游离a-氨基酸含量的测定
39. 保护氨基酸检验指导书
保护氨基酸检验指导书发放号：编写: 审核:批准:1. 检验流程1.1 成品置于待测区1.2 检验员取样1.3 成品检测(外观、纯度、质谱、旋光、熔点、澄清度等)1.4 备注：A. 产品粉碎并包装置于待测区后，取样检测出的数据写入检验报告。
B. 研发部提供的生产过程中的图谱 (MS、HPLC) ，可做参考，有权进行复查。
2 检验项目2.1 外观：目测法（须为白色或类白色粉末或结晶性类白色粉末）2.2 光学纯度的测定2.2.1 仪器和试剂液相色谱仪、输液泵、检测器、色谱柱、记录装置、进样阀、微量注射器、超声波发生器、蒸馏水、乙晴、三氟乙酸2.2.2 分析步骤A. 称取一定量的样品溶于10ml容量瓶中，直至完全溶解，然后将其过滤。
B. 用微量注射器吸取一定量试样溶液进入色谱系统，利用梯度洗脱使样品达到分离。
C. 各组分经过紫外检测器，通过色谱工作站记录各组分的紫外吸收、并转换为电信号。
D. 在线色谱工作站记录各组分的各项参数，如保留时间、峰高、峰面积，通过面积归一法计算出各组分的百分含量。
2.2.3 注意事项A. 氨基酸样品分析必须打空白，谱图中不允许出现未积分的小杂峰，若是空白中有的，必须以基线相减的方式处理掉；如果处理不掉，必须进行复测。
B. 基线尽量保持一条直线。
C. 谱图中不允许出现负峰。
2.2.4 要求及规定A. 氨基酸样品分析必须打空白，谱图中不允许出现未积分的小杂峰，若是空白中有的，必须以基线相减的方式处理掉；如果处理不掉，必须进行复测。
B. 基线尽量保持一条直线。
C. 谱图中不允许出现负峰。
D. 尽量安排同一产品的测试使用同一分析条件，这样可加强可比性。
E. 比较数据的重复性时，安排统一产品测试的时间不要间隔很久。
F . 若单项杂质在1%±0.05%，复测确定数据的重复性。
G. 若同一批次产品分包装送样检测，混合样数据应在各分包装测试数据的范围内。
例如：分包装测试的数据分别为：98.5%、98.6%、98.7%，若混合样数据不在98.5%-98.7%范围内，则复测确定数据的重复性。
游离氨基酸测定(完整版)
总游离氨基酸测定（完整版）实验原理：游离氨基酸的游离氨基可与水合茚三酮作用，产生蓝紫色的化合物二酮茚－二酮茚胺，产物的颜色深浅与游离氨基酸含量成正比，用分光光度计在570nm下测其含量。
因蛋白质中的游离氨基酸也会产生同样反应，在测定前必须用蛋白质沉淀剂将其除掉.仪器与用具：100ml容量瓶；漏斗；三角瓶研钵；刻度吸管：0.1ml×1、1ml×2、2ml×2、5ml×1;沸水浴；具塞刻度试管20ml×10;分光光度计.一、试剂1.水合茚三铜：称重结晶的茚三铜0.6g,装入烧杯，加入正丙醇15ml，使其溶解加入正丁醇30 ml、乙二醇60 ml、乙酸-乙酸钠缓冲液（pH=5.4）9 ml,混匀，棕色瓶冰箱保存，10天内有效。
2.乙酸-乙酸钠缓冲液（pH5.4）：称取化学纯乙酸钠54.4g，加入无氨蒸馏水100 ml，电炉加热至沸，使其体积减半，冷却后加冰乙酸30 ml，加蒸馏水定容至100 ml。
3.氨基酸标准溶液：精确称取80℃烘干至恒重的亮氨酸0.0234g溶于10％异丙醇并定容至50ml。
取此液5ml蒸馏水稀释到50ml，即为5μg/ml氨基酸标液。
4.0.1%抗坏血酸：称取0.050g抗坏血酸，溶于50 ml蒸馏水中，即配即用。
