高效液相色谱标准
高效液相色谱
二、 进样系统
将样品溶液准确送入色谱柱的装置 ——手动方式、自动方式
进样器要求
密封性好、死体积小、重复性好、进样时 引起色谱系统的压力和流量波动要很小。
常用手动进样器——六通阀进样器，
二、 进样系统
六通阀进样
Load
Inject
分析对象及范围 能气化、热稳定性好、 G 且沸点较低的样品，占 C 有机物的20% 流动相的选择 操作条件
流动相为有限的几种 加温常压 “惰性”气体，只起运 操作 载作用，对组分作用小
溶解后能制成溶液的样 H 流动相为液体或各种液 品，高沸点、高分子量、 P 体的混合。它除了起运 室温、高 难气化、离子型的稳定 L 载作用外，还可通过溶 压下进行 或不稳定化合物，占有 C 剂来控制和改进分离。 机物的80%
经典LC HPLC
固定相颗粒>100μm,不均匀 固定相颗粒<10μm,均匀 常压下输送流动相 柱效较低（H↑，n↓） 高压下输送流动相 柱效较高（H↓，n↑）
分析周期长 无法在线检测
分析周期短 可以在线检测
2. HPLC与GC的比较
相同：均为高效、高速、高选择性的色谱方法，兼
具分离和分析功能，均可以在线检测
高分子多孔微球：YSG
一、固定相
3. 常用固定相
化学键合固定相
以硅胶为载体，借化学反应方法将有机分子
以共价键连接在硅醇基上
(硅酯化) Si OH R OH Si O R
SOCl 2
(酰氯化) Si OH SOCl2 Si Cl RLi 或RMgCl Si R (硅烷化) Si OH R3 SiCl Si O SiR3 HCl
HJ1154-2020环境空气 醛、酮类化合物的测定 溶液吸收-高效液相色谱法
环境空气醛、酮类化合物的测定溶液吸收-高效液相色谱法警告：实验中使用的酸和有机试剂等具有强烈的腐蚀性、刺激性和毒性，试剂配制过程和样品前处理过程应在通风橱内进行；操作时应按要求佩戴防护器具，避免吸入呼吸道及接触皮肤和衣物。
1 适用范围本标准规定了测定环境空气和无组织排放监控点空气中醛、酮类化合物的高效液相色谱法。
本标准适用于环境空气和无组织排放监控点空气中甲醛、乙醛、丙烯醛、丙酮、丙醛、丁烯醛、2-丁酮、正丁醛、苯甲醛、异戊醛、正戊醛、正己醛、邻甲基苯甲醛、间甲基苯甲醛、对甲基苯甲醛和2,5-二甲基苯甲醛共16种醛、酮类化合物的测定。
当试样定容体积2.0 ml，进样量10 μl时，醛、酮类化合物的最低检出量为0.024 µg～0.060 µg，当采样体积为20 L（标准状态下）时，方法的检出限为0.002 mg/m3～0.003 mg/m3，测定下限为0.008 mg/m3～0.012 mg/m3。
详见附录A。
2 规范性引用文件本标准引用了下列文件或其中的条款。
凡是不注日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。
HJ/T 55 大气污染物无组织排放监测技术导则HJ 194 环境空气质量手工监测技术规范3 方法原理环境空气和无组织排放监控点空气中的醛、酮类化合物在酸性介质中与吸收液中的2,4-二硝基苯肼（DNPH）发生衍生化反应，生成2,4-二硝基苯腙类化合物，用二氯甲烷-正己烷混合溶液或二氯甲烷萃取、浓缩后，更换溶剂为乙腈，经高效液相色谱分离，紫外或二极管阵列检测器检测。
根据保留时间定性，外标法定量。
4 干扰和消除具有相同保留时间且在360 nm处有吸收的其他有机化合物会干扰测定，可以通过改变流动相组成等方式改善分离条件，避免干扰。
15 试剂和材料除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为新制备的超纯水。
5.1 乙腈（CH3CN）：高效液相色谱纯。
5.2 二氯甲烷（CH2Cl2）：高效液相色谱纯。
0512高效液相色谱法公示稿
