游离氨基酸测定(完整版)
茶叶中游离氨基酸的测定
茶叶中游离氨基酸的测定茶叶是一种传统的饮品，具有多种保健功效。
而茶叶中的游离氨基酸是决定茶叶品质的重要因素之一。
本文将探讨茶叶中游离氨基酸的测定方法及其意义。
一、茶叶中游离氨基酸的意义游离氨基酸是构成蛋白质的基本组成部分，也是人体所需的重要营养物质之一。
在茶叶中，游离氨基酸的含量与茶叶的品质有着密切的关系。
茶叶中游离氨基酸的含量高低直接影响着茶叶的口感和香气，也是评价茶叶质量好坏的重要指标之一。
因此，准确测定茶叶中游离氨基酸的含量对于茶叶品质的评价具有重要意义。
常用的测定茶叶中游离氨基酸含量的方法主要有色谱法、高效液相色谱法和光谱法等。
以下将分别介绍这几种方法的原理和步骤。
1. 色谱法色谱法是一种常用的游离氨基酸测定方法。
其原理是利用色谱柱将茶叶样品中的游离氨基酸分离出来，再通过检测器测定其浓度。
具体步骤如下：（1）样品制备：将茶叶样品粉碎并称取适量，加入适量溶剂提取游离氨基酸。
（2）色谱柱分离：将提取得到的茶叶样品溶液注入色谱柱进行分离，根据游离氨基酸的特性选择合适的色谱柱。
（3）浓度测定：通过色谱柱后，游离氨基酸会进入检测器，根据吸光度或荧光强度等参数测定游离氨基酸的浓度。
2. 高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分离和测定游离氨基酸的方法。
其原理是利用高效液相色谱仪将茶叶样品中的游离氨基酸分离出来，并通过检测器测定其浓度。
具体步骤如下：（1）样品制备：将茶叶样品粉碎并称取适量，加入适量溶剂提取游离氨基酸。
（2）色谱柱分离：将提取得到的茶叶样品溶液注入高效液相色谱仪进行分离，根据游离氨基酸的特性选择合适的色谱柱。
（3）浓度测定：通过高效液相色谱柱后，游离氨基酸会进入检测器，根据吸光度或荧光强度等参数测定游离氨基酸的浓度。
3. 光谱法光谱法是一种简单快速的游离氨基酸测定方法。
其原理是利用游离氨基酸在特定波长下的吸收特性来测定其浓度。
具体步骤如下：（1）样品制备：将茶叶样品粉碎并称取适量，加入适量溶剂提取游离氨基酸。
游离氨基酸测定（完整版）
总游离氨基酸测定（完整版）实验原理：游离氨基酸的游离氨基可与水合茚三酮作用，产生蓝紫色的化合物二酮茚－二酮茚胺，产物的颜色深浅与游离氨基酸含量成正比，用分光光度计在570nm下测其含量。
因蛋白质中的游离氨基酸也会产生同样反应，在测定前必须用蛋白质沉淀剂将其除掉.仪器与用具：100ml容量瓶；漏斗；三角瓶研钵；刻度吸管：0.1ml×1、1ml×2、2ml×2、5ml×1;沸水浴；具塞刻度试管20ml×10;分光光度计.一、试剂1.水合茚三铜：称重结晶的茚三铜0.6g,装入烧杯，加入正丙醇15ml，使其溶解加入正丁醇30 ml、乙二醇60 ml、乙酸-乙酸钠缓冲液（pH=5.4）9 ml,混匀，棕色瓶冰箱保存，10天内有效。
2.乙酸-乙酸钠缓冲液（pH5.4）：称取化学纯乙酸钠54.4g，加入无氨蒸馏水100 ml，电炉加热至沸，使其体积减半，冷却后加冰乙酸30 ml，加蒸馏水定容至100 ml。
3.氨基酸标准溶液：精确称取80℃烘干至恒重的亮氨酸0.0234g溶于10％异丙醇并定容至50ml。
取此液5ml蒸馏水稀释到50ml，即为5μg/ml氨基酸标液。
4.0.1%抗坏血酸：称取0.050g抗坏血酸，溶于50 ml蒸馏水中，即配即用。