5.10％乙酸二、标准曲线制备加塞子密封于沸水中加热15分钟，取出后用冷水迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红色被空气逐渐氧化褪去，待呈现兰紫色时，用60％乙醇定容至20ml，摇匀于570nm波长下比色。
以吸光度为纵坐标，氨基氮ug数为横坐标，绘标准曲线三、实验步骤：1.烟末0.5g于研钵中加入5 ml10%乙酸，研磨匀浆后用蒸馏水定容100 ml，用滤纸过滤到三角瓶中备用。
2.1ml滤液加入到20ml 干燥试管中，加1 ml蒸馏水，水合茚三铜3ml, 0.1%抗坏血酸0.1ml, 加塞子密封于沸水中加热15分钟，取出后用冷水迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红色被空气逐渐氧化褪去，待呈现兰紫色时，用60％乙醇定容至20ml，摇匀于570nm波长下比色。
游离氨基酸的测定方法
游离氨基酸的测定方法
游离氨基酸咋测定呢？其实有不少方法呢！比如说茚三酮比色法。
先准备好样品，把它处理成合适的状态。
然后加入茚三酮试剂，经过一系列反应后，通过比色来确定游离氨基酸的含量。
这过程中可得小心操作，要是弄错了一步，那结果可就不靠谱啦！那安全性咋样呢？只要按照正确的步骤来，一般没啥大问题。
稳定性嘛，只要试剂没问题，操作规范，结果还是挺稳定的。
这方法能用到好多地方呢！像食品检测领域，你想想，要是不知道食品里的游离氨基酸含量，咋能保证食品的质量和营养呢？优势也不少呢！操作相对简单，成本也不高。
咱举个实际案例哈。
有个食品加工厂，用这个方法检测产品中的游离氨基酸含量，及时调整了生产工艺，提高了产品质量。
这效果多棒啊！
游离氨基酸的测定方法真的超实用，能帮我们了解各种物质中的氨基酸情况，为我们的生活和生产带来很多好处。
咱可得好好利用这些方法，让它们发挥更大的作用。
蘑菇中游离氨基酸含量的测定实验报告
蘑菇中游离氨基酸含量的测定实验报告一、引言在食品营养学中，游离氨基酸是评价食品蛋白质质量的重要指标之一。
游离氨基酸的含量可以反映食品的蛋白质水平，也可以为食品品质的评价提供依据。
蘑菇是一种常见的食材，其营养价值较高，其中游离氨基酸含量的测定对于评价蘑菇的蛋白质质量非常重要。
本实验旨在通过对蘑菇中游离氨基酸的测定，探究蘑菇的蛋白质质量，并为进一步研究蘑菇的营养价值提供参考。
二、实验方法1. 实验材料准备•蘑菇样品：取新鲜的蘑菇作为实验样品。
•无水无氧乙酸：用于提取蘑菇中的游离氨基酸。
•pH 2.2缓冲液：用于调节提取液的酸碱度。
2. 实验步骤1.将蘑菇样品洗净并切碎成小块。
2.取20克蘑菇样品加入100 mL pH 2.2缓冲液中。
3.加入适量的无水无氧乙酸，使pH值控制在2.2左右。
4.进行超声波提取，提取时间为30分钟。
5.将提取液离心，收集上清液。
6.将上清液过滤，得到待测样品。
3. 游离氨基酸含量测定1.取1 mL 待测样品加入氨基酸分析仪样品瓶中。
2.将样品瓶放入氨基酸分析仪，按照仪器操作说明进行测定。
3.记录并计算游离氨基酸的含量。
三、实验结果根据实验测定，蘑菇中游离氨基酸含量为：•脯氨酸：5.2 mg/g•缬氨酸：3.8 mg/g•苏氨酸：2.5 mg/g•赖氨酸：1.9 mg/g•…四、实验讨论根据实验结果可以看出，蘑菇中游离氨基酸的含量较高，表明蘑菇具有较高的蛋白质质量。
其中以脯氨酸和缬氨酸的含量最高，说明蘑菇富含这两种氨基酸。
与其他食材相比，蘑菇中游离氨基酸的含量可能有所差异。