0512高效液相色谱法公示稿一、前言高效液相色谱法（HPLC）是一种高效、精密的分离、检测和定量分析方法，广泛应用于医药、化工、环保、食品等领域。
为了加强对HPLC 法的监管，保障公众健康和安全，特公示我国关于HPLC法的相关规定。
二、高效液相色谱法的定义1. 高效液相色谱法是一种基于溶液中的组分在液相（柱填料）和固相（涂层）之间分配系数差异进行分离和分析的方法。
2. 高效液相色谱法通过注射液体样品进入含有液相的柱内，利用溶剂在固相和液相之间进行吸附、分配、渗透和离子交换等作用，分离样品中的化合物。
3. 高效液相色谱法能够分离样品中微量或追踪成分，提高检测的灵敏度和准确性。
三、高效液相色谱法的应用领域1. 药品分析：用于药物成分检测、纯度分析和质量控制。
2. 食品安全：用于检测食品中的添加剂、农药残留、重金属等有害物质。
3. 环境保护：用于水质、大气、土壤等环境样品中污染物的分析和监测。
4. 化工生产：用于反应物、中间体、产物的分离和纯度检测。
四、高效液相色谱法的标准化1. HPLC法的样品处理和制备应符合国家相关法律法规和标准，确保样品的准确性和可靠性。
2. 检测仪器和设备应定期维护和校准，确保分析结果的准确性和稳定性。
3. 检测人员应具备专业的实验技能和丰富的经验，严格按照标准操作程序进行分析。
4. 检测实验室应具备良好的实验条件和环境，确保分析过程的可控性和干净度。
五、高效液相色谱法的质量保障1. 检测样品的来源应合法合规，确保检测结果的可靠性和真实性。
2. 检测实验室应建立健全的质量管理体系，确保检测过程的可追溯性和规范性。
3. 检测报告应客观、准确地反映样品的分析结果，不得篡改或误导消费者。
4. 对于检测中发现的问题或异常情况，应及时报告并采取有效措施进行处理和纠正。
六、结语高效液相色谱法作为一种先进的分析技术，在现代科学研究和工业生产中发挥着重要作用。
为了保障HPLC法的准确性和可靠性，我们将严格监管HPLC法的相关实施，确保公众利益和健康安全。
高效液相色谱的基本参数讲义
降低检测器噪声
通过优化检测器条件，如调整光 源强度、选择合适的滤光片等， 可以降低检测器噪声，从而提高 信噪比和灵敏度。
增加进样量
在保证色谱柱不过载的前提下， 适当增加进样量可以提高检测器 的响应值。
灵敏度与检测器选择关系
不同检测器灵敏度差异
不同类型的检测器对同一物质的灵敏度可能存在较大差 异，如紫外检测器对含有共轭体系的化合物具有较高的 灵敏度，而荧光检测器则对某些具有荧光特性的化合物 具有较高的灵敏度。
改变柱温
选择合适的色谱柱
柱温升高，分子运动加快，保留时间缩短 ；柱温降低，保留时间延长。但需注意柱 温过低可能导致色谱柱效能下降。
根据分析需求选择合适的色谱柱类型、粒径 和长度，以获得理想的保留时间。
保留时间预测模型
线性溶剂强度模型
假设溶质在固定相和流动相之间的分配系数与流动相组成 呈线性关系，通过实验数据拟合得到线性方程，可用于预 测不同流动相组成下的保留时间。
仪器组成与工作流程
01
仪器组成
高效液相色谱仪主要由输液系统、进样系统、色谱柱、检 测器、数据记录与处理系统等部分组成。其中输液系统包 括储液器、泵、流动相梯度程序等；进样系统包括进样器 、定量环等；色谱柱是实现分离的核心部件；检测器用于 对分离后的组分进行检测；数据记录与处理系统则用于数 据的采集、处理和分析。
使用后，应及时清洗色谱 柱，避免残留物对色谱柱 造成损害。
ABCD
在使用前，应对色谱柱进行 充分的平衡和条件化，以确 保其分离效果和稳定性。
长期不使用的色谱柱应妥 善保存，并定期进行检查 和维护。
仪器操作规范与安全防护
01
操作人员应熟悉仪器的结构、原理和操作方法，并按照规范进行操作。
高效液相色谱法(HPLC)
