游离氨基酸测定(完整版)
茶叶中游离氨基酸的测定
茶叶中游离氨基酸的测定茶叶是一种传统的饮品，具有多种保健功效。
而茶叶中的游离氨基酸是决定茶叶品质的重要因素之一。
本文将探讨茶叶中游离氨基酸的测定方法及其意义。
一、茶叶中游离氨基酸的意义游离氨基酸是构成蛋白质的基本组成部分，也是人体所需的重要营养物质之一。
在茶叶中，游离氨基酸的含量与茶叶的品质有着密切的关系。
茶叶中游离氨基酸的含量高低直接影响着茶叶的口感和香气，也是评价茶叶质量好坏的重要指标之一。
因此，准确测定茶叶中游离氨基酸的含量对于茶叶品质的评价具有重要意义。
常用的测定茶叶中游离氨基酸含量的方法主要有色谱法、高效液相色谱法和光谱法等。
以下将分别介绍这几种方法的原理和步骤。
1. 色谱法色谱法是一种常用的游离氨基酸测定方法。
其原理是利用色谱柱将茶叶样品中的游离氨基酸分离出来，再通过检测器测定其浓度。
具体步骤如下：（1）样品制备：将茶叶样品粉碎并称取适量，加入适量溶剂提取游离氨基酸。
（2）色谱柱分离：将提取得到的茶叶样品溶液注入色谱柱进行分离，根据游离氨基酸的特性选择合适的色谱柱。
（3）浓度测定：通过色谱柱后，游离氨基酸会进入检测器，根据吸光度或荧光强度等参数测定游离氨基酸的浓度。
2. 高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分离和测定游离氨基酸的方法。
其原理是利用高效液相色谱仪将茶叶样品中的游离氨基酸分离出来，并通过检测器测定其浓度。
具体步骤如下：（1）样品制备：将茶叶样品粉碎并称取适量，加入适量溶剂提取游离氨基酸。
（2）色谱柱分离：将提取得到的茶叶样品溶液注入高效液相色谱仪进行分离，根据游离氨基酸的特性选择合适的色谱柱。
（3）浓度测定：通过高效液相色谱柱后，游离氨基酸会进入检测器，根据吸光度或荧光强度等参数测定游离氨基酸的浓度。
3. 光谱法光谱法是一种简单快速的游离氨基酸测定方法。
其原理是利用游离氨基酸在特定波长下的吸收特性来测定其浓度。
具体步骤如下：（1）样品制备：将茶叶样品粉碎并称取适量，加入适量溶剂提取游离氨基酸。
实验一离氨基酸含量的测定(实验报告用)
实验一 食品中游离氨基酸含量的测定实验原理：电位滴定法测定酱油中氨基酸态氮的含量。
氨基酸有氨基及羧基两性基团，它们相互作用形成中性内盐，利用氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出来酸性，用氢氧化钠标准溶液滴定后定量，根据酸度计指示pH 值，控制终点。
实验试剂：1、甲醛（36%）：应不含有聚合物。
2、氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L] 实验仪器：1、酸度计；2、20mL 移液管；3、10mL 微量滴定管；4、100mL 容量瓶；5、250mL 烧杯；6、磁力搅拌器； 实验步骤：1、吸取5mL 试样，置于100mL 容量瓶中，加水至刻度，混匀，备用。
2、吸取上述稀释液20.00mL V 3置于200mL 烧杯中，加水60mL 水，插入电极，开动磁力搅拌器，用氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH)=0.050mol/L]滴定至酸度计指示pH8.2，记录消耗氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]的毫升数，（可计算总酸含量）。
（使中性内盐分离成为氨基酸）3、向上述溶液中准确加入10.0mL 甲醛溶液，混匀。
再用氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]继续滴定至pH9.2，记录加入甲醛后滴定所消耗氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]的毫升数V 1。
