH=6.8) 50ml
10%SDS 4ml
蒸馏水 46ml
10%过硫酸铵 5ml
4.7 电泳缓冲液： Tris 3.0g
甘氨酸 14.4g
SDS 1.0g
定容至1L，用HCl调节pH为8.3。
4.8 5×样品缓冲液（5×Loading buffer 蓝色）：
1.00mol/L Tris-HCl(pH=6.8) 0.6ml
50%甘油 5.0ml
10% SDS 2.0ml
β-巯基乙醇 0.5ml
1.0% 溴酚兰 1.0ml
蒸馏水 0.9ml
4.9 5%浓缩胶的配制：（总4ml）
4.10 12%分离胶的配制：（总10ml）
4.11 0.03 mol/L的Tris-HCl样品浸提液
Tris 3.63g
β-巯基乙醇 0.7ml
定容至1L，用HCl调节pH为8.0
5. 聚丙烯酰胺凝胶的制备
将洁净的玻璃片置于制胶支架上（缺口朝里），放平、齐，压紧，将配好的16%分离胶，用1ml枪头从矮口的一侧缓慢加入，操作的过程中，禁止有气泡的生成，离矮面玻璃边缘2cm处，用医用注射器吸取1ml无水酒精，缓慢注入分离胶上，此时可以明显看出分离胶与无水乙醇的分层线，切不可过分晃动胶板，防止乙醇进入分离胶内部，阻碍其凝结。
待分离胶凝固后，倒出乙醇，并用滤纸轻轻吸干乙醇，用同样的方法继续注入5%浓缩胶，注满后插入进样梳，待其完全凝结，后拔掉进样梳，备用。
注意：温度的升高可加速胶的凝结速度，但是过高的温度会造成胶的皱缩，一般控制其凝结温度为30℃左右。
6．样品的制备及电泳
取发酵豆粕1.0g，加入20.00ml 0.03 mol/L的Tris-HCl(pH=8.0)(包括0.01 mol/L 的β-巯基乙醇)在室温下浸泡1小时后（每10分钟搅拌一次），10000rpm下离心20分钟，取上清液80μl，加入20μl 5×样品缓冲液（5×loading buffer 蓝色），沸水浴3分钟后，进行SDS-PAGE电泳：取各样品溶液10μl分别加入到凝胶槽中，开启稳压电源开关，设置电压180v进行电泳，当样品缓冲液的蓝色条带迁移到凝胶底部时结束电泳，将凝胶用拨胶版小心剥下，放入装有染色液的容器中，染色10min后将染色液倒掉，加入脱色液进行脱色，直到凝胶的背影颜色为初始的白色且条带清晰可见为止。
7 结果判定
对比豆粕的抗原条带上，直接判读发酵豆粕中抗原蛋白的降解情况。
结果判定方法如下：完全降解：-，基本降解：++，降解不完全：+++，没有降解：++++
发酵豆粕中不良寡糖的定性检测
——薄板层析法（TLC）
1 适用范围
本标准适用于测定发酵豆粕中的寡糖的定性检测
2 原理
利用不同大小的糖分子在硅胶薄板上的扩散速度的大小不同，将发酵豆粕中的寡糖分开。
3 仪器设备
3.1 硅胶板：10＊10 cm（建议购至青岛海洋化工）
3.2 层析缸（可供放置硅胶板）与硅胶板配套
3.3 烘箱（控制温度70℃和140℃）
3.4 移液枪(10μl)以及其配套枪头；（建议使用金花牌）
3.5 高速离心机；
3.6 250ml具塞锥形瓶
4 试剂
4.1乙醇，分析纯；
4.2正丙醇，分析纯；
4.3乙酸，分析纯；
4.4 1-萘酚，分析纯；
4.5 正磷酸，分析纯；
5 试剂的配制
5.1 展开液：正丙醇：乙酸：水＝1:1:0.1(V/V/V)
5.2 显色液： 1-萘酚 1g
磷酸 100ml
乙醇 900ml
共 1000ml
6 试样的选取与制备
6.1 选取具有代表性的饲料样品；
6.2 利用四分法将原始样品缩至30g；
7 测定步骤
7.1 寡糖（水苏糖和棉籽糖）标样（均购至sigma公司，也可用豆粕按6.2提取糖代替）分别称取寡糖0.01g溶于80%的乙醇溶液中，4℃保藏备用。
