核糖核酸酶活力的测定
RNA研究进展
四、RNA生物功能的多样性：
1、RNA在遗传信息的翻译中起着决定的作用 mRNA 信使(messenger)和模板(template) tRNA 转运(transfer)和信息转换(adaptor) rRNA 装配 (assembler)和催化(catalyst)
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• 延伸
1992年,Holler证明转肽反应是由核糖体大亚基rRNA 所催化,核糖体蛋白质被认为只起辅助作用
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2、RNA具有重要的催化功能（核酶）及其他 持家功能（house—keeping function）
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核酶(Ribozyme)
载酯蛋白BmRNA编辑 3）粘菌线粒体转录物中单个C的添加 4）A→I（或G），U→G（或A）的转变
5）核苷酸的共转录添加
6）3/端多聚腺嘌呤化产生终止密码子
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• RNA的编辑----gRNA的作用
g
g
g
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RNA编辑的意义
1）1981年Cech 等人在研
究四膜虫前体rRNA拼接机 制发现自我催化，且 L-19 （395核甘酸）有催化作用
2）1983年Altmam和Pace 两家实验室研究核糖核酸 酶P（RNaseP）发现其中 M1 RNA具有核糖核酸酶 活性
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Cech小组 —— 四膜虫的26s rRNA
•具有高度的专一性 •服从Michaelis-Menten动力学规律 • Km＝42×10－6 M （C5为底物）
某大学生物工程学院《生物化学》考试试卷(39)
某大学生物工程学院《生物化学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题（95分，每题5分）1. 核苷酸的碱基和戊糖相连的糖苷键是CN型。
（）答案：正确解析：2. 从理论上说，可用Edman降解法测定任何非封闭多肽的全部氨基酸顺序。
（）答案：正确解析：3. 一种生物所有体细胞的DNA，其碱基组成均是相同的，这个碱基组成可作为该类生物种的特征。
（）解析：4. 磷脂具有亲水与疏水两重性质，其强的亲水性是由于具有一个磷酸基团。
（）答案：正确解析：5. 维生素B1缺乏必然带来TPP含量减少，导致机体脂代谢障碍，临床上称为脚气病。
（）答案：错误解析：6. 三维结构的破坏和生物活性的丧失是蛋白质变性和核酸变性的最重要的标志。
（）答案：错误解析：DNA的生物活性并不因为变性而丧失。
7. 维生素E是一种抗氧化剂，对线粒体膜上的磷脂有抗自由基的作用。
（）解析：8. 二硫键能稳定蛋白质的三级结构，但它又属于一级结构的内容。
（）答案：正确解析：9. 胰岛素分子中含有A7SSB7，A20SSB19和A6SSA11三个二硫键，这些属于二级结构的内容。
（）[暨南大学2018研]答案：错误解析：二硫键在一级结构中指的是数量和位置，在三级结构中指的是二硫键本身。
10. 大多数蛋白质的主要带电基团是由它N端的氨基和C端的羧基组成。
（）答案：错误解析：蛋白质分子所带的电荷主要来自带电荷的侧链基团。
11. 纯酶一定可以结晶。
（）答案：错误12. 酶反应速率一般用单位时间内底物的减少量来表示。