重复做3组平行样。
4、取80mL 水，先用氢氧化钠标准滴定溶液滴定至酸度计指示pH8.2，再加入10.0mL 甲醛溶液，混匀，再用氢氧化钠标准滴定溶液滴定至pH9.2，记录加入甲醛后滴定所消耗氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数V 2。
重复做3组平行样。
数据记录与计算（一）数据记录：见下表项目样品 空白 加入甲醛后滴定所消耗 氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数标准氢氧化钠溶液浓度（mol/L ）（二）结果计算试样中氨基酸态氮的含量为：()1001005014.0321⨯⨯⨯⨯-=V C V V X式中：X —试样中氨基酸态氮的含量，g/100 mL ；V 1—测定用试样稀释液加入甲醛后消耗标准碱液的体积，mL ； V 2—测定空白试验加入甲醛后消耗标准碱液的体积，mL ； C —氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L ； V 3—试样稀释液取用量，mL ；0.014—与1.00 mL氢氧化钠标准滴定溶液相当的氮的质量。
游离a-氨基酸含量的测定
2、标准曲线制作： 在6支比色管中，按下表顺序与用量加入试剂：
比色管号 V标/mL V缓/mL V茚/mL 1 0 3.00 2.00 2 0.50 2.50 2.00 3 0.10 2.00 2.00 4 1.50 2.00 2.00 5 2.00 2.00 2.00 6 2.50 2.00 2.00
实验内容
1、样品中游离a－氨基酸的提取： 称1.0g剪碎的新鲜蘑菇放入研钵中，加入2mL
蒸馏水，研磨成匀浆，再转入7号25mL比色管，然
后用6mL蒸馏水分三次洗涤研钵，分别转入7号比色 管，再置于80℃水浴槽加热10分钟后用冷水冷却，
再用蒸馏定容至25mL。摇匀后，过滤，将滤液置于
8号比色管以备用。
2、加抗坏血酸可减少氧气对显色影响，但用量要
严格控制。 3、蒸馏水最好是无氨蒸馏水。
4、水合茚三酮不要溅到皮肤上。
思考题
1、简述721型分光光度计的操作步骤。 2、实验过程为何使用无氨蒸馏水。
抗坏血酸（滴）
氨基氮ug/管 吸光度
4
0
4
12.5
4
25.0
4
37.5
4
50.0
4
62.5
摇匀后，将上述6支比色管置于80℃水浴槽加热
15分钟后用冷水冷却，再用缓冲液定容至25mL，摇匀。
3、样品含量的测定
从8号比色管移取1.00mL溶液于9号25mL比色
管，在分别加入3.00mL缓冲溶液、2.00mL茚三酮 溶液和4滴抗坏血酸，摇匀后置于80℃水浴槽加热 15分钟后用冷水冷却，再用缓冲液定容至25mL， 摇匀。以1号比色管溶液为参比液测出样品的吸光
度，从标准曲线上查到对应的氨基氮的含量，按下
公式计算样品中氨基氮的含量：
水溶肥 游离氨基酸含量测定标准
水溶肥游离氨基酸含量测定标准
水溶肥是一种现代化肥料，它可以直接溶解在水中，提供给植
物所需的养分。
其中，游离氨基酸是水溶肥中的重要成分之一，对
植物的生长发育起着重要作用。
因此，准确测定水溶肥中游离氨基
酸的含量，对于合理施肥、提高作物产量和质量具有重要意义。
为了保证水溶肥中游离氨基酸含量的准确性，制定了相应的测
定标准。
首先，需要选择合适的测定方法，常见的有高效液相色谱法、气相色谱法、紫外分光光度法等。
然后，根据标准操作程序，
进行样品的前处理、提取和分析，确保测定结果的准确性和可靠性。
同时，还需要建立相应的质控体系，包括仪器设备的校准、标准品
的准备和实验室操作规范等，以确保测定结果的准确性和可靠性。