7.2 样品的预处理：
准确称取发酵豆粕样品5.0g于250mL三角瓶中，加入50.0mL 80％的乙醇溶液，70℃水浴浸提1h。
取2mL浸提液，10000rpm离心10min，4℃保藏备用。
7.3 样品的测定：
在预制硅胶板上点样，点样量为5μL，点样干燥后在展开液中展开，展开至离硅胶板前沿约2cm处。
自然晾干后，喷淋显色液，在140℃下烘至显色（约2-3分钟）。
8 结果判定
对比硅胶层析板上，样品和标样的条带，直接判读发酵豆粕中寡糖的降解情况。
结果判定方法如下：完全降解：-，基本降解：++，降解不完全：+++，没有降解：++++
M：标样；1-8：不同厂家的发酵豆粕样品；。
发酵豆粕中抗原蛋白和不良寡糖的检测
发酵豆粕中抗原蛋白和不良寡糖的检测发酵豆粕中抗原蛋白的定性检测——SDS-PAGE法1．适用范围本标准适用于测定发酵豆粕中抗原蛋白的定性检测。
2．仪器设备2.1蛋白电泳仪：2.1.1 电泳仪；（建议使用：北京六一仪器DYY-2C型）2.1.2 电泳槽；（建议使用：美国伯乐公司的mini型）2.2 25μl微量进样器；2.3 制胶装置；（与电泳槽配套出售，包括玻璃板(厚度分别为1.0 mm和 1.5mm各一套)，梳子，拨胶板）2.4 移液枪(1000μl,200μl,10μl)以及其配套枪头；（属于常规实验耗材）3．试剂3.1 丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、过硫酸铵、TEMED；（建议购至上海申能博彩，Chemisonic 进口分装，必须要进口的产品！国产做出来的结果很差）；分析纯；3.2 无水酒精，分析纯；3.3 甘氨酸，分析纯；3.4 Tris，分析纯；3.5 考马斯亮兰R250，分析纯；3.6甲醇，分析纯；3.7 冰醋酸，分析纯；3.8 甘油（丙三醇），分析纯；3.9 β-巯基乙醇，分析纯；3.10 溴酚蓝，分析纯；3.11 HCl，分析纯；4.试剂的配置4.1 SDS-PAGE溶液的配制：30%丙烯酰胺的配制：丙烯酰胺 30.0gN’N-甲叉双丙烯酰胺 0.8g去离子水定容至100ml4.2 10%过硫酸铵：将1g过硫酸铵溶于10.00ml去离子水中。
2.00mol/L Tris-HCl(pH=8.8)：称取Tris 121.14g溶于500mL蒸馏水中，用浓盐酸调节pH至8.8(要求准确)。
1.00mol/L Tris-HCl(pH=6.8)：称取Tris 60.57g溶于500mL蒸馏水中，用浓盐酸调节pH至6.8(要求准确)。
10%SDS：称取5gSDS溶于50ml蒸馏水中。
1.0% 溴酚兰：称取0.05g溴酚兰溶于5ml蒸馏水中。
4.3 染色液：考马斯亮兰R250 0.25g甲醇 45.40ml冰醋酸 9.20ml水 45.40ml4.4 脱色液：甲醇 456.0ml冰醋酸 72.0ml水 472.0ml4.5 4×分离胶缓冲液：2.00mol/L Tris-HCl(pH=8.8) 75ml10%SDS 4ml蒸馏水 21ml10%过硫酸铵 5ml4.6 4×堆积胶缓冲液：1.00mol/L Tris-HCl(pH=6.8) 50ml10%SDS 4ml蒸馏水 46ml10%过硫酸铵 5ml4.7 电泳缓冲液： Tris 3.0g甘氨酸 14.4gSDS 1.0g定容至1L，用HCl调节pH为8.3。
您须知道的发酵豆粕真正品质评判的测定方法说明【五】
