重组基因的导入和鉴定
高中生物重组技术实验教案
高中生物重组技术实验教案
实验名称：重组技术实验
实验目的：通过实验，让学生了解重组技术的基本原理和应用，培养学生的实验操作能力和科学思维能力。
实验材料：DNA分子模型、重组酶、DNA片段、载体DNA、PCR仪器、琼脂糖凝胶等。
实验步骤：
1. 首先，讲解重组技术的基本原理和应用，并展示实验所需材料。
2. 学生分组进行实验，每组配备一个老师指导。
3. 将载体DNA和DNA片段分别用重组酶切割成合适的长度，然后将它们混合并利用PCR 技术将其连接起来。
4. 将连接好的DNA转化至细菌宿主中，培养并筛选出带有目标基因的细菌。
5. 最后，将细菌中的目标基因进行提取并通过琼脂糖凝胶电泳进行验证。
实验评估：学生根据实验结果进行分析和讨论，并撰写实验报告，总结实验过程中的操作技能和体会。
拓展延伸：可以邀请专业人士来讲解重组技术在医学、农业等领域的应用，并参观相关实验室，进一步拓展学生的实验技能和知识面。
注意事项：1. 实验中需要小心操作化学药品和实验器材，注意安全防护措施。
2. 实验结束后要及时清理实验台和器材，保持实验现场的整洁。
3. 学生要尊重实验材料和动植物，严禁损坏或滥用。
高中生物基因重组实验教案
高中生物基因重组实验教案
实验目的：通过本实验，学生可以了解基因重组技术的原理和应用，掌握基因工程的基本操作技能。
实验材料：
1. 大肠杆菌菌种
2. 质粒DNA
3. 荧光素底物
实验步骤：
1. 将质粒DNA和大肠杆菌菌种分别取出，让其回温至室温。
2. 在洁净的实验台上，取出一个无菌平板，将大肠杆菌菌种均匀涂抹在平板上。
3. 利用移液枪或其他合适的工具，向大肠杆菌菌种中转染质粒DNA。
4. 将转染后的大肠杆菌平板进行培养，并在适当的温度下放置一段时间。
5. 观察培养后的大肠杆菌菌落，通过照射荧光素底物，观察是否有发光现象。
6. 如有发光现象，则说明成功实现了基因重组。
实验注意事项：
1. 实验中所有操作都需在洁净环境下进行，避免外部杂质的干扰。
2. 质粒DNA和大肠杆菌菌种皆需在合适的保存条件下保存，避免受到污染或损坏。
3. 实验中使用的荧光素底物需遵循生物安全规范使用，避免对环境和个人造成伤害。
拓展实验：
1. 可以尝试使用不同种类的质粒DNA和大肠杆菌菌种进行实验，观察不同基因组合的结果。
2. 可以了解基因重组技术在医学、农业等领域的应用，深入探讨基因工程的潜力及争议。
实验总结：
通过本实验，学生可以了解基因重组技术的基本原理和操作方法，培养实验操作能力和科学思维。
同时，也能够拓展对基因工程技术的认识，为未来的学习和研究奠定基础。
第六章 重组DNA导入受体细胞
根据基因转移方法的特性，重组DNA导入受体细胞的 方法有以下几种： •转化：将重组质粒导入受体细菌细胞，使受体细菌遗传 性状发生改变的方法； •转染：将携带外源基因的病毒感染受体细胞的方法（磷 酸钙沉淀法与体外包装法）； •微注射技术：将外源基因直接注射到真核细胞内的方法； •电转化法 •基因枪技术：又称微弹技术或高速离子轰击法； •脂质体介导法 •其他方法：快速冷冻法、碳化硅纤维介导法。
CaCl2使细菌发生休克后，立即进行转化（E.coli X1776
可长期冷藏，并保持其摄取DNA的能力）。 也可以采用Rb+、Mn2+、K+、二甲基亚砜、二流苏糖
醇（DTT）等制备感受态细胞。
CaCl2制备感受态细胞的一般过程：
•E.coli 接种于LB agar培养基，37℃培养一晚；
•挑选3-5个大菌落，接种于50ml LB培养基，37 ℃振摇培 养一晚后，在A550测定，要求细菌繁殖一定量（一般为对 数生长期）；
以病毒（噬菌体）为载体，转染宿主细胞的方法主 要有磷酸钙沉淀法和体外包装转染法。 一、磷酸钙沉淀法
磷酸钙沉淀法（磷酸钙-DNA共沉淀法），它能把外 源基因与λ噬菌体DNA的重组子导入大肠杆菌和哺乳动物 细胞，但转染效率仍不如体外包装法。
细胞具有摄取磷酸钙沉淀的双链DNA（吞噬DNA-磷酸 钙复合颗粒）的能力，几乎所有的双链DNA都可以通过这 种方法导入细胞。