5.10％乙酸二、标准曲线制备加塞子密封于沸水中加热15分钟，取出后用冷水迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红色被空气逐渐氧化褪去，待呈现兰紫色时，用60％乙醇定容至20ml，摇匀于570nm波长下比色。
以吸光度为纵坐标，氨基氮ug数为横坐标，绘标准曲线三、实验步骤：1.烟末0.5g于研钵中加入5 ml10%乙酸，研磨匀浆后用蒸馏水定容100 ml，用滤纸过滤到三角瓶中备用。
2.1ml滤液加入到20ml 干燥试管中，加1 ml蒸馏水，水合茚三铜3ml, 0.1%抗坏血酸0.1ml, 加塞子密封于沸水中加热15分钟，取出后用冷水迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红色被空气逐渐氧化褪去，待呈现兰紫色时，用60％乙醇定容至20ml，摇匀于570nm波长下比色。
茚三酮法测游离氨基酸
一、目的学习茚三酮显色法测定氨基酸含量的方法二、原理茚三酮溶液与氨基酸共热，生成氨。
氨与茚三酮和还原性茚三酮反应，生成紫色化合物。
该化合物颜色的深浅与氨基酸的含量成正比，可通过测定570nm处的光密度，测定氨基酸的含量。
三、试剂与材料（1）标准氨基酸溶液：配制成0.3mmol/L溶液。
（2）pH5.4，2mol/L醋酸缓冲液：量取86mL2mol/L醋酸钠溶液，加入14mL2mol/L乙酸混合而成。
用pH检查校正。
（3）茚三酮显色液：称取85mg茚三酮和15mg还原茚三酮，用10mL乙二醇甲醚溶解。
茚三酮若变为微红色，则需按下法重结晶：称取5g茚三酮溶于15～25mL热蒸馏水中，加入0.25g活性炭，轻轻搅拌。
加热30min后趁热过滤，滤液放入冰箱过夜。
次日析出黄白色结晶，抽滤，用1mL冷水洗涤结晶，置干燥器干燥后，装入棕色玻璃瓶保存。
还原型茚三酮按下法制备：称取5g茚三酮，用125mL沸蒸馏水溶解，得黄色溶液。
将5g维生素C用250mL温蒸馏水溶解，一边搅拌一边将维生素C溶液滴加到茚三酮溶液中，不断出现沉淀。
滴定后继续搅拌15min，然后在冰箱内冷却到4℃，过滤、沉淀用冷水洗涤3次，置五氧化二磷真空干燥器中干燥保存，备用。
乙二醇甲醚若放置太久，需用下法除去过氧化物：在500mL乙二醇甲醚中加入5g硫酸亚铁，振荡1～2h，过滤除去硫酸亚铁，再经蒸馏，收集沸点为121～125℃的馏分，为无色透明的乙二醇甲醚。
（4）60％乙醇。
（5）样品液：每毫升含0.5～50μg氨基酸。
（6）分光光度计。
（7）水浴锅。
四、操作步骤1．标准曲线的制作分别取0.3mmol/L的标准氨基酸溶液0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL于试管中，用水补足至1mL。
各加入1mLpH5.4，2mol/L醋酸缓冲液；再加入1mL茚三酮显色液，充分混匀后，盖住试管口，在100℃水浴中加热15min，用自来水冷却。
放置5min后，加入3mL60％乙醇稀释，充分摇匀，用分光光度计测定OD570nm。
实验八植物组织中游离氨基酸的分离鉴定
实八:植物组织中游离氨基酸的分离鉴定
左哥
一、实验材料、器材
1、展层溶剂标准氨基酸溶液0.5%羧甲基纤维素钠溶液硅胶G粉0.5%茚三酮丙酮溶液
2、层析缸玻璃板
二、操作步骤
1、马铃薯提取液制备：30g去皮马铃薯，80%乙醇，组织捣碎机，水浴蒸干，残渣加水溶解→
2、制版：1.8g硅胶G，研磨3min，干燥，110C烘箱活化30min→
3、点样：→
4、展层→
5、显色→
6、鉴定。
三、实验结果
四、讨论及分析
由样点颜色和Rf值与标准样点对比可知，2号点为Met，6号点为Pro，7号点为His，
