脱氧核糖核酸酶酶活力检测方法》标准编制说明
标准_核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶纯度检测方法(编制说明)
标准_核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶纯度检测方法（编制说明）标准_核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶纯度检测方法(编制说明)核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶纯度检测方法编制说明(征求意见稿)一、任务来源本国家标准的制定任务列入国家标准化管理委员会《二О一五年国家标准制修订项目》，项目编号“20154060-T-424”。
本项任务由中国标准化研究院提出并归口，定于2016年完成。
本标准起草工作组由中国标准化研究院、浙江工商大学、河北农业大学等单位共同组成。
二、目的及意义核酸分解的第一步是水解核苷酸之间的磷酸二酯键，在高等动植物中都有作用于磷酸二酯键的核酸酶，其本质均是蛋白质。
但是不同来源的核酸酶，其专一性、作用方式都有所不同。
有些核酸酶只能作用于底物RNA，通常称为核糖核酸酶(RNase)，有些核酸酶只能作用于底物DNA，称为脱氧核糖核酸酶(DNase)，核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶统称为核酸酶(Nuclease)。
核糖核酸酶是一类广泛存在于动植物体内的核酸水解酶，从20世纪60年代以来一直作为一种模型蛋白被普遍用于分子生物学研究。
RNase家族包括RNase A、RNase B、RNase C、RNase H、S-RNase、RNase P、RNase T等，主要生理功能是控制细胞内RNA的种类与数量分布，除参与核糖核酸转录后的剪切、修饰和降解等过程外，还与某些植物的自交不亲和性、器官发生、宿主的防御机制、控制肿瘤血管生成、杀灭肿瘤细胞及抑制病毒复制等有关。
其中核糖核酸酶A一般被认为是核糖核酸酶的典型代表，分子量约为13.64 kDa，通过X射线衍射和质谱分析结果表明，它的空间结构呈肾形分布，见图1。
脱氧核糖核酸酶是将单链或双链DNA同等程度地随机分解，生成具有5'-P末端寡核苷酸的脱氧核糖核酸内切酶。
脱氧核糖核酸酶的主要用途包括制备不含DNA的RNA样品;RT-PCR反应前RNA样品中去除基因组DNA等可能的DNA污染;体外T7, T3,,1/15,标准_核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶纯度检测方法(编制说明) SP6等RNA Polymerases催化的RNA转录后去除DNA模板;DNase I Foot printing 研究DNA-蛋白质相互作用;缺口平移(Nick translation);产生DNA随机片段文库;细胞凋亡TUNEL检测中部分剪切基因组DNA作为阳性对照等。
PfAgo核酸内切酶活性检测方法-最新国标
Pf Ago核酸内切酶活性检测方法1范围本文件描述了Pf Ago核酸内切酶活性的检测方法。
本文件适用于Pf Ago核酸内切酶活性的检测。
2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T191-2008包装储运图示标志GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法。
3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
3.1Pf Ago核酸内切酶Pf Ago endonucleasePf Ago核酸内切酶是一种依托向导DNA序列（guide DNA，gDNA）与靶核酸序列碱基互补配对，继而特异识别并剪切靶核酸的核酸内切酶。