第六章重组dna导入受体细胞????????????外源基因与载体在体外连接成重组体dna分子后需要将其导入受体细胞进行扩增和筛选得到大量单一的重组体分子这就是外源基因的无性繁殖即
第六章 重组DNA导入受体细胞
内容提要
•克隆与导入方法 •转化 •转染 •共转化 •电转化 •基因枪法 •微注射技术 •脂质体导入法 •转化酵母菌 •植物细胞的基因转移方法 •哺乳动物细胞基因导入法 •反转录病毒载体的转染
高中生物4章基因工程2节基因工程的操作程序2课时目的基因的导入和检测
第2课时目的基因的导入和检测[目标导读] 1.结合教材P77～81图文，阐明目的基因的导入的四种方法。
2.分析教材P81～83内容，掌握目的基因的检测与表达产物的测定。
[重难点击] 1.目的基因的导入方法。
2.目的基因的检测与表达产物测定的原理方法。
方式一通过前面的学习，我们了解了基因工程中目的基因的获取和基因表达载体的构建。
在目的基因与载体连接成重组DNA分子以后，下面的重要工作主要是将其导入受体细胞进行扩增和筛选，获得大量的重组DNA分子，这就是外源基因的无性繁殖，即克隆(cloning)。
方式二目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过检测与鉴定才能知道。
这是基因工程的第四步工作。
以上步骤完成后，在全部的受体细胞中，真正能够摄入重组DNA分子的受体细胞是很少的。
因此，必须通过一定的手段对受体细胞中是否导入了目的基因进行检测。
检测的方法有很多种，例如，大肠杆菌的某种质粒具有青霉素抗性基因，当这种质粒与外源DNA组合在一起形成重组质粒，并被转入受体细胞后，就可以根据受体细胞是否具有青霉素抗性来判断受体细胞是否获得了目的基因。
重组DNA分子进入受体细胞后，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达过程。
一、目的基因的导入1．花粉管通道法(如图)(1)概念：是指外源基因利用植物受精后花粉萌发形成的花粉管通道进入受体细胞，借助天然的种胚系统形成含有目的基因的种胚。
常用的两种方法有柱头滴加法和花粉粒携带法。
(2)实验：利用花粉管通道法将目的基因导入棉花的实验操作程序①原理：授粉后使外源DNA能沿着花粉管通道渗入，经过珠心通道进入胚囊，转化尚不具备正常细胞壁的卵细胞、合子或早期胚胎细胞。
②操作过程a．提取含有目的基因的总DNA或者质粒DNA，配成质量分数为0.01%的溶液。
b．用棉线捆住将要在第二天开花的花朵，不让花朵自动开放。
c．第二天清晨给花朵进行人工授粉，授粉后套袋，作好标记。
DNA重组技术的原理及步骤
DNA重组技术的原理及步骤DNA重组技术是一种分子生物学技术，它通过重新组合DNA分子的特定部分，可以改变生物体的基因组成，从而实现对基因的操作和操控。
DNA重组技术的原理可以概括为：通过酶类作用在DNA链上剪切出特定的片段，再利用DNA连接酶将不同源的DNA片段连接在一起，形成新的DNA分子。
第一步：DNA提取DNA提取是DNA重组技术的前提和基础。
首先需要选择适当的生物样本，如细菌、植物、动物细胞等，利用细胞裂解方法将细胞溶解，释放出DNA。
然后经过蛋白质酶的消化，去除蛋白质、RNA等杂质，最终得到纯净的DNA溶液。
第二步：DNA切割DNA切割是指将DNA分子切割成特定的片段。
这一步骤可以利用限制性内切酶来实现。
限制性内切酶是一种酶类，能够识别DNA链上的特定序列，并在该序列的特定位点上切割DNA链。
通过选择不同的限制性内切酶，可以将DNA切割成不同长度的片段。
第三步：DNA纯化与回收切割后的DNA片段需要通过凝胶电泳分离和纯化。
凝胶电泳是利用DNA片段在电场中的移动速度差异，使不同长度的DNA片段在凝胶中分离的方法。
分离完成后，可以通过抽取单个的DNA片段进行纯化，获得所需的DNA溶液。
第四步：目标片段回收将目标片段从凝胶中回收需要先进行DNA片段的可视化。
一般可以采用亮蓝G染色剂着色和紫外线照射的方式进行可视化，然后使用刮片等方法将目标片段回收。
第五步：DNA连接DNA连接是将目标片段与载体DNA连接在一起，形成重组DNA。
载体DNA一般选择能够稳定复制的质粒或噬菌体基因组。
