硫酸铵沉淀
蛋白纯化硫酸铵沉淀盐析法
蛋白纯化硫酸铵沉淀盐析法The manuscript was revised on the evening of 2021蛋白纯化硫酸铵沉淀盐析还能想起那些在荧屏中曾经震撼过我们，具有超能力的英雄么？蜘蛛侠，敏捷，灵活迅速飞流直下，忽闪直冲高楼；绿巨人浩克，力量，速度，耐力，在我们的想象力中膨胀；还有，我们随身携带星形盾牌，品格高尚的美国队长……幻想里中的人物形象存在我们的记忆力，然而生物背景出身的我们，总归要锻炼出属于自己的实验技能，即便是相同的实验步骤，每个人做出来的结果也不尽相同，差别在哪？反复练习，用心总结出属于自己的心得，转化为自己的实验“超能力”吧。
本文总结了蛋白纯化硫酸铵沉淀详细的实验原理、步骤，供大家参考。
-------锻炼属于我们自己的实验“超能力”之一我是超级蜘蛛精看我有劲儿不？冲啊，我是美国队而我是一只冷静的科研小蜗牛这次，我们所要分享的便是一种很常见，但是也很重要的蛋白质纯化方法：硫酸铵沉淀蛋白法，一起走进实验室吧。
硫酸铵沉淀法是粗分离蛋白时常用的纯化和浓缩蛋白的技术。
蛋白质的溶解度和盐浓度密切相关，在低浓度的条件下，随着盐浓度的增加，蛋白质的溶解度增加；但在高浓度的盐溶液里，盐离子竞争性的结合蛋白表面的水分子，破坏蛋白表面的水化膜，溶解度降低，蛋白质在疏水作用下聚集形成沉淀。
每种蛋白质的溶解度不同，因此可以用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。
硫酸铵的溶解度大，解离形成大量的NH4+、SO42-离子，会结合大量的水分子，使蛋白质的溶解度下降，另外，其温度系数小，不易使蛋白质变性，因此，蛋白质粗分离时硫酸铵沉淀法是很重要的一种技术，后续可采用层析技术进一步纯化蛋白，效率更高。
硫酸铵沉淀法是常用的分离免疫球蛋白的方法。
各种不同蛋白质盐析需要不同浓度的硫酸铵溶液。
在实验中建议配置不同梯度浓度的硫酸铵溶液来确定蛋白质沉淀所需的最佳浓度。
（1）参照如下表格配置不同浓度的硫酸铵溶液；例如，在25 ℃条件下，配置饱和度为100 %的硫酸铵溶液，称取767 g的硫酸铵固体，边搅拌边加入到1 L的蒸馏水中，完全溶解后，用氨水或者硫酸调节pH到。
igm硫酸铵沉淀
igm硫酸铵沉淀
硫酸铵沉淀法是分离免疫球蛋白的常用方法，特别是针对抗体的分离。
原理主要是高浓度的硫酸铵破坏蛋白表明的水化膜，降低球蛋白的溶解性。
在具体操作上，一般首先过滤或离心来得到上清液，然后加入饱和硫酸铵至终浓度45%，静置沉淀蛋白。
之后，用最小体积的PBS或硼酸盐缓冲液溶解沉淀的蛋白，并用PBS或硼酸盐（含0.02%叠氮钠）缓冲液来洗脱。
最后通过电泳来检测分子量大小，并用分光光度法测定抗体浓度。
这种方法适用于分离各种免疫球蛋白，包括鼠抗所有亚类、其他种属抗体、任何种属的IgM、IgG、IgA等。
但请注意，不同的免疫球蛋白适宜的硫酸铵浓度可能会有所不同。
以上信息仅供参考，如有需要，建议咨询专业实验室工作人员。
硫酸铵分级沉淀原理及实验方案
一，基本原理硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。
用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。
高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。
各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。
这种方法称之为盐析。
盐浓度通常用饱和度来表示。
硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白变性而应用最为广范。
二，试剂及仪器1 . 组织培养上清液、血清样品或腹水等2. 硫酸铵（NH 4 ）SO 43. 饱和硫酸铵溶液（SAS ）4. 蒸馏水5. PBS( 含0.2g /L 叠氮钠)6. 透析袋7. 超速离心机8. pH 计9. 磁力搅拌器三，操作步骤以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。
各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。
通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为33% —50% 。
（一）配制饱和硫酸铵溶液（SAS ）1.将767g （NH 4 ）2 SO 4 边搅拌边慢慢加到1 升蒸馏水中。
用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0 。