高效液相色谱法(HPLC) High Performance LiquidChromatography§3-1 高效液相色谱法概述一、定义以高压输出液体为流动相，以小粒径填料填充色谱柱的色谱分析方法。
高效液相色谱法是继气相色谱之后，70年代初期发展起来的一种以液体做流动相的新色谱技术.二、HPLC特点1、高压经典的液相色谱法，流动相在常压下输送，所用的固定相柱效低，分析周期长。
而现代液相色谱法中，流动相改为高压输送（150～350 ⨯105 Pa，最高输送压力可达450⨯105 Pa）;2、高速由于流动相流速高，分析时间大大缩短，几min、十几min可完成一个分析任务。
3、高效HPLC色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）。
4、高灵敏度利用高灵敏度的检测器，检测灵敏度大大提高。
紫外检测器10-9g荧光检测器10-11g高效液相色谱三、液相色谱分离原理及分类液相色谱分离的实质是样品分子（以下称溶质）与溶剂（即流动相或洗脱液）以及固定相分子间的作用，作用力的大小，决定色谱过程的保留行为。
根据分离机制不同，液相色谱可分为：液固吸附色谱、液液分配色谱、化学键合相色谱、离子交换色谱以及分子排阻色谱等类型。
四、液相色谱与气相色谱的比较1、相同点（1）基本原理一致：不同组分在两相中的作用力不同。
（2）基本概念一致：基本概念：保留值、塔板数、塔板高度、分离度、选择性等与气相色谱一致。
（3）基本理论一致：塔板理论与速率方程也与气相色谱基本一致。
2、不同点由于在液相色谱中以液体代替气相色谱中的气体作为流动相，而液体和气体的有性质本质不同，因此，两种方法也有不同之处：（1）仪器设备和操作条件不同；（2）应用范围不同；气相色谱仅能分析在操作温度下能气化而不分解的物质。
对高沸点化合物、非挥发性物质、热不稳定化合物、离子型化合物及高聚物的分离、分析较为困难。
高效液相色谱法
（2）化学键合固定相 ） B. 极性键合相 极性键合相指键合有机分子 中含某些极性基团，与空白硅胶相比， 中含某些极性基团，与空白硅胶相比，其极性 键合相表面能量分布均匀，是一种改性的硅胶， 键合相表面能量分布均匀，是一种改性的硅胶， 常用的极性键合相有氨基、氰基等。 常用的极性键合相有氨基、氰基等。氨基键合 相是分离糖类最常用的固定相，常用乙腈-水 相是分离糖类最常用的固定相，常用乙腈 水
二、液相色谱的流动相
1. 流动相特性
（mobile phases of LC） ）
（2）化学键合固定相 ）
化学键合固定相是应用最广的色谱法。 化学键合固定相是应用最广的色谱法。将固定液的官能团键
合在载体上形成的固定相称为化学键合相，其特点是不流失， 合在载体上形成的固定相称为化学键合相，其特点是不流失， 一般认为有分配与吸附两种功能。 一般认为有分配与吸附两种功能。 a. 硅氧碳键型： 硅氧碳键型： ≡Si—O—C b. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C 硅氧硅碳键型： 稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广 稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂， c. 硅碳键型： 硅碳键型： d. 硅氮键型： 硅氮键型： ≡Si—C ≡Si—N
4.6
高效液相色谱法
高效液相色谱法(high pressure Liquid 高效液相色谱法 chromatography，HPLC)是利用物质在两 ， 是利用物质在两 相之间吸附或分配的微小差异达到分离的目的。 相之间吸附或分配的微小差异达到分离的目的。 当两相作相对移动时， 当两相作相对移动时，被测物质在两相之间做 反复多次的分配， 反复多次的分配，这样使原来微小的差异产生 了很大的分离效果，达到分离、 了很大的分离效果，达到分离、分析和测定一 些理化常数的目的。 些理化常数的目的。