3.2Pf Ago核酸内切酶活性单位activity unit of Pf Ago endonuclease在25μL反应体积中，95℃条件下反应，每分钟剪切0.1nmol单链靶核酸DNA所需的Pf Ago蛋白量，定义为一个活性单位(U)。
4原理Pf Ago核酸内切酶是一种依托向导DNA序列（guide DNA，gDNA）与靶核酸序列碱基互补配对，继而特异识别并剪切靶核酸的核酸内切酶，其可以在5’磷酸化的单链gDNA(大于15nt)引导下剪切与gDNA互补的单链DNA底物，从而发挥核酸内切酶作用。
剪切位点常发生在底物与gDNA互补序列的第10位和11位之间的磷酸二酯键处。
根据Pf Ago核酸内切酶的作用原理，在25μL反应体积，95℃反应条件下，单位时间内消耗0.1nmol单链靶核酸DNA的Pf Ago蛋白量来进行活性测定。
5试剂或材料5.1水符合GB/T6882规定的RNase-free超纯水。
5.21mol/L Tris-HCl（pH8.0）按配制所需量，用分析天平称取Tris12.114g，加入80mL超纯水中，充分混匀后用6M盐酸调至pH值8.0±0.05，加入超纯水定容至100.0mL，并用0.22μm微孔滤膜对其过滤，存储于2～8℃，储存期限为24个月。
udg酶标准
udg酶标准UDG酶标准是一种用于检测DNA污染的重要工具。
UDG（Uracil-DNA Glycosylase）是一种能够识别和剪切含有尿嘧啶（U）的DNA分子的酶。
在PCR反应中，如果使用的DNA模板中含有未被完全去除的前一次PCR产物或外源DNA污染物，将会对后续实验产生负面影响。
因此，准确测定和控制PCR反应中的DNA污染是非常重要的。
UDG酶标准的目的是通过定量测定PCR反应中的DNA污染程度，为后续的实验提供准确可靠的数据。
UDG酶标准的使用方法非常简便，下面将介绍一种常用的实验步骤。
首先，准备实验所需的材料和试剂。
包括PCR反应液、UDG酶标准、逆转录酶、引物和试管。
确保所有试剂的质量和纯度都符合实验要求。
接下来，进行PCR反应。
根据实验需要设计好PCR反应的引物和温度条件，将待测的DNA模板与引物一起加入PCR反应液中，进行PCR扩增。
扩增结束后，将PCR产物取出，加入逆转录酶和逆转录缓冲液，进行反转录反应。
这一步的目的是将RNA转化为cDNA，以便后续的定量测定。
反转录反应完成后，加入UDG酶标准和UDG缓冲液。
UDG酶标准是一种已知浓度的UDG酶，它能够切割含有尿嘧啶的DNA分子。
根据UDG酶标准的浓度，可以推断出PCR反应中的DNA污染程度。
将反应混匀后，孵育一段时间，然后加入酶停止液停止反应。
将反应液离心，将上清液转移到新的试管中，准备进行下一步的测定。
最后，利用合适的测定方法，如荧光定量PCR或比色法，测定PCR反应中的DNA污染程度。
根据UDG酶标准的浓度，可以通过测定样品的信号强度，计算出样品中的DNA污染程度。
UDG酶标准的应用有助于准确评估PCR反应中的DNA污染程度，为后续实验提供可靠的数据基础。
通过合理的实验设计和标准操作流程，可以有效避免实验结果的偏差和误差，提高实验的准确性和可重复性。
总之，UDG酶标准是一种重要的实验工具，用于定量测定PCR反应中的DNA 污染程度。
DNase I 脱氧核糖核酸酶
ü 必须在加热之前加入终止溶液（20 mM EGTA）以防止金属（Mg/Ca）离子催化水解 RNA。在 70°C 加热 10 分钟使 DNA 酶 I 和 RNA 变性。
DNase 活性。
质检结果： 泳道 1：Marker 泳道 2：阴性对照（无 DNase I） 泳道 3：DNA + 1 单位 DNA 酶 I. 泳道 4：DNA + 2 单位 DNA 酶 I. 泳道 5：DNA + 3 单位 DNA 酶 I.
