白细胞介素的测定
白细胞介素-6定量方法研究进展
I n s p e c t i o n/检验检测白细胞介素-6定量方法研究进展燕茹，林婧(南京市计量监督检测院，江苏南京210049)摘要：细胞介素-6 (IL-6)是一种重要的细胞因子，在机体病理和生理活动中发挥着多种作用。
因此需要高 准确度测定丨L-6的水平。
文章综述了近年来国内外IL-6不同定量方法的研究进展，包括酶联免疫法、免疫 放射法、电化学免疫法，讨论了 IL-6不同定量方法的特点，并展望了其发展趋势。
关键词：白细胞介素-6;检测方法1弓丨言白介素6 (Interleukin-6, IL-6)是一种炎症因 子，由212个氨基酸组成的糖蛋白，健康人体内一般 小于7 pg/m L,当机体受到细菌感染时，含量急剧升 高，其含量与感染程度呈正相关。
IL-6在传递信息，激活与调节免疫细胞，介导T、B细胞活化、增殖与 分化及在炎症反应中起重要作用。
检测IL-6有助于 评价糖尿病、心血管病、炎症性疾病和感染性疾病等。
患者IL-6的连续监测，有助于评估炎症反应的严重 程度，脓毒症及其预后情况；日本指南推荐将IL-6 用于脓毒症辅助诊断，IL-6可以作为脓毒症的早期 预警指标。
研究发现，2019-n C o V感染的患者血清中IL-6 等炎症细胞因子显著升高。
患者血清中IL-6的含量 有助于新型冠状病毒肺炎的临床分型及预测疾病严重 程度和患者预后。
《新型冠状病毒肺炎诊疗方法（试 行第七版）》将外周血炎症因子IL-6进行性上升作 为新型冠状病毒肺炎重型、危重型临床预警指标。
IL-6作为感染性疾病的早期诊断、病情评估、疗效监控和预后判断的诊断指标。
IL-6的准确测定 具有重要意义。
为准确地测定血清中IL-6的含量，提高检测结果准确性，本文对IL-6的定量方法进行 综述。
2丨L-6定量检测方法根据IL-6的检测原理及方法的不同，对IL-6的 检测分为：免疫学方法、生物学检测方法。
2.1免疫学方法免疫分析方法的原理为利用特定抗体与抗原发生 的特异性识别和结合，对待测抗体或者抗原进行分析 测定的方法。
人白细胞介素-10(IL-10)
人白细胞介素-10（IL-10）酶联免疫检测试剂盒使用说明书使用前仔细阅读本说明书。
本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理，来检测人白细胞介素-10（IL-10），只能用于研究用途，不得用于医学诊断。
用途：用于人血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素-10（IL-10）的测定。
工作原理本试剂盒采用的是双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中人白细胞介素-10（IL-10）的水平。
向预先包被了人白细胞介素-10（IL-10）单克隆抗体的酶标孔中加入白细胞介素-10（IL-10），温育；洗涤后，加入HRP标记过的白细胞介素-10（IL-10）抗体。
再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅与样品中人白细胞介素-10（IL-10）的浓度呈正相关。
试剂盒组成需要而未提供的试剂和器材1．37℃恒温箱。
2．标准规格酶标仪。
3．精密移液器及一次性吸头4．蒸馏水，5．一次性试管6．吸水纸注意事项1．从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。
酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差3．建议所有标准品、样本都做双份检测。
如标本中待测物质含量过高，请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再按说明书操作进行测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
4．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.5．为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
6．不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
7．底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
洗板方法手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少注入孔内，浸泡1-2分钟。
根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中标本要求1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
白细胞介素(IL-2)检测及临床意义