1—6号点，对应氨基酸为酸性或中性氨基酸，而7、8号对应氨基酸为碱性氨基酸。
薄板上样品中5号显色斑点为紫红色，但距离6号点较近，未能完全分离，推断有以下
几点原因：点样时扩散直径过大，导致两斑点扩散区域重叠难以辨认；薄层担体粒度本身的
限制，试验中展层时间不长即达到了预计的溶剂前沿（居上边缘约1cm），即展层速度过快，
原因可能是制板时硅胶G研磨过粗，据范迪姆特方程：H=A+B/U+Cu,其中A、C均与粒度成
正比，即提高填充料的均匀性和减少粒度才能在定长的条件下提高有效搭伴数，增强分离效
果；研磨时用力适当，方法合适，适当增加研磨时间才能是硅胶G颗粒又匀又细，达达到
较好分离效果。
同时，也要注意不可研磨过细，否则易拖尾。
实验植物组织游离氨基酸总量测定柯上网材料
缩合生成Ruhemans紫。
福建农林大学-植物生理生化实验室/柯玉琴
共热、微酸性
《植物生理生化实验A》
福建农林大学
24％
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《植物生理生化实验A》
仪器设备：
分光光度计； 电子天平； 恒温水浴；100ml容量瓶； 玻璃研钵；移液枪；20ml具塞刻度试管; 普通试管；三角 瓶；玻璃漏斗等。
谢等有一定意义 。
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测定意义：
《植物生理生化实验A》
作作作为为为福营施逆建农养肥境林品的生大学质生理的理指指指标标标 。。。。。。？
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目的要求：
《植物生理生化实验A》
1、了解植物体内氨基酸测定的意义； 2、了解氨基酸测定的方法； 34、、其掌进操握一茚步作三熟要酮练点分试;剂光显福光色建度法农计测林的定大游使学离用氨方基法酸。总量的基本原理及 5、比较不同萌发程度的水稻种子游离氨基酸总量的差异。
2．标准曲线的绘制及样品测定： 取10支20mL刻度试管，按下表进行操作。
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《植物生理生化实验A》
实验步骤：
表1 游离氨基酸标准曲线制作及样品测定
试管
试
编号
剂 (毫升)
样品提取液
标准氨基酸溶液 （5μg/ml）
无氨蒸馏水(ml)
水合茚三酮(ml) 0.1%抗坏血酸(ml)
什么要加入抗坏血酸溶液？
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《植物生理生化实验A》
福建农林大学
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游离a-氨基酸含量的测定
• 目的与要求
• 实验的重点和难点
• 仪器和试剂 • 基本操作 • 实验原理 • 实验内容 •数据记录和处理 • 思考题
•注意事项
实验目的与要求
1、了解分光光度法测定游离氨基酸的原理与方法； 2、掌握分光光度计的使用。
重点和难点
分光光度计的使用与标准曲线的制作
仪器和试剂
抗坏血酸（滴）
氨基氮ug/管 吸光度
4
0
4
12.5
4
25.0
4
37.5
4Байду номын сангаас
50.0
4
62.5
摇匀后，将上述6支比色管置于80℃水浴槽加热
15分钟后用冷水冷却，再用缓冲液定容至25mL，摇匀。
3、样品含量的测定
从8号比色管移取1.00mL溶液于9号25mL比色