您须知道的发酵豆粕真正品质评判的测定方法说明【五】发酵豆粕中的小肽与抗原蛋白是衡量品质优劣的两项重要指标，长期以来国内的发酵豆粕产品主要由乳酸菌通过厌氧发酵生产，而出于便捷考虑，业内通常使用酸溶蛋白法测定小肽含量，使用ELISA法测定抗原蛋白含量，但随着发酵豆粕使用普遍性提高，并且芽孢杆菌通过有氧发酵生产的发酵豆粕在国内市场上渐露锋芒，这两种测定方法是否适用，是否能作为客观反映小肽和抗原蛋白真实含量的指标，引起了关注与讨论。
1 小肽-酸溶蛋白法①不同pH 发酵(或酶解)的豆粕在酸中的溶解度不同微生物发酵过程中对蛋白质的分解，实质上就是微生物产蛋白酶的作用。
但是，不同酸碱性的蛋白酶酶解豆粕所得的小肽在酸中的溶解度不同，其中酸性蛋白酶酶解小肽高达96%可以溶于三氯乙酸，而碱性蛋白酶酶解小肽不到 50%。
因此，酸溶蛋白更适合评估酸性发酵或酶解的豆粕产品，将低估希杰速益肽这类芽孢杆菌发酵的中偏碱性产品的小肽含量(刘慧珍，江南大学硕士论文，2007)。
速益肽 55%CP 产品酸溶蛋白相对低(6-10%)。
②小肽应有明确的分子量定义食品国家标准《大豆肽粉GBT 22492》2008 版将小肽的定义由③酸溶蛋白只体现了速益肽小肽含量的一小部分希杰研究所实验发现，同时测定的发酵豆粕样品整体蛋白分布(红色峰)和三氯乙酸溶解后上清液的蛋白分布结果(蓝色峰)。
三氯乙酸提取的分子量5kDa 以下蛋白质部分，而红色图谱和蓝色图谱之间存在一个灰色的面积区域是三氯乙酸没有办法提取出来的样品中的肽含量的部分，即三氯乙酸并不能完全溶解出样品中的所有的肽，只能溶解出其中的一小部分(如下图)。
2 抗原蛋白-ELISA 法和SDS 法①ELISA 法测定加工豆类产品的缺陷致敏性不确定：目前已有商品化大豆抗原蛋白的检测试剂有大豆球蛋白检测试剂盒和β-伴大豆球蛋白检测试剂盒，但是另两种大豆抗原蛋白 Gly m Bd 30K 和 Gly m Bd 28K 并没有商品化试剂盒。
发酵豆粕检测方法
发酵豆粕检测方法（参考）目录1.检测用仪器简介 (2)2.变性聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳 (3)3.Elisa 大豆球蛋白（酶联免疫法） (6)4.小肽的检测（酸溶蛋白） (10)5.寡糖的检测——薄板层析法（TLC） (11)6.乳酸的检测 (12)7.蛋白溶解度的检测（PS） (13)8.发酵豆粕蛋白溶解度的检测（改良） (14)9.水溶性蛋白的检测 (15)10.挥发性盐基氮（VBN） (17)11.PH 值测定 (19)12.水苏糖含量的测定 (20)13.水分、粗蛋白、粗灰分、粗纤维、尿素酶活性的检测 (20)1、检测用仪器简介2、变性聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE ）电泳聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE ）是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速而且可重复的方法。
通过对电泳条带的观察和分析，可以很明显的看出发酵前后或不同产品的抗原蛋白含量。
一、 原理SDS —聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE ）电泳主要依据蛋白质的分子量对豆粕中的抗原蛋白进行分离。
SDS 与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折迭结构，并使其稳定地存在于一个广泛均一的溶液中。
SDS —蛋白质复合物的长度与其分子量成正比。