标准的制定和实施，不仅有利于水溶肥生产企业提高产品质量，还可以为农民提供科学合理的施肥指导，促进农业生产的可持续发展。
因此，加强对水溶肥游离氨基酸含量测定标准的研究和推广应用，具有重要的现实意义和深远的社会影响。
希望相关部门和科研
机构能够进一步加强标准的制定和实施，推动水溶肥行业的发展，
为农业生产提供更好的支持。
实验植物组织游离氨基酸总量测定柯上网材料
缩合生成Ruhemans紫。
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共热、微酸性
《植物生理生化实验A》
福建农林大学
24％
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《植物生理生化实验A》
仪器设备：
分光光度计； 电子天平； 恒温水浴；100ml容量瓶； 玻璃研钵；移液枪；20ml具塞刻度试管; 普通试管；三角 瓶；玻璃漏斗等。
谢等有一定意义 。
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测定意义：
《植物生理生化实验A》
作作作为为为福营施逆建农养肥境林品的生大学质生理的理指指指标标标 。。。。。。？
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目的要求：
《植物生理生化实验A》
1、了解植物体内氨基酸测定的意义； 2、了解氨基酸测定的方法； 34、、其掌进操握一茚步作三熟要酮练点分试;剂光显福光色建度法农计测林的定大游使学离用氨方基法酸。总量的基本原理及 5、比较不同萌发程度的水稻种子游离氨基酸总量的差异。
2．标准曲线的绘制及样品测定： 取10支20mL刻度试管，按下表进行操作。
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《植物生理生化实验A》
实验步骤：
表1 游离氨基酸标准曲线制作及样品测定
试管
试
编号
剂 (毫升)
样品提取液
标准氨基酸溶液 （5μg/ml）
无氨蒸馏水(ml)
水合茚三酮(ml) 0.1%抗坏血酸(ml)
什么要加入抗坏血酸溶液？
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《植物生理生化实验A》
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游离氨基酸测定方法
游离氨基酸测定方法嘿，朋友们！今天咱就来聊聊游离氨基酸测定方法。
这可真是个有意思的事儿呢！你想想看，那小小的游离氨基酸，就像一群小精灵，在各种物质里蹦跶来蹦跶去。
咱要想抓住它们，搞清楚它们的情况，那可得有点本事和窍门哟！先来说说茚三酮比色法吧，这就好比是个神奇的“照妖镜”。
把样本往那里面一放，经过一系列操作，那些游离氨基酸就会现形啦！颜色一变，咱就能知道个大概啦。
是不是很神奇呢？就好像变魔术一样呢！还有离子交换色谱法，这就像是给氨基酸们来了一场特殊的“选美比赛”。
不同的氨基酸在这个过程中会按照各自的特点排好队，然后咱就能清楚地分辨出它们来啦。
这多有意思呀！分光光度法呢，就像是给游离氨基酸们拍了一张特别的“照片”。
通过对这张“照片”的分析，咱能了解到它们的好多信息呢。
咱在做这些测定的时候可得细心点哦，就像呵护宝贝一样。
要是不小心弄错了一步，那可就像在森林里迷了路，找不到那些小精灵啦。
而且呀，各种方法都有它的特点和适用范围，咱得根据实际情况来选择，可不能瞎搞哟！就像你不能穿着拖鞋去跑步比赛一样，得选对合适的装备呀！那有人可能会问啦，为啥要费这么大劲去测这些游离氨基酸呀？嘿，这用处可大了去啦！比如说在食品领域，咱能知道食物的营养好不好呀；在医学领域，能帮助医生诊断疾病呢。
