革兰染色试剂
革兰氏染色需要的试剂
革兰氏染色需要的试剂革兰氏染色是一种临床上常用的微生物诊断方法，它是利用细菌的特异性自身的酶和体外物质的反应而使细菌表面有不同的色泽，从而对细菌进行特异性的鉴定。
革兰氏染色需要的试剂有：一、染料：1.革兰氏染色所需要的染料有紫罗兰染料（Gram’s violet）、卡拉氏染料（Kala’s dye）、罗丹明B染料（Ludwig’s B dye）、乙醚紫染料（Ethyl violet）等。
2.紫罗兰染料（Gram’s violet）是在革兰氏染色中通常采用的染料，能与细菌外膜中脂肪、糖等成分发生化学反应，使细菌保持紫色，细菌呈深蓝色。
3.卡拉氏染料（Kala’s dye）是一种无机染料，在细菌外膜中可以形成稳定的络合物，使细菌呈深蓝色。
4.罗丹明B染料（Ludwig’s B dye）是一种无机染料，具有强烈的抗氧化作用，使细菌表面呈褐色。
5.乙醚紫染料（Ethyl violet）是一种有机染料，可以与细菌外膜中的脂肪和糖等成分发生反应，使细菌呈紫色。
二、抗原：1.革兰氏染色中用到的抗原有去氧核糖核酸（DNA）、核苷酸（RNA）、多糖（polysaccharide）、蛋白质（protein）等。
2.去氧核糖核酸（DNA）是细菌表面的一种膜质抗原，可以与染料发生化学反应，使细菌表面呈现出紫色。
3.核苷酸（RNA）是细菌表面的一种膜质抗原，可以与染料发生化学反应，使细菌呈深蓝色。
4.多糖（polysaccharide）是细菌表面的一种膜质抗原，可以与染料发生化学反应，使细菌呈褐色。
5.蛋白质（protein）是细菌表面的一种抗原，可以与染料发生化学反应，使细菌呈黑色。
三、抗性：1.抗性是指细菌在染色过程中可以抗染料的作用，会导致形成的颜色异常，从而影响革兰氏染色的效果。
2.抗性可以分为细菌内抗性和细菌外抗性。
细菌内抗性是指细菌内部存在的特殊酶，如脱氧核糖核酸酶（DNAase）、磷酸核酸酶（RNAase）、多糖酶（polysaccharase）等，可以与染料结合，使其不能达到预期的染色效果。
实验革兰氏染色法
细菌呈现第一次染色的 效果紫色，革兰氏阳性 菌（紫阳G+）
呈现第二次染色的效果 红色；称革兰氏阴性菌 （红阴G -）
G+ 菌: 金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、 甲型和乙型链球菌、枯草杆菌 G- 菌: 大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、 卡他双球菌、淋球菌等
四、注意事项：
1、选用培养18～24小时菌龄的细菌为宜，若细菌太老， 由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。 2、加热固定时要使用载玻片夹子，以免烫伤。不要将 载玻片在火焰上烧烤时间过长，以免载玻片破裂。 3、革兰氏染色成败的关键是脱色时间，如脱色过度， 革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为革兰氏阴性菌；如 脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被误认为是革兰氏阳 性菌。因此必须 严格把握脱色时间。 4、使用染料时注意避免沾到衣物上，乙醇脱色时勿靠 近火焰。
三、实验原理：
1、无菌操作技术：
高温对微生物具有致死效应，因为在微生物的转接 过程中，一般在火焰旁进行，并用火焰直接灼烧接种环， 以达到灭菌的目的，但一定要保证其冷却后方可进行转 接，以免烫死微生物。
2、细菌制片：
涂片法：
涂抹——细胞个体在载玻片上均匀分布，避免菌体堆 积而无法观察个体形态。 加热——固定使细胞质凝固，使细胞固定在载玻片上， 这种加热处理还可以杀死大多数细菌而且不破坏细胞 形态。
