烟草中游离氨基酸的测定

烤烟游离氨基酸的研究

湖南农业大学硕士学位论文烤烟游离氨基酸的研究姓名：刘荣森申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：杨虹琦;周冀衡20071201幽４．２不同烤烟晶种适熟中部叶片炎冬氩酸、谷氦阪的禽罐Ｆｉｇｕｒｅ４．２ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＡｓｐ．Ｇｌｕｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｖａｒｉｅｔｉｅｓｏｆｍａｔｕｒｅｆｌｕｅ－ｃｕｒｅｄｔｏｂａｃｃｏｌｅａｖｅｓｔｈａｔａｒｅｉｎｔｈｅｍｉｄｄｌｅｏｆｔｏｂａｃｃｏｐｌａｎｔｓ幽４．３≈；同烤煳赫秭透热中部ｆｆｆＨ”苯丙氯陂、脯氩酸的禽凝ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＰｈｅ．Ｐｒｏｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｖａｒｉｅｔｉｅｓｏｆｍａｔａｉ＇ｅｆｌｕｅ－ｃｕｒｅｄｌｏｂａｃｃｏＪｅａｖｅｓｔｈａｔＡｆｔｉｎｔｈｅｍｉｄｄｌｅ图４．４小州烤船ｌ品种通热中部ｎＩ片酪氟酸、缬氰酸的含鼙ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｎｆＴｙｒ．Ｖａｌｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｖａｒｉｅｔｉｅｓｏｆｍａｔｎｒｅｆｌｕｅ—ｃｕｒｅｄｔｏｂａｃｃｏｌｅａｖｅｓｔｈａｔａｒｅｉｎｔｌｌｅｍｉｄｄｌｅ幽４．５不同烤烟品种适熟中部叶片丝氨酸、苏氨酸的含簧Ｆｉｇｕｒｅ４．５ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＳｅｒ．Ｔｈｒｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｖａｒｉｅｔｉｅｓｏｆｍａｔｕｒｅｆｌｕｅ，ｃｕｒｅｄｔｏｂａｃｃｏＩｅａｖｅｓｔｈａｔａｒｅｉｎｔｈｅｍｉｄｄｌｅｌ射４．６不同馋烟晶种适熟中部ｎＩ片甲硫氨酸、亮氦酸的禽嫩ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＭｅｔ，Ｌｅｕｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｖａｒｉｅｔｉｅｓｏｆｍａｔｕｒｅｆｌｕｅ－ｃｕｒｅｄｔｏｂａｃｃｏ｜ｅａｖｅｓｔｈａｔａｒｅｉｎｔｈｅｍｉｄｄｌｅ豳４．？不弼烤翅麓秘惩熬中帮＃｜。

跨瓣‘缀酸，赣氦酸的禽繁ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＧ｜ｙ．酶ｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｖａｒｉｅｔｉｅｓｏｆｍａｔｏｒｃｆｌｕｅ－ｃａｒｅｄｔｏｂａｃｃｏｌｅａｖｅｓｔｈａｔａｒｃｉｎｔｈｅｍｉｄｄｌｅＩ割４．８／ｆｉ同必烟品种适熟ｑ１部叶片’ｒ胱氦酸，色氰酸的禽苗Ｆｉｇｕｒｅ４．８ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＣｙｓ．Ｔｒｐｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｖａｒｉｅｔｉｅｓｏｆｍａｔｕｒｅｆｌｕｅ－ｃｕｒｅｄｔｏｂａｃｃｏｌｅａｖｅｓｔｈａｔａｒｅｉｎｔｈｅｍｉｄｄｌｅ—ｏｆｔｏｂａｃｃｏｐｌａｎｔｓ幽４．９不同烤烟品种适熟中部ｎｌ片异亮氨酸、精氩酸的含鼙ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｌｉｅ．Ａｒｇｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｖａｒｉｅｔｉｅｓｏｆｍａｔｕｒｅｆｌｕｅ—ｃｕｒｅｄｔｏｂａｃｃｏｌｅａｖｅｓｔｈａｔａｒｅｉｎｔｈｅｍｉｄｄｌｅｏｆｔｏｂａｃｃｏｐｌａｎｔｓ２．２不同烤烟品种烟碱和蛋白质含量的差异不同烤烟品种适熟中部叶片中烟碱含量和蛋白质含量的测定结果见图４．１０。