白细胞介素（IL-2）检测及临床意义
一、概述
白细胞介素-2 (IL-2)又称T细胞生长因子。
主要由T细胞产生。
是在淋巴细胞增殖分化过程中重要的细胞生长因子，生理作用有刺激T细胞生长、诱导细胞毒作用和对B细胞的生长及分化均有一定的促进作用等
二、检测方法
IL-2主要检测方法为生物素亲合素系统的双抗体夹心ELISA 法。
三、临床意义
1、IL-2可提高人体对病毒、细菌、真菌和原虫等感染的免疫应答，促进细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、自然杀伤细胞(NK 细胞)、淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK 细胞)和肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)增殖，并使其杀伤活性增强，进而清除体内肿瘤细胞和病毒感染细胞等。
2、IL-2 还可以增加抗体和干扰素 (IFN)等细胞因子的分泌，在机体免疫应答中具有非常重要的作用，是一种免疫增强剂，具有抗病毒、抗肿瘤和提高机体免疫功能等作用。
3、IL-2的表达异常与临床多种疾病有密切关系，尽管外周血、尿液中IL-2 水平，或激活淋巴细胞上清液中IL-2水平的异常没有疾病特异性，但是可作为相关疾病的辅助诊断、预后及疗效观察提供可靠数据。
4、IL-2升高：肿瘤、心血管病、肝病等疾病时均可使 IL-2 水平升高，在器官移植后早期排斥反应时也出现IL-2表达升高。
5、IL-2降低：在多种原发性免疫缺陷病和继发性免疫缺陷病时均可伴有 IL-2 水平降低，如 SLE、麻风和艾滋病等。
细胞因子检测
细胞因子检测【关键词】细胞因子检测一、白细胞介素(IL)检测1.白细胞介素1β(IL-1β)检测IL-1又称淋巴细胞激活因子，是急性期免疫反映的要紧调剂因子，对T细胞激活，诱导IL-2产生起着大体的作用；而这些作用大多数是IL-1β直接产生的。
[参考值]～μg/L(ELISA)[临床意义](1)组织损伤或感染，如Crohn’s病、败血症；某些自身免疫性炎症反映(如类风湿关节炎)、结核、风湿等血中IL-1β升高。
(2)神经系统炎症或损伤时脑脊液中IL-1β升高。
(3)胸膜腹膜炎渗出液中IL-1β升高。
(4)在再生障碍性贫血患者，单核细胞产生IL-1能明显下降。
(5)老年人或癌症患者外同血中单核细胞产生IL-1能力也低于正常人，因此在感染后不易显现发烧等临床病症。
[注意事项](1)不抗凝静脉血检测，也可是脑脊液或渗出液；(2)搜集标本必需用不含致热原、内毒素的清洁试管；(3)标本不该有溶血、脂血、黄疸。
2.白细胞介素2(IL-2)检测白细胞介素2(IL-2)是白细胞介素中的一种。
要紧由活化T细胞产生，是具有多向性作用的细胞因子(要紧增进淋巴细胞生长、增殖、分化)。
它对机体的免疫应答和抗病毒感染有重要作用。
[参考值]～μg/L(ELISA)[临床意义](1)IL-2要紧刺激T细胞生长；诱导细胞毒作用；对B细胞的生长及分化有必然的增进作用；可明显增强对单核.巨噬细胞的抗原递呈能力、杀菌力、细胞毒性。
IL-2随年龄增加有降低趋势。
(2)增高见于自身免疫性疾病(如SLE、类风湿关节炎等)、再生障碍性贫血、多发性骨髓瘤、心血管病、肝病、肿瘤、排斥反映等。
(3)降低见于免疫缺点病(如艾滋病、联合免疫缺点病等)、恶性肿瘤、l型糖尿病、某些病毒感染、同意免疫抑制医治者和老年人等。
[注意事项](1)不抗凝静脉血标本，以血清进行检测，也可检测尿液或人淋巴细胞培育上清液中的白细胞介素2水平。
(2)搜集标本必需用不含致热原、内毒素的清洁试管。
人白细胞介素23(IL-23)说明书
人白细胞介素23（IL-23）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中白细胞介素23（IL-23）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白细胞介素23（IL-23）水平。
用纯化的人白细胞介素23（IL-23）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素23（IL-23），再与HRP标记的白细胞介素23（IL-23）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白细胞介素23（IL-23）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人白细胞介素23（IL-23）浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：450ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
人白细胞介素27 (IL-27)说明书