（）答案：错误解析：13. 不同来源DNA单链，在一定条件下能进行分子杂交是由于它们有共同的碱基组成。
（）答案：错误解析：14. 天然核苷酸中的碱基与戊糖的连接既有CN键，也有CC键。
（）答案：正确解析：15. PKA、PKC和PKG都是催化蛋白质分子上的SerThr发生磷酸化修饰。
脱氧核糖核酸酶活力检测方法
脱氧核糖核酸酶活力检测方法编制说明（征求意见稿）一、任务来源本国家标准的制定任务列入国家标准化管理委员会《二О一五年国家标准制修订项目》，项目编号“-T-424”。
本项任务由中国标准化研究院提出并归口，定于2016年完成。
本标准起草工作组由中国标准化研究院、浙江工商大学、河北农业大学等单位共同组成。
二、标准制定的背景及意义核酸分解的第一步是水解核苷酸之间的磷酸二酯键，在高等动植物中都有作用于磷酸二酯键的核酸酶，其本质是蛋白质。
不同来源的核酸酶，其专一性、作用方式都有所不同。
有些核酸酶只能作用于核糖核酸（RNA），称为核糖核酸酶（RNase），有些核酸酶只能作用于脱氧核糖核酸（DNA），称为脱氧核糖核酸酶（DNase），核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶统称为核酸酶（Nuclease）。
脱氧核糖核酸酶是将单链或双链DNA同等程度地随机分解，生成具有5'-P 末端寡核苷酸的脱氧核糖核酸内切酶。
脱氧核糖核酸酶具有重要的功能，目前主要用途包括制备不含DNA的RNA样品；RT-PCR反应前RNA样品中去除基因组DNA等可能的DNA污染；体外T7, T3, SP6等RNA Polymerases催化的RNA 转录后去除DNA模板；DNase I Foot printing研究DNA-蛋白质相互作用；缺口平移（Nick translation）；产生DNA随机片段文库；细胞凋亡TUNEL检测中部分剪切基因组DNA作为阳性对照等。
脱氧核糖核酸酶I一般被认为是脱氧核糖核酸酶的典型代表，分子量约32 kDa。
由于脱氧核糖核酸酶具有重要的生理学作用，引起了国内外广泛的关注。
目前已经商业化生产和销售，但是作为脱氧核糖核酸酶的重要质量指标之一的酶的活力，根据文献调研显示相应的测定方法目前仍然没有形成统一的检测和分析标准，各生产和销售厂商对其活力的质量控制各自定义，同一种酶选用不同的活力测定方法结果显示大小差异显著。
这实际上已经成为脱氧核糖核酸酶产品可持续发展的瓶颈问题，给消费者造成了极大的不便。
细胞凋亡检测方法
细胞凋亡检测方法细胞凋亡检测方法是利用特定的实验手段和技术来识别细胞凋亡的发生与否，观察细胞凋亡的程度。
细胞凋亡检测是生物过程中重要的一块，其能够反映细胞死亡的类型，从而可以帮助研究者确定细胞是否已经进入凋亡状态。
现在，细胞凋亡检测的常用方法有多样，包括水解酶活力分析、流式细胞术、免疫组化、细胞图像分析等。
1. 水解酶活力分析：水解酶活力分析法是目前使用最多的细胞凋亡检测方法，原理是以细胞内的水解酶活性（如肌酸激酶、核糖核酸酶）来反映细胞凋亡程度。
细胞凋亡检测方法将细胞悬液添加到活性检测液体，然后经过细胞溶解和脱水稀释后，细胞内的水解酶（如肌酸激酶或核糖核酸酶）就会被释放出来，测定其活力值。
通过比较正常细胞和凋亡细胞的活力值，可以判定细胞凋亡的程度。
2. 流式细胞术：流式细胞术是一种常用的检测细胞凋亡的方法，主要以细胞的DNA含量与形态特点作为检测凋亡的标志物。
通常，凋亡细胞的DNA含量要明显低于正常细胞，且凋亡细胞的形态特征也会发生明显的变化，比如大小、形状、酸性等。
3. 免疫组化：免疫组化是一种利用免疫细胞学技术检测细胞凋亡的方法，它主要是针对细胞凋亡伴随而出现的特定抗原，如多种酶、APO2.7及特有蛋白等。
通过洗涤细胞，并用带有特定抗原的抗体制作出免疫印迹，就可以观察到细胞凋亡的现象。
