游离氨基酸总量的测定
游离氨基酸的测定实验报告
游离氨基酸的测定实验报告背景游离氨基酸是构成蛋白质的基本组成单位，对人体的生理功能起着重要作用。
因此，准确测定游离氨基酸的含量对于研究和分析蛋白质代谢、营养摄入以及疾病发展等方面具有重要意义。
本实验旨在通过一系列分析方法测定样品中游离氨基酸的浓度。
分析实验设备和试剂•恒温水浴器•离心机•分光光度计•超纯水系统•氨基酸标准品•Ninhydrin标准溶液•稀盐酸（6 mol/L）•无水乙醇（95%）•氨水（25%，体积分数）•Na2CO3溶液（3%，取6 g Na2CO3溶于200 mL水）实验步骤1. 样品制备将待测样品（例如食品、体液等）取适量加入10 mL离心管中，并加入适量稀盐酸溶液，使样品pH降至酸性，以保证游离氨基酸不会发生气化。
利用离心机对样品进行离心，取上层液保存。
2. 氨基酸含量测定2.1 Ninhydrin法准备一系列浓度已知的氨基酸标准品溶液，分别为0、2、4、6、8和10 μmol/mL。
取6个离心管，分别加入1 mL样品上层液或相应浓度的标准品溶液。
然后，对每个离心管加入1 mL Ninhydrin标准溶液，混匀后放入恒温水浴器中，温度设定为80°C，加热15分钟使其反应完成。
在背景相对较深的条件下使用分光光度计，设置波长为570 nm进行吸光度测定，记录吸光度值。
2.2 紫外分光光度法准备一系列浓度已知的氨基酸标准品溶液，分别为0、2、4、6、8和10 μmol/mL。
在离心管中分别加入1 mL样品上层液或相应浓度的标准品溶液，然后加入1 mLNa2CO3溶液，混匀后放入分光光度计进行紫外吸光度测定，设置波长为280 nm，并记录吸光度值。
3. 结果和分析根据实验步骤2中的测定结果，计算出标准曲线的方程和相关系数，并根据标准曲线对待测样品中的游离氨基酸含量进行定量分析。
结果下表为实验测定获得的标准曲线数据：氨基酸浓度(μmol/mL)Ninhydrin反应吸光度值紫外吸光度值0 0 02 0.3 0.14 0.7 0.26 1.2 0.38 1.6 0.410 2.1 0.5根据上述数据，可得到标准曲线的方程为：•Ninhydrin法：吸光度 = 0.2[氨基酸浓度(μmol/mL)] + 0.1，相关系数r = 0.99；•紫外分光光度法：吸光度 = 0.05[氨基酸浓度(μmol/mL)] + 0.1，相关系数 r = 0.98。
游离氨基酸的测定实验报告3页
游离氨基酸的测定实验报告3页
实验目的：测定蛋白质水解液中游离氨基酸的含量。
实验原理：蛋白质是由若干个氨基酸通过肽键连接而成，而氨基酸是构成蛋白质的基本单元。
游离氨基酸是水解蛋白质后剩余的未发生缩合反应的氨基酸，可以用二硫化二钠与氨基酸发生二级反应，并且具有荧光性质，故可以通过比色法或荧光法测定其含量。
实验步骤：
1.取约1g蛋白质水解液，加入等量的50%三硝酸溶液，使测定溶液呈红棕色。
2.将上述混合溶液蒸干，加入少量蒸馏水，使含盐量达到适宜比例。
3.将上述溶液通过20μ滤器滤过，在滤液中加入0.1%的二硫化二钠溶液。
4.加入等量的1.5N盐酸，使 pH 值降至2左右。
5.将上述混合液振荡30秒，静置10分钟，测定荧光强度或比色度。
实验结果：测量得到游离氨基酸的含量为x mg/L。
实验分析：游离氨基酸在酸性条件下可以与二硫化二钠反应生成荧光物质，故可以用荧光法或比色法进行测定。
本实验采用的是荧光法，即通过荧光分光光度计测定游离氨基酸的荧光强度，再由标准曲线推算游离氨基酸的含量。
需要注意的是，在测定过程中必须确保荧光试剂与游离氨基酸充分反应，否则会导致测定结果偏低。
实验结论：本实验成功测定了蛋白质水解液中游离氨基酸的含量为x mg/L，实验结果具有一定的可靠性和准确性。