Sangon 泳道1 泳道 2 泳道 3 泳道 4 泳道 5
DNase I 脱氧核糖核酸酶
产品编号 : A610099 包装规格：250 MG / 1 G / 5 G
产品说明: 脱氧核糖核酸酶 I（A610099）是来源于牛胰腺的核酸内切酶，在二价阳离子存在的情况下会降解双链 DNA，生成 3'-OH
寡核苷酸。Mg2+存在条件下，DNase I 可以剪切双链 DNA 位点形成切口，而在 Mn2+存在条件下，DNase I 可以剪切 DNA 的 双链。
抑制剂：EGTA；EDTA；盐浓度> 100 mM 会降低 DNase 活性。
io 分子量：31,000 道尔顿。 B 必备：Ca2+和 Mg2+或 Mn2+
来源：牛胰腺。
n 储存温度：-20°C 储存。避免频繁的温度变化。请参阅产品信息标签上的有效期。 o 终止溶液：20 mM EGTA（pH 8.0）。
脱氧核糖核酸酶活力检测方法
脱氧核糖核酸酶活力检测方法编制说明（征求意见稿）一、任务来源本国家标准的制定任务列入国家标准化管理委员会《二О一五年国家标准制修订项目》，项目编号“-T-424”。
本项任务由中国标准化研究院提出并归口，定于2016年完成。
本标准起草工作组由中国标准化研究院、浙江工商大学、河北农业大学等单位共同组成。
二、标准制定的背景及意义核酸分解的第一步是水解核苷酸之间的磷酸二酯键，在高等动植物中都有作用于磷酸二酯键的核酸酶，其本质是蛋白质。
不同来源的核酸酶，其专一性、作用方式都有所不同。
有些核酸酶只能作用于核糖核酸（RNA），称为核糖核酸酶（RNase），有些核酸酶只能作用于脱氧核糖核酸（DNA），称为脱氧核糖核酸酶（DNase），核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶统称为核酸酶（Nuclease）。
脱氧核糖核酸酶是将单链或双链DNA同等程度地随机分解，生成具有5'-P 末端寡核苷酸的脱氧核糖核酸内切酶。
脱氧核糖核酸酶具有重要的功能，目前主要用途包括制备不含DNA的RNA样品；RT-PCR反应前RNA样品中去除基因组DNA等可能的DNA污染；体外T7, T3, SP6等RNA Polymerases催化的RNA 转录后去除DNA模板；DNase I Foot printing研究DNA-蛋白质相互作用；缺口平移（Nick translation）；产生DNA随机片段文库；细胞凋亡TUNEL检测中部分剪切基因组DNA作为阳性对照等。
脱氧核糖核酸酶I一般被认为是脱氧核糖核酸酶的典型代表，分子量约32 kDa。
由于脱氧核糖核酸酶具有重要的生理学作用，引起了国内外广泛的关注。
目前已经商业化生产和销售，但是作为脱氧核糖核酸酶的重要质量指标之一的酶的活力，根据文献调研显示相应的测定方法目前仍然没有形成统一的检测和分析标准，各生产和销售厂商对其活力的质量控制各自定义，同一种酶选用不同的活力测定方法结果显示大小差异显著。
这实际上已经成为脱氧核糖核酸酶产品可持续发展的瓶颈问题，给消费者造成了极大的不便。
检测脱氧核糖核酸酶的DNA探针、试剂盒和方法[发明专利]
![检测脱氧核糖核酸酶的DNA探针、试剂盒和方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/6884b429fe00bed5b9f3f90f76c66137ee064fc3.png)
(10)申请公布号(43)申请公布日 (21)申请号 201610076852.8(22)申请日 2016.02.03C12Q 1/68(2006.01)C12Q 1/34(2006.01)C12N 15/11(2006.01)(71)申请人广州市锐博生物科技有限公司地址510663 广东省广州市科学城科学大道182号创新大厦C3-13(72)发明人张必良 刘霭珊 曹亮克雷格·梅洛(74)专利代理机构广州华进联合专利商标代理有限公司 44224代理人万志香 胡杰(54)发明名称检测脱氧核糖核酸酶的DNA 探针、试剂盒和方法(57)摘要本发明提供一种检测脱氧核糖核酸酶活性的DNA 探针、试剂盒和方法，采用发夹状DNA 探针为脱氧核糖核酸酶的底物，探针的两端或内部分别标记上荧光基团及对应的荧光淬灭基团。