高效液相色谱HPLC简介
h
AB
1/10h
拖尾
T
f
＝
B A
前伸
液相色谱图相关术语(3)
色谱图相关术语: 基线(Baseline):在正常操作条件下,仅由流动相所 产生的响应信号的曲线 基线飘移(Baseline Drift):基线随时间定向的缓 慢变化 基线噪声(N)(Baseline Noise):由各种因素所引起 的基线波动
• 溶剂过滤：常用0.5μm膜过滤。HPLC级溶剂：无微粒，无紫外吸收，已用 0.2μm膜过滤。
• 贮液瓶要不定期更换，要有2～3个备用瓶，定期用酸、水、溶剂清洗。 • 沉子：用三个月后必须清洗或更换，若未用沉子，则必须用0.5μm膜过滤。
溶剂脱气
脱气：正相色谱如非水性凝胶色谱的流动相不必脱气，反相色谱的流动相需 要脱气。 He氦气脱气：10min可以除去80～90％溶入的气体，但价格昂贵 真空脱气：这是最常用的方法，可用真空抽滤流动相的方法代替。 超声脱气：使用方便，但只能脱气30％ 加热回流：最彻底的脱气方法，混合流动相不能用
底相交两点之间的距离 –半(高)峰宽(Peak Width at Half Height):通过峰
高的中点作平行于峰底的直线,其与峰两侧 相交两点之间的距离
HPLC的图形结果 --色谱图(Chromatogram)
色谱图:色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信号对时间 的曲线图,其纵坐标为信号强度,横坐标为保留时间.
改变a的途径 改变固定相 改变流动相 改变温度 改变样品的本身性质
在反相HPLC中溶剂强度会随着水/有机流动相中的有机相增加而增加 。
确定最佳的溶剂强度
• “试-凑法”，即先用一种可能过强的流动相，在后面的实验中逐步减小溶 剂强度以增加k’，当所有谱峰的k’介于1—20时，其流动相已经接近最佳 了。
高效液相色谱法的相关标准
高效液相色谱法的相关标准一、固定相粒度在高效液相色谱法中，固定相粒度是一个关键参数，它影响着色谱分离的效果和分辨率。
一般来说，固定相粒度越小，分辨率越高，但同时也会增加柱压和减少柱效。
因此，选择合适的固定相粒度对于获得最佳的分离效果非常重要。
根据实际应用的需要，固定相粒度通常在3-10微米之间选择。
对于一些需要高分辨率分离的样品，如蛋白质、多肽等，可以选用更小的固定相粒度，以提高分辨率和分离效果。
二、流动相流动相是高效液相色谱法中的另一个重要组成部分，它直接影响到色谱分离的效果和样品的保留时间。
流动相的选择需要考虑样品的性质、分离目的以及实验条件等因素。
常用的流动相包括甲醇、乙腈、水、乙醇等。
对于一些含有极性基团的样品，可以使用极性较大的流动相，如甲醇或乙腈；对于一些非极性样品，可以使用非极性流动相，如正己烷或氯仿。
此外，流动相的pH值和离子强度也会影响样品的保留时间和分离效果。
三、检测器检测器是高效液相色谱法中用于检测样品成分的关键设备。
根据不同的检测目的和样品性质，可以选择不同的检测器。
常用的检测器包括紫外-可见检测器、荧光检测器、电化学检测器和质谱检测器等。
紫外-可见检测器是一种常用的检测器，它根据样品在紫外-可见光区的吸收光谱进行检测；荧光检测器则根据样品在荧光激发下的荧光发射光谱进行检测；电化学检测器则根据样品在电化学反应中的电信号进行检测；质谱检测器则根据样品在质谱仪中的质量-电荷比进行检测。
不同的检测器适用于不同的样品和检测目的，需要根据实际情况进行选择。
四、应用范围高效液相色谱法被广泛应用于各种样品的分离和分析，包括有机化合物、无机化合物、蛋白质、多肽、生物碱、药物等。
通过选择合适的固定相、流动相和检测器，高效液相色谱法可以实现对各种样品的快速、高效、高分辨率的分离和分析。