连接需要使用DNA连接酶，该酶能够识别DNA链的断裂末端，并将目标片段与载体DNA连接在一起。
第六步：转化连接完成后，可以将重组的DNA转移到宿主细胞内。
转移可以通过化学法转化细胞、电穿孔法或者基因枪等方法实现。
转化后的细胞会自主复制并表达被插入的重组DNA。
第七步：筛选与鉴定对转化后的细胞进行筛选与鉴定，以确定是否成功插入重组DNA。
重组体分子的选择与鉴定方法及鉴定
电泳后的图谱
挑三个菌落 鉴定，图显 示的是三个 菌落中的质 粒双酶切的 结果
依赖于重组子结构特征分析的筛选方法三 PCR方法筛选鉴定重组子
• 基本原理： • 在载体DNA分子中，外源DNA插入位点两侧的序列多为 已知，通过与插入位点两侧已知序列互补的引物，从单 克隆中提取少量质粒DNA作为模板进行PCR扩增，琼脂 糖凝胶电泳分析确定是否为重组子。
抗药性标记法示意图
b类插入失活筛选
• 从原理上讲，当外源基因(或DNA片段)插入到某一基因内 的位点后, 使这个基因丧失了原有的功能叫插入失活 (insertional inactivation) 。插入失活法是从不同的重组 DNA分子获得的转化子中鉴定出含有目的基因的转化子 （筛选）的主要方法。
常用的抗药性选择标记
抗药性 氨苄青霉素 （Amp） 溶解剂 虑过 除菌 是 贮存温度 贮存浓度 终浓度
水
-20℃
50mg/ml
50~100µ g/ml
氯霉素（Cm） 卡那霉素 （Ka或Kan）
四环素（Tet 或Tc） 链霉素（Sm 或Str）
乙醇
否
-20℃
34mg/ml
20~17交液中，在60℃下放置6h；把同 位素标记的DNA探针于100℃变性后加入杂交溶液中，然 后放入滤膜，60℃杂交16－24h。探针的用量一般为105 －106cpm/ml。用2×SSC洗脱3次，每次30min。 • 7 放射自显影：将洗好的滤膜用吸水纸吸干，夹于两层保 鲜膜中，在暗室内放进暗盒，放好X线片，并于X线片上 作好标记，置于－70℃冰箱暴光48－72h。 • 8 洗片：在暗室内取出X线片，进行显影和定影，分析杂 交结果。
RNA水平
蛋白质水平
免疫化学检测法（放射性抗体检测法、 免疫沉淀检测法） Westhern印迹杂交法
何水林版基因工程第五章基因的转移与重组体的筛选和鉴定
带酶切位点的PCR产物 5’- GCAGAATTC
PCR产物 PCR产物
GGATCCGCG CCTAGGCGC BamH I位点
-3’
-5’
3’- CGTCTTAAG
EcoR I位点
EcoR I BamH I 5’AATTC 3’- G PCR产物 PCR产物 G -3’ CCTAG -5’
两头各有一个粘性末端！
4. DEAE-葡萄糖转染法 二乙氨乙基（DEAE）葡聚糖为多聚阳离子试剂，能 促进哺乳动物细胞摄入外源DNA。
葡聚糖
++ ++++++ ++ + + + 二乙氨乙基 + + （DEAE） ++ ++ ++++
++ ++++++ ++ + + + 二乙氨乙基 + + （DEAE） ++ ++ ++++ - - - -- - DNA - - --- -
4、在培养基中生长数小时之后，球形细胞复原并增殖。
操作步骤： 10ng 载体DNA 100L 感受态细胞 10-100L转化液 涂Amp＋平板
（p140）
吸附DNA 冰浴30min
摄入DNA 42℃ 1~2min
37℃ 振荡培养1h
加入1mL LB培养基 （Amp-）
转化率：106-108/g DNA
（一）转化率的计算：
转化率 ＝ 产生菌落的总数 / DNA的加入量
基因工程重组体克隆的筛选和鉴定
基因功能的正向遗传筛选技术
突变体库的构建
通过化学诱变、同源重组 等技术构建大规模突变体 库。
表型筛选
通过特定表型筛选出具有 特定功能的突变体。
突变基因的鉴定
通过测序等技术鉴定出突 变基因，并研究其功能。
05
克隆基因的应用前景
克隆基因在医学上的应用
疾病诊断与治疗
利用克隆技术获取特定基因，可用于疾病诊断、药物研发和个性化治疗。
基因敲入
将特定基因敲入生物体基因组，观察 生物体表型变化，以确定该基因的功 能。
基因表达干扰
通过转录因子或RNAi技术干扰特定 基因的表达，观察生物体表型变化， 以确定该基因的功能。