染色 (1) 初染:滴加结晶紫染液数滴 于涂片上1 分钟,水洗; (2) 媒染:滴加碘液媒染1 分钟,水洗; (3) 脱色:滴加95 %酒精,轻轻不断摇动 玻片,使染液尽可能脱去,持续20~30s, 水洗; (4) 复染:滴加稀释石炭酸复红染液数 滴于涂片上复染1 分钟,水洗。吸水纸 吸干,油镜观察。
3、革兰氏染色：
革兰氏染色是丹麦医生Hans Christian Gram于1884年发明的 一种鉴别不同类型细菌的染色方法。
革兰氏染色所用试剂
革兰氏染色所用试剂
革兰氏染色是一种常用的微生物染色技术，可以检测微生物的存在。
该技术可以检测出某种特定细菌的存在，并通过色谱来识别不同的微生物。
它的最大优势在于不需要使用昂贵的设备，只需要几个简单的试剂，就可以完成检测。
革兰氏染色所用的试剂主要集中在以下几类，包括培养基，抗毒素，染色剂和除菌剂。
培养基是革兰氏染色的基础，其主要功能是提供细菌所需的一切条件，以及生长和繁殖所必需的营养。
一般选用的培养基有乳清培养基、拉丁牙齿培养基、卡介苗培养基和血清培养基等。
抗毒素是革兰氏染色的必备试剂，其主要功能是抑制某些有毒成分对细菌的影响，以及免疫抑制物质对细菌的影响，从而提高染色效果。
常用的抗毒素有抗原、抗毒素A和抗毒素B等。
染色剂是革兰氏染色的基础，其实质是一种高分子物质，可以通过互相作用或与细菌电荷作用，使染色的目的物的色素发生变化，从而检测出细菌的存在。
常用的染色剂有新明蓝、苯酚红、芯蓝等。
除菌剂是革兰氏染色的必备试剂，主要功能是抑制和杀灭室内污染物，降低微生物胞外污染的风险，保证染色结果的准确性。
常用的除菌剂有碳酸氢钠、肼溶液、碳酸钠溶液、铝酸溶液等。
革兰氏染色所用的试剂除了上述提到的几类外，还包括各类消毒剂、抗凝剂、抗碱剂、还原剂等。
由于染色的细菌类型和批次不同，在使用这些试剂时，应根据实际情况选择合适的试剂，并结合文献资
料掌握其使用方法，以确保染色结果准确可靠。
综上所述，革兰氏染色是一种实用性很强的微生物染色技术，它使用试剂类型多样，实验条件简单，操作简单方便，效果显著，染色结果准确可靠，值得广大科研工作者推崇及使用。
革兰染色法实验报告
革兰染色法实验报告一、引言革兰染色法是细菌学常用的染色方法之一，通过染色剂革兰碘紫和酒精洗脱，可以将细菌分为革兰阳性和革兰阴性两类。
本实验旨在通过革兰染色法的操作步骤，熟悉该方法的原理和应用。
二、实验材料与方法1. 实验材料：- 细菌培养液- 革兰染色试剂：革兰碘紫、酒精、脱色剂、碘酒解、碘酒液- 玻璃片- 非吸水性棉签- 显微镜2. 实验步骤：1）取一片玻璃片，用酒精擦拭消毒。
2）取一支无菌棉签，蘸取适量的细菌培养液。
3）将棉签涂抹在玻璃片上，制备细菌涂片。
4）将涂片在室温下晾干。
5）将晾干的涂片固定在火焰上烘烤杀菌。
6）将固定的涂片放入革兰碘紫中浸泡，静置1分钟。
7）将涂片取出，用酒精洗脱涂片，直到洗脱液不再有颜色。
8）用脱色剂洗涤涂片，直到洗涤液变为浅紫色。
9）将涂片放入碘酒解中浸泡3-5分钟。
10）用酒精洗涤涂片，直到洗脱液不再有颜色。
11）用碘酒液洗涤涂片，洗涤液变为深紫色。
12）将涂片晾干，观察细菌染色效果。
13）使用显微镜在1000倍放大下观察细菌形态和染色效果。
三、结果与讨论经过革兰染色法处理后，观察涂片下显微镜图像，可以得出以下结论：1. 革兰阳性菌：染色后呈紫色或紫黑色，细胞形态较大，常呈固定形状，比如球菌球状、链球菌链状等。
2. 革兰阴性菌：染色后呈红色或粉红色，细胞形态较小，形状多样，比如杆菌、弧菌等。
革兰染色法的原理是基于细菌细胞壁的差异。
革兰阳性菌细胞壁含有较多的胆固醇和肽聚糖，革兰碘紫可以与其结合形成革兰碘紫-胆固醇-肽聚糖复合物，导致细胞呈紫色。
而革兰阴性菌细胞壁则较薄，革兰碘紫不易穿透，但可以通过酒精洗脱后，用碘酒解中的碘酒液再次染色，使细胞呈红色。