4. 细胞图像分析：这是一种以细胞形态及细胞图像分析来检测细胞凋亡的方法，主要是利用荧光显微镜或电子显微镜观察细胞，以及对被观察细胞的形态特点进行分析，根据细胞形态变化观察凋亡程度。
通过观察正常细胞与凋亡细胞的形态比较，便可以判断细胞是否进入凋亡状态。
上述是现时比较常用的细胞凋亡检测方法，它们都有一定的特点，可以根据不同的实验需求选择合适的检测方法。
然而，对于不同的细胞类型，其凋亡方式也可能会有所不同，可能需要使用不同的检测方法来进行识别细胞凋亡的发生与否。
因此，根据具体的实验，研究者可以选择合适的检测方法，配合研究凋亡发生机制，为研究凋亡提供科学依据。
关于原料药中酶残留限度药典检测方法
关于原料药中酶残留限度药典检测方法在药物生产过程中，原料药的质量直接影响到药物的稳定性和疗效。
而酶残留限度则是影响原料药质量的重要因素之一。
为了保证原料药的质量，药典检测方法是必不可少的。
本文将会按类介绍一些关于原料药中酶残留限度的药典检测方法。
一、酰胺酶测定法酰胺酶是一类针对酰胺键进行水解的酶，常用在药物合成反应中。
酰胺酶测定法是通过对原料药中残留的酰胺酶进行检测来判断原料药的质量。
该方法的原理是将待检测的药物与酰胺酶反应，测定反应前后的酶活力差值。
酶活力差值与待检测药物中酶的残留量成正比。
二、脱氧核糖核酸酶测定法脱氧核糖核酸酶是一类酶，它主要作用是水解脱氧核糖核酸（DNA）。
在药物生产过程中，脱氧核糖核酸酶的残留会影响到药物的稳定性和疗效。
因此，脱氧核糖核酸酶测定法是判断原料药中酶残留的一种方法。
该方法的原理是将待检测的样品与脱氧核糖核酸进行反应，测定反应前后脱氧核糖核酸的降解程度。
脱氧核糖核酸降解程度与药物中脱氧核糖核酸酶的残留量成正比。
三、葡萄糖氧化酶测定法葡萄糖氧化酶是一种将葡萄糖氧化成葡萄糖酸的酶。
在药物生产过程中，葡萄糖氧化酶通常用于检测生物反应器中的葡萄糖含量。
葡萄糖氧化酶测定法是通过将待检测的药物与葡萄糖氧化酶进行反应，测定反应前后的葡萄糖含量，从而判断药物中葡萄糖氧化酶残留量的方法。
以上三种检测方法均是通过将待检测的样品与酶进行反应，测定反应前后相关物质的含量差值，从而判断原料药中酶残留量的。
这些药典检测方法不仅可以保证原料药的质量，同时也为药物疗效的稳定性提供了保障。
总之，原料药中酶残留限度药典检测方法是确保药物质量的重要手段之一。
对于药物生产企业来说，只有通过高质量的原料药和严格的药典检测方法，才能在保证药物疗效的同时，提升企业的核心竞争力。
西安大学生物工程学院2020级《生物化学》考试试卷(609)
西安大学生物工程学院2020级《生物化学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题（40分，每题5分）1. 初速度底物浓度关系不遵守米氏方程是别构酶的基本特征之一。
（）。
答案：正确解析：2. 酶分子除活性中心部位和必需基团外，其他部位对酶的催化作用是不必需的。
（）答案：错误解析：3. 其嘧啶碱基含量较高的DNA的Tm值高于嘌呤碱基含量较高的DNA。
（）答案：错误解析：根据碱基配对原则，A＋G＝C＋T，DNA的双链中，嘧啶碱基含量与嘌呤含量相等。
一种DNA分子的Tm值大小与其所含碱基中的G＋C比例相关，G＋C比例越高，Tm值越高。
4. 两性离子氨基酸在溶液中，其正负离子的解离度与溶液pH无关。
（）答案：错误解析：两性离子氨基酸在溶液中，其正负离子的解离度与溶液pH有关。
在酸性条件下，氨基酸中的氨基可以加上一个氢离子而带正电；在碱性条件下，羧基可以解离出一个氢离子而带负电。
5. 胶原蛋白质由三条左手螺旋形成的右手超螺旋，其螺旋周期为68nm。
（）答案：正确解析：6. 血红蛋白和肌红蛋白具有相同的生物学功能，因此它们具有相同的空间结构。
（）答案：错误解析：血红蛋白多肽近似球形，是一个四聚体蛋白质，由4个多肽亚基组成，每一亚基缔合有一个血红素辅基。