茚三酮法测定茶叶游离氨基酸总量研究
基金项目十三五国家重点研发计划项目“茶叶活性成分绿色制备及防腐、保鲜功效与应用技术研究”(2016YFD040080502)。
作者简介涂云飞(1981-),男,安徽巢湖人,硕士,副研究员。
研究方向:茶叶功能成分纯化与功效。
收稿日期2018-04-02摘要鉴于茚三酮法测定游离氨基酸总量不够稳定,本文对茚三酮法测定茶游离氨基酸的显色反应时间与氨基酸浓度因素进行了条件优化,并考察了方法的准确度与精密度。
结果表明,将200μL 的2×pH 5.6的缓冲液、200μL 水或茶叶水提取液(茶水比1∶250,沸煮30min )和400μL 茚三酮溶液显色体系均匀混合,沸煮结束后立即用自来水充分冷却并加入4.8mL 去离子水,于570nm 处测定吸光值,所获得的结果稳定可靠,适宜作为茶叶中游离氨基酸总量的测定条件。
关键词茶叶;游离氨基酸总量;茚三酮中图分类号TS272.7文献标识码A 文章编号1007-5739(2018)14-0235-01Determination of Total Free Amino Acid in Tea by NinhydrinTU Yun-fei 1,2(1Key Laboratory of Tea Resource Multi-applied Technology of Zhejiang Province ,Hangzhou Zhejiang 310016;2Hangzhou Institute of Tea ,China Coop )Abstract In this paper ,ninhydrin reaction parameters for determination of total free amino acid in tea samples were optimized.The results indicated that ,the method was stable and reliable in the following cases :200μL buffer (2×pH 5.6),200μL water or tea extraction aqueous (tea to water was 1∶250,boiling 30min ),and 400μL ninhydrin solution mixed sufficiently in one system ,after boiling ,the reaction system was cooled by tap water and then added 4.8mL deionized water to colorimetric analysis at 570nm ,which was suitable to determine the total free amino acid in tea.Key words tea ;total free amino acid ;ninhydrin茚三酮法测定茶叶游离氨基酸总量研究涂云飞1,2(1浙江省茶资源跨界应用技术重点实验室,浙江杭州310016;2中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院)茶叶中的游离氨基酸除了含有组成蛋白质常见的20种基酸外,还含有含量较为丰富的非蛋白质组成成分的茶氨酸及γ-氨基丁酸。
实验植物组织游离氨基酸总量测定柯上网材料
缩合生成Ruhemans紫。
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共热、微酸性
《植物生理生化实验A》
福建农林大学
24％
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《植物生理生化实验A》