正向遗传筛选
通过突变体库筛选具有特定表型的突 变体，鉴定突变基因，以研究该基因 的功能。
基因敲除和敲入技术
基因敲除技术
基于测序的筛选
对转化子进行全基因组测序或目的基因片段测序，与已知序列进行比 对，判断是否含有目的基因。
蓝白筛选法
原理
步骤
利用载体上标记基因的表达产物对转化子 进行筛选，通过菌落颜色的变化判断是否 含有目的基因。
将转化子涂布在含有抗生素的培养基上， 培养后观察菌落颜色变化，蓝色菌落为阳 性克隆，白色菌落为阴性克隆。
基因表达的蛋白质印迹分析
原理
利用特异性抗体检测样品中特定蛋白质的表达情况，通过显 色反应或荧光信号对蛋白质进行定性或定量分析。
用等 方面的研究。
04
克隆基因的功能研究
基因功能研究的方法
基因敲除
通过基因工程技术将特定基因敲除， 观察生物体表型变化，以确定该基因 的功能。
Northern印迹杂交
原理
基于RNA的电泳分离和转移，将RNA 片段与标记的探针进行杂交，以检测 特异的RNA转录本。
第四章基因的转移与重组体的筛选和鉴定
第四章基因的转移与重组体的筛选和鉴定第一节转化基因片段在体外只是一段核酸分子，是化学物质，无法表现出遗传物质的生命活性。
只有当其存在于活细胞后，生命的特征才能充分展示出来。
在分子克隆实践中，在体外操作的核酸分子只有进入细胞以后才能达到克隆的目的。
一、重组DNA分子转入原核生物细胞1. 重组质粒DNA分子转化大肠杆菌转化（transformation）——重组质粒DNA分子通过与膜蛋白结合进入受体细胞，并在受体细胞内稳定维持和表达的过程。
转化不仅适合于大肠杆菌受体细胞，而且适合于枯草杆菌和蓝藻等其他原核生物以及酵母等低等真核生物受体细胞。
（1）CaCl2处理后的细菌转化或转染A、制备感受态细胞受体细胞的细菌，经一定浓度的冰冷的 CaCl2（50～100 mmol／L）溶液处理后变成。
所谓感受态细胞，处在感受态状态的菌体有摄取各种外源 DNA的能力。
转化：感受态的大肠杆菌细胞捕获和表达质粒载体DNA分子的生命过程；转染：感受态的大肠杆菌细胞捕获和表达噬菌体DNA分子的生命过程；好的感受态细胞，每微克的超螺旋质粒DNA可得5×107个转化体。
B、细胞转化（或转染）的具体操作过程：①将处于对数期的新鲜培养物于0℃4000转/分离心10分，回收细菌细胞；②将细胞用0℃的0.1mol/L CaCl2低渗溶液处理30分钟，离心回收细胞，再用适量0℃的0.1mol/L CaCl2重悬细胞，以诱导感受态产生。
③加入适量DNA，于42 ℃热处理混合物90秒，使DNA分子被细胞吸收；④将混合物快速转到冰浴中，冷却1~2分，加入适当的培养基，在37 ℃培养45分，使细胞复苏并表达质粒所携带的转化基因；⑤通过选择培养基上平板培养，选择转化体。
⑥如果用抗菌素筛选转化体，作为对照的受体菌应该在此培养基上不生长。
（2）电穿孔转化法基本原理是利用高压电脉冲作用，在大肠杆菌细胞膜上进行电穿孔（electroporation），形成可逆的瞬间通道，从而促进外源DNA的有效吸收。
基因工程原理-第5章重组基因导入受体细胞
转化率＝
转化子 DNA分子数
＝
Ca2+诱导大肠杆菌转化法
① 低温下使磷质层形成液晶结构， Ca2+： 使膜间核酸酶分离 ② 与DNA结合，抗DNase
（1）感受态的制备
对数生长后期的菌体 5x107个/毫升
冰浴10分钟
含CaCl2缓冲液 15分钟 含CaCl2缓 冲液
（3）筛选转化子。
（2）DNA分子转化感受态细胞
菌间接合转移的有关基因
tra。
（Vir 区）
（Con区）
出毒性。占Ti质粒 1/3。
Ori区 ——复制起始区。
外源基因
Ti质粒载体
限制性酶 切开
（1）叶盘法转化植物细胞
（2）整体植株接种转化法
人为地在整体植株上造
成创伤部位，然后把农杆菌
接种在创伤表面，使农杆菌 按照天然的感染过程在植株
体内进行侵染。获得转化的
CHO，猴肾细胞等
• 受体动物：鼠、牛、羊、鱼等
第二节 重组基因导入受体细胞
一、重组基因导入原核受体细胞
接受DNA片段
（一）转化
1928年英国学者F·Griffth在肺炎双球菌中发现的，证
明了遗传的物质基础是DNA。