当探针结构完整时，荧光基团与淬灭基团位于同一个DNA 分子上，荧光基团被激发的荧光被淬灭基团吸收，荧光基团不发出荧光；而当探针被脱氧核糖核酸酶降解后，荧光基团与淬灭基团分离，荧光基团能正常发出荧光。
采用实时定量PCR 仪检测反应体系中发出的荧光强度，即可判断反应体系中是否存在脱氧核糖核酸酶。
本方法可广泛用于生物制品中脱氧核糖核酸酶残留的质量检测，或用于脱氧核糖核酸酶定量测定。
(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书11页序列表2页 附图5页CN 105648062 A 2016.06.08C N 105648062A1.一种DNA探针，其特征在于,其包含有一个茎环结构，且2个末端或内部分别连接有能量供体基团和能量受体基团，能量供体基团和能量受体基团之间能进行能量转移,所述DNA 探针的碱基长度为15-50个核苷酸，且包含一个能被DNase切割的位点，被降解后的探针的能量供体基团和能量受体基团在不同的探针片段上；所述茎环结构中，其茎结构包括分别位于探针两端的5～15bp的回文互补序列，其环结构包括长度为5～20nt的核苷酸序列，探针退火后形成茎环结构，两个回文互补部分Tm值大于35℃。
乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸定量检测试剂注册技术审查指导原则
（五）主要原材料研究资料 应提供主要原材料如引物、探针、酶、标准品或企业参考品等的选 择与来源、制备过程、质量分析和质控标准等的相关研究资料。若主要 原材料为企业自己生产，其生产工艺必须稳定；如主要原材料源于外购， 应提供的资料包括：供货方提供的质量标准、出厂检定报告，以及该原 材料到货后的质量检验资料。 1.企业内部参考品的制备、定值过程。建议采用灭活病毒的血清/ 血浆建立参考品，不宜使用质粒。 2.核酸分离/纯化组分（如有）的主要组成、原理介绍及相关的验证 资料。 3.聚合酶链反应（PCR）组分的主要材料（包括引物、探针、内标、 各种酶及其他主要原料）的选择、制备、质量标准及实验研究资料，主 要包括以下内容： （1） 脱氧三磷酸核苷（dNTP） 核酸的组成成分，包括：dATP、dUTP、dGTP、dCTP 和 dTTP，对纯度、 浓度、保存稳定性等的详细验证资料。 （2）引物 由一定数量的 dNTP 构成的特定序列，通常采用 DNA 合成仪人工合成， 合成后经聚丙烯酰胺凝胶电泳或其他适宜方法纯化，并对序列准确性、
细胞荧光定量脱氧核糖核酸多聚酶链式
细胞荧光定量脱氧核糖核酸多聚酶链式脱氧核糖核酸多聚酶链式反应，简称PCR，是一种用于扩增DNA片段的生物技术方法。
它是由美国生物学家基利斯和萨利斯在1983年发明的，也因此两人获得了1993年的诺贝尔化学奖。
PCR技术通过酶的作用，可以在非常短的时间内扩增出特定DNA片段，使其数量呈指数级增加。
这项技术的发明，极大地加速了分子生物学的研究速度，也被广泛应用于医学诊断、犯罪科学、考古学等领域。
PCR技术是如何实现DNA片段的扩增的呢？它主要依赖于三个温度调节步骤。
首先是变性步骤，通过高温使DNA双链变性为两个单链；接着是退火步骤，降低温度时引物（两个特定序列的DNA）结合到目标DNA上；最后是延伸步骤，通过DNA聚合酶酶作用，合成新的DNA链。
通过这三个步骤反复循环，可以将目标DNA段扩增。
而在PCR扩增的实验中，需要对反应结果进行定量检测，这就需要用到细胞荧光定量技术。
在PCR反应结束后，通常是通过在洗脱物中加入特定标记的荧光探针，通过与目标DNA结合产生荧光信号。
然后利用光学分光度计或实时荧光定量PCR仪器来测量这些荧光信号，并且以此确定DNA的含量。
