不同培养基对蛹虫草酯酶同工酶的影响试验
不同固态培养基对蛹虫草子实体品质的影响
2021 Vol.40 No.4•100- Serial No.350China BrewingResearch Report不同固态培养基对蛹虫草子实体品质的影响周绍琴王乐乐C ,吴映梅周 艳袁丹丹9(1.贵州医科大学食品科学学院，贵州贵阳550025;2.贵州医科大学环境污染与疾病监控教育部重点实验室，贵州贵阳550025;3.贵州省农产品质量安全监督检验测试中心，贵州贵阳550004)摘要:通过测定不同固态培养基培养蛹虫草子实体的生长情况,虫草素、虫草酸、虫草多糖含量，1,1-二苯基-2-三硝基苯腓(DPPH )及2,2，--双-3-!-6-磺酸(ABTS )能力，研究 蛹虫草子实体品质的影响。
结果表明， 体 蛹虫草子实体的活性物质与抗氧化活性差异显著(P V0.05),其中小米+麦+ 蛹虫草子实体的生长情况较佳，出芽时间最快，为12 d ,子实体最长，为(6.50±0.15) cm ,鲜质量最重，为(8.58±0.07) g ,其虫草素和虫草酸含量最高，分别为(6.53±0.06) mgg 和(7.66±0.21) mgg ； 7仁米培养基培养蛹虫草子实体虫草多糖含量最高，为(59.07±1.89) mgg ,7仁米+麦 +培养基抗氧化活性最强,DPPH和ABTS 自由基清除率分别为(66.84±0.77)%、(68.28±0.26)% =关键词:蛹虫草;虫草素;虫草酸;虫草多糖;抗氧化活性中图分类号：Q815文章编号-0254-5071 (2021)04-0100-05doi:10.11882j.issn.0254-5071.2021.04.019引文格式:周绍琴，王乐乐,吴映梅，等.不同固态培养基对蛹虫草子实体品质的影响［J ］.中国酿造,2021,40(4):100-104.Effect of different solid media on the quality ofCordyceps militaris fixiit bodyZHOU Shaoqin 1-2, WANG Lele 3, WU Yingmei 1-2, ZHOU Yan 1-2**, YUAN Dandan 1收稿日期：2020-10-22修回日期：2020-12-28基金项目：黔科合基础［201911254号；贵州省2019年大学生创新创业训练计划项目(20195200896)；贵州省2019年大学生创新创业项目(20195200940);贵州医科大学2020年乡村经济振兴项目(062190207)作者简介:周绍琴(1990-),，讲师，硕士，研究 生物与发酵。
毕业论文答辩：蛹虫草菌丝体液体培养条件的优化
4.蛹虫草菌丝体生长曲线的绘制
图3-10 蛹虫草菌丝体生长曲线
➢ 由图3-10可知，菌丝体生长分为四个时期，5d之前 菌丝体属于调整期，主要用于适应培养基中环境并汲 取营养，第5天到第7.5天，为对数期，在此期间菌丝 体快速生长繁殖，而后在第8天进入相对稳定期，达 到最高产量。从第9天以后，菌丝体逐渐进入衰亡期。 因此，培养时间设为8d为保证菌丝体产量最高，质量 最好。
五、致谢
➢ 感谢本论文的指导老师王老师，在整个完成实验 和论文的过程中，不断地指导和关心，帮助我开 拓研究思路，精心点拨。感谢王老师的一直鼓励 帮助我顺利完成论文。
➢ 感谢在实验过程中提供实验场地及实验仪器的邱 教授。
➢ 感谢在实验过程中师兄师姐们的帮助与指导，感 谢大学同学们的帮助与鼓励，大家的帮助使我顺 利完成论文，对此感谢所有的老师同学们。
表3-2 L9（34）正交实验结果
因素
B
C
1
1
2
2
3
3
1
2
2
3
3
1
1
3
2
1
3
2
33.86
34.45
35.87
36.94
34.98
35.32
11.29
11.48
11.96
12.31
11.66
11.77
0.67
0.83
D 1 2 3 3 1 2 2 3 1 37.29 32.74 34.68 12.43 10.91 11.56 1.52
（2）培养温度的选择
图3-8 不同温度对菌丝体生长的影响
➢ 由图3-8可知，随温度从18℃升高到28℃，菌丝体 生长量先增加再减少，当温度达到24℃时，菌丝体产 量最高，生长最好。
蛹虫草遗传多样性分析