仪器设备：
分光光度计； 电子天平； 恒温水浴；100ml容量瓶； 玻璃研钵；移液枪；20ml具塞刻度试管; 普通试管；三角 瓶；玻璃漏斗等。
谢等有一定意义 。
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测定意义：
《植物生理生化实验A》
作作作为为为福营施逆建农养肥境林品的生大学质生理的理指指指标标标 。。。。。。？
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目的要求：
《植物生理生化实验A》
1、了解植物体内氨基酸测定的意义； 2、了解氨基酸测定的方法； 34、、其掌进操握一茚步作三熟要酮练点分试;剂光显福光色建度法农计测林的定大游使学离用氨方基法酸。总量的基本原理及 5、比较不同萌发程度的水稻种子游离氨基酸总量的差异。
2．标准曲线的绘制及样品测定： 取10支20mL刻度试管，按下表进行操作。
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《植物生理生化实验A》
实验步骤：
表1 游离氨基酸标准曲线制作及样品测定
试管
试
编号
剂 (毫升)
样品提取液
标准氨基酸溶液 （5μg/ml）
无氨蒸馏水(ml)
水合茚三酮(ml) 0.1%抗坏血酸(ml)
什么要加入抗坏血酸溶液？
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《植物生理生化实验A》
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实验20植物组织中游离氨基酸总量的测定
实验20植物组织中游离氨基酸总量的测定第一篇：实验20植物组织中游离氨基酸总量的测定实验20植物组织中游离氨基酸总量的测定茚三酮显色法氨基酸是组成蛋白质的基本单位也是蛋白质的分解产物。
植物根系吸收、同化的氮素主要以氨基酸和酰胺的形式进行运输。
所以测定植物组织中不同时期、不同部位游离氨基酸的含量对于研究根系生理、氮素代谢有一定意义。
一、原理氨基酸与茚三酮共热时能定量地生成二酮茚胺。
该产物显示蓝紫色称为 Ruhemans 紫。
其吸收峰在 570 nm 而且在一定范围内吸光度与氨基酸浓度成正比。
氨基酸与茚三酮的反应分两步进行第一步氨基酸被氧化形成 CO 2、NH 3 和醛茚三酮被还原成还原型茚三酮第二步所形成的还原型茚三酮与另一个茚三酮分子和一分子氨脱水缩合生成二酮茚–二酮茚胺 Ruhemans 紫反应式如下在一定范围内反应体系颜色的深浅与游离氨基的含量成正比因此可用分光光度法测定其含量。
二、实验材料、试剂与仪器设备一实验材料各种植物组织。
二试剂 1.水合茚三酮试剂称取 0.6 g 再结晶的茚三酮置烧杯中加入 15 mL 正丙醇搅拌使其溶解。
再加入 30 mL 正丁醇及 60 mL 乙二醇最后加入9 mL pH5.4 的乙酸–乙酸钠缓冲液混匀贮于棕色瓶置4 ℃下保存备用10 d 内有效。
2.乙酸–乙酸钠缓冲液 pH 5.4 称取乙酸钠 54.4 g 加入100 mL 无氨蒸馏水在电炉上加热至沸使体积蒸发至 60 mL 左右。
冷却后转入100 mL 容量瓶中加30 mL 冰醋酸再用无氨蒸馏水稀释至100 mL。
3.标准氨基酸称取80 ℃下烘干的亮氨酸 46.8 mg 溶于少量10 异丙醇中用 10 异丙醇定容至 100 mL。
取该溶液 5 mL 用蒸馏水稀释至 50 mL 即为含氨基氮5 μ g/mL 的标准氨基酸溶液。
4.0.1 抗坏血酸称取 50 mg 抗坏血酸溶于 50 mL 无氨蒸馏水中随配随用。
饲料中游离氨基酸的检测方法
饲料中游离氨基酸的检测方法