此即饱和度为100% 的硫酸铵溶液（4.1 mol/L, 25 °C ）.2.其它不同饱和度铵溶液的配制（二）沉淀1.样品（如腹水）20 000 ′g 离心30 min ，除去细胞碎片；2.保留上清液并测量体积；3.边搅拌边慢慢加入等体积的SAS 到上清液中，终浓度为1 ：1 （4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6 小时或搅拌过夜（4 °C ），使蛋白质充分沉淀。
（三）透析1.蛋白质溶液10 000 ′g 离心30 min （4 °C ）。
弃上清保留沉淀；2.将沉淀溶于少量（10-20ml ）PBS -0.2g /L 叠氮钠中。
沉淀溶解后放入透析袋对PBS -0.2g /L 叠氮钠透析24-48 小时（4 °C ），每隔3-6 小时换透析缓冲液一次，以彻底除去硫酸氨；3.透析液离心，测定上清液中蛋白质含量。
硫酸铵沉淀时间
硫酸铵沉淀时间
硫酸铵沉淀时间是指在一定条件下，硫酸铵在溶液中形成的沉淀所需的时间。
硫酸铵是一种常用的化学试剂，广泛应用于化学分析、冶金、医药等领域。
硫酸铵沉淀时间的测定对于分析数据的准确性和可靠性至关重要。
硫酸铵沉淀时间的影响因素有很多，主要包括温度、浓度、
pH值、搅拌速度等。
其中，温度是影响硫酸铵沉淀时间最为
显著的因素之一。
一般来说，温度越高，硫酸铵沉淀时间越短；反之，温度越低，硫酸铵沉淀时间越长。
此外，硫酸铵浓度、pH值等因素也会对硫酸铵沉淀时间产生一定的影响。
硫酸铵沉淀时间的测定方法有很多种，常用的包括比色法、电导法、滴定法等。
其中，比色法是一种简单易行、准确可靠的测定方法。
具体步骤如下：
1.将待测溶液加入试管中，加入适量的硫酸铵和硫酸钡溶液。
2.用玻璃棒搅拌均匀，然后静置一段时间。
3.观察溶液中是否有白色沉淀生成，如果有，则说明硫酸铵已
经沉淀。
4.记录下静置时间t，即为硫酸铵沉淀时间。
需要注意的是，在测定硫酸铵沉淀时间时，应该尽量保持实验条件的一致性，以提高测定结果的准确性和可重复性。
此外，还应该选择合适的测定方法和仪器设备，以满足实验要求。
总之，硫酸铵沉淀时间是化学分析中一个非常重要的参数，对于保证分析数据的准确性和可靠性具有重要意义。
在实际应用中，需要根据具体情况选择合适的测定方法和条件，以获得更为准确和可靠的结果。
硫酸铵沉淀凝集素的原理
硫酸铵沉淀凝集素的原理硫酸铵沉淀凝集素是一种常用的实验室试剂，它可以通过与特定物质发生反应，使其凝结成固体沉淀。
其原理主要涉及溶液的化学反应和凝固过程。
我们来了解一下硫酸铵的性质。
硫酸铵是一种无色结晶，可溶于水，其溶液呈酸性。
硫酸铵分子中含有两个氮原子，可以提供氮源，广泛应用于农业和化工领域。
硫酸铵沉淀凝集素的原理主要是基于硫酸铵的化学性质。
在某些条件下，硫酸铵的溶液可以与其他物质发生化学反应，生成不溶性的沉淀物。
这种沉淀物具有较大的颗粒大小和较高的密度，可以通过离心或过滤等方法分离出来。
硫酸铵沉淀凝集素的应用非常广泛。
在实验室中，它常常被用来分离和富集特定物质，如蛋白质、DNA、RNA等。
在生物化学研究中，硫酸铵沉淀凝集素可以用于纯化蛋白质，去除掉杂质和其他溶解性物质。
在分析化学中，硫酸铵沉淀凝集素可以用于分析样品中的金属离子或其他有机物。
硫酸铵沉淀凝集素的使用方法相对简单。
首先，将硫酸铵加入待处理的溶液中，并充分搅拌混合。
然后，根据反应条件进行适当的处理，如调节溶液的pH值、温度或加入其他试剂。
通过这些处理，可以促使硫酸铵与特定物质发生反应，并形成沉淀物。
最后，使用离心机或过滤器将沉淀物与溶液分离。
值得注意的是，硫酸铵沉淀凝集素的使用需要根据具体实验要求进行优化。
不同的物质可能需要不同的反应条件和处理方法。
此外，由于硫酸铵本身具有腐蚀性，操作时需要注意安全，避免直接接触皮肤和眼睛。
总结起来，硫酸铵沉淀凝集素通过与特定物质发生反应，使其凝结成固体沉淀。
其原理主要涉及溶液的化学反应和凝固过程。
硫酸铵沉淀凝集素的应用非常广泛，可以用于分离、富集和纯化特定物质。
使用时需要根据具体实验要求进行优化，并注意安全操作。
(抗体的纯化)硫酸铵沉淀法
抗体的纯化( 硫酸铵沉淀法）一，基本原理硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。
用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。
高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。
各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。
这种方法称之为盐析。
盐浓度通常用饱和度来表示。
硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。