管，在分别加入3.00mL缓冲溶液、2.00mL茚三酮 溶液和4滴抗坏血酸，摇匀后置于80℃水浴槽加热 15分钟后用冷水冷却，再用缓冲液定容至25mL， 摇匀。以1号比色管溶液为参比液测出样品的吸光
实验内容
1、样品中游离a－氨基酸的提取： 称1.0g剪碎的新鲜蘑菇放入研钵中，加入2mL
蒸馏水，研磨成匀浆，再转入7号25mL比色管，然
后用6mL蒸馏水分三次洗涤研钵，分别转入7号比色 管，再置于80℃水浴槽加热10分钟后用冷水冷却，
再用蒸馏定容至25mL。摇匀后，过滤，将滤液置于
8号比色管以备用。
2、标准曲线制作： 在6支比色管中，按下表顺序与用量加入试剂：
比色管号 V标/mL V缓/mL V茚/mL 1 0 3.00 2.00 2 0.50 2.50 2.00 3 0.10 2.00 2.00 4 1.50 2.00 2.00 5 2.00 2.00 2.00 6 2.50 2.00 2.00
蘑菇中游离氨基酸含量的测定实验报告
蘑菇中游离氨基酸含量的测定实验报告一、引言在食品营养学中，游离氨基酸是评价食品蛋白质质量的重要指标之一。
游离氨基酸的含量可以反映食品的蛋白质水平，也可以为食品品质的评价提供依据。
蘑菇是一种常见的食材，其营养价值较高，其中游离氨基酸含量的测定对于评价蘑菇的蛋白质质量非常重要。
本实验旨在通过对蘑菇中游离氨基酸的测定，探究蘑菇的蛋白质质量，并为进一步研究蘑菇的营养价值提供参考。
二、实验方法1. 实验材料准备•蘑菇样品：取新鲜的蘑菇作为实验样品。
•无水无氧乙酸：用于提取蘑菇中的游离氨基酸。
•pH 2.2缓冲液：用于调节提取液的酸碱度。
2. 实验步骤1.将蘑菇样品洗净并切碎成小块。
2.取20克蘑菇样品加入100 mL pH 2.2缓冲液中。
3.加入适量的无水无氧乙酸，使pH值控制在2.2左右。
4.进行超声波提取，提取时间为30分钟。
5.将提取液离心，收集上清液。
6.将上清液过滤，得到待测样品。
3. 游离氨基酸含量测定1.取1 mL 待测样品加入氨基酸分析仪样品瓶中。
2.将样品瓶放入氨基酸分析仪，按照仪器操作说明进行测定。
3.记录并计算游离氨基酸的含量。
三、实验结果根据实验测定，蘑菇中游离氨基酸含量为：•脯氨酸：5.2 mg/g•缬氨酸：3.8 mg/g•苏氨酸：2.5 mg/g•赖氨酸：1.9 mg/g•…四、实验讨论根据实验结果可以看出，蘑菇中游离氨基酸的含量较高，表明蘑菇具有较高的蛋白质质量。
其中以脯氨酸和缬氨酸的含量最高，说明蘑菇富含这两种氨基酸。
与其他食材相比，蘑菇中游离氨基酸的含量可能有所差异。
这可能是由于蘑菇的生长环境、品种等因素所致。
进一步的研究可以探究不同蘑菇品种中游离氨基酸含量的差异。
游离氨基酸的含量对于食物的品质和营养价值具有重要的影响。
蘑菇作为一种营养价值较高的食材，其富含的游离氨基酸有助于提供人体所需的必需氨基酸，并具有重要的保健作用。
五、结论通过本实验的测定，我们得出了蘑菇中游离氨基酸的含量，并得出以下结论：1.蘑菇中富含游离氨基酸，特别是脯氨酸和缬氨酸。
饲料中游离氨基酸的检测方法
饲料中游离氨基酸的检测方法
一、样品制备
1.采集样品：选择有代表性的饲料样品，用干净、干燥的容器采集，避免污染和变质。
2.粉碎样品：将采集的样品进行粉碎，使氨基酸分布更均匀。
3.称取样品：按照实验室规范，精确称取一定量的样品用于后续实验。
二、衍生化处理
1.确定衍生化试剂：根据待测氨基酸的化学性质和仪器检测需求，选择合适的衍生化试剂。
2.衍生化反应条件：确定衍生化反应的温度、时间、pH值等条件，确保反应完全、稳定。