由于在样品介质和聚丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂，蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小，而电荷因素可以被忽略。
SDS —PAGE 因易于操作和用途广泛， 成为许多研究领域中一种重要的分析技术。
二、 仪器 1、电泳仪及电泳槽 2、振荡器3、离心机（10000 转）4、移液枪（大、中、小）5、离心管（7ml 、5ml 或 1.5ml 、1ml ）三、 试剂： 1、单体母液： 100ml 丙烯酰胺（ACR ） 30g 甲叉双丙烯酰胺 0.8g去离子水定容至 100ml ，棕色瓶 4℃下存放。
可保存 3 个月。
2、分离胶缓冲液（（PH=8.8） 100mlTris-base （1.5mol/L ） 18.17gSDS 0.4g 浓 HCL 调节 PH 至 8.8，定容至 100ml ，过滤，4℃存放。
发酵豆粕的检测方法
发酵豆粕的检测方法引言发酵豆粕是一种富含营养的饲料原料，通过发酵过程可以改变其营养成分和口感等特性。
为了确保发酵豆粕的品质和安全性，需要进行一系列的检测方法。
本文将介绍发酵豆粕的检测方法，并重点讨论营养成分、微生物、重金属以及有害物质的检测方法。
营养成分是评价饲料品质的重要指标之一、以下是一些常用的发酵豆粕营养成分的检测方法：1.水分含量检测：采用干燥法测定。
2. 粗蛋白含量检测：采用Kjeldahl法测定。
3. 粗脂肪含量检测：采用Soxhlet萃取法测定。
4. 粗纤维含量检测：采用Weende方法、AOAC方法或Van Soest方法测定。
5.粗灰分含量检测：采用高温炉燃烧法测定。
微生物含量是评估发酵豆粕安全性的重要指标。
以下是一些常用的发酵豆粕微生物检测方法：1.总菌落计数：采用平板计数法或膜过滤法。
2.酵母和霉菌计数：采用平板计数法或膜过滤法。
3.大肠菌群检测：采用MPN法或膜过滤法。
4.乳酸菌计数：采用平板计数法或膜过滤法。
重金属含量是评估发酵豆粕的环境污染程度的重要指标。
以下是一些常用的发酵豆粕重金属检测方法：1.铅和镉的测定：采用火焰原子吸收光谱法或电感耦合等离子体质谱法。
2.汞的测定：采用氢化物液相色谱法或电感耦合等离子体质谱法。
3.铬、镍、锰和锌的测定：采用火焰原子吸收光谱法或电感耦合等离子体质谱法。
有害物质的含量是评估发酵豆粕的安全性的重要指标。
以下是一些常用的发酵豆粕有害物质检测方法：1.黄曲霉毒素的测定：采用高效液相色谱法或气相色谱法。
2.农药残留的测定：采用气相色谱法或液相色谱法。
3.病原体的检测：采用PCR法或快速培养法。
结论发酵豆粕的检测方法包括营养成分、微生物、重金属以及有害物质的检测方法。
这些方法可以评估发酵豆粕的品质和安全性，确保其在畜牧养殖中的应用效果。
在实际应用中，还需要根据具体情况选择合适的检测方法，并严格执行相关的检测标准，保证检测结果的准确性和可靠性。
QBHHS JC003-2013 发酵豆粕中抗原蛋白的定性检测办法
8%分离胶不同体积各成分含量详表 含量/mL 10mL 15mL 20mL 3.3 5.0 6.7 2.7 4.0 5.3 3.8 5.7 7.6 0.1 0.15 0.2 0.1 0.15 0.2 0.006 0.009 0.012
30mL 10.0 8.0 11.4 0.3 0.3 0.018
50mL 16.7 13.3 19.0 0.5 0.5 0.03
表9
30 6.0 12.0 11.4 0.3 0.3 0.012
50 10.0 20.0 19.0 0.5 0.5 0.02