人白细胞介素27 (IL-27)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆，组织及相关液体样本中白细胞介素27 (IL-27)的含量。
实验原理：本试剂盒应用夹心法测定标本中白细胞介素27 (IL-27)水平。
用纯化的人白细胞介素27 (IL-27)抗体包被微孔板，往微孔中依次加入白细胞介素27 (IL-27)，再与HRP标记的白细胞介素27 (IL-27)抗体结合，形成免疫复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白细胞介素27 (IL-27)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中白细胞介素27 (IL-27)浓度。
试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
细胞因子生物学活性检测
细胞因子生物学活性检测细胞因子水平测定是细胞免疫功能检测的一个重要组成部分。
由于许多细胞因子cDNA 克隆和表达的成功，给细胞因子单克隆抗体制备、生物学功能的鉴定提供必要条件。
目前检测细胞因子水平主要包括两类方法：一是生物学活性的检测，这类方法是利用细胞因子某一特定的生物学作用所设计的检测方法，如IL-2维持活化T细胞的增殖，IFN能保护病毒对正常细胞的感染，TNF-α选择性杀某些肿瘤细胞等，因此敏感性也较高；二是定量的检测，常用酶联免疫吸附试验(ELISA)，如多克隆抗体与单克隆抗体，识别不同表位两种单克隆抗体的双抗体夹心法，生物学和定量的检测方法各有优缺点，在必要时可同时进行检测。
一、白细胞介素1(IK-1)生物学活性测定白细胞介素1是一种重要的细胞因子，主要由单核-巨噬细胞产生，IL-1不仅对多种免疫活性细胞有重要的调节功能，而且与发热、炎症发生以及某些疾病的病理变化有关。
目前对IL-1产生水平的检测主要应用生物学活性检测的方法。
ConA刺激小鼠胸腺细胞检测IL-1生物学活性(一) 原理小鼠胸腺细胞在丝裂原刺激下表达IL-1受体，在有IL-1同时存在的条件下，IL-1可协同丝裂原促T细胞的增殖作用。
根据加入IL-1后增殖水平(３H-TdR掺入率)的增加可计算出样品中IL-1的活性单位，或计算出刺激指数。
(二) 操作步骤取6～8周龄C57BL16小鼠，拉颈处死，无菌取胸腺置不锈钢网筛上，用注射器针蕊研磨成细胞悬液调整细胞数为1.5×10７／ml↓细胞悬液内加入ConA，使终浓度为3μg／ml，在96孔培养板中加100μl(1.5×10６细胞)↓加入不同稀释度待测样品和IL-1标准品100μl／孔(ConA终浓度为1.5μg／ml)↓37℃ CO２孵箱 66h每孔加３H-TdR 0.5μci孵箱 6h多头细胞收集仪收获于9999型玻璃纤维纸上↓烤干，移入液闪瓶中，加适量闪烁液，于液闪仪上测β计数计算:1. 从IL-1标准曲线上测得IL-1的活性单位2. 也可用刺激指数(SI)表示实验组cpmSI＝──────×100％对照组cpm(三) 试剂和器材1. 10％ FCS RPMI1640，96孔培养板，孵箱2. 标准IL-1，ConA3. ３H-TdR，PPO、POPOP，二甲苯4. 9999型玻璃纤维滤纸，细胞收集仪5. β液闪计数仪(四) 注意事项1. 不同品系小鼠对IL-1的反应性有差异，据国内资料报道以C57BL为好。
白细胞介素—10检测及其临床意义
白细胞介素—10检测及其临床意义250?Labeledlmmunoassays&ClinMed.Dec咖ber2001.V ol8.N0.4检测技歹了白细胞介素一10检测及其临床意义董晓军(解放军总医院科技开发由一,北京100853)白细胞介素一10(简称白介素10,inlet—leukin一10,IL一10)是具有多种生物功能的细胞因子,它与机体自身免疫疾病,感染性疾病和肿瘤等有着密切关系.IL10主要由单核细胞,巨噬细胞,肥大细胞,T,B淋巴细胞和激活的角质细胞产生.人的IL1O是一种单肽链的.由160个氯基酸组成的酸性蛋白,分子量为18.7kD(不包括N端18个氨基酸构成的信号肽序列),等电点为8.1,通常为二聚体(39kD)人IL一1O和鼠II～10核苷酸序列同源性达81%,氯基酸序列同源性达73%.人IL1O对人细胞和小鼠细胞均有作用,小鼠IL一10只对鼠细胞有作用,而对人细胞无作用.白介素的基因是单拷贝基因,其位置在第一染色体上.IL～1O基因的核苷酸序列或蛋白质氯基酸顺序和其他的细胞因子无明显的顺序同源性而IL一10基因和EBV基因组中有一段开放读码区的BCRF1有大于80%的明显同源性.IL1O是一种具有免疫抑制和免疫刺激作用的细胞因子,人IL一10在单核细胞存在下,能直接抑制T细胞增殖和白介素的产生.当它作为免疫抑制因子时,能抑制多种细胞合成其他细胞因子ll10抑制细胞性免疫应答,主要是通过抑制T1产生IL一2,干扰素一(IFN一)等,抑制II2R的作用.