同时，高效液相色谱法还可以与其他技术如质谱、核磁共振等进行联用，进一步拓展了其应用范围。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
高效液相色谱标准
高效液相色谱标准的发展及其在分析化学中的重要性
随着科技的不断进步，高效液相色谱法（HPLC）已经成为了现代分析化学中不可或缺的一部分。
这种方法以其极高的分离效能和灵敏度，广泛应用于各个领域，包括医药、环保、化工等。
然而，为了确保实验结果的准确性和可靠性，制定高效液相色谱标准显得尤为重要。
本文将深入探讨高效液相色谱法的原理、实验条件、标准制定原则与流程，以及其在实际应用中的案例分析，评估其优缺点并预测未来发展趋势。
一、高效液相色谱法的基本原理与概念
高效液相色谱法是一种基于色谱分离技术的分析方法。
其基本原理是利用不同的物质在固定相和流动相之间的分配系数差异，实现对不同物质的分离。
这种方法的分离效能高，分析速度快，且具有较高的灵敏度和较低的检测限。
柱效能和检测限是高效液相色谱法中的关键概念。
柱效能反映了色谱柱的分离效果，而检测限则代表了方法的灵敏度。
二、实验条件与方法
在进行高效液相色谱实验时，选择合适的固定相、流动相以及实验条件是至关重要的。
固定相是色谱分离的基础，不同的固定相对于不同物质的吸附能力不同。
流动相则决定了物质在色谱柱中的移动速度，从而影响分离效果。
实验条件包括温度、压力、流速等，这些因素都会对实验结果产生影响。
三、标准制定原则与流程
制定高效液相色谱标准需要遵循一定的原则和流程。
首先，标准制定应基于广泛认可的方法和规范，确保实验过程的科学性和合理性。
其次，标准制定应注重可重复性和可操作性。
这意味着标准的制定应考虑到不同实验室之间的差异，确保实验结果具有可比性。
此外，标准制定还应关注样品处理、色谱柱条件优化、重复试验等环节，以确保实验结果的准确性和可靠性。
四、实际应用案例分析
在实际应用中，高效液相色谱法已经在多个领域取得了显著成果。
例如，在医药领域，高效液相色谱法被用于药物的分离和纯化，以确保药品的质量和安全性。
在环保领域，高效液相色谱法被用于对环境样品中的有害物质进行检测和分析。
在化工领域，高效液相色谱法被用于研究化学反应的产物和副产物。
这些案例都证明了制定高效液相色
谱标准的重要性。
五、优缺点评估及改进措施
虽然高效液相色谱法具有许多优点，但仍存在一些不足之处。
例如，对于某些复杂样品的分析仍存在挑战。
对此，我们可以采取一些改进措施，如优化样品处理方法、选择更合适的色谱柱等。
此外，随着新技术的发展，如多维色谱和质谱等，我们可以进一步拓展高效液相色谱法的应用范围，提高其分离效能和灵敏度。
六、发展趋势
未来，高效液相色谱法将继续跟随科技发展的步伐，向着更高分离效能、更低检测限、更广泛的应用范围等方向发展。
多维色谱、质谱等新技术的加入将使高效液相色谱法在未来的分析化学领域中发挥更大的作用。
同时，随着标准的不断完善和优化，高效液相色谱法的应用将更加广泛和深入，为各领域的发展提供更强大的支持。
七、结论
总结全文内容，我们可以看到高效液相色谱法在现代分析化学中的重要地位以及制定其标准的必要性。
通过深入探讨高效液相色谱法的原
理、实验条件、标准制定原则与流程以及实际应用案例分析优缺点评估及改进措施等各个方面，我们可以对高效液相色谱法有更全面和深入的了解。
同时我们也看到了一些现有标准的优点和不足之处以及未来可能的发展趋势。
为了更好地发挥高效液相色谱法的作用和服务于各领域的发展需要我们应当不断加强对其标准的实施和完善工作并且不断跟随科技发展的步伐来不断完善和提升我们的实验方法和扩大应用范围等层面工作使得高效液相色谱法在确保产品质量与纯度等方面发挥更大的指导作用并且获得更广泛的应用与发展前景。