革兰染色法的优点在于简单、快速，可以初步判断细菌的类型。
但也存在一些限制，比如对于某些特殊菌株的染色效果不明显，或者存在某些变构菌株，其细胞壁在革兰染色过程中可能出现异常表现。
四、实验总结通过本次实验，我们成功地进行了革兰染色法的操作，并观察到了不同类型细菌的染色效果。
革兰氏染色所用试剂
革兰氏染色所用试剂革兰氏染色法是一种广泛应用于微生物学实验中的染色法，主要通过染色剂将微生物染成不同的颜色，以便研究者识别和辨认微生物种类。
革兰氏染色所用的试剂可以分为三大类：染料，抑菌剂和染料的稳定剂。
其中，染料是革兰氏染色的关键试剂，抑菌剂可以抑制其他微生物的发酵，而染料的稳定剂可以防止染料稳定性的降低。
染料是革兰氏染色所用的最重要的试剂之一，可用来染色探针和定性抗原。
常用的染料有铵离子染料、碱金属染料、有机乙酸酯酸染料等。
铵离子染料的优势在于比较稳定，而且可以很好地代表有机物；碱金属染料的优势在于比较稳定，易于用于临床检验；有机乙酸酯染料的优势在于比较通用，可以染出多种颜色，而且不会因高PH值而褪色。
抑菌剂是革兰氏染色中最常用的试剂，抑菌剂可以有效地抑制宿主细胞膜上的细菌，从而有助于革兰氏染色法中染色细菌的检出。
一般来说，常用的抑菌剂有甲醛、碘化菊酯、橙黄菊酯、磺胺、多西环素等，它们在消毒作用上比较强，适用于实验室检测。
染料的稳定剂是革兰氏染色中常用的一种试剂，它可以有效地防止染料的氧化变性和酸化，从而提高染料的稳定性。
染料的稳定剂常用的有铁血清素、对硫酸糖水杨酸、硝酸、过氧化乙醇等，这些物质可以有效地稳定染料中的有机氧离子，防止氧化变性和酸化，从而提高染料的稳定性。
革兰氏染色所用的试剂具有不同特性，使用者需要根据实验要求来选择最合适的试剂，以确保实验数据的可靠性。
例如，如果实验要求染料的稳定性要求高，那么就需要使用适当的染料稳定剂。
此外，在使用试剂时，用户还要确保试剂的有效性和稳定性，以方便检测结果的精确性和可靠性。
总之，革兰氏染色所用的试剂有染料、抑菌剂和染料的稳定剂，不同试剂有不同特性，使用者要根据实验要求来选择最合适的试剂。
此外，用户还要确保试剂的有效性和稳定性，来保证实验结果的可靠性。
革兰氏染色步骤
革兰氏染色步骤引言：革兰氏染色是一种常用的细菌染色技术，由丹麦细菌学家Hans Christian Gram于1884年发明。
该技术以细菌细胞壁结构的不同为基础，将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌。
革兰氏染色的步骤简单易行，适用范围广泛，被广泛应用于医学、生物学等领域的细菌鉴定工作中。
本文将对革兰氏染色的步骤进行详细介绍，以帮助读者更好地了解和掌握革兰氏染色技术。
一、准备工作1.1 试剂准备进行革兰氏染色需要的试剂主要包括：革兰碘液、革兰洗涤液、乙醇和碱性紫。
1.2 样品处理将待染菌株铺在平板上，选择好光洁的玻璃片，取少量样品用针头将菌液均匀涂布在玻璃片上。
待菌落完全干燥后，即可开始染色。
二、革兰氏染色步骤2.1 固定将涂布好菌液的玻璃片朝上放置在架子上，使用银夹将玻璃片固定住。
将固定好的玻璃片在灯火或火焰中加热，直至菌液完全干燥。
此步骤的主要目的是固定菌液，使其不易脱落。
2.2 革兰碘液染色将固定好的玻璃片放入容器中，加入足量的革兰碘液，浸泡5-10分钟。
革兰碘液的作用是增强染色效果，使细菌细胞壁紧密结合革兰紫染料。
2.3 洗涤用水冲洗玻璃片，直至水澄清。
这一步是为了去除多余的碘液。
2.4 乙醇洗涤将固定好的玻璃片放入容器中，加入适量的95%乙醇，浸泡20-30秒。
乙醇的作用是洗去革兰紫颜料。
2.5 洗涤用水冲洗玻璃片，直至水澄清。
这一步是为了去除多余的乙醇。
2.6 碱性紫染色将固定好的玻璃片放入容器中，加入适量的碱性紫，浸泡30-60秒。
碱性紫的作用是染色细菌细胞。
2.7 洗涤用水冲洗玻璃片，直至水澄清。
