实例解析——高效液相色谱(HPLC)
高效液相色谱分析实验
高效液相色谱分析实验高效液相色谱(HPLC)是一种用于分离、检测和定量分析化学样品的分析技术，具有高分辨率、高灵敏度和高选择性。
在实验室中，HPLC广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全等领域。
本文将介绍HPLC的实验原理、步骤及关键技术。
一、实验原理HPLC的原理是将混合物通过高压注射，经过固定相柱进行分离。
在HPLC中，固定相柱是最重要的组成部分之一，它可以根据样品之间的化学性质选择不同的固定相柱，如反相柱、离子交换柱、手性柱等。
在HPLC实验中，样品可以通过两种方式进样，一种是自动进样器，另一种是手动进样。
进样器将样品注入进样站点后，通过高压泵将样品推入柱子中，样品在柱子中分离后，被通过光学检测器检测，进而得到分离的结果。
二、实验步骤1.样品准备：根据实验要求，准备需要进行分析的物质样品，将其溶解或稀释到适当的浓度。
2.选择柱子：根据样品的性质选择适当的固定相柱。
例如，如果样品是极性的，则选择反相柱。
3.设定实验条件：根据样品的特征和实验需求，设置高压泵的流速、检测器、柱温等参数。
4.样品进样：将样品使用自动进样器或手动进样器进行进样。
5.柱子分离：开启高压泵，将样品推入柱子中。
样品将在柱子中根据化学性质进行分离。
6.数据检测和记录：通过光学检测器检测样品的峰值，并记录分离结果。
可以使用计算机软件进行数据分析。
7.清洗和重用：实验完成后，需要对HPLC仪器进行清洗和重置，以便下次使用。
三、关键技术1.换柱：为了保证实验结果的准确性和可靠性，柱子需要定期更换。
柱子的寿命取决于样品的特性和使用情况。
2.校准标准品：在实验中使用标准品校准HPLC仪器，以确保仪器的准确性和灵敏度。
3.优化实验条件：通过改变流速、温度、柱子等实验条件，可以优化分离效果。
4.检测器选择：根据样品的性质选择合适的检测器，例如紫外检测器、荧光检测器等。
5.数据分析：使用HPLC软件对数据进行分析，生成和保存分析报告。
四、实验安全1.注意个人防护：在操作HPLC仪器时，应佩戴安全防护眼镜和手套，避免接触有害物质。
hplc高效液相色谱法
HPLC高效液相色谱法简介高效液相色谱法（HPLC）是一种利用液体作为流动相，通过高压输液系统，将样品中的各组分在固定相和流动相之间进行分配或吸附等作用而实现分离和检测的色谱技术。
HPLC具有分离效率高、灵敏度高、选择性强、分析速度快、样品适用范围广等优点，已成为化学、生物、医药、环境等领域中最重要的分析方法之一。
本文将简要介绍HPLC的基本原理、仪器组成、常用的色谱模式和应用领域，以期对HPLC感兴趣的读者有所帮助。
一、HPLC的基本原理HPLC的基本原理是利用样品中的各组分在固定相和流动相之间的不同亲和力，使其在色谱柱内以不同的速度移动，从而达到分离的目的。
固定相是填充在色谱柱内的颗粒状物质，可以是固体或涂于固体载体上的液体。
流动相是通过高压泵送入色谱柱的溶剂或溶剂混合物，可以是极性或非极性的。
样品是通过进样器注入流动相中，并随流动相进入色谱柱。
当样品中的各组分经过固定相时，会发生吸附、分配、离子交换、排阻等作用，导致它们在固定相中停留不同的时间。
这个时间称为保留时间（retention time），通常用tR表示。
保留时间是反映样品组分在色谱柱内分离程度的重要参数，不同的组分有不同的保留时间。
当样品组分从色谱柱出口流出时，会被检测器检测到，并产生一个信号。
这个信号随时间变化而变化，形成一个色谱峰（chromatographic peak）。
色谱峰的位置反映了样品组分的保留时间，色谱峰的面积或高度反映了样品组分的含量或浓度。
将检测器信号随时间变化而绘制出来，就得到了一条色谱图（chromatogram）。
色谱图上可以看到不同的色谱峰，每个峰对应一个样品组分。
通过比较保留时间和色谱峰面积或高度，就可以对样品进行定性和定量分析。
二、HPLC仪器组成HPLC仪器主要由以下几个部分组成：溶剂供给系统（solvent delivery system）：负责提供恒定压力和流速的流动相，并将溶剂混合成所需比例。