肌红蛋白只有一、二、三级结构，无四级结构。
7. 霍乱毒素能与肠道上皮细胞膜中的鞘糖脂结合。
（）[南开大学2016研]答案：正确解析：鞘糖脂中的神经节苷脂在神经突触的传导中起重要作用，除此之外糖蛋白也作为细菌毒素的受体，如霍乱毒素的受体。
8. 固定化酶的一个缺点是很难作用于水不溶性底物。
（）答案：错误解析：2、名词解释（20分，每题5分）1. 碘值（iodine number）答案：碘值（iodine number）又称碘价，是100g脂质样品所吸收的碘的克数，通常天然橡胶用它来表示油脂中脂酸的不饱和程度。
某大学生物工程学院《生物化学》考试试卷(1331)
某大学生物工程学院《生物化学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题（75分，每题5分）1. 糖的变旋现象是由于糖在溶液中起了化学作用。
（）答案：错误解析：糖的变旋现象不是由于糖在溶液中起了化学作用，而是由于其分子结构在溶液中起了变化，从α型变成β型或相反地从β型变成α型。
2. 在强酸或强碱条件下，蛋白质的构型会发生改变而失去生物活性。
（）答案：错误解析：在强酸或强碱条件下，蛋白质会变性，如果不涉及共价键的断裂，构型就不会发生改变，因为构型改变需要断裂共价键。
3. 一般来说酶是具有催化作用的蛋白质，相应的蛋白质都是酶。
（）答案：错误解析：酶是由活细胞产生的、对其底物具有高度特异性和高度催化效能的蛋白质或RNA。
一般来说，酶是具有催化作用的蛋白质，但是相应的蛋白质不一定都是酶，要根据不同情况下蛋白质的作用进行区分。
4. DNA核蛋白及RNA核蛋白可用0.14molL NaCl溶液抽提出来。
（）答案：错误解析：DNA核蛋白及RNA核蛋白一般用1molL NaCl抽提。
5. Pro不能参与α螺旋，它使α螺旋转弯。
（）答案：正确解析：6. 除翻译外，DNA的复制、转录、反转录都按碱基互补原则进行。
（）答案：正确解析：7. 蛋白激酶使蛋白质磷酸化的部位都是丝氨酸残基。
（）答案：错误解析：底物蛋白质被磷酸化的氨基酸残基有两类：①Thr、Ser、Tyr、Asp、Glu……“PO”键连接；②Lys、Ar9、His……“PN”键连接。
主要是磷酸化Ser、Thr，个别为Tyr。
被磷酸化的氨基酸残基可以是一个、两个或多个。
8. 理论上己糖有8对对映体。
（）答案：正确解析：9. 脂肪的皂化价高表示含低相对分子质量的脂肪酸少。
（）[山东大学2017研]答案：错误解析：皂化值（价）是指皂化1g脂肪所需的KOH的毫克数。
重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ的复性及活性鉴定
重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ的复性及活性鉴定刘大和;张允;郭雄军;郭平川;Sorajo Umar;李锦秀;陈劲春【摘要】建立尿素梯度凝胶过滤复性重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ的方法.将诱导表达的重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ包涵体通过初步纯化后变性,然后在尿素梯度凝胶过滤色谱柱Sephadex G-75中复性,洗脱流速0.4 mL/min,复性完毕后透析除去小分子复性剂,使用琼脂糖电泳法检验其有活性后,再用单向酶扩散法测定其酶活力为655.8 U/mg,复性得率为83.7％.最后通过LC-ESI-MS/MS从氨基酸序列组成上证明复性产物是重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ.结果表明,建立的方法能成功用于复性变性的重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ包涵体蛋白,获得了可用于结构和功能研究的具有生物学活性的重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ.【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2012(000)009【总页数】5页(P155-159)【关键词】重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ;尿素梯度;凝胶过滤;包涵体;复性;酶活【作者】刘大和;张允;郭雄军;郭平川;Sorajo Umar;李锦秀;陈劲春【作者单位】北京化工大学生命科学与技术学院,北京100029;北京化工大学生命科学与技术学院,北京100029;北京化工大学生命科学与技术学院,北京100029;北京化工大学生命科学与技术学院,北京100029;北京化工大学生命科学与技术学院,北京100029;北京化工大学生命科学与技术学院,北京100029;北京化工大学生命科学与技术学院,北京100029【正文语种】中文随着基因工程技术的发展，大肠杆菌被广泛用于高水平表达有重要价值的外源性蛋白质，但是使用大肠杆菌高水平表达的产物大多数是没有活性的包涵体［1］，这就需要一个有效的手段把非活性状态的包涵体蛋白转化为有活性的天然状态。
因疏水作用而引起的蛋白聚集是包涵体正确复性率极低的根本原因。
传统的稀释复性和透析复性能通过控制蛋白质的起始浓度（10-50 μg/mL）防止聚集，获得相对较高的复性产率，但是这两种方法耗时长，操作繁琐，不适合工业化大规模复性［2］。
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南京林业大学实验报告
专业学号姓名日期
实验二、核糖核酸酶活力的测定
一．实验目的：
核糖核酸酶包括脱氧核糖核酸酶(DNase)和核糖核酸酶（RNase)是水解DNA和RNA磷酸二酯键的核酸内切酶，与植物的生长、分化、衰老、种子成熟和萌发等生理生化过程密切相关。
通过测定这两个酶的活性，可间接获得植物体内核酸含量极代谢情况。
推测其所处的生长发育状态和阶段。
二、原理
以植物叶片试验材料，提取粗酶液，进行酶促反应，以反应混合物中0.1ml 酶液在30min内催化形成具有OD值为1的硝酸镧可溶性RNA 碎片的酶量为1个酶活性单位。
三、材料、试剂与仪器设备：
植物材料：绣球
实验试剂：0.01M的HAc（醋酸缓冲液pH4.8）；0.05ml30mM巯基乙醇；1ml酵母RNA；1.5ml冷的硝酸镧-HCl溶液。
实验器具：分光光度计；离心机；研钵；离心管；移液管；试管等；恒温水浴箱。
四、实验步骤
1.酶液的提取
称取0.4g绣球叶片剪碎用3ml0.01M的HAc（醋酸缓冲液pH4.8）分三次加入（1，1，1），研磨提取，在5000rpm下离心10min,取上清液。
2.核酸酶活力测定
取0.1ml 酶液放入离心管中+0.05ml30mM巯基乙醇+1ml酵母RNA+0.35ml HAc （pH4.8）混合均匀，在37水浴保温30min.
3.加硝酸镧-HCl
到时间后，将离心管放入冰浴中放置3~4min ,加入1.5ml冷的硝酸镧-HCl溶液→强烈震荡混合液→至于冷冻离心机中离心15min (5000rpm/min),测定上清液的体积。
4. 光密度测定
取上清液0.3ml+2.7ml蒸馏水定容至3ml。
在260nm下（紫外分光光度计）测定OD 值。
活力单位=所测OD260nm×10
五、结果计算
OD=0.115-0.008=0.107
活力单位=0.107*10=1.07
六、注意事项
1.研磨叶片要充分，在离心前要选择合适的离心管一起离心。
2.加入其他溶剂时要注意精确，不然会导致实验有失误。