通过这项技术，可以非常准确地确定PCR 扩增出的DNA量，其灵敏度和精度非常高。
细胞荧光定量技术的应用不仅局限于PCR扩增反应，它还广泛应用于细胞培养、酶活性测定、蛋白质浓度检测等领域。
目前，基于PCR 技术的荧光定量技术已经成为分子生物学和临床实验室中广泛应用的一种方法。
不仅如此，PCR技术结合细胞荧光定量技术在微生物检测、临床诊断、基因测序等领域也具有重要的应用价值。
在临床诊断中，细胞荧光定量技术的应用使得疾病的诊断更为精准。
比如，在病毒感染的检测中，可以利用PCR技术扩增病毒RNA或DNA，然后通过细胞荧光定量技术准确地测量病毒的含量，从而确定感染情况。
这为病毒性疾病的早期预警和治疗提供了重要的参考数据。
另外，在基因测序中，PCR扩增的DNA片段，通过细胞荧光定量技术，可以用来确定DNA浓度，为后续的测序工作提供了重要的数据支持。
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脱氧核糖核酸酶活力检测方法编制说明（征求意见稿）一、任务来源本国家标准的制定任务列入国家标准化管理委员会《二О一五年国家标准制修订项目》，项目编号“20154057-T-424”。
本项任务由中国标准化研究院提出并归口，定于2016年完成。
本标准起草工作组由中国标准化研究院、浙江工商大学、河北农业大学等单位共同组成。
二、标准制定的背景及意义核酸分解的第一步是水解核苷酸之间的磷酸二酯键，在高等动植物中都有作用于磷酸二酯键的核酸酶，其本质是蛋白质。
不同来源的核酸酶，其专一性、作用方式都有所不同。
有些核酸酶只能作用于核糖核酸（RNA），称为核糖核酸酶（RNase），有些核酸酶只能作用于脱氧核糖核酸（DNA），称为脱氧核糖核酸酶（DNase），核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶统称为核酸酶（Nuclease）。
脱氧核糖核酸酶是将单链或双链DNA同等程度地随机分解，生成具有5'-P 末端寡核苷酸的脱氧核糖核酸内切酶。
脱氧核糖核酸酶具有重要的功能，目前主要用途包括制备不含DNA的RNA样品；RT-PCR反应前RNA样品中去除基因组DNA等可能的DNA污染；体外T7, T3, SP6等RNA Polymerases催化的RNA 转录后去除DNA模板；DNase I Foot printing研究DNA-蛋白质相互作用；缺口平移（Nick translation）；产生DNA随机片段文库；细胞凋亡TUNEL检测中部分剪切基因组DNA作为阳性对照等。
脱氧核糖核酸酶I一般被认为是脱氧核糖核酸酶的典型代表，分子量约32 kDa。
由于脱氧核糖核酸酶具有重要的生理学作用，引起了国内外广泛的关注。
目前已经商业化生产和销售，但是作为脱氧核糖核酸酶的重要质量指标之一的酶的活力，根据文献调研显示相应的测定方法目前仍然没有形成统一的检测和分析标准，各生产和销售厂商对其活力的质量控制各自定义，同一种酶选用不同的活力测定方法结果显示大小差异显著。
这实际上已经成为脱氧核糖核酸酶产品可持续发展的瓶颈问题，给消费者造成了极大的不便。
鉴于此，开展脱氧核糖核酸酶活力检测方法标准的制定，具有重要的现实意义，可有助于规范市场上此类产品的乱象，切实保障消费者的使用。
经济全球化浪潮使标准竞争上升到了战略地位，特别是进入21世纪以后，生物技术和生物产品发展迅速，发达国家纷纷制定包括脱氧核酸酶等在内的各自的标准化发展战略，以应对因经济全球化对自身带来的影响。
此外，此类标准的制定也同样满足《国家中长期科学和技术发展规划纲要（2006-2020年）》中明确把实施技术标准战略作为我国科技发展的两大战略之一的目标，有助于保障国家科学发展、社会和谐。
三、标准制定原则及主要内容（一）标准编制原则标准的制定过程中采用文献调查法、专家座谈法、凝胶电泳方法等多种研究方法，方法科学先进、过程周密严谨、数据真实可信、结果明确。