转化（transformation）——重组质粒DNA分子进入受体细胞，并在受 体细胞稳定维持和表达的过程，转化后的受 体菌，称转化子。 转化子 细胞数
（二）植物病毒介导基因转移 DNA病毒20%
植物病毒
RNA病毒80%
花椰菜花叶病毒：双链DNA病毒
（三）化学诱导DNA直接转化 （1）多聚物介导法 聚乙二醇 多聚赖氨酸 多聚鸟苷酸
（2）脂质体介导基因转化
脂质体
（四）物理方法介导DNA直接转化 （1）基因枪转化
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（3）操peration)
该方法利用脉冲电场提 高细胞膜的通透性，使 细胞膜上形成纳米大小 的微孔，可将DNA转移到 细胞中。该方法简便， 且有较稳定的转染效率， 可广泛运用于培养细胞 的基因转移.
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原理：细胞生物学研究证明，细胞膜的磷脂双分子层可视为 一种电容，其静膜电位（Vm）约为l00mV，导电性很差。当 把细胞置于外加电场中时，会使膜电位升高，双分子层两端 电压形成差势，随着外加电场电压升高，细胞膜被压缩变薄， 当膜电压升到一定数值时，膜被击穿。
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固定细胞技术
显微注射技术的关键是原生质体或具壁 细胞或细胞团的固定。 首先必须建立固定细胞技术，然后才能 进行定位显微注射操作。 常用的细胞固定方法有3种： 一、琼脂糖包埋法 二、多聚赖氨酸粘连法 三、吸管支持法
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二、基因转移的化学方法
磷酸钙共沉淀法
化学方法
DEAE—葡聚糖转染法 脂质体转染法
构建重组体DNA是分子生物学常用 技术。它把经过处理的、具有匹配末 端的外源片段和载体进行连接,转化感 受态细菌后,经生长、筛选或鉴定,获 得含目的DNA 的转化菌。本章讨论外 源重组基因转入受体细胞的方法，及 其重组子的鉴定。
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第一节
基因转移的方法
在确定染色体DNA是遗传的主要载体后 的一段较长时间内，人们一直认为虽然 生物种类繁多，表型各异，但决定每种 生物基因组的DNA是固定的，包括数目 固定、位置固定、功能固定的一系列基 因。他们的流动性受到十分严格的限制。
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基因枪所用材料： （1）钨粉使用起来经济实惠，也可以得到较好的转化效果； 但容易被氧化，颗粒易聚集，并且对植物细胞的毒害也比 金粉大。 （2）将DNA包被到微载体上所用的试剂有亚精胺、CaCl2、 乙醇、聚乙二醇、异丙醇等，但多用前两种。
（3）所用动力系统：一类以火药爆炸力作为动力加速微 弹；另一类以电弧放电蒸发液滴作为动力；第三类以高压 蒸汽作为动力。 基因枪法的特点：（1）转化效率高。
2
随着遗传学研究的深入，人们逐渐发现 细菌的结合、转导、转化、转座等现象， 在这些事件中存在明显的遗传物质转移， 而这种转移与生物繁殖过程中的遗传物 质的转移有显著区别。这些现象后来成 为基因工程的基因转移技术。可以用于 细菌、真菌和动、植物的基因工程体构 建。
3
一、基因转移的物理方法
裸DNA直接注射 微粒轰击 电穿孔 显微注射
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(4)显微注射
指在显微镜下，将DNA 由细胞玻璃针直接注入 细胞。可以将DNA直接 注入核内而减少溶酶体 对外源DNA的降解，有 助于基因的整合与表达。 适用于多种贴壁生长细 胞及悬浮生长细胞，包 括原代及传代细胞、胚 胎细胞等。
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(4)显微注射