这可能是由于蘑菇的生长环境、品种等因素所致。
进一步的研究可以探究不同蘑菇品种中游离氨基酸含量的差异。
游离氨基酸的含量对于食物的品质和营养价值具有重要的影响。
蘑菇作为一种营养价值较高的食材，其富含的游离氨基酸有助于提供人体所需的必需氨基酸，并具有重要的保健作用。
五、结论通过本实验的测定，我们得出了蘑菇中游离氨基酸的含量，并得出以下结论：1.蘑菇中富含游离氨基酸，特别是脯氨酸和缬氨酸。
氨基酸总量的测定
氨基酸总量的测定(茚三酮比色法)一、方法原理：氨基酸的游离氨基与水合茚三酮作用后，可产生二酮茚一二酮茚胺的取代盐等蓝紫色化合物，其颜色深浅与氨基酸含量成正比，据此可以比色测定氨基酸含量。
二、试剂：1．2％茚三酮溶液：1g茚三酮(C9H403·2H2O)溶于25ml热水中，加入40mg氯化亚锡；(SnCl2·2H2O)，搅拌溶解，滤去残渣，滹液放在冷暗处过夜，用水定容为50ml，保存声冷暗处。
如茚三酮有微红色，配成的溶液也带红色，将影响比色测定，需将茚三酮重结晶后再用方法是：取5g茚三酮溶于20ml热水中，加入0.2g活性炭，轻轻摇动，放三十分钟后过滤，滤液置冰箱中过夜，次日过滤，用1ml冷水淋洗结晶，然后放在干燥器中干燥，装瓶保存。
2。
磷酸盐缓冲液(pH8.0)：①1／15mol/l磷酸二氢钾溶液：取KH2P04 0.9070g溶于lOOml水中。
②1／15mol/l磷酸氢二钠溶液：取磷酸氢二钠(Na2HP04·12H20)23.876g溶于水，加水至1000ml。
取①50ml与②95ml混匀即得。
3．10％醋酸：取lOml冰醋酸加水至lOOml。
4，氨基酸标准溶液(200ppm)：称取干燥的氨基酸(白氨酸，或其它的氨基酸)0.2000g溶解于水，定容为1000ml。
三、仪器：水浴，721分光光度计。
四、操作步骤：(一)标准曲线绘制：分别吸取氨基酸标准溶液(200ppm)0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml各置于25ml容量瓶中,加水补充至4.0ml，各加入缓冲液lml，加入茚三酮lml，摇匀。
置沸水浴中加热15分钟，取出迅速冷却至室温，—用水定容。
放置15分钟，在570nm波长下测定，绘制标准曲线。
氨基酸浓度分别为0，4.0，8.0，12.0，16.0，20.Oppm。
(二)样品测定：l提取样品：称取1.0 ~2.0g植物样品(新鲜样或干样)，加5m1 10％醋酸，在研钵中研碎，用水洗移入lOOml容量瓶，水定容，过滤到三角瓶中，取滤液测定。
氨基酸测定方法的研究进展
氨基酸测定方法的研究进展一、本文概述氨基酸作为生物体内蛋白质的基本构成单元，其种类、数量及比例对于蛋白质的功能和生物体的生命活动具有决定性的影响。
因此，氨基酸的测定方法一直以来都是生物化学和生物学研究的重要领域。
随着科学技术的不断发展，氨基酸测定方法也取得了显著的进步，从早期的传统化学分析法，到现代的仪器分析法，再到近年来的生物信息学方法，氨基酸测定的准确性和效率得到了显著的提升。
本文将对近年来氨基酸测定方法的研究进展进行综述，旨在为读者提供全面的氨基酸测定方法的知识，并展望未来的发展方向。
我们将简要介绍氨基酸测定方法的发展历程，从传统的化学分析法到现代的仪器分析法，以及最新的生物信息学方法。
随后，我们将重点综述近年来氨基酸测定方法的研究进展，包括新的测定技术、方法的优化和改进，以及在不同领域的应用。
我们还将讨论氨基酸测定方法目前面临的挑战和未来的发展趋势，以期为相关领域的研究提供参考和借鉴。