本标准是为相关组织脱氧核糖核酸酶活性检测提供技术支撑，考虑到生产、监管等不同需求，在方法选择上，主要基于现状、现有成熟的技术以及结果及验证基础确定的，因此实用性较强。
（二）标准制订主要依据1、标准编写遵循GB1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》的有关要求。
2、标准编写内容参考了与脱氧核糖核酸酶活性检测相关文献，标准参照了GB/T 6379.1-2004《测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）》第1部分总则与定义和GB/T 6379.2-2004《测量方法与结果的准确度》第2部分确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法。
（三）本标准的主要内容本标准主要包括以下7个部分：（1）范围；（2）术语和定义；（3）原理；（4）仪器设备及器具；（5）主要试剂；（6）分析步骤；（7）结果分析等。
四、主要工作过程1、组成标准起草小组根据国家制修订有关程序和要求，2015年10月下旬，中国标准化研究院主持召开了《脱氧核糖核酸酶活性检测》国家标准制定研讨会。
会上，组成了标准起草工作组，明确了任务要求，安排了工作进度，成立了标准起草工作小组，会议研究讨论了《脱氧核糖核酸酶活性检测》初稿，对起草小组在标准起草过程中的一些思考及难点问题进行了深刻讨论，各单位代表就标准内容及方法选择进行了讨论。
2、开展相关调研情况脱氧核糖核酸酶活性检测标准属于生物产业领域的标准，是支撑生产方、第三方组织开展产品评价的技术依据。
起草工作小组首先针对生产和检测开展了大量的调研工作。
从满足实际检测需要出发，开展了国内外相关资料的收集和确认工作，资料的检索和信息的收集过程中，分析比较了大量的国内外文献方法，在符合标准化工作规划和标准化计划要求的基础上，初步形成了检测方法的制定思路，期间参与人员进行了多次交流和讨论。
3、标准起草完善过程在广泛调查研究的基础上，标准起草单位组织相关技术人员对脱氧核糖核酸酶活性检测标准项目进行了预研，课题组成员广泛收集了国内外脱氧核糖核酸酶活性的标准、文献，了解了国内外相关技术动态，并且明确了工作思路和进程安排，分析了通过前期的实验摸索、反复论证，确定了本标准方法设定的一系列重要参数：其中包括温度、pH、底物浓度、反应时间、酶活最适测定范围等指标参数，开展了实际样品的检测。
然后依据GB/T 1.1—2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》、GB/T 1.2—2002《标准化工作导则第2部分：标准中规范性技术要素内容的确定方法》等标准编制要求，对《脱氧核糖核酸酶活性检测》标准开展了起草工作。
于2016年3月中旬，起草工作小组完成了《脱氧核糖核酸酶活性检测》国家标准（草案）。
2016年6月，在北京组织有关单位和专家分别召开了标准草案讨论会，重点对脱氧核糖核酸酶活性检测和流程提出了完善建议。
同时对方法进行了验证，针对验证所出现的问题，在2016年11月11组织专家对标准逐字逐句进行了讨论完善，形成了《脱氧核糖核酸酶活性检测》国家标准征求意见稿。
五、国内外研究概况目前国内外对于脱氧核糖核酸酶活性的检测方法主要有单相酶扩散法和紫外吸收法两种。
其中单相酶扩散法其原理是当荧光染料溴化乙锭（Ethidium Bromide, EB）与DNA结合后可形成一种荧光络合物，在紫外光照射下发出较强的荧光。
在含有EB与DNA的琼脂板上打孔加样，孔中的DNase向周围扩散，水解琼脂板中的DNA形成水解环，在紫外透射仪下可见为不发荧光的暗环。
在一定条件下水解环的大小与DNase的活性成正比。
实验结果证明该方法重复性好，受外界环境影响小，但检测时间长，并且使用的EB 染料具有较大的污染。
脱氧核糖核酸酶适用于紫外分光光度法检测其活性，核酸的最大吸收波长在260 nm，核酸降解后，降解产物的吸光度会增加，即产生增色效应。