2.8 水分干燥将玻璃片放置在架子上晾干或用纸巾轻轻吹干。
确保玻璃片完全干燥后，即可进行观察和分析。
三、结果观察和分析革兰氏染色后，观察玻璃片上的细菌染色情况。
革兰阳性菌一般呈紫色或深紫色，革兰阴性菌一般呈粉红色。
通过观察颜色的不同，可以初步判断细菌的分类，并进一步进行鉴定和分析。
需要注意的是，革兰氏染色技术在细菌鉴定中是一种初步的判断方法，对于一些特殊的细菌，染色结果可能会有一定的误差。
革兰氏染色试验步骤
革兰氏染色试验步骤所需试剂和设备：1.菲尔水2.结晶紫3. Lugol液4.酒精5.活菌片6.显微镜7.显微制片玻片8.火焰消毒器实验步骤：1.取一枚无菌的显微制片玻片，并用菲尔水清洗干净，以保证玻片无污染。
2.取一滴无菌的水滴在玻片上，将一枚均匀悬浮的细菌样品加入水滴中。
细菌样品可以是培养物中的细菌液体培养物，也可以是细菌单克隆的菌落。
3.用火焰消毒器将显微镜取出并消毒。
将显微镜调整为100倍放大倍数，并将显微镜使用菲尔水沾湿。
4.用火焰消毒器将显微镜片摆放在火焰上加热，待其冷却后再用纸巾擦拭干净。
确保显微镜片无污染。
5.用取有活菌片的设备，在细菌悬液上取片，使细菌均匀分布于显微片的表面上。
待片上的细菌液体干燥后，将片置于火焰中加热数秒，以固定细菌在片上。
6.将固定后的细菌片依次按如下顺序进行染色:用菲尔水冲洗干净玻片上的细菌，倒入1-2滴的结晶紫液，静置1分钟。
7.用菲尔水冲洗细菌片，直到从玻片上冲洗下结晶紫。
8. 倒入1-2滴的Lugol液，静置1分钟。
9. 用菲尔水冲洗细菌片，直到从玻片上冲洗下Lugol液。
10.迅速地将细菌片倒入酒精中，进行脱色。
脱色的时间应控制在10-20秒之间，直到从细菌片上冲洗下少量酒精。
11.用菲尔水冲洗细菌片，直到从玻片上冲洗下酒精。
12.将细菌片放在火焰上加热数秒，使其干燥。
13.将细菌片挂在显微镜上，通过100倍的放大倍数观察细菌的形态和染色性质。
在革兰氏染色中，革兰氏阳性细菌呈紫色或紫黑色，而革兰氏阴性细菌呈红色或粉红色。
观察细菌形态和染色性质可以帮助确定细菌的分类。
革兰氏染色实验报告
革兰氏染色实验报告实验目的，通过革兰氏染色实验，观察和比较革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在染色后的显微镜下的形态特征，从而对细菌进行初步鉴定。
实验材料和方法：1. 实验材料，革兰染色试剂（碘液、靛洋红、洗涤液）、玻璃片、无菌吸管、显微镜、革兰氏阳性菌培养液、革兰氏阴性菌培养液。
2. 实验步骤：（1）取一张无菌玻璃片，用无菌吸管分别取革兰氏阳性菌培养液和革兰氏阴性菌培养液滴于玻璃片上。
（2）将玻璃片放在火焰上加热，使细菌液均匀分布在玻璃片上。
（3）用吸管滴加碘液，静置1分钟后倾倒干净。
（4）用吸管滴加靛洋红，静置1分钟后用水冲洗干净。
（5）将玻璃片挂在显微镜载玻片上，用100倍镜观察。
实验结果：在显微镜下观察，革兰氏阳性菌呈紫色或蓝紫色，球菌呈葡萄簇状，链球菌呈链状排列；革兰氏阴性菌呈红色或粉红色，杆菌呈杆状或弯曲状排列。
实验结论：通过本次实验，我们成功地进行了革兰氏染色，观察到了革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在染色后的形态特征。
革兰氏染色是一种简单而有效的细菌初步鉴定方法，对于临床医学和微生物学研究具有重要意义。
实验注意事项：1. 实验过程中要保持玻璃片的无菌状态，避免外界污染。
2. 染色试剂的使用要按照规定比例和顺序进行，避免试剂浓度不足或过高影响染色效果。
3. 在观察细菌形态时，要注意调节显微镜的焦距和光线，以获得清晰的观察效果。
4. 实验结束后，要及时清洗实验器材，保持实验台面的清洁。