微量注射：用注射针或微针在受体细胞或组织穿刺成孔， DNA随穿刺孔进入细胞或随穿刺针头—道进入。 真正的显微注射：利用显微注射仪，通过机械方法把外 源DNA直接注入细胞质或细胞核的基因转化方法。
可逆击穿：击穿小孔可在一定时间内复原。 不可逆击穿：击穿小孔不可修复，处理细胞成活率低。
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操作程序：
将盛有细胞和DNA混合物的特制小 容器置于电脉冲仪的正负极之间， 在0度下加高压（2～ 4KV），电脉 冲10分钟后，将待处理的细胞转移 到新鲜培养基中生长2天，再进行 筛选。存活细胞的回收率约为 60%～ 80%。
物理方法
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(1)裸DNA直接注射
1990年Wolff等首次注意到给小鼠直接肌肉注 射纯化的DNA或RNA重组表达载体，可使载体 上的基因在局部肌细胞内表达，这种表达可 持续数日或更长时间，且没有检出注射的外 源核酸与宿主染色体整合。 随后的大量动物实验都说明在合适的条件下， DNA接种后可诱导机体产生细胞及体液免疫。 于是，作为一种新的基因治疗手段——核酸 免疫技术应运而生。
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该方法操作简单，又不需特殊仪器，瞬 间转移效率最高可达到20％，但长期表 达效率较低，目前已被广泛运用于离体 细胞的基因转移，是最普遍使用的方法 之一。
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(2)基因枪介导的皮内或皮下导入
80年代末期，由康奈尔大学的Sanford最先提出，主要 是为了克服以往各种基因转化技术的局限。
该方法是利用一种物理仪器装置，将钨、金等金属微粒 加速冲击细胞，把细胞击孔，使目的基因进入受体。
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(2)基因枪介导的皮内或皮下导入
操作技术程序为：
首先将钨、金微粒(直径约0.4μm，重量约0.05mg)与供体DNA溶 液(1～2μl)混合并保温，使DNA吸附在金属微粒的表面，然后 将该溶液置于所谓的“基因枪”仪器中，仪器高压放电将金属 微粒加速，直接喷射受体原生质或细胞，细胞击穿成孔后，在 钨粒上的DNA以及溶液中的DNA都可以进入受体细胞。
液、心肌毒柬或麻醉剂(如利多卡因)的 预处理。
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(2)基因枪介导的皮内或皮下导入
首先利用微小的金、钨等金属颗粒相DNA吸附， 然后在高压作用下将DNA伴随金颗粒高速进入 细胞，由于微粒的直径一般在0.5-0.9 Fm之间， 远小于细胞． 因此可直接将DNA导入细胞质中，这种方法能 有效地使DNA在活体组织、贴壁细胞和悬浮细 胞中表达。由于该方法的高转染效率，通常只 得少量DNA即可获得外源基因的表达并激发有 效免疫应答。
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提高转化效率措施
实验表明，横纹肌细胞(如心肌、骨傍肌) 和胸腺滤泡细胞摄取DNA的能力较强，但实 际上质粒DNA注射入肌组织后，最多只有1％2％的肌纤维被转染，DNA的转染效率不仅与 质粒DNA的大小、构型有关，还与肌细胞的状 态有十分密切的关系。 人们为提高肌细胞摄取DNA的能力采取了一些 措施，如在质粒接种前先给予高渗蔗糖溶
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(1)磷酸钙共沉淀法
当CaCl2、DNA和磷酸盐缓冲液缓慢混合 时，即有磷酸钙微细沉淀形成，这些 细小颗粒可以吸附在细胞表面，通过细 胞膜的内吞作用将DNA吸收进入细胞质 面后进入细胞核，其详细机制尚不明确。 DNA多以多拷贝首尾相连的串珠状排列 进入细胞，在细胞中常以多拷贝形式存 在。
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