20192021年第dible育蛹虫草（Cordyceps militaris）属子囊菌门，肉座菌目，虫草科，虫草属，又名北冬虫夏草、北虫草，是虫草属的模式种[1]。
研究证明，蛹虫草含有虫草素、虫草酸及多糖等特殊活性物质，具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、抗炎和免疫调节等诸多生理功效，被用作冬虫夏草的替代品[2]。
酯酶同工酶是食用菌种质资源研究的生化指标之一，可反映出生物间的遗传信息和进化关系，可作为传统生物学分类的辅助依据[3]。
笔者用酯酶同工酶技术对12个蛹虫草菌株的亲缘关系进行分析，旨在为蛹虫草菌种管理和种质资源遗传多样性的研究提供理论依据。
1材料与方法1.1供试菌株与培养基供试的12个蛹虫草菌株采用组织分离获得，编号为C1~C12。
固体培养基配方：马铃薯200g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，琼脂20g，蛋白胨10g，水1000mL。
液体菌种培养基配方：马铃薯200g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，维生素B110mg，蛋白胨3g，牛肉膏5g，水1000mL。
栽培种培养基配方：每瓶装40g小麦，加入营养液60mL。
1.2试验方法1.2.1菌丝培养特性试验用直径6mm打孔器取活化后的菌种块接种于直径9cm的固体培养基平板上，置于培养箱内（23±1）℃避光培养。
观察菌丝长势以及菌丝转色后的颜色，并计算菌丝平均生长速度[4]。
菌丝平均长速（mm/d）=[（菌落直径-6）÷2]÷培养时间1.2.2收集菌丝将活化后的菌种在无菌条件下接入20mm×200mm的试管中，每个菌株8支，置于（23±1）℃培养箱内，避光培养，待菌丝长满试管后将菌丝慢慢刮下，注意菌丝不带有培养基，以免影响后期的试验数据。
每个菌株取0.5g菌丝，-20℃冰冻24h后备用[5]。
1.2.3同工酶电泳采用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳方法。
将收集的菌丝放入液氮中研磨，并加入0.5mL的提取液，研磨后将样品收集于1.5mL离心管中，14938×g 离心20min，取上清液。
蛹虫草菌液体培养基配方优化研究
蛹虫草菌液体培养基配方优化研究作者：张志瑾毛宁来源：《天津农业科学》2012年第04期摘要：利用L9（34）正交试验设计，研究了蛹虫草菌液体培养基不同营养成分对蛹虫草菌丝生长干质量的影响，以对蛹虫草液体培养基配方进行优化。
结果表明，蛹虫草液体培养基最佳配方为：玉米粉1%、麦麸1%、葡萄糖2%、蛋白胨2%、酵母膏0.5%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%、维生素B1 10 mg•L-1。
蛹虫草菌最终菌体总干质量达到14.85 g•L-1。
关键词：蛹虫草菌；液体培养；碳源；氮源；最佳培养基中图分类号：R17 文献标识码：A DOI编码：10.3969/j.issn.1006－6500.2012.04.030Optimization of Cordyceps sinensis Liquid MediumZHANG Zhi-jin，MAO Ning(Provincial Key Laboratory for Protection and Utilization of Longdong Bio-resources in Gansu Province, Qingyang, Gansu 745000, China)Ａｂｓｔｒａｃｔ: Different nutrient component in the liquid medium were used to study the effects on the dry weight of fruit body and to get the optimized medium. The results showed that the maxim fruit body yield（14.85 g•L-1） was obtained on the medium of corn starch1%, wheat bran 1%, glucose 2%, peptone 2%, yeast extract 