这就好像是给我们打开了一扇了解世界的窗户，让我们能看到那些平时看不到的东西。
总之呢，游离氨基酸测定方法就像是一把神奇的钥匙，能帮我们打开知识的大门，让我们对这个世界有更深入的了解。
咱可得好好掌握这些方法，让它们为我们服务呀！所以呀，大家可别小瞧了这些看似普通的测定方法哦，它们可有着大能量呢！。
蘑菇中游离氨基酸含量的测定实验报告
蘑菇中游离氨基酸含量的测定实验报告一、引言在食品营养学中，游离氨基酸是评价食品蛋白质质量的重要指标之一。
游离氨基酸的含量可以反映食品的蛋白质水平，也可以为食品品质的评价提供依据。
蘑菇是一种常见的食材，其营养价值较高，其中游离氨基酸含量的测定对于评价蘑菇的蛋白质质量非常重要。
本实验旨在通过对蘑菇中游离氨基酸的测定，探究蘑菇的蛋白质质量，并为进一步研究蘑菇的营养价值提供参考。
二、实验方法1. 实验材料准备•蘑菇样品：取新鲜的蘑菇作为实验样品。
•无水无氧乙酸：用于提取蘑菇中的游离氨基酸。
•pH 2.2缓冲液：用于调节提取液的酸碱度。
2. 实验步骤1.将蘑菇样品洗净并切碎成小块。
2.取20克蘑菇样品加入100 mL pH 2.2缓冲液中。
3.加入适量的无水无氧乙酸，使pH值控制在2.2左右。
4.进行超声波提取，提取时间为30分钟。
5.将提取液离心，收集上清液。
6.将上清液过滤，得到待测样品。
3. 游离氨基酸含量测定1.取1 mL 待测样品加入氨基酸分析仪样品瓶中。
2.将样品瓶放入氨基酸分析仪，按照仪器操作说明进行测定。
3.记录并计算游离氨基酸的含量。
三、实验结果根据实验测定，蘑菇中游离氨基酸含量为：•脯氨酸：5.2 mg/g•缬氨酸：3.8 mg/g•苏氨酸：2.5 mg/g•赖氨酸：1.9 mg/g•…四、实验讨论根据实验结果可以看出，蘑菇中游离氨基酸的含量较高，表明蘑菇具有较高的蛋白质质量。
其中以脯氨酸和缬氨酸的含量最高，说明蘑菇富含这两种氨基酸。
与其他食材相比，蘑菇中游离氨基酸的含量可能有所差异。
这可能是由于蘑菇的生长环境、品种等因素所致。
进一步的研究可以探究不同蘑菇品种中游离氨基酸含量的差异。
游离氨基酸的含量对于食物的品质和营养价值具有重要的影响。
蘑菇作为一种营养价值较高的食材，其富含的游离氨基酸有助于提供人体所需的必需氨基酸，并具有重要的保健作用。
五、结论通过本实验的测定，我们得出了蘑菇中游离氨基酸的含量，并得出以下结论：1.蘑菇中富含游离氨基酸，特别是脯氨酸和缬氨酸。
植物组织中游离氨基酸总量的测定
【试剂】1、 3%茚三酮试剂称3g茚三酮用95%乙醇溶解定容到100ml容量瓶里,贮于棕色瓶中.此试剂应放在冷凉处,不宜久放,使用期约10天.2、氰酸盐缓冲液（按以下方法配制）：（1）NaCN贮备液0.01mol/L（490mg/L）.（2）醋酸缓冲液：称360g醋酸钠（含三分子结晶水）溶于约300ml无氨蒸馏水中,加66.67ml 冰醋酸再用无氨蒸馏水稀释至1L.取溶液（1）20ml,用溶液（2）定容到1L.3、标准氨基酸精确称取在80℃下烘干的亮氨酸13.1mg（或α-丙氨酸8.9mg）溶于10%的异丙醇中,并在100ml容量瓶中用10%异丙醇稀释至刻度,混匀, 即为1mmol/L的标准氨基酸贮备液,置冰箱中保存.为了制备工作液,可取贮备液与等量无氨蒸馏水混合,此液浓度为0.5mmol/L,即1ml含氨基酸0.5μmol,或氨基氮7μg.4、 95%乙醇；5、异丙醇（分析纯）.【操作步骤】1. 标准曲线的制作取20ml刻度试管18支,按下表15-1加入各试剂.加完试剂后混匀,在100℃水浴中加热12min（加热时封口）,取出在冷水中迅速冷却,立即于每管中加入5ml 95%乙醇,塞好塞子,猛摇试管,使加热时形成的红色产物被空气中的氧所氧化而褪色,此时溶液呈蓝紫色.于570nm波长下测其光密度（以空白管为参比）,以氨基酸浓度为横坐标,光密度为纵坐标,绘制标准曲线,求出直线方程.