反相高效液相色谱法测定不同烟叶中的游离氨基酸

ＡｓＧｌＡｓＧｉＳｒＨｉＧｌＴＡｌＡｒｐｕｎｎｅ、ｓｙｈｒａｇ
ＴｒＣｓＶｌＭｅ、ｈ、ｌ、ｅ、ｒ、ｏ基酸试ｙ、ｙ、ａ、ｔＰｅＩＬｕＰｏＮｒ氨ｅ
剂：生化试剂；
量的多少与烟叶质量的优劣、基酸种类、氨数量及作
期间环境对烟叶中游离氨基酸的影响，及烟叶调以制期和发酵期游离氨基酸的变化］对于不同品，
称取阳离子树脂３０ｇ置于烧杯中，后加入然１０ｍ０Ｌ的浓盐酸并搅拌浸泡树脂２，后再将盐４ｈ然
甲醛丹酰氯）ＦＯ（芴基甲氧基羰酰氯）、ＭＣ９一联合柱前衍生反相高效液相色谱法测定其中的游离氨基酸。由于该方法克服了ＯＡ和ＦＣ单独使用时ＰＭＯ
的弊端，承了两者的优点，继因此使利用高效液相色谱测定氨基酸的方法更趋完善；不同烟叶中游离对氨基酸的含量进行测定，烟叶中游离氨基酸的应为
摘要
用乙醇水溶液提取烟叶中的游离氨基酸并通过阳离子交换柱纯化后，用ＯＡ（采Ｐ邻苯二甲醛丹酰氯）、
ＦＣ９一芴基甲氧基羰酰氯）ＭＯ（联合在线衍生反相高效液相色谱法对烤烟、白肋烟和香料烟中的游离氨基酸进行了对比研究，发现白肋烟、香料烟和烤烟的烟叶中所含游离氨基酸总量分别为１．／ｇ７７ｍｇ和３３ｍ／；４０ｍｓ、．ｓ／．ｓｇ三者在所含主要氨基酸种类上存在显著差别。用该方法考察了不同产地烟叶中游离氨基酸的含量。

烟草中氨基酸的分离与分析方法研究

郑州轻工业学院本科毕业设计（论文）题目学生姓名陈晓专业班级应用化学06-1班学号200604040104院（系）材料与化学工程学院指导教师(职称) 贾春晓（教授）完成时间2010年 6 月5日目录摘要 (I)ABSTRACT (II)前言 (1)1 实验部分 (2)1.1 实验材料、试剂及仪器 (2)1.1.1实验材料 (2)1.1.2所用试剂与仪器 (2)1.2相关溶液的配置 (4)1.2.1 盐酸的配置 (4)1.2.2 衍生化试剂的配制 (4)1.2.3 10﹪甲醇-水溶液 (4)1.2.4AccQ.Tag 缓冲溶液 (5)1.2.5 60﹪乙腈--水 (5)1.2.6标准溶液 (5)1.2.7 BF08二号样 (5)1.2实验原理 (6)1.2.1 高效液相色谱法分析的原理及特点 (6)1.2.2 AccQ•Tag 方法的原理 (10)1.3 实验方法 (12)1.3.1原料的预处理 (12)1.3.2 HPLC分析条件 (12)1.3.3 柱前衍生 (13)2 结果与讨论 (15)2.1 水解烟叶中游离氨基酸所用盐酸浓度的确定 (15)2.2色谱条件优化 (15)2.2.1 仪器条件 (15)2.2.2样品的稀释浓度的确定 (15)2.3烟叶中氨基酸的定性分析 (16)2.4 烟叶中氨基酸的定量分析 (20)2.4.1 氨基酸标准曲线的绘制 (20)2.4.2 烟叶中氨基酸的定量分析 (25)2.4.3氨基酸含量的对比分析 (29)结论 (31)致谢 (33)参考文献 (34)附表 (36)烟草中氨基酸的分离与分析方法研究摘要烟草中的氨基酸是重要的致香前体物质 ,同时也是合成烟碱、多酚等有关物质的前提,对烟株体内氮的代谢及烟叶品质具有重要作用。