0.5%, KH2PO40.1%, MgSO40.05%, vitamin B1 10 mg•L-1.Key words: Cordyceps sinensis; liquid fermentation; carbon source; nitrogen source; best medium蛹虫草（Cordyceps sinensis）也称北冬虫夏草、北虫草，属真菌门（Eumycota），子囊菌亚门（Ascomycotina），核菌纲（Pytenomy），肉座菌目（Cordycepsmilitaris），麦角菌科（Clavicipitaceae），虫草属（Cordyceps），与冬虫夏草是同属异种[1-3]。
蛹虫草菌丝体液体培养工艺的研究
蛹虫草菌丝体液体培养工艺的研究房天琪;邱芳萍;王长周;季晓枫【摘要】采用Plankett Burman设计对影响虫草菌丝体生物量的液体培养基组分及培养条件进行了筛选,找到最佳培养条件.以不同培养基得出的人工栽培蛹虫草菌丝体得率为指标对蛹虫草摇瓶发酵工艺条件进行优化.通过响应面分析法和中心组合设计对主要影响因子进行优化,确定蛹虫草发酵最佳工艺参数为:葡萄糖23.34g/L,玉米浆12.5 mL/L,接种量9%,发酵温度25℃,KH2PO41 g/L和MgSO4·7H2O 1 g/L,VB1 2 g/L、发酵转速150 r/min,pH值7.0.最佳培养基条件下的验证试验结果为菌丝体生物量15.59 g/L,与模型的预测值15.56 g/L基本一致,表明模型可较好地预测蛹虫草菌丝体的生物量.【期刊名称】《长春工业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2011(032)001【总页数】5页(P83-87)【关键词】蛹虫草;液体发酵;响应面法;中心组合设计【作者】房天琪;邱芳萍;王长周;季晓枫【作者单位】长春工业大学化学与生命科学学院,吉林长春130012;长春工业大学化学与生命科学学院,吉林长春130012;长春工业大学化学与生命科学学院,吉林长春130012;长春工业大学化学与生命科学学院,吉林长春130012【正文语种】中文【中图分类】Q8150 引言蛹虫草(Cordyceps militaris)又名北冬虫夏草、北虫草等，是著名的食药用菌，具有较高的食药用价值[1]，近年来，随着野生冬虫夏草资源逐渐枯竭，价格不断上涨，人们把目光瞄准了用人工培育的蛹虫草作为冬虫夏草的替代品[2]。
有研究表明，人工培育蛹虫草的菌丝体和子实体具有相似的药用与滋补功效[3]。
因此，采用液体发酵获得的菌丝体代替子实体生产各种药用和保键产品成为目前冬虫夏草市场亟待解决的问题[4]。
本研究通过响应面分析法与PB实验相结合的方法，以菌丝体生长量为响应值[5]，采用多元二次回归拟合方程[6]，并通过求偏导获得了主要影响因子的最佳浓度配比[7]。
培养基的成分、数量对蛹虫草生物转化率和品质的影响
米 ＋营养 液 、 小 米 ＋营养 液 、 混 合米 （ ５ ０ ％大
米 ＋５ ０ ％ 小米 ） ＋营养 液 ， 每处理 ５次 重复 。培 养 基 用量 试验 各设 ３ 个 处理 ，培养 基装 量分 别
采收。 将 出菇 面 用灭 菌镊 子 清理 干净 ， 每 瓶加 ３ ｍ ｌ 灭 菌
瘤、 抗 缺 氧 等功效 ， 对 肾炎 、 肝炎、 肿瘤 、 哮喘、 神 经衰 弱 等疾 病 有 明显 的治疗 效果 ［ ２ １ 。作为 冬虫 夏草 的理想 替
代品， 近年来 越来 越受 到人 们 的青 睐 ， 其 种植 量 也不 断
蛹 虫 草 又 名 北 冬 虫 夏 草 （ Ｃ ｏ ｒ ｄ ｕ ｃ ｅ ｐ ｓ ｍｉ ｌ ｉ ｔ ａ ｒ ｉ ｓ Ｌ ； ｓ ｐ ，Ｐ Ｌ ） ，为 子 囊 菌 亚 ｆ － １（ Ａ ｓ ｃ ｏ ｍｙ ｃ ｏ ｔ ｉ ｎ ａ ）麦 角 菌 目 （ Ｃ ｌ ａ ｖ ｉ ｃ ｉ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ｅ ｓ ）麦 角菌科 （ Ｃ ｏ ｒ ｄ ｙ ｃ ｅ ｐ ｐ ｓ ） 真菌 。 药 效类 似 冬虫 夏草 ｎ 】 ， 具有 镇 静 消炎 、 止血 化 痰 、 补精 髓 、 抗 肿
出菇 管理
待菌 丝 长满 瓶后 ， 将 瓶 移入 出菇 室 ， 在