高效液相色谱仪应用实例
高效液相色谱仪应用实例
高效液相色谱仪（HPLC）作为一种常用的分析仪器，在许多领域都有广泛的应用。
下面将介绍几个HPLC的应用实例。
1. 药物分析：HPLC可以用于药物分析，例如分离和定量分析常用的药物成分、药代动力学研究等等。
同时，HPLC在药物筛选中也有广泛的应用。
2. 食品分析：HPLC可以用于检测食品中的添加剂、污染物以及营养成分等等，例如酸奶中的乳酸、果汁中的维生素C等等。
3. 生化分析：HPLC在生化领域也有广泛的应用，例如分离和定量分析蛋白质、核酸、糖类等等。
4. 环境分析：HPLC可以用于环境污染物的检测和分析，例如空气中的有机污染物、水中的有机物和重金属等等。
总之，HPLC作为一种常用的分析仪器，具有广泛的应用前景，可以帮助科学家们更好地了解和探索各个领域的问题。
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高效液相色谱法(HPLC)
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反相离子对色谱
是分离有机离子的有效方法，离子对试剂和其 他添加剂的选用规则：1.样品中含有—COOH,— SO3H基团时，选用的离子对试剂应是带正电荷的 有机铵盐，以增加样品阴离子在反响色偶中的保 留值，选用的流动相一般是甲醇/水；2.除了加入 离子对试剂，还要加入磷酸盐或者其他缓冲液， 以控制流动相的酸度；3.样品中含有—NH2和— NH基团或其他阳离子时，选用的离子对试剂应是 烷基磺酸盐或硫酸盐；4.样品同时含有—NH2，— COOH,—SO3H等不同性质的基团时则以上规则 选用的离子对试剂和添加剂都合理。
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特点：适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具 有官能团的化合物和异构体有较高选择性；
缺点：非线形等温吸附，常引起峰的拖尾
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举例：
苯乙胺类药物中重酒石酸去甲肾上腺素注射液 的高效液相色谱测定法。
色谱条件与系统适应性试验：十八烷基硅烷键 合硅胶为填充剂；以0.14%更烷基磺酸钠溶液— —甲醇(65:35)，用磷酸调节PH值至3.0作为流动 相；流速为每分钟1ml；检测波长为280nm。理论 板数按重酒石酸去甲肾上腺素峰值计算应不低于 3000。
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目录
一、液相色谱分析法的发展 二、液相色谱分析法的特点 三、液相色谱仪 四、液相色谱分析法的原理 五、高效液相色谱法的主要类型及原理 六、高效液相色谱分析法的应用 七、分离数据的处理方法 八、参考文献
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一、液相色谱分析法的发展
• 20世纪初： 俄国植物学家茨维特提出经典液相色谱法
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实例解析——高效液相色谱(HPLC)
实例解一一高效液相色谱(HPLC)一、原理利用不同物质在两相中(液液、液固、离子交换、尺寸排阻)具有不同的分配系数，当二者相对运动时候，物质在两相中反复多次分配，从而使得物质得到完全分离二、适用范围高沸点、热不稳定的天然产物、生物大分子、高分子化合物、离子型样品、生化样品三、特点高压、高效、高灵敏度四、仪器组成流动液贮存提供脱气，输液系统、进样系统、分离系统、检测系统，控制记录系统贮液瓶、高压泵、进样器、分离柱、检测器、记录仪五、仪器选择由实验条件确定是选用二元高压还是四元低压、一般来说，二元高压的准确度较高。
四元低压是先将样品按比例混合再泵入，而二元高压是先泵入不同比例的溶剂再混合。