本实验研究两种黑龙江白肋烟BF08和C2F不同工艺处理的烟丝中游离氨基酸种类和含量的变化，为白肋烟的进一步应用研究提供较丰富的基础数据,同时对白肋烟的加工工艺参数的调整有着积极的指导意义，有利于选择优良的工艺条件。

液相色谱串联质谱法测定烟草中的游离氨基酸

Ｃｌ８（５０ｍｍｘ２．１ｍｍｘ２．５Ｉｘｍ），０．１％ｆｏｒｍｉｃａｃｉｄｓｏｌｕｔｉｏｎａｎｄａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅｗｅｒｅｔａｋｅｎａｓｍｏｂｉｌｅ
ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｎｄ，ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｄｉｖｅｃｔｌｙ．ＴｈｅＬＣｓｅｐａｒａｔｉｏｎｗａｓｃａｒｒｉｅｄｏｎａｒｅｖｅｒｓｅｄ—ｐｈａｓｅＸＴｅｒｒａＭＳ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｏｆ２０ｆｒｅｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｉｎｔｏｂａｃｃｏｗａｓｄｅｖｅｌｏｐｅｄｗｉｔｈｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｔａｎｄｅｍｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ．ＴｏｂａｃｃｏｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｅｘｔｒａｃｔｅｄｗｉｔｈＯ．１％ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃ
５８８４
色谱条件：色谱柱为ＸＴｅｒｒａＭＳＣ１８（５０ｍｍ￣２．１ｍｒｎ￣２．５Ｉ．ｚｍ）；进样量为５；柱温为２５ ℃；流动相Ａ为０．１％甲酸溶液，流动相Ｂ为乙腈；洗脱条件
ａｎｄｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｔｈｅｆｒｅｅａｍｉｎｏａｃｉｄｉｎｔｏｂａｃｃｏ．

测AA方法

反相高效液相色谱法测定烟叶中的游离氨基酸氨基酸是烟草中的一类重要化学物质，在烟草调制、醇化或发酵、加工直至燃烧过程中，游离氨基酸与还原糖之间可发生酶催化及非酶催化的棕色化反应，生成多种具有蒸煮、烤香、爆米花香味特征的吡喃、吡嗪、吡咯、吡啶类等杂环化合物，某些氨基酸如苯丙氨酸还可自身分解成香味化合物，如苯甲醇、苯乙醇等。

氨基酸含量与烟草制品的吃味有着密切的关系，氨基酸在燃烧裂解过程中一般形成具有刺激性的含氮化合物，对烟气香吃味产生不良影响，个别氨基酸还产生HCN等危害健康的烟气成分。