在机体免疫应答中,既有对机体起保护作用的一面,也有不利于机体的一面.IL一10 能增强体液免疫应答IL1O在机体多种自身免疫疾病的产生过程中起着重要的作用,与白血病关系较为密切.IL10与11,3和IL一4协同因子能刺激未成熟的肥大细胞增殖内源性IL一10也能抑制同种异体MLR表达IL一10和转化生长收稿日期:2001—02—18:修回日期:2001'05—28 因子(TGF)可通过抑制一氧化氮的产生而干扰IFN一对单核细胞活化.IL1O对NK细胞的抑制作用是间接的而非直接,IL10抑制NK细胞产生IFN—I1一10不抑制LAK细胞活性.成熟的B细胞才能分泌IL一10,IL1O是B细胞有效的增殖和分化因子,它对B细胞活化和增殖有着效应.在TGF口存在下,IL—l0能提高lgA分泌能力,在IL4存在下IL10能提高IgE生物活性.IL10检测对疾病的临床诊断,免疫病理和免疫调节等方面的研究都是必需的.IL一1O的检测方法和临床意义:1放射免疫分析法和酶免疫吸附法这类检测方法简称为RIA和ELISA法,检测特异性高,较生物活性检测方法快速,其灵敏度可达Pg水平.可测患者的血,细胞液和尿液等标本中的IL1O水平,已有成套试剂盒可供使用,操作也十分方便和简单.2斑.杂交法用地高辛甙标记的eDNA作为探针的点杂交方法,可检测系统红斑狼苍(SLE)患者IL一1O mRNA的含量.实验结果表明,LES患者IL一1O mRNA表达量比正常人高二倍,提示IL一10与SLE发病有直接关系,并表明了IL10拮抗剂有可能用于SLE病的治疗.这种方法操作简便,并有助于SLE疾病的临床治疗和用于选择合适的免疫调节剂.3反转录一PCR检测法这种检测法简称为RT—PCR,检测IL1O特定基因转录产物RNA的表达水平.它可以从血清,血浆,细胞,腹水和组织液等,一步处理,快速分离样品中的RNA,可从50pgRNA中扩增出所需片段,最大扩增片段超过2kb,因此具有高特异记免疫分析与临床2001年l2月第8卷第4期性和高灵敏度.4免提荧光法采用双标记免疫荧光法,可检测唾液腺炎患者唾液腺组织中IL—l0,IL—l2和IFN一的表达水平,而大部分IL—l0表达阳性的单个核细胞, CD4也阳性,又称双阳性免疫荧光标记法采用免疫双染色法可检测类风湿性关节炎和骨关节炎患者的滑膜细胞培养液中IL—l0的水平,结果表明类风湿性关节炎患者II一10水平为358—5501pg/mL,骨关节炎患者Il一l0水平为310—3390pg/mL.这表明IL—l0是由l滑膜里层单核细胞和聚集的淋巴细胞(T细胞)产生的5ELISA一点技术这项技术简称为ELI—SPOT,用ELI—SPOT25l能检测单个细胞水平IL—l0的产生,对研究IL—l0在细胞间进行信息传递的作用,具有重要的意义.操作步骤:将单细胞悬液加到包被抗IL—l0抗体的反应孔中,经诱导产生IL—l0,后者与生物素化的第二抗体产生结合反应,当加入碱性磷酸酶标记的链亲和素和显色剂后,显色反应在覆盖的琼脂胶中进行,最后用倒置显微镜计数蓝色斑点.本法操作简单,可以使细胞处于与体内的状态非常相近的条件.ELI—SPOT法还可用来跟踪疾病产生,调整治疗方案等.如用于重症肌无力患者外周血T细胞分泌IL—l0(和IFN—)的研究;用于检测多发性硬化患者外周单个细胞IL—l0分泌水平.(胨泮藻编委审张增武编辑)用流式细胞仪测定母血中胎儿红细胞含量的新方法周春喜(解放军总医院雕璺宴验锺试中..北京100853)本文介绍一种快速而准确地测量母血中胎儿红细胞含量的方法.它通过流式细胞仪检测母血中胎儿红细胞胞内的血红蛋白(HbF)和红细胞表面i抗原,可以特异地识别母血中胎儿红细胞.这对预防新生儿溶血症和优生优育具有重要意义.材料与方法l样品处理方法(1)静脉采血lmL,用EDTA抗凝,室温保存备用.(2)用血球计数仪计数并计算抗凝血中红细胞的浓度.(3)用冲洗液将抗凝血稀释成浓度为25x109个/mL的红细胞悬液.(4)取一带盖尖底离fl,管,加入10/~I红细胞悬液及100~-L封闭液,混匀.加入100VI同定液, 混匀,室温温育30rain.收稿日期:2001—05—18;修回B期:2OOl—o8—10 (5)再加2.5mL冲洗液,将离心管颠倒几次洗细胞.1000g离心3min,弃上清,将剩下的细胞混匀.加100/~L破膜液,混匀,室温温育3min. (6)加2.5mL冲洗液,将离心管颠倒几次洗细胞.1000g离心3min,弃上清,用25mL冲洗液再洗细胞一次.离心弃上清,加lmL冲洗液,混匀.2黄光染色方法(1)每份样品取2支流式细胞仪样品管,分别标记为l和2.(2)在l号管中依次加入100/~L细胞悬液,10/~L异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗HbF,10/~L 藻红蛋白(PE)标记的抗i抗原和10/~LDNA染液(LDS751),混匀.(3)在2号管中依次加入100~.L细胞悬液,10~.LFITC标记的IgGl,10vLPE标记的IgM和10t,LLDS751,混匀.(4)将两管于4t避光温育30rain.用2.5mL冲洗液洗1次.。