15%分离胶不同体积各成分含量详表 含量/mL 试剂名称 5 10 15 20 30 蒸馏水 0.5 1.0 1.5 2.0 3.0 30%Acr-Bis(29:1) 2.5 5.0 7.5 10.0 15.0 1M Tris,pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 10%过硫酸铵 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.012 注：如果配制非变性胶，参考上述配方，不加 10%SDS 即可配制成非变性 PAGE 胶。
7
附录 SDS-PAGE 分离胶浓度的最佳分离范围 不同样品的检测，需根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度，不同分离胶浓度的最
7.1
佳分离范围如表 5 所示。 表5 SDS-PAGE 分离胶浓度 6%胶 8%胶 10%胶 12%胶 15%胶 分离胶浓度与最佳分离范围对照表 最佳分离范围 备注 50-150kD 分子生物学中，kD 表示分子量 的单位道尔顿， 一般写的是 Da， 30-90kD kDa 就是 1000Da。 20-80kD 12-60kD 10-40kD
发酵豆粕脲酶活性、胰蛋白酶抑制因子、凝集素和大豆抗原的测定研(精)
发酵豆粕脲酶活性、胰蛋白酶抑制因子、凝集素和大豆抗原的测定研究彭辉才1粱明振1’张宏福2(1广西大学动物科技学院,广西南宁530005;2北京畜牧兽医研究所营养学国家重点实验室, 北京海淀区100094摘要:豆粕中最主要的抗营养因子是胰蛋白酶抑制因子、凝集素和大豆抗原;本试验对8种发酵豆粕进行测定,前两者含量极低未检出。
用SDS-PAGE凝胶电泳定性检测大豆抗原中的B一伴大豆球蛋白(B--Conglycinin和大豆球蛋白(Glycinin,6种条带模糊,抗原消失,结果表明,生物发酵是一种有效的钝化抗营养因子的方法。
关健词:胰蛋白酶抑制因子凝集素13一伴大豆球蛋白大豆球蛋白测定发酵豆粕指是通过现代生物发酵技术对原料豆粕进行发酵处理后的产物。
发酵过程中可产生蛋白酶、非淀粉多糖酶和植酸酶等多种酶活,其目的就是消除抗营养因子,把大分子量的大豆蛋白质分解为多肽、寡肽、小肽,从而增加水溶性,提高消化率,利于动物消化吸收。
这些酶把纤维类物质分解为糖,部分糖被转化为乳酸,并产生大量有益微生物,使豆粕转化成高营养价值的功能性饲料。
发酵豆柏可替代日粮中血浆蛋白粉、鱼粉、肠膜蛋白和乳清粉等动物性饲料原料,可替代日粮中控制腹泻的预防性抗生素,大大降低生产成本,减少畜禽养殖对动物性饲料原料的依赖,杜绝动物性饲料原料所带来的疾病传播,提高养殖业的安全与效益。
大豆的抗营养因子有蛋白酶抑制因子(protease inhibitors,大豆凝集素(SBA、大豆抗原、非淀粉多糖(NSP、植酸(phytic acid、单宁、大豆寡糖、脲酶、.大豆异黄酮、大豆皂甙、致甲状腺肿因子、生氰糖甙等。
这些抗营养因子会导致人和动物胰腺肿大、过敏反应、生长缓慢、日粮养分利用率下降以及其他一些不良生理反应。
本试验测定起主要抗营养作用的胰蛋白酶抑制因子、凝集素及大豆抗原中的大豆球蛋白和B一伴大豆球蛋白。
1材料与方法1.1腮酶的测定脲酶活性测定参照国标GB8622--88执行。
质检豆粕总结(3篇)
质检豆粕总结第1篇豆粕中存在着许多抗营养因子，如胰蛋白酶_、低聚糖、大豆凝血素、植酸、脲酶、大豆抗原蛋白(致敏因子)及致甲状腺肿素等，这些抗营养因子不仅影响饲料的适口性，还会影响饲料的营养价值和动物的物质消化吸收以及体内的一些生理过程，严重影响了动物的健康和生产性能。