一般说来，氨基酸含量太高，烟气辛辣、味苦、刺激性强烈；含量太低时烟气则平淡无味缺少丰满度。

因此对氨基酸的分析是一项很有意义的工作，二十世纪60年代以来，国内外在这方面做了大量的工作[1-5]。

植物游离氨基酸样品的制备，国内外采用的提取剂和纯化方法各不相同。

据文献报道[6-7]，盐酸、不同浓度的乙醇溶液均可以用来提取植物组织中的游离氨基酸；提取液纯化则有用阳离子交换树脂、5%磺基水杨酸、活性炭或乙醚等方法。

本实验对不同的提取方式和不同的纯化方法进行了对比研究，确定提取烟叶中游离氨基酸的较佳提取剂和纯化方法。

提取、纯化后的样品，采用OPA、FMOC联合柱前衍生反相高效液相色谱法对烟叶中的游离氨基酸进行了测定。

该方法使带氨基和亚氨基基团的氨基酸能够被同时测定，且得到较好的定性定量结果。

1 实验1.1 仪器Agilent公司HP1100型高效液相色谱仪(带可变波长紫外检测器和自动进样器)，PE公司Lambda Bio40 紫外-可见分光光度计。

1.2 试剂正缬氨酸（Norvaline，内标），OPA，FMOC，均为色谱纯，Agilent公司提供；硼酸缓冲溶液，Agilent公司提供；醋酸钠(NaAc)，分析纯，中国医药（集团）上海化学试剂公司；三乙胺（TEA），四氢呋喃（THF），乙腈（CH3CN），甲醇(MeOH)，均为色谱纯，Fisher公司试剂；氨基酸标样包括：天冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）、天冬酰胺（Asn）、谷氨酰胺（Gln）、丝氨酸（Ser）、组氨酸（His）、甘氨酸（Gly）、苏氨酸（Thr）、丙氨酸（Ala）、精氨酸（Arg）、酪氨酸（Tyr）、胱氨酸（Cys）、缬氨酸（V al）、蛋氨酸（Met）、苯丙氨酸（Phe）、异亮氨酸（Ile）、亮氨酸（Leu）、脯氨酸（Pro），均为生化试剂，中国医药（集团）上海化学试剂公司；苯乙烯阳离子交换树脂（732型），天津树脂厂。

柱前衍生HPLC法测定烟叶中20种游离氨基酸含量

烟草科技/T obacco Sc ience&T echno logy烟草化学/T obacco Chem istry2010年第8期(总第277期)柱前衍生HPLC法测定烟叶中20种游离氨基酸含量程勇,陈玲,邓晓春深圳波顿香料有限公司,广东省深圳市南山区大新路19号 518051关键词:H PLC;柱前衍生法;2,4-二硝基氟苯;烟叶;游离氨基酸摘要:建立了以2,4-二硝基氟苯(DNFB)作衍生化试剂,0 015m ol/L磷酸氢二钠和磷酸二氢钾缓冲液和50%乙腈水溶液为流动相,采用反相HPLC法测定烟叶中20种游离氨基酸含量的方法,并采用该法测定了7个烟叶样品。

结果表明: 20种氨基酸的平均回收率在94 2%~118 4%之间;相对偏差小于3%;4个烤烟样品中均未检出甲硫氨酸和异亮氨酸,均是脯氨酸含量最高,且2个上部烟叶样品中的游离氨基酸总量都大于2个中部烟叶样品;!7个烟叶样品中,唯有巴西白肋烟BC RA总氨基酸含量最高,其天门冬氨酸的含量显著地高于其他烟叶样品;∀马里兰烟苯丙氨酸的含量在7个烟叶样品中是最高的,且其天门冬酰胺和脯氨酸含量显著地高于其它6个烟叶样品;希腊香料烟样品中的脯氨酸略低于马里兰烟。