3.衍生化产物纯化：对衍生化产物进行纯化，去除杂质，提高检测的准确性。
三、分离纯化
1.选择色谱柱：根据氨基酸的性质和分离要求，选择合适的色谱柱。
2.确定色谱条件：调整流动相的组成、pH值、流速等条件，达到最佳的分离效果。
3.检测器选择：根据需要选择合适的检测器，如紫外检测器、荧光检测器等。
4.分离纯化过程：将样品溶液进行分离纯化，得到纯化的氨基酸
溶液。
四、检测分析
1.仪器准备：根据选择的检测器类型，准备好相应的仪器设备。
2.进样分析：将纯化的氨基酸溶液进行进样分析，记录色谱图和峰信息。
3.数据处理：对色谱数据进行处理，计算各氨基酸的含量和相关参数。
4.结果分析：根据计算结果，对饲料中游离氨基酸的含量和分布进行分析。
以上是饲料中游离氨基酸的检测方法，包括样品制备、衍生化处理、分离纯化和检测分析等方面。
根据实际需求和实验室条件，可以选择合适的实验方法和仪器设备进行检测和分析。
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总游离氨基酸测定（完整版）
实验原理：游离氨基酸的游离氨基可与水合茚三酮作用，产生蓝紫色的化合物二酮茚－二酮茚胺，产物的颜色深浅与游离氨基酸含量成正比，用分光光度计在570nm下测其含量。
因蛋白质中的游离氨基酸也会产生同样反应，在测定前必须用蛋白质沉淀剂将其除掉.
仪器与用具：100ml容量瓶；漏斗；三角瓶研钵；刻度吸管：0.1ml×1、1ml×2、2ml×2、5ml×1;沸水浴；具塞刻度试管20ml×10;分光光度计.
一、试剂
1.水合茚三铜：称重结晶的茚三铜0.6g,装入烧杯，加入正丙醇15ml，使其溶
解加入正丁醇30 ml、乙二醇60 ml、乙酸-乙酸钠缓冲液（pH=5.4）9 ml,混匀，棕色瓶冰箱保存，10天内有效。
2.乙酸-乙酸钠缓冲液（pH5.4）：称取化学纯乙酸钠54.4g，加入无氨蒸馏水
100 ml，电炉加热至沸，使其体积减半，冷却后加冰乙酸30 ml，加蒸馏水定容至100 ml。
3.氨基酸标准溶液：精确称取80℃烘干至恒重的亮氨酸0.0234g溶于10％异
丙醇并定容至50ml。
取此液5ml蒸馏水稀释到50ml，即为5μg/ml氨基酸标液。
4.0.1%抗坏血酸：称取0.050g抗坏血酸，溶于50 ml蒸馏水中，即配即用。
5.10％乙酸
二、标准曲线制备
加塞子密封于沸水中加热15分钟，取出后用冷水迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红色被空气逐渐氧化褪去，待呈现兰紫色时，用60％乙醇定容至20ml，摇匀于570nm波长下比色。
以吸光
度为纵坐标，氨基氮ug数为横坐标，绘标准曲线
三、实验步骤：
1.烟末0.5g于研钵中加入5 ml10%乙酸，研磨匀浆后用蒸馏水定容
100 ml，用滤纸过滤到三角瓶中备用。
2.1ml滤液加入到20ml 干燥试管中，加1 ml蒸馏水，水合茚三铜
3ml, 0.1%抗坏血酸0.1ml, 加塞子密封于沸水中加热15分钟，取出后用冷水迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红色被空气逐渐氧化褪去，待呈现兰紫色时，用60％乙醇定容至20ml，摇匀于570nm波长下比色。
四. 计算：
求三重复的平均值，由标准曲线得知各样的氨基酸ug数，代入公式计算。
氨基酸含量（mg/g干样）=｛氨基酸ug数×（提取液总体积/测定体积）｝/（样品g数×1000）。