茶 游离氨基酸的测定

茶游离氨基酸总量测定

文件类别：作业指导书

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名称茶游离氨基酸总量测定文件编号:

1 原理

氨基酸在pH8.0的条件下与茚三酮共热，形成紫色络合物，用分光光度法在特定的波长下测定其含量。

2 仪器和用具

分析天平：感量0.0001g。分光光度仪。

3 试剂和溶液

3.1 pH8.0磷酸盐缓冲液：

按《茶茶多酚测定》中3.2的规定，配制1/15M磷酸氢二钠（3.2.1）和1/15M磷酸二氢钾（3.2.2）溶液。然后取1/15M的磷酸氢二钠溶液95ml和1/15M磷酸二氢钾溶液5ml，混匀。

3.2 2%茚三酮溶液：

称取水合茚三酮（纯度不低于95%） 2g，加50ml水和80mg氯化亚锡（GB 638-78，分析纯），搅拌均匀。分次加少量水溶解，放在暗处，静置一昼夜，过滤后加水定容至100ml。

3.3 茶氨酸或谷氨酸标准液：

称取100mg茶氨酸或谷氨酸（纯度不低于99%）溶于100ml水中，作为母液。准确吸取5ml母液，加水定容至50ml作为工作液（1ml含茶氨酸或谷氨酸0.1mg）。

4 操作方法

4.1取样方法

按“茶叶原料验收规范”（文件编号…………）要求进行取样。

4.2试液制备

按《茶茶多酚测定》中4.2.1试液制备之规定，制备试液。

4.3 测定

准确吸取试液（4.2）0.5ml，注入25ml容量瓶中，加0.5ml水，0.5mlpH 8.0缓冲液（3.1）和0.5ml 2%茚三酮溶液（3.2），在沸水浴中加热15min。待冷却后加水定容至25ml。放置10min后，用10mm比色杯，在570nm处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度（A）。

生效日期页次1/2 页序 A 表号:R-0110-002-1A 文件标准用纸

名称 茶 游离氨基酸总量测定 文件编号:

4.4氨基酸定量标准曲线的制作

分别吸取0.0、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml 氨基酸工作液（3.3）于一组25ml 容量瓶中，各加水至4ml 、茚三酮溶液（3.2）0.5ml 和缓冲液（3.1）2ml ，在沸水浴中加热15min ，冷却后加水定容至25ml ，按4.3的操作测定吸光度（A ）。将测得的吸光度与对应的茶氨酸或谷氨酸浓度绘制标准曲线。

参考标准曲线：C=0.1686*A+0.0381

5 结果计算

5.1 计算方法和公式

茶叶中游离氨基酸含量，以干态质量百分率表示，按下式计算：

100m

002.11000%⨯⨯⨯⨯

=M L B C ）游离氨基酸总量（

式中： B —— 试样液总质量，g ；

L —— 测定用试样量，ml ；

M —— 试样量，g ；

C —— 根据4.3测定的吸光度从标准曲线上查得的茶氨酸的mg 数； 1.002 —— 试样液比重（经验值）；

m —— 试样干物质含量百分率，%。

5.2 重复性

同一样品进行两次测定，取两次测定的算术平均值作为结果。测定值之差，不得超过平均值的5%。

备注：本方法参考GB 8314《茶 游离氨基酸总量的测定》。

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表号:R-0110-002-1A 文件标准用纸