中图分类号:TS411.1 文献标识码:B 文章编号:1002-0861(2010)08-0034-07D eter m i n ation of Tw ent y Free Am i n o A cids in Tobacco Leaves by HPLC w it h Preco l u m n D erivatizationC H E NG YONG,C HEN LI N G,and DENG X I A O CHUNShenzhen Boton Flavours and Fragrances Co.,Ltd.,Shenzhen518051,Guangdong,Ch i n aK eywords:H i g h perfor m ance li q ui d chro m atography(HPLC);Pr e co l u mn deri v ation;2,4-D i n itr ofl u orobenzene; Tobacco lea;f Free a m i n o acidAbst ract:A m et h od for deter m ining20free a m i n o ac i d s in tobacco leaf w as estab lished by usi n g2,4-di n itrofluorobenzene(DNFB)as a derivative reagen,t0.015m ol/L disodium hydrogen phosphate and potassi u m di h ydrogen phosphate as buffer so l u ti o n and50%aqueous aceton itrile as m ob ile phase,and reversed phase HPLC.Seven tobacco leaf sa m ples were de tected.The resu lts show ed tha:t1)The average recoveri e s of t h e20a m i n o acids w ere fro m94.2%to118.4%w it h the RSDs of less t h an3%.2)M eth i o nineand iso leuci n e w ere not detected in four fl u e cured tobacco sa m ples,the content o f pr o li n e w as the h i g hes,tand the contents of total free a m ino acids i n t w o upper leaf sa mp les w ere higher than those i n t w o cuttersa mp les.3)The content o f total free a m ino ac i d s i n the sa m p l e o f Brazil burley tobacco,BCRA,w as the highest,and its aspartic aci d contentw as si g nificantl y higher than t h at i n o ther sa m ples.4)The phenyla lanine content in t h e sa m ple o fM ary land tobacco w as the h i g hes,t and asparag i n e contentw as obv i o usly h i g her thant h at i n other sa m ples,and pr o li n e con tent w as slightly higher than that in the sa m ple o f Greece orienta l andsi g nifican tl y higher than that i n the other five sa m p les.作者简介:程勇(1973-),大专,工程师,主要从事烟草及烟用香精的研究。

离子色谱法测定烟叶中游离氨基酸

离子色谱法测定烟叶中游离氨基酸作者：李辉岳先领李皓侯鹏娟张峻松来源：《湖北农业科学》2015年第23期摘要：为了研究离子色谱法测定烟叶中游离氨基酸含量，以游离氨基酸测定总量为指标，考察了萃取所用的溶剂、温度、时间以及料液比等因素对游离氨基酸测定量的影响。

结果表明，烟草中游离氨基酸的最优检测条件为：萃取溶剂为0.1 mol/L盐酸、萃取时间为30 min、萃取温度为30 ℃、烟叶与盐酸的比例为1∶40（w/v）。

测定方法的氨基酸检出限为2.76～22.36 ng/mL，定量限为9.57～102.13 ng/mL，试验的RSD为1.26%～4.96%，氨基酸的加标回收率为83.51%～106.78%，说明该优化方法可行，利用确定的最佳条件测定了国内主产区的10种烤烟型烟叶。

关键词：烟草;游离氨基酸;离子色谱;测定中图分类号：O656.3 ; ; ; ;文献标识码：A ; ; ; ;文章编号：0439-8114（2015）23-6023-03DOI：10.14088/ki.issn0439-8114.2015.23.058Determination of Free Amino Acids in Tobacco by Ion Chromatography MethodLI Hui1，YUE Xian-ling1，LI Hao2，HOU Peng-juan2，ZHANG Jun-song2（1.Technology Center of Heilongjiang Tobacco Industry Co.，Ltd.， Harbin 150001， China;2.College of Food and Bioengineering Zhengzhou University of Light Industry， Zhengzhou 450002， China）Abstract： In order to study the effect of ion chromatography method for the determination of free amino acids in tobacco， the optimization of the experimental conditions were studied， the value of free amino acids used as a response value. The experimental results showed that the best experimental conditions were as follows： the extract solvent was 0.1 mol/L hydrochloric acid; the temperature of experiment was 30 ℃; the extract time was 30 min; the solid to liquid ratio was 1∶40（w/v）. The detection limit of the method was 2.76～22.36 ng/mL，limit of quantitation was9.57～102.13 ng/mL， the method has high recovery（83.51%～106.78%）and good repeatability （RSDKey words：tobacco;free amino acids;ion chromatography;determination游离氨基酸是烟草中的一类重要化合物，约占烟叶重量的0.5%～2.1%[1]，在烟草生长、烘烤、陈化、工艺加工以及燃烧的过程中参与化学反应，并生成许多种具有不同香味特征的化合物，与烟叶内或外加的还原糖发生缩合以及缩合物的进一步降解，生成一系列的吡咯、吡嗪和呋喃类等碱性香味化合物，这些碱性香味成分对烟草的香气、吸味等感官质量产生显著影响[2，3]。