总结：革兰氏染色实验是微生物学实验中常用的一种方法，通过本次实验的学习和实践，我们对革兰氏染色的原理和步骤有了更深入的理解，并且掌握了正确的操作技巧。
革兰氏染色在细菌鉴定和临床诊断中具有重要的应用价值，希望通过今后的学习和实验，能够进一步提高自己的实验操作能力和科研水平。
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革兰染色液说明书
【产品名称】
革兰染色液
【包装规格】
货号：DM0016
单瓶包装规格分别为：20ml、100ml、250ml、500ml、5000ml；
每套/盒包装规格分别为：4×20ml/盒、4×100ml/盒、4×250ml/盒、4×500ml/盒。
【预期用途】
用于细菌或真菌的涂片染色。
【检验原理】
革兰氏染色法是丹麦医生Christain Gram于1884年所发明，是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，细菌的不同显色反应是由于细胞壁对乙醇的通透性和抗脱色能力的差异，主要是由肽聚糖层厚度和结构决定的，经结晶紫染色的细胞用碘液处理后形成不溶性复合物，乙醇能使它脱色。
在革兰阴性细胞染色中乙醇或丙酮破坏了胞壁外膜、损伤肽聚糖层和细胞质膜，结晶紫和碘复合物从细胞中渗漏出来，当再用其他染色液复染时显现红色，红色染料虽然也能进入已染成紫色的G+细胞，但被紫色盖没，所以红色显示不出来；在革兰阳性细胞染色中乙醇还能使厚的肽聚糖层脱水，导致孔隙变小，由于结晶紫和碘复合物分子太大，不能通过细胞壁不易脱色，所以保持着紫色。
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法(属复染法)，可用于标本涂片或菌落涂片，染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，从而用以临床分类鉴定，染色结果将细菌分为革兰氏阳性菌(紫色)和革兰氏阴性菌(红色)两大类。
【主要组成成分】
试剂组成主要成分
1、结晶紫染色液结晶紫、乙醇
2、碘溶液碘、碘化钾
3、脱色液乙醇、水
4、沙黄染色液或复红染色液沙黄染色液：沙黄、乙醇
复红染色液：品红、乙醇
【储存条件及有效期】
5℃～35℃保存，原包装未开封染色液的有效期为24个月，在有效期内的已开封染色液应在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。
【样本要求】
涂片时必须注意细心操作，涂片薄而均匀；制备的涂片应自然干燥，采用加热固定时，固定温度不宜过高，以背面接触手背不烫为准，否则可能使细菌形态改变影响观察结果。
【检验方法】
1、涂片：取待检细菌，于载玻片中央涂成薄层或在载玻片上滴加少许无菌水，取菌与水混合均匀，涂成一薄层；
2、干燥、固定：涂片后在室温下自然干燥，也可在酒精灯上略加温，使之迅速干燥，也可以用甲醇或乙醇固定；
3、染色。
4、滤纸吸干或在空气晾干，镜检。
【检验方法的局限性】
采用陈旧标本涂片时有产生假阴性的可能。
【注意事项】
1、涂片之前，应事先在背面做好圆圈标记，以便判断后续试验的位置。
2、取细菌时，应注意自我防护，拔或塞试管塞时，应将试管口通过火焰略加烧灼，最后将接种环在
火焰上烧灼灭菌。
3、染色时间视何种标本、涂片厚薄等稍作调整；染妇科白带涂片时应稍延长染色时间,可获得更好的染色效果。
4、试剂用完后，请迅速盖好，以免挥发；尽量避免高、低温环境及阳光直射。
5、冬季室温过低时，染色时间要适当延长。
6、本产品仅用于体外诊断，应由专业人士使用及进行结果的判读。
7、使用前应详细阅读说明书，并做好个人卫生防护，在有效期内使用，生产日期、生产批号和失效日期见包装。
8、用后应按医院或环保部门要求处置废弃物。
【基本信息】
备案人/生产企业名称：安徽雷根生物技术有限公司
住所：淮北凤凰山经济开发区凤冠路三期标准化厂房三号厂房。