饲料中游离氨基酸的检测方法主要包括以下几种：
1. 比色法：利用氨基酸与重金属离子或某些化学试剂形成特定颜色的配合物，通过比色反应来定量测定游离氨基酸的含量。
2. 色谱法：常用的色谱方法包括气相色谱（GC）和高效液相色谱（HPLC）。
色谱法可以对多种氨基酸进行分离和定量，具有准确、灵敏、高效的特点。
3. 生物传感器法：利用生物传感器对游离氨基酸进行检测。
常用的生物传感器包括酶传感器、抗体传感器和细胞传感器等，这些传感器具有高灵敏度和高选择性。
4. 光谱法：包括紫外光谱、红外光谱和质谱等分析方法，可以利用氨基酸的特征吸收峰或质谱图谱进行定量测定。
以上方法在游离氨基酸的检测中都有各自的优缺点，在实际应用中可以根据需要选择合适的方法进行分析。
游离氨基酸的测定实验报告
游离氨基酸的测定实验报告一、实验目的本实验旨在学习游离氨基酸的测定方法，了解不同游离氨基酸在不同条件下的反应特点，掌握游离氨基酸的测定原理和操作技能。
二、实验原理1. 游离氨基酸的化学性质游离氨基酸是一类含有羧基和胺基的有机化合物，具有两个官能团。
在弱碱性溶液中，它们会发生季铵盐反应，生成带正电荷的离子。
在强碱性溶液中，则会发生烷化反应，生成相应的烷基胺。
2. 游离氨基酸的测定方法（1）二硫代乙酰荧光素法：该方法利用二硫代乙酰荧光素与游离氨基酸之间发生缩合反应并产生荧光现象来测定游离氨基酸。
（2）二元亚胺法：该方法利用二元亚胺与游离氨基酸之间发生缩合反应，并通过比色法或荧光法来测定其含量。
（3）红外光谱法：该方法利用游离氨基酸的特征吸收峰来测定其含量。
（4）高效液相色谱法：该方法是目前应用最为广泛的游离氨基酸分析方法，它可以快速、准确地测定多种游离氨基酸。
三、实验步骤1. 样品制备：将待测样品加入适量的0.1mol/L盐酸中，加热至沸腾，使样品蛋白质水解成游离氨基酸。
2. 二硫代乙酰荧光素法测定：将样品与二硫代乙酰荧光素混合后，放置静置5分钟后，在荧光分析仪上进行荧光强度检测。
3. 二元亚胺法测定：将样品与二元亚胺混合后，放置静置10分钟后，在紫外分光光度计上进行吸光度检测。
4. 红外光谱法测定：将样品制成KBr片后，在红外光谱仪上进行扫描检测。
5. 高效液相色谱法测定：将样品注入高效液相色谱仪中进行分析。
四、实验结果与分析本实验中，通过二硫代乙酰荧光素法、二元亚胺法、红外光谱法和高效液相色谱法共计测定了5种不同游离氨基酸的含量。
根据实验结果，可以发现不同游离氨基酸在不同条件下的反应特点存在差异，因此需要选择合适的测定方法进行分析。
五、实验注意事项1. 实验过程中需严格按照操作要求进行操作，避免误差和污染。
2. 实验结束后要彻底清洗实验器材和仪器设备，保持干净整洁。
3. 注意安全，避免接触有毒有害物质。
gbt8314-87茶游离氨基酸总量测定-中华人民共和国国家标准茶游离
中华人民共和国国家标准茶游离氨基酸总量测定 GB/T 8314—87 Tea-Determination of free amino acids content━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━本标准适用于茶叶中游离氨基酸总量的测定。
茶叶水浸出物中具有α-氨基的有机酸且呈游离状态存在者,均称茶叶游离氨基酸。
1 原理氨基酸在pH8.0的条件下与茚三酮共热,形成紫色络合物,用分光光度法在特定的波长下测定其含量。
2 仪器和用具实验室常规仪器及下列各项:2.1 分析天平: 感量0.0001g。
2.2 分光光度仪。
3 试剂和溶液3.1 pH8.0磷酸盐缓冲液:按GB 8313—87《茶茶多酚测定》中3.2的规定,配制1/15M磷酸氢二钠(3.2.1)和1/15M磷酸二氢钾(3.2.2)溶液。