确定采用的脱气系统，一般采用在线脱气。
确定进样方式，人工手动六通阀进样，还是进样针自动进样，一个适用于少量样品，一个适用于大量样品。
选择检测器，如果是有较强的紫外吸收的可用紫外可见检测器(二极管阵列检测器)，如果是芳香族化合物，可选用荧光检测器，对于离子可采用电导检测器。
六、实验条件优化配置待测物质的标准溶液1、色谱柱的确定分析样本确定是采用何种类型的色谱柱(1)分配色谱，两项间分配系数流动相选用极性的物质(甲醇、乙腈、水)则固定相选择非极性物质。
一般用C18 ODS 柱。
(2)吸附色谱，(3)离子交换色谱各种离子与树脂上交换集团的交换能力不同。
固定相：离子交换树脂，流动相为无机酸、无机碱。
常用于分离离子或者可解离的化合物(4)排阻色谱法配置含待测物质的标准品溶液，采用不同C18柱分离，检测，对照不同色谱图像，可得到分离效能最高的色谱柱2、最佳流动相梯度洗脱程序的确定梯度洗脱：按照一定的程度，不断改变流动相中个溶剂组成的比例以改变流动相的极性。
将色谱柱上不同的组分洗脱出来。
配置不同的梯度洗脱方案，用标准溶液进行试验，并选取能达到最高分离效能的梯度洗过方案作为最佳流动相梯度洗脱程序3、流动相的确定在分离效能相似条件下选择更经济、毒性小的流动相4、流速确定流速太大，待分离组分来不及与固定相充分作用，故其中的组分较易被洗脱下来，出峰时间变短，而且柱压比较高，会引起泵负荷的增加，进而导致色谱柱的使用命的缩短，色谱峰的分离度变差。
高效液相色谱原理和操作详解
高效液相色谱我国药典收载高效液相色谱法项目和数量比较表：鉴于HPLC应用在药品分析中越来越多，因此每一个药品分析人员应该掌握并应用HPLC。
I．概论 (2)一、液相色谱理论发展简况 (2)二、HPLC的特点和优点 (2)三、色谱法分类 (3)四、色谱分离原理 (3)II．基本概念和理论 (5)一、基本概念和术语 (5)二、塔板理论 (8)三、速率理论（又称随机模型理论） (9)III．HPLC系统 (10)一、输液泵 (11)二、进样器 (13)三、色谱柱 (14)四、检测器 (17)五、数据处理和计算机控制系统 (20)六、恒温装置 (20)IV．固定相和流动相 (20)一、基质（担体） (20)二、化学键合固定相 (22)三、流动相 (23)1．流动相的性质要求 (23)2．流动相的选择 (24)3．流动相的pH值 (24)4．流动相的脱气 (25)5．流动相的滤过 (25)6．流动相的贮存 (26)7．卤代有机溶剂应特别注意的问题 (26)8．HPLC用水 (26)V．HPLC应用 (27)一、样品测定 (27)二、方法研究 (27)附件：高效液相色谱法（HPLC）复核细则 (28)一、对起草单位的要求： (28)二、对复核单位的要求： (28)I．概论一、液相色谱理论发展简况色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。
又称为色层法、层析法。
色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。
后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。
液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。
高效液相色谱(HPLC)
6、HPLC分析中的动力学因素
在HPLC中, 液体的扩散系数仅为气体的万分之一，则速率方 程中的分子扩散项B/u较小，可以忽略不计，即： H=A+Cu 故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同
五、高效液相色谱的分析的操作
1、准备流动相： 过滤，脱气 2、试样处理： 过滤，除去不溶于流动相的无机物 3、进样：
2.2 高效液相色谱与气相色谱的区别
相同之处：兼具分离和分析功能，均可以在线检测 主要差别：分析对象的差别和流动相的差别
1
分析对象差别
HPLC
GC