通过A260 nm值的改变来鉴定脱氧核糖核酸酶的作用，可对脱氧核酸酶的酶活力进行定量研究。
故本标准采用紫外-可见分光光度法，该方法操作简单、重复性较好，反应时间短，并且没有环境污染，安全环保。
六、关键试验内容和技术指标说明6.1分析方法及其条件的选择与优化6.1.1 分析方法的选择根据文献报道，脱氧核糖核酸酶适用于紫外-分光光度法检测其活性，脱氧核糖核酸的最大吸收波长在260 nm，脱氧核糖核酸降解后，降解产物的吸光度会增加，即产生增色效应。
通过吸光度A260 nm值的改变来鉴定脱氧核糖核酸酶的作用，进而对脱氧核糖核酸酶的酶活力进行定量研究。
6.1.2 反应条件的选择脱氧核糖核酸酶可以水解DNA上嘧啶残基的3′端和相邻核苷酸形成的磷酸二酯键，结合前期试验结果，本方法设定反应温度范围为25-65℃、反应时间范围为1-15分钟等，通过酶活力的测定确定最终的反应温度、反应时间和pH值。
6.1.3 酶活力定义脱氧核糖核酸酶活力：以浓度为0.15 mg/mL的1.5 ml小牛胸腺DNA为底物，在35 ℃且pH 5.0的条件下，1分钟内使反应液在260 nm处的吸光度增加0.001所需要的酶量为一个活性单位（U）6.2 定量方法的建立6.2.1 结果分析与计算按照式（1）计算：C (U/mg) =△A260×1000×稀释倍数(1)式中：C（U/mg）——核糖核酸酶活力。
△A260——检测管与空白对照管在260 nm处测定得到的吸收值差值。
1000——吸光度原值与活力规定中规定吸光度0.001的换算系数。
6.3 方法特异性6.3.1 标准曲线的制定由于底物DNA的分子量不固定，没有确定的分子量，另外脱氧核糖核酸酶催化底物生成的物质也不确定，所以无法参考常规酶活力的检测方法，即无法通过计算脱氧核糖核酸酶催化底物DNA生成的真实的量来表示酶的活力，因此没有制定标准曲线。
6.3.2 仪器设备及器具恒温水浴槽。
紫外-可见分光光度计：吸光度精确至0.001。
pH计：精确至0.01。
1 cm 比色皿。
电子天平：精度为0.0001 g。
电子天平：精度为0.01 g。
6.3.3溶液配置本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6882规定的二级水。
以下所有试验操作步骤均应在洁净的无外源DNA酶环境中进行。
（1）0.1 mol/L 乙酸/乙酸钠（NaAc/HAc）缓冲液，pH 5.0称取8.2 g NaAc，0.45 g不含有结晶水的MgCl2，0.21 g无水CaCl2溶于蒸馏水中，缓慢加入HAc调pH至5.0，混匀后定容至1000 mL。
（2）0.15 mol/L NaCl溶液称取8.766 g NaCl溶于蒸馏水中，混匀后定容至1000 mL。
（3）小牛胸腺脱氧核糖核酸来源于小牛胸腺，含量≥98%。
6.3.4 吸光值测定方法优化后的吸光值测定方法为取检测管若干，空白管中依次加入小牛胸腺DNA溶液1.5 mL、水0.5 mL与NaAc/HAc缓冲液1 mL；将稀释后的待测酶液各取0.5 mL分别加入样品管中标号并加入NaAc/HAc缓冲液1 mL和小牛胸腺DNA溶液1.5 mL（反应体系为3 mL）。
在35 ℃恒温下，以空白管为对照依次测定各个稀释度待测酶液在260 nm下10 min后的吸光值。
具体的底物浓度、反应时间、反应温度等根据优化过程中的实际实验情况确定。
6.3.5 结果记录与计算记录各个稀释倍数下各样品管在260 nm紫外光的吸收值A260，并计算与空白管的差值△A260。
6.4 实验结论6.4.1 底物浓度的确定酶促反应的底物浓度非常重要。
低浓度的底物由于提供的底物不足，酶活力测定值偏小，并且由于吸光度值吸光度变化过小，往往是千分位上的变化，测定不准确。
加大底物浓度，能提供足够的反应底物，催化反应速度增加，酶活力测定值也增大，但如果底物浓度过大，酶促反应将过于迅速，导致相对标准偏差增大，因此必须选择合适的底物浓度。