然后取1/15M的磷酸氢二钠溶液95mL和1/15M磷酸二氢钾溶液5mL,混匀。
3.2 2％茚三酮溶液: 称取水合茚三酮(纯度不低于99％)2g,加50mL水和80mg氯化亚锡(GB638—78,分析纯),搅拌均匀。
分次加少量水溶解,放在暗处,静置一昼夜,过滤后加水定容至100mL。
3.3 茶氨酸或谷氨酸标准液: 称取100mg茶氨酸或谷氨酸(纯度不低于99％)溶于100mL水中,作为母液。
准确吸取5mL母液,加水定容至50mL作为工作液(1mL含茶氨酸或谷氨酸0.1 mg)。
4 操作方法4.1 取样按GB 8302—87《茶取样》规定取样。
4.2 试样的制备按GB 8303—87《茶磨碎试样的制备及其干物质含量测定》的规定,制备试样。
4.3 测定步骤4.3.1 试液的制备按GB 8305—87《茶水浸出物测定》中3.4.1的规定,制备试液。
4.3.2 测定准确吸取试液(4.3.1)1mL,注入25mL容量瓶中,加0.5mLpH8.0缓冲液(3.1)和0.5mL 2％茚三酮溶液(3.2),在沸水浴中加热15min。
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植物体内游离氨基酸总量的测定
方法一：
一、原理
游离氨基酸的氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，其颜色的深浅与游离氨基酸的含量成正比。
二、仪器设备
分光光度计；电子天平；容量瓶25ml 或50ml 3 个；漏斗（直径6 厘米）3 个、滤纸适量；20ml刻度试管7支；移液管0.5ml 3支、5ml 1支；试管架；玻棒；吸耳球；
剪刀；移液管架；橡皮筋、塑料薄膜（封试管口）；吸水纸；擦镜纸适量；电炉；水浴锅（含铁丝筐）。
三、试剂
1.3% 茚三酮试剂
称3g 茚三酮用95%乙醇溶解定容到100ml 容量瓶里，贮于棕色瓶中。
此试剂应放在冷凉处，不宜久放，使用期约10 天。
2.氰酸盐缓冲液（按以下方法配制）：
(1) NaCN±备液0.01mol/L (490mg/L)。
（2）醋酸缓冲液：称360g醋酸钠（含三分子结晶水）溶于约300ml无氨蒸馏水中，加66.67ml 冰醋酸再用无氨蒸馏水稀释至1L。
取溶液（1）20ml，用溶液（2）定容到1L。
3. 标准氨基酸
精确称取在80°C下烘干的亮氨酸13.1mg （或a -丙氨酸8.9mg）溶于10%勺异丙醇中，并在100ml容量瓶中用10%异丙醇稀释至刻度，混匀，即为1mmol/L 的标准氨基酸贮备液，置冰箱中保存。
为了制备工作液，可取贮备液与等量无氨蒸馏水混合，此液浓度为0.5mmol/L，即1ml含氨基酸0.5卩mol，或氨基氮7卩g。
4. 95% 乙醇；异丙醇（分析纯）
四、操作步骤
1.标准曲线的制作取20ml刻度试管18支，按下表1加入各试剂。
加完试剂后混匀，
在100C水浴中加热12min （加热时封口），取出在冷水中迅速冷却，立即于每管中加入5ml 95%乙醇，塞好塞子，猛摇试管，使加热时形成的红色产物被空气中的氧所氧化而褪色，此时溶液呈蓝紫色。
于570nm 波长下测其光密度（以空白管为参比），以氨基酸浓度为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出直线方程。
2. 样品提取选取有代表性的植物叶片（或其它组织），洗净擦干，剪碎混匀，迅速
称取0.10~0.20g （视氨基酸含量多少而定），共称3份，分别加入20ml 刻度试管中，再加蒸馏水10ml 盖塞（或系上塑料薄膜），置沸水浴中20min 以提取游离氨基酸，到时取出在自来水中冷却，把上清液滤入25ml 容量瓶中，之后再往试管中加5ml蒸馏水，置沸水浴上再加热10min，过滤并反复冲洗残渣，最后定容至刻度，摇匀。