能气化、热稳定性好、且沸点较低 的样品 高沸点、挥发性差、热稳定性差、 离子型及高聚物的样品不可检测 占有机物的20%
溶解后能制成溶液的样品 不受样品挥发性和热稳定性的限制 分子量大、难气化、热稳定性差及 高分子和离子型样品均可检测 用途广泛，占有机物的80%
可对80%的有机化合物进行分离和分析。
2.4 高效液相色谱法的局限性
1
在高效液相色谱法中，使用多种溶剂作为流动相，当进 行分析时所需成本高于气相色谱法，且易引起环境污染。 高效液相色谱法中缺少如气相色谱法中使用的通用型检测 器（如TCD和FID）。 高效液相色谱法不能替代气相色谱法，去完成要求柱效高 达10万块理论塔板以上，必须用毛细管气相色谱法分析组 成复杂的具有多种沸程的石油产品。 高效液相色谱法也不能代替中、低压柱色谱法，在200 kPa至1MPa柱压下去分析受压易分解、变形的具有生物活 性的生化样品。
2
高压、高速
由于高压输液泵的使用，相对于经典液相（柱）色谱，其分析时间大大缩短。完 成一个样品的分析仅需几分钟到几十分钟。
3
检测灵敏度高
在高效液相色谱法中使用的检测器大多数都具有较高的灵敏度。如紫外吸收检测器 最小检出量可达10-9g；用于痕量分析的荧光检测器，最小检出量可达10-12g。
高效液相色谱法（hplc）
高效液相色谱法(HPLC)一．概述色谱法是一种应用范围相当广泛的分离分析技术，它已有近百年的发展史。
二十世纪五、六十年代石油及石油化工的突起促使了GC技术大发展，而七、八十年代生命科学、生化、制药工业的发展推动了HPLC的迅速发展。
目前除分析化学外，生物化学，石油化学，有机化学，无机化学等学科都普遍采用色谱技术。
现代高效液相色谱仪，以其高效，快速和自动化等特点成为当代分析仪器中发展最快的仪器。
HPLC已成为操作方便、准确、快速并能解决困难分离问题的强有力的分析手段。
1．HPLC的特点（1）适用范围广已知有机物中仅20%不经预先化学处理，可用GC分析；而其余80%有机物可用HPLC分析。
HPLC适于分离生物、医学大分子和离子化合物，不稳定的天然产物，种类繁多的其它高分子及不稳定化合物。
（2）流动相及固定均与样品分子作用，而GC仅固定相与样品分子作用。
（3）具有独特性能的柱填料（固定相）种类较多，具有多种分离方式，适于各种化合物分析。
（4）分离温度较低，提高了分离效率。
（5）具有一些独特的检测器：电化学，示差折光，可见紫外吸收及荧光检测器等。
（6）样品易回收。
2．HPLC分类按分离机理分为四类：吸附色谱（液固）：通过试样组分对活性固体表面吸附亲合力的不同实现分离。
对具有不同官能团的化合物和异构体有较高选择性，早期应用较多，现在大多可用正相键合相色谱替代，常用硅胶柱。
分配色谱：不同溶质分子按其在固定相和流动相中分配系数不同得到分离。
现代分配色谱即化学键合相色谱，是将各种不同的有机基团通过化学反应键合到硅胶表面，具有很好的化学稳定性和热稳定性。
大部分分离问题都可用键合相色谱解决。
离子交换色谱：以离子交换剂为固定相，试样中电离组分与交换剂基体相反电荷的离解部位亲合力不同而分离。
用于分离无机或有机离子。
固定相为阴（阳）离子交换树脂，流动相为电解质溶液。
分子排阻色谱：按物质分子量大小进行分离。
不仅对高聚物，对分子量差别较大的低聚物或小分子化合物也可进行分离。
高效液相色谱分析HPLC
高效液相色谱
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第7讲
高效液相色谱
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§3-4 液相色谱法固定相
色谱柱是色谱法的心脏，固定相及装柱技术是关键。 一、液-液色谱法及离子对色谱法固定相 1.全多孔型担体：直径小于10µm（75/-4） 2.表面多孔型担体，目前不用。 3.化学键合固定相（P76及P69） a.成相：用化学的方法通过化学键把有机分子结合 到担体表面。常用18碳柱 b.特点76/-5：4点. 4.分离机制77/2：既不是全部吸附过程，亦不是典型 的液-液分配过程，而是双重机制兼而有之，只是 按键合量的多少而各有侧重.