二、传统氨基酸测定方法传统氨基酸测定方法主要包括色谱法、电泳法、光谱法以及衍生化法等。
这些方法各有特点，并在不同的历史阶段对氨基酸的测定和研究起到了重要作用。
色谱法：色谱法是一种经典的氨基酸测定方法，其基本原理是利用氨基酸在固定相和移动相之间的分配平衡进行分离。
常见的色谱法包括纸色谱、薄层色谱以及高效液相色谱（HPLC）等。
其中，HPLC具有较高的分辨率和灵敏度，能够同时分离多种氨基酸，因此在氨基酸测定中得到了广泛应用。
电泳法：电泳法是一种基于氨基酸带电性质进行分离的方法。
在电场作用下，氨基酸会根据其带电性质和分子量大小在凝胶或溶液中移动，从而实现分离。
电泳法操作简单，分辨率高，特别适用于小分子氨基酸的测定。
光谱法：光谱法主要利用氨基酸的特殊光谱性质进行测定。
例如，氨基酸与某些试剂反应后会产生特征性的颜色变化，通过比色法可以测定氨基酸的含量。
氨基酸还具有紫外吸收和荧光性质，可以利用紫外-可见光谱和荧光光谱法进行测定。
饲料蛋白水解氨基酸含量的测定-实验方案
四、实验条件
2
1.仪器： (1) 样品粉碎机 (2) 样品筛（60 目） (3) 分析天平（感重 0.0001 g） (4) 真空泵 (5) 过滤器 (6) 恒温干燥箱 (7) 漩涡混匀仪 (8) 磁力搅拌器 (9) 酒精喷灯 (10)蒸空冷冻干燥仪 (11)纯水系统 (12)注射器 (13)0.22 μm 微孔滤膜 (14)100/1000 μL 移液枪 (15)试管（20*200）、烧杯、量筒、容量瓶、漏斗、氨基酸样品瓶等玻璃器具 (16)日立 L-8900 全自动氨基酸分析仪：配有自动进样器，2622#色谱柱，可见分光光度计， 柱温箱配有电子加热/制冷温控装置，EZChrom Elite 分析软件。 2.试剂： （1）酸解剂——盐酸溶液，c(HCl)=6 mol/L：盐酸(GR)与纯水 1:1 混合，每升盐酸溶液 含 5 g 苯酚。 （2）样品稀释溶液/空白溶液——盐酸(GR)溶液，c(HCl)=0.02 mol/L （3）17 种氨基酸混合标准储备液，各组分浓度 c(氨基酸)=2.50 μmol/mL, （4）混合氨基酸标准工作液：取 40 μL 氨基酸标准储备液用样品稀释溶液稀释至 1 mL， 使各氨基酸组分浓度 c(氨基酸)=100 nmol/mL。 （5）液氮、氮气 （6）燃烧用酒精 （7）超纯水 （8）不同 pH 和离子强度的洗脱用柠檬酸钠缓冲液（按仪器说明书配制）
中蛋白质水解后氨基酸的含量。
蛋白质水解法适于含动植物蛋白的单一饲料、配合饲料、浓缩饲料和预混料中氨基酸
的测定，包含常规酸水解法、氧化酸水解法和碱水解法。氧化酸水解法主要用于测定含硫
氨基酸，碱水解法只适于测定色氨酸。普通酸水解法会破坏色氨酸和部分破坏含硫氨基酸，
适于测定除色氨酸、含硫氨基酸(胱氨酸和蛋氨酸等)以外的蛋白水解氨基酸，使用最广，
饲料中游离氨基酸的检测方法
饲料中游离氨基酸的检测方法
饲料中游离氨基酸的检测方法主要包括以下几种：
1. 比色法：利用氨基酸与重金属离子或某些化学试剂形成特定颜色的配合物，通过比色反应来定量测定游离氨基酸的含量。
2. 色谱法：常用的色谱方法包括气相色谱（GC）和高效液相色谱（HPLC）。
色谱法可以对多种氨基酸进行分离和定量，具有准确、灵敏、高效的特点。
3. 生物传感器法：利用生物传感器对游离氨基酸进行检测。
常用的生物传感器包括酶传感器、抗体传感器和细胞传感器等，这些传感器具有高灵敏度和高选择性。