通常检测豆粕品质的方法有以下几种：1.尿素酶活性(UA)测定法UA测定法是用于测定大豆中脲酶活性的方法，也是测定豆粕中胰蛋白酶_的间接方法，是评定大豆粕的加工程度是否适当及营养品质优劣的传统方法。
将粉碎的大豆粕与中性尿素缓冲溶液混合，在30±℃温度下保持30min，尿素酶催化尿素水解产生氨，在中性条件下用过量的盐酸中和氨，再用氢氧化钠回滴，计算出每分钟每克大豆粕释放氨态氮的毫克数来表示尿素酶的活性(UA)。
通常认为豆粕中脲酶活性越低，豆粕的营养价值就越高，但如果加热过度又会引起氨基酸的被破坏。
2.蛋白溶解度(PS)测定法此方法被认为是一项优于UA测定方法的评估大豆加工过度与加工不足的最佳方法。
方法主要是用氢氧化钾溶解豆粕，测定其中的蛋白含量占未用氢氧化钾处理的豆粕中的蛋白含量的百分比，来表示蛋白溶解度。
其原理是：加热使游离氨基酸与其他化合物的基团形成不能为消化酶所打开的分子间和分子内的结合键，因而降低了蛋白质的溶解。
一般情况下蛋白溶解度低于70%的豆粕营养价值已受到破坏，低于65%几乎可以肯定豆粕加热过度，严重过熟，致使蛋白的消化利用率会非常低。
近年来由于加工技术的改进，PS有增高的趋势。
有研究表明，豆粕蛋白在氢氧化钾溶液中的溶解度和脲酶活性呈正相关。
3.营养成分检测评定根据我国国家标准GB/T19541-2004，饲料用大豆粕的质量标准及分级标准主要以粗蛋白、粗纤维、粗灰分为质量指标，按含量分为三级。
三级大豆粕质量指标必须全部符合相应等级规定，二级饲用大豆粕为中等质量指标，低于三级者为等外品。
测定豆粕各项营养成分是评定豆粕营养价值的重要方法。
发酵豆粕质量鉴定
发酵豆粕教槽料是指猪出生5天后开始补料时至断奶后10 天内所使用的饲料。
在这期间乳猪的营养生理特点是：消化系统发育不完善，大部分消化酶的活性低，对植物性蛋白和淀粉的消化率低，主要依靠母乳的营养。
为达到提早...教槽料是指猪出生5 天后开始补料时至断奶后10 天内所使用的饲料。
在这期间乳猪的营养生理特点是：消化系统发育不完善，大部分消化酶的活性低，对植物性蛋白和淀粉的消化率低，主要依靠母乳的营养。
为达到提早乳猪猪诱食的目的，又能够克服乳猪断奶营养应激的效果，营养全面、适口性好、消化利用率高和降低腹泻的高品质的乳猪教槽料一直是科研人员研究的热点。
乳猪出生时胃内仅有凝乳酶，胃蛋白酶很少，由于胃底腺部缺乏游离盐酸，胃蛋白酶没有活性，不能很好地消化蛋白质，特别是植物性蛋白质。
这就要求在蛋白原料选择上，既要考虑原料的营养成分，又要考虑其适口性和乳猪的营养生理特点。
不能仅凭简单的实验室分析和资料的说明，应根据以往的经验和实际生产数据来进行选择。
1 蛋白质原料的选择蛋白质原料的选择应从消化率、氨基酸比例、降解产生小肽的速度、蛋白质含量和成本等多方面考虑。
在乳猪教槽料配方中，常用的蛋白质原料有血浆（球）蛋白粉、高蛋白的乳清粉、鱼粉、膨化大豆（豆粕）、发酵豆粕（大豆）和啤酒（核酸）酵母等等。
植物性蛋白中含有许多抗营养因子。
例如大豆抗原（主要以大豆球蛋白和B -伴大豆球蛋白为主）是一种致敏因子，是导致仔猪营养性腹泻的主要原因。
因此大家一直尽量少用植物蛋白，多选用动物蛋白。
动物性蛋白质也有一定的劣势，价格比较昂贵，一些动物性蛋白加工或储存不当容易携带或滋生病原体，鱼粉容易氧化产生过氧化物、组胺和肌胃糜烂素等，同时还有同源性比较近等生物安全问题。
这些问题常常困扰一些配方师，左右为难，难以取舍。
2 发酵豆粕的特点与优势发酵豆粕是利用现代生物技术将植物蛋白源同微生态技术完美结合在一起，是微生态制剂在饲料中原料化的一个体现。