二，试剂及仪器1 .组织培养上清液、血清样品或腹水等2. 硫酸铵（NH 4 ）SO 43. 饱和硫酸铵溶液（SAS ）4. 蒸馏水5. PBS( 含0.2g /L 叠氮钠)6. 透析袋7. 超速离心机8. pH 计9. 磁力搅拌器三，操作步骤以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。
各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。
通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为33% —50% 。
（一）配制饱和硫酸铵溶液（SAS ）1.将767g （NH 4 ）2 SO 4 边搅拌边慢慢加到1 升蒸馏水中。
用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0 。
此即饱和度为100% 的硫酸铵溶液（4.1 mol/L, 25 °C ）.2.其它不同饱和度铵溶液的配制（二）沉淀1.样品（如腹水）20 000 ′g 离心30 min ，除去细胞碎片；2.保留上清液并测量体积；3.边搅拌边慢慢加入等体积的SAS 到上清液中，终浓度为1 ：14.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6 小时或搅拌过夜（4 °C ），使蛋白质充分沉淀。
（三）透析1.蛋白质溶液10 000 ′g 离心30 min （4 °C ）。
弃上清保留沉淀；2.将沉淀溶于少量（10-20ml ）PBS -0.2g /L 叠氮钠中。
沉淀溶解后放入透析袋对PBS -0.2g /L 叠氮钠透析24-48 小时（4 °C ），每隔3-6 小时换透析缓冲液一次，以彻底除去硫酸氨；3.透析液离心，测定上清液中蛋白质含量。
硫酸铵沉淀蛋白质原理
硫酸铵沉淀蛋白质原理
硫酸铵沉淀蛋白质是常用的蛋白质分离和纯化方法之一。
该方法
的原理是利用硫酸铵盐溶液中的盐度效应，调节蛋白质水合层，使蛋
白质失去溶解性沉淀出来。
硫酸铵的加入将水合壳破坏，蛋白质的疏
水部位暴露出来，因而沉淀，从而实现了对蛋白质的分离和提纯。
硫酸铵沉淀蛋白质的具体操作步骤如下：首先，将待提取的蛋白
质样品加入适量的硫酸铵盐溶液中并充分搅拌，一般可选取25%、35%、50%、60%和75%等不同浓度的硫酸铵盐溶液。
然后，待溶液静置约30
分钟后，离心沉淀。
最后，可通过去除上清液、冲洗、离心等方式获
得沉淀的蛋白质。
硫酸铵沉淀原理
硫酸铵沉淀原理
硫酸铵沉淀法的基本原理:这是一种从大量粗制品中提取并部分提纯蛋白质的方法。
主要是通过将免疫球蛋白从试样中分离，通常采用的方法是：高浓度的盐离子蛋白溶液和蛋白质的水分子发生竞争，导致其水和蛋白质分子减弱，通过溶解度从溶液沉淀出来。
因不同的蛋白质溶解度相同，所以用相同的盐溶液进行沉淀，称为盐析。
盐的含量一般用饱和度来表示，而硫酸铵由于具有较高的溶解度，较低的温度系数，容易引起蛋白的变性，因此得到广泛的应用。
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在计算所添加的硫酸铵的重量方面，找到了一个不错的网站——硫酸铵计算机
这个网页上可以靠着输入实验温度、溶液体积、想要到达的百分浓度以及初始的百分浓度这四个数值，就可以得到需要添加的硫酸铵克数，以及在加入固体硫酸铵后所增加的体积，算是一个很不错的网站。
此外另一个比较值得提的，是我有用两种方式加入硫酸铵，第一种是固体的硫酸铵模碎加入，另一种是将硫酸铵溶成饱和溶液再加入，各有各的优缺点，比较如下：
1.造成蛋白质变质的程度：固体的硫酸铵>硫酸铵饱和溶液
利用硫酸铵饱和溶液真的超棒，滴入的速度可以很快而不造成变质(没试过用倒入的)。
不像固体的硫酸铵只能磨碎慢慢加入，速度一快蛋白质就坏了(溶液有致密的白色气泡产生)。
2.操作的容易度：硫酸铵饱和溶液>>固体的硫酸铵
固体硫酸铵最大的缺点就是操作不容易，要一直敲敲敲又不能太快，所以当你要溶解的蛋白质很多时，这是很累的步骤。
然而硫酸铵饱和溶液比较麻烦只有在配制部分，要先加热让它饱合后，回到操作温度让它过饱和，最后用滤纸把硫酸铵结晶去掉。
3.蛋白质溶液的体积放大程度硫酸铵饱和溶液>>固体的硫酸铵
这是使用硫酸铵饱和溶液最头痛的部分，举例来说，要让100 ml的硫酸铵百分比从0%到25%，如果是加入固体的硫酸铵，只会让溶液从100 ml变成107 ml左右，但若是加入硫酸铵饱和溶液，会让溶液变成125 ml！而且若是要提高到50%，须加等量的硫酸铵饱和溶液，所以会让蛋白质溶液从100 ml变成200 ml。
因此在加入硫酸铵时，若是低百分浓度可以利用硫酸铵饱和溶液，然而如果是高百分浓度的，除非不在意蛋白质溶液体积的放大(反正都要离心离下来)，否则还是用固体硫酸铵来的好。
所以今天从0%拉到25%及从25%拉到50%时，都是利用硫酸铵饱和溶液，但是当要从50%拉到75%时，我选择利用固体硫酸铵，因为如果用硫酸铵饱和溶液，离心机无法离那么多的溶液体积。