瓶 口薄膜 中央扎 ４—６个 孔 ， 培养 室 空气 相对 湿 度控 制 在８ ５ ％ 一 ９ ５ ％之间， 温度 为 ｌ ８—２ ０ ℃， 有充 足 的散 射
光 。待子 实体 长 到 ５—８ ｃ ｍ， 上部 布 满颗 粒状 的子囊 时
蛹虫草的生物学特性研究
蛹虫草的生物学特性研究蛹虫草的生物学性质为筛选优良菌株的一个依据，实验从不同的温度、PH 值、碳氮源、菌丝体形态、菌丝体液体培养积累量业研究不同菌株的生物学特性，确定最佳生长条件，为进行菌株的丢弃建立初步的依据。
1.材料与方法1.1试验材料1.1.1供试菌株蛹虫草菌株，由锦州食用菌协会实验室提供。
葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、MGSO4、VB1、酵母粉、琼脂、蔗糖、乳糖、半乳糖、可溶性淀粉、甘露醇、麦芽糖、大豆蛋白胨、酵母膏、牛肉膏、硝酸铵、硫酸铵、尿素。
1.1.2主要仪器医用型净化工作台、立式自控电势压力蒸汽灭菌器、电势恒温鼓风干燥箱、酸度计。
1.1.3培养基PDA加富培养基：马铃薯20g，葡萄糖20g、蛋白胨2g、KH2PO43g、MGSO41.5G、VB11g，加水至1000ml。
基础培养基：葡萄糖20g、酵母粉2g、KH2PO42g、MGSO41g、琼脂20g，加蒸馏水定容至1000ml。
1.2试验方法1.2.1供试菌株的活化将供试菌株用灭过菌的接种铲取1*1cm的菌块接种到斜面PDA培养基上，25℃下恒温培养10天。
每天菌株做10次重复。
1.2.2培养方式将斜面菌种用灭过菌的接种铲取1*1cm的菌块接种到直径9cm的培养皿中心，在25℃下恒温培养10天，每个菌种做5次重复。
用直径5mm的无菌打扎器取早虫草菌片接种至PDA平板中央，将平板分别置于培养室自然光照培养，观察菌落形态。
每个菌种3次重复。
1.2.3温度对早虫草生长速度的影响分成五个温度梯度：17℃、20℃、23℃、26℃、29℃。
用5MM无菌打扎器打扎接种到PDA培养基中心。
每个菌种做8个重复，每个温度2个重复。
每24H 用游标卡尺测量菌落直径，计算菌丝生长速度，并观察菌落的变化及其生长状况。
1.2.4 PH值对蛹虫草生长速度的影响分成五个PH酸度：PH5.5、PH 6.0、PH 6.5、PH 7.0、PH 7.5。
用直径5mm 无菌打扎器打扎接种到不同的PH值培养基中心中，每个菌种做3个重复。
两种蛹虫草液体菌种比较试验汇总
毕业设计（论文）题目：两种蛹虫草液体菌种比较试验系部：农业与生物技术系专业：设施农业学号：学生姓名：指导教师姓名：指导教师职称：二O一四年四月二十日目录第一章文献综述 (1)1.1什么是虫草 (1)1.2野生冬虫虫草的主要分布地点 (1)1.3虫草的种类 (2)1.3.1虫草的营养价值 (2)1.3.2蛹虫草的营养价值 (2)1.4本次试验的研究意义 (2)第二章液体菌种的制作方法与材料 (3)2.1菌种制作方法的选择 (3)2.2摇床液体菌种培养配方 (3)2.4摇床液体菌种的配制方法 (4)2.4.1培养基的配制 (4)2.5静置液体菌种的配制方法 (5)2.5.1培养基的配制 (5)2.6摇床液体菌种的培养方法 (6)2.7静置液体菌种的培养方法 (6)第三章实验的观察与统计 (6)3.1摇床液体菌种观察记录 (6)3.2静置液体菌种观察记录 (7)第四章实验对比结果 (8)4.1两种菌种个方面对比 (8)4.2两种液体菌种配制的优缺点 (9)4.2.1摇床液体菌种配制的优点 (9)4.2.2摇床液体菌种配制的缺点 (10)4.2.3静置液体菌种配制的优点 (10)4.2.4静置液体菌种配制的缺点 (10)致谢 (10)摘要：随着社会经济的不断发展，人们越来越崇尚健康天然绿色的药用、食用的保健品。
在当今诸多的保健品当中，虫草是一直被人们所推崇的保健品之一，但是纯野生的冬虫夏草分布地区狭窄、自然寄生率低、对生活环境条件要求苛刻，因此野生资源非常有限。
加上近年来冬虫夏草主产地生态环境遭到人为严重破坏，大量盲目不合理采挖致使资源日趋减少，产量逐年下降，且价格奇高，导致中草药市场价格长期不断的大幅上涨，冬虫夏草的市场需求缺口不断扩大。
然而通过药化、药理和临床实验证明蛹虫草完全可以作为冬虫夏草的代用品。
北冬虫夏草中含有大量的虫草素，虫草素的特殊医疗保健功能已经引起国内外专家的高度重视，已有不少以虫草素为主的保健品、保健食品、化妆品、药品投放市场。