发酵豆粕采用优质多菌种协同发酵，利用微生物丰富的酶系，将植物大分子蛋白降解为寡肽，并将植物蛋白中的抗营养物质如胰蛋白酶抑制因子、脲酶、血凝素、抗原蛋白等彻底分解，植物细胞壁100%破裂，蛋白质消化率大于95% ，显著改善了适口性和消化率。
两步发酵法降解大豆抗原蛋白的研究
体培养基。２瓶接入枯草芽孢杆菌，３７℃摇床中培养
图１为摇瓶发酵样品的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测图。从图１
１６ ｈ后，ｌ瓶中投入１００ ｍｇ １１Ｓ抗原蛋白粉末，另ｌ瓶 可以看出，枯草芽孢杆菌可以很好的降解两种抗原蛋
投入ｌｌＳ＋７Ｓ抗原蛋白粉末２００ ｍｇ，发酵２４ ｈ。另２瓶 白。在摇瓶发酵的２４ ｈ内，枯草芽孢杆菌把１１Ｓ抗原
酵液。
１．２．２两种菌混合发酵固体生豆粕试验
１．２．２．１枯草芽孢杆菌与酵母菌的混合发酵
准备枯草芽孢杆菌与酵母菌的ＰＤＡ液体培养基
注：１．枯草芽孢杆菌菌液；２．７ｓ＋枯草芽孢杆．６，ｐＨ值为６．５条
孢杆菌发酵液；４．Ｉ １Ｓ＋酵母菌发酵液；５．７Ｓ＋酵母菌发酵液；６．
６个碱性亚基组成，酸性亚基有两种分子量，分别为 朱曦等研究了枯草芽孢杆菌、酵母菌及乳酸菌混菌发
３４．８及４０ ｋＤａ，碱性亚基分子量约为１９．６ ｋＤａ（李成 酵的条件。吴胜华等用小肽含量作为检测指标，采用
二元发酵法发酵大豆粕（吴胜华等，２００８）。但混菌发
酵时菌种之间相互作用的研究报道较少。本文拟通过
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豆粕品质的检测方法
豆粕品质的检测方法一、评定指标1、1：抗胰蛋白酶的活性：Trypsin Inhibitor Activity TIA大豆粕在0。
01mol/LnaOH浸泡1h过滤,滤液用PBPA水解.测胰蛋白酶活性TIU.1、2：尿酶活性（Urease Activity UA）国际标准法（ISO）、PH增值法（ΔPH法）、扩散法、酚红法。
CHINA规定ΔPH《0。
4 在0.02-0.2之间是优质豆粕.UA与TAI几乎同步失活.在加热过度以前,TIA以全部失活.1、3:蛋白质溶解度:(Protein Solubility)美国乔治大学:Dale & Araba (1987)以检测豆粕是否加热过度.一定量的豆粕与0.2%NaOH溶液混合离心过滤,滤液凯氏测氮.PS<70%,则加热过度,70-80%为适宜,测时其灵敏度不够,粒度影响,当粒度在60-80目时方稳定.1、4：有效赖氨酸:赖与精氨酸属热敏性AA,高温时Lys与还原糖发生Maillard反应.测定法有:A染料结合法(DBL):二硝基氟苯(FDNB),三硝基磺酸(TNBS),酸性橙-12,茚三酮发生特异性呈色反应.B 高效液相色谱法(HPLC)1、5：蛋白质的水溶解度和氮的水溶解度：蛋的质的水溶解度（PDI）与氮的水溶解度（NSI），二者只是与水混合后的搅拌强度不一样。
PDI是8500r/min的速度搅拌10min，NDI是120r/min搅拌30min。
PDI测定豆粕的加热程度比UA和PS（NaOH）灵敏，NSI在7-27.8%是可以接受。
NSI低于10%则为加热过度。
Balloun & Hgymard(1959):加热时间延长，NSI降低，加热过度，则大大降低，鸡的增重与饲料报酬降低。
1、6考马氏亮蓝法：Kratzer(1989): 考马氏亮蓝对蛋白质考马氏亮蓝考马氏亮蓝显色对AA不显色并与PS相关度好但考法测的实际值大大低于凯氏法测的蛋白质溶解度。