3.样品测定另取4支洁净干燥的试管，其中3支分别加入0.5ml 提取液，另一支加
0.5ml蒸馏水，然后在上述4支试管中分别加入NaCh缓冲液、水合茚三酮各0.5ml，
加完试剂后盖塞，置沸水浴上加热12min，冷却后，再分别加5ml 95%乙醇，摇匀，以空白作参比，在波长570nm下测其光密度。
根据光密度查标准曲线（或用回归方程计算）即可求出提取液中氨基酸的浓度。
方法二：
一、原理
游离氨基酸的氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，其颜色的深浅
与游离氨基酸的含量成正比。
二、仪器设备
分光光度计；电子天平；容量瓶25ml 或50ml 3 个；漏斗（直径6 厘米）3 个、滤纸适量；20ml刻度试管7支；移液管0.5ml 3支、5ml 1支；试管架；玻棒；吸耳球；剪刀；移液管架；橡皮筋、塑料薄膜（封试管口）；吸水纸；擦镜纸适量；电炉；水浴锅（含铁丝
筐）。
三、试剂
1.3% 茚三酮试剂
称3g 茚三酮用95%乙醇溶解定容到100ml 容量瓶里，贮于棕色瓶中。
此试剂应放在冷凉处，不宜久放，使用期约10天。
2.氰酸盐缓冲液（按以下方法配制）：
（1 ）NaCN 贮备液0.01mol/L （490mg/L ）。
（2）醋酸缓冲液：称360g 醋酸钠（含三分子结晶水）溶于约300ml 无氨蒸馏水中，加66.67ml 冰醋酸再用无氨蒸馏水稀释至1L。
取溶液（1）20ml，用溶液（2）定容到1L。
3.标准氨基酸
精确称取在80 °C下烘干的亮氨酸13.1mg （或a丙氨酸8.9mg ）溶于10% 的异丙醇中，并在100ml 容量瓶中用10%异丙醇稀释至刻度，混匀，即为1mm ol/L 的标准氨基酸贮备液，置冰箱中保存。
为了制备工作液，可取贮备液与等量无氨蒸馏水混合，此液浓度为0.5mmol/L ,艮卩1ml含氨基酸0.5卩mo j或氨基氮7ug。
4.95%乙醇；异丙醇（分析纯）。
四、操作步骤
1.标准曲线的制作取20ml刻度试管18支，按下表1加入各试剂。
加完试剂后混匀，在100 C水浴中加热12min （加热时封口），取出在冷水中迅速冷却，立即于每管中加入
5ml 95%乙醇，塞好塞子，猛摇试管，使加热时形成的红色产物被空气中的氧所氧化而褪色，此时溶液呈蓝紫色。
于570nm波长下测
其光密度（以空白管为参比），以氨基酸浓度为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出直线方程。
表1各试管加入试剂量
2•样品提取选取有代表性的植物叶片（或其它组织），洗净擦干，剪碎混匀，迅速称取0.10~0.20g （视氨基酸含量多少而定），共称3份，分别加入2 Oml刻度试管中，再加蒸馏水10ml盖塞（或系上塑料薄膜），置沸水浴中20m in以提取游离氨基酸，到时取出在自来水中冷却，把上清液滤入25ml容量瓶中，之后再往试管中加5ml蒸馏水，置沸水浴上再加热10min，过滤并反复冲洗残渣，最后定容至刻度，摇匀。
3•样品测定另取4支洁净干燥的试管，其中3支分别加入0.5ml提取液，另一支加0.5ml 蒸馏水，然后在上述4支试管中分别加入NaCN缓冲液、水合茚三酮各0.5ml，加完试剂后盖塞，置沸水浴上加热12min，冷却后，再分别加5ml 95%乙醇，摇匀，以空白作参比，在波长570nm下测其光密度。
根据光密度查标准曲线（或用回归方程计算）即可求出提取液中氨基酸的浓度。
4.计算
游离氨基酸含量
:INH： TkgJgFH7）= 聊
式中C:由直线方程计算的值，即0.5ml试样中氨基酸的微摩尔数（卩mo）;
V :样品提取液经稀释后的总体积（ml）;
W:样品重（g）。
测定结果按表2记录。
表2游离氨基酸总量测定记载表。