柱前衍生-高效液相色谱法测定新鲜烟叶中游离氨基酸

D0I：10.13822/ki.hxsj.2021007962化学试剂，2021,43(6),801〜805柱前衍生-高效液相色谱法测定新鲜烟叶中游离氨基酸许永「，黄丽佳一2，刘欣1,李晶「，宋春满"，杨光宇1,李雪梅1(1.云南中烟工业有限责任公司技术中心，云南昆明650106；2.昆明医科大学药学院，云南昆明650504)摘要:建立了柱前衍生-高效液相色谱检测新鲜烟叶中18种游离氨基酸的分析方法。

0.2g样品用5mL超纯水超声提取30min,过滤后取0.5mL滤液以异硫氰酸苯酯(PITC)衍生，以Waters SunFire C18色谱柱为分析柱，80%乙睛和0.1mol/L乙酸钠水溶液为流动相，梯度洗脱，在254nm处检测，外标法定量。

结果表明，18种氨基酸的线性范围为2~ 50wg/mL，定量限为0.03〜0.10mg/g,3个水平加标平均回收率在84.6%-105%之间，相对标准偏差为1.7%~5.5%-该方法简便快速，适用于新鲜烟叶中18种游离氨基酸的含量分析-关键词:柱前衍生;高效液相色谱;烟叶;游离氨基酸中图分类号：0652文献标识码：A文章编号：0258-3283(2021)06-0801-05Determination of Free Amino Acids in Fresh Tobacco Leaves by High Performance Liquid Chromatography with Precolumn Derivatization XU Yong1,HUANG Li-jia'，,LIU Xin,LI Jing',SONG Chun-man*1,YANG Guang-yu',LI Xue-mei (1.Technology Center of China Tobacco Yunnan Industrial Co.,Ltd.,Kunming650106,China；2.School of Pharmacy,Kunming Medical University,Kunming650504,China),Huaxue Shiji,2021,43(6),801〜805Abstract:A method was developed for the determination of18free amino acids in fresh tobacco leaves by pre-column derivatiza-tion-high performance liquid chromatography.0.2g Sample was extracted by ultrasonication with5mL ultrapure water for30min, filtrated and then0.5mL of the filtrate was derived with phenyl isothiocyanate(PITC)and analyzed on a Waters SunFire C18 column with80%acetonitrile and0.1moL/L aqueous sodium acetate solution as mobile phase.Derivatives were detected at the wavelength of254nm and quantified with external standard method.The results showed that the linear ranges of18free amino acids were2~50wg7mL,and the limits of quantitation were0.03〜0.10mg/g,and the average recoveries of18free amino acids were in the range of84.6%-105%with relative standard deviations of1.7%〜5.5%.The method is simple and suitable for the analysis of18free amino acids in fresh tobacco leaves.Key words:pre-column derivatization；high performance liquid chromatography；tobacco leaves；free amino acids氨基酸是烟草中一类重要化合物，在烟草生长、调制、醇化、加工直至成品卷烟抽吸过程中,氨基酸与烟草中的还原糖发生非酶棕化反应,生成多种香味前体物质,某些氨基酸如苯丙氨酸还可以自身分解成香味化合物,对形成芳香的烟草香气和吸味有重要贡献［1］-因此，分析烟草中氨基酸含量，对烟草品质评价及卷烟配方设计等均有重要意义-烟草氨基酸的分析方法有直接测定法和间接测定法，直接测定法有离子色谱-脉冲安培检测法［2,3］和液相色谱-串联质谱法［4-6］。