表15-1 各试管加入试剂量2. 样品提取选取有代表性的植物叶片（或其它组织）,洗净擦干,剪碎混匀,迅速称取0.10~0.20g（视氨基酸含量多少而定）,共称3份,分别加入20ml刻度试管中,再加蒸馏水10ml盖塞（或系上塑料薄膜）,置沸水浴中20min以提取游离氨基酸,到时取出在自来水中冷却,把上清液滤入25ml容量瓶中,之后再往试管中加5ml蒸馏水,置沸水浴上再加热10min,过滤并反复冲洗残渣,最后定容至刻度,摇匀.3. 样品测定另取4支洁净干燥的试管,其中3支分别加入0.5ml提取液,另一支加0.5ml蒸馏水,然后在上述4支试管中分别加入NaCN缓冲液、水合茚三酮各 0.5ml,加完试剂后盖塞,置沸水浴上加热12min,冷却后,再分别加5ml 95%乙醇,摇匀,以空白作参比,在波长570nm下测其光密度.根据光密度查标准曲线（或用回归方程计算）即可求出提取液中氨基酸的浓度.4. 计算游离氨基酸含量式中 C-由直线方程计算的值,即0.5ml试样中氨基酸的微摩尔数（μmol）；V-样品提取液经稀释后的总体积（ml）；W-样品重（g）.测定结果按表15-2记录.表15-2 游离氨基酸总量测定记载表测定日期：。
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总游离氨基酸测定（完整版）
实验原理：游离氨基酸的游离氨基可与水合茚三酮作用，产生蓝紫色的化合物二酮茚－二酮茚胺，产物的颜色深浅与游离氨基酸含量成正比，用分光光度计在570nm下测其含量。
因蛋白质中的游离氨基酸也会产生同样反应，在测定前必须用蛋白质沉淀剂将其除掉.
仪器与用具：100ml容量瓶；漏斗；三角瓶研钵；刻度吸管：0.1ml×1、1ml×2、2ml×2、5ml×1;沸水浴；具塞刻度试管20ml×10;分光光度计.
一、试剂
1.水合茚三铜：称重结晶的茚三铜0.6g,装入烧杯，加入正丙醇15ml，使其溶
解加入正丁醇30 ml、乙二醇60 ml、乙酸-乙酸钠缓冲液（pH=5.4）9 ml,混匀，棕色瓶冰箱保存，10天内有效。
2.乙酸-乙酸钠缓冲液（pH5.4）：称取化学纯乙酸钠54.4g，加入无氨蒸馏水
100 ml，电炉加热至沸，使其体积减半，冷却后加冰乙酸30 ml，加蒸馏水定容至100 ml。
3.氨基酸标准溶液：精确称取80℃烘干至恒重的亮氨酸0.0234g溶于10％异
丙醇并定容至50ml。
取此液5ml蒸馏水稀释到50ml，即为5μg/ml氨基酸标液。
4.0.1%抗坏血酸：称取0.050g抗坏血酸，溶于50 ml蒸馏水中，即配即用。
5.10％乙酸
二、标准曲线制备
加塞子密封于沸水中加热15分钟，取出后用冷水迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红色被空气逐渐氧化褪去，待呈现兰紫色时，用60％乙醇定容至20ml，摇匀于570nm波长下比色。
以吸光
度为纵坐标，氨基氮ug数为横坐标，绘标准曲线
三、实验步骤：
1.烟末0.5g于研钵中加入5 ml10%乙酸，研磨匀浆后用蒸馏水定容
100 ml，用滤纸过滤到三角瓶中备用。
2.1ml滤液加入到20ml 干燥试管中，加1 ml蒸馏水，水合茚三铜
3ml, 0.1%抗坏血酸0.1ml, 加塞子密封于沸水中加热15分钟，取出后用冷水迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红色被空气逐渐氧化褪去，待呈现兰紫色时，用60％乙醇定容至20ml，摇匀于570nm波长下比色。
四. 计算：
求三重复的平均值，由标准曲线得知各样的氨基酸ug数，代入公式计算。
氨基酸含量（mg/g干样）=｛氨基酸ug数×（提取液总体积/测定体积）｝/（样品g数×1000）。