4. 光谱法：包括紫外光谱、红外光谱和质谱等分析方法，可以利用氨基酸的特征吸收峰或质谱图谱进行定量测定。
以上方法在游离氨基酸的检测中都有各自的优缺点，在实际应用中可以根据需要选择合适的方法进行分析。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
2、标准曲线制作： 在6支比色管中，按下表顺序与用量加入试剂：
比色管号 V标/mL V缓/mL V茚/mL 1 0 3.00 2.00 2 0.50 2.50 2.00 3 0.10 2.00 2.00 4 1.50 2.00 2.00 5 2.00 2.00 2.00 6 2.50 2.00 2.00
实验内容
1、样品中游离a－氨基酸的提取： 称1.0g剪碎的新鲜蘑菇放入研钵中，加入2mL
蒸馏水，研磨成匀浆，再转入7号25mL比色管，然
后用6mL蒸馏水分三次洗涤研钵，分别转入7号比色 管，再置于80℃水浴槽加热10分钟后用冷水冷却，
再用蒸馏定容至25mL。摇匀后，过滤，将滤液置于
8号比色管以备用。
2、加抗坏血酸可减少氧气对显色影响，但用量要
严格控制。 3、蒸馏水最好是无氨蒸馏水。
4、水合茚三酮不要溅到皮肤上。
思考题
1、简述721型分光光度计的操作步骤。 2、实验过程为何使用无氨蒸馏水。
抗坏血酸（滴）
氨基氮ug/管 吸光度
4
0
4
12.5
4
25.0
4
37.5
4
50.0
4
62.5
摇匀后，将上述6支比色管置于80℃水浴槽加热
15分钟后用冷水冷却，再用缓冲液定容至25mL，摇匀。
3、样品含量的测定
从8号比色管移取1.00mL溶液于9号25mL比色
管，在分别加入3.00mL缓冲溶液、2.00mL茚三酮 溶液和4滴抗坏血酸，摇匀后置于80℃水浴槽加热 15分钟后用冷水冷却，再用缓冲液定容至25mL， 摇匀。以1号比色管溶液为参比液测出样品的吸光
度，从标准曲线上查到对应的氨基氮的含量，按下
公式计算样品中氨基氮的含量：
25.0 K 氨基氮含量 (mg/kg鲜样)＝ 1.00 m
K为查标准曲线所得氨基氮含量（ug） m为样品称取量（g）
数据处理
在坐标纸上画出标准曲线，并查得样品管中
的氨基氮含量K值，计算初鲜蘑菇中的氨基氮含量。
注意事项 1、显色反应应控制在85℃以内，否则溶液易退 色；显色反应后在50分钟内应完成测量任务， 否则溶液会退色。
游离a－氨基酸含量的测定
• 目的与要求
• 实验的重点和难点
• 仪器和试剂 • 基本操作 • 实验原理 • 实验内容 •数据记录和处理 • 思考题
•注意事项
实验目的与要求
1、了解分光光度法测定游离氨基酸的原理与方法； 2、掌握分光光度计的使用。
重点和难点
分光光度计的使用与标准曲线的制作
仪器和试剂
仪 器 721型分光ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ度计 25mL比色管 试剂 pH＝5.0的缓冲液 1％水合茚三酮溶液 0.1％抗坏血酸 恒温水浴槽 5mL吸量管 漏斗 研钵
氨基酸标准溶液
鲜蘑菇
基本操作
1）吸量管的使用 2）比色管的使用 3）721分光光度计计的使用
实验原理
α－氨基酸在pH=5.0的溶液中与茚三酮共热时，
与茚三酮作用生成蓝紫色化合物。该化合物的最大 吸收波长为570nm，根据朗伯比尔定律，采用分光 光度法测定其吸光度，通过标准曲线法进行定量分 析，求出样品中α－氨基酸的浓度。