第7讲
高效液相色谱
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离子对色谱分离过程示意图
第7讲
高效液相色谱
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五、离子色谱法 1.固定相:离子交换树脂 流动相:电解质溶液 检测器:电导检测器 主配件：抑制柱 2. 流程图：fig3-2 3.分离机制 （阴离子为例） a.双柱型：化学抑制型离子色谱法； b.单柱型：非抑制型，用低电导的洗脱液； 4.应用：从无机和有机阴离子到金属阳离子，从 有机阳离子到糖类、氨基酸等均可用该法分析.
高效液相色谱
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第三章
高效液相色谱分析（HPLC）
§3-1高效液相色谱的特点 一、定义：液相色谱法是指流动相为液体的色谱 技术。 二、特点 1.高压: 可达150～350×105 Pa 2.高速: 例，分离20种氨基酸，经典色谱法要20 多小时，用HPLC只需1小时。 3.高效：3万塔板/米（GC2000塔板/米） 4.高灵敏度： 紫外检测器10-9 g 荧光检测器10-11g
高效液相色谱
第Байду номын сангаас页
第7讲
高效液相色谱
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高效液相色谱技术简介(HPLC)
140高效液相色谱技术（HPLC ）高效液相色谱（HPLC ：High Performance Liquid Chromatography ）是化学、生物化学与分子生物学、医药学、农业、环保、商检、药检、法检等学科领域与专业最为重要的分离分析技术，是分析化学家、生物化学家等用以解决他们面临的各种实际分离分析课题必不可缺少的工具。
国际市场调查表明，高效液相色谱仪在分析仪器销售市场中占有最大的份额，增长速度最快。
高效液相色谱的优点是：检测的分辨率和灵敏度高，分析速度快，重复性好，定量精度高，应用范围广。
适用于分析高沸点、大分子、强极性、热稳定性差的化合物。
其缺点是：价格昂贵，要用各种填料柱，容量小，分析生物大分子和无机离子困难，流动相消耗大且有毒性的居多。
目前的发展趋势是向生物化学和药物分析及制备型倾斜。
7.1 基本原理固定相 流动相AB CCBA固定相 —— 柱内填料，流动相 —— 洗脱剂。
HPLC 是利用样品中的溶质在固定相和流动相之间分配系数的不同，进行连续的无数次的交换和分配而达到分离的过程。
通常，按溶质（样品）在两相分离过程的物理化学性质可以作如下的分类：分配色谱：—— 分配系数亲和色谱：—— 亲和力吸附色谱：—— 吸附力离子交换色谱：—— 离子交换能力凝胶色谱（体积排阻色谱）：—— 分子大小而引起的体积排阻分配色谱又可分为：正相色谱：固定相为极性，流动相为非极性。
反相色谱：固定相为非极性，流动相为极性。
用的最多，约占60～70％。
固定相（柱填料）：固定相又分为两类，一类是使用最多的微粒硅胶，另一类是使用较少的高分子微球。
后者的优点是强度大、化学惰性，使用pH范围大，pH=1～14，缺点是柱效较小，常用于离子交换色谱和凝胶色谱。
最常使用的全孔微粒硅胶（3～10μm）是化学键合相硅胶，这种固定相要占所有柱填料的80％。
它是通过化学反应把某种适当的化学官能团（例如各种有机硅烷），键合到硅胶表面上，取代了羟基（－OH）而成。
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利用不同物质在两相中（液液、液固、离子交换、尺寸排阻）具有不同地分配系数，当二者相对运动时候，物质在两相中反复多次分配，从而使得物质得到完全分离资料个人收集整理，勿做商业用途
适用范围
高沸点、热不稳定地天然产物、生物大分子、高分子化合物、离子型样品、生化样品
特点
高压、高效、高灵敏度
仪器组成
流动液贮存提供脱气，输液系统、进样系统、分离系统、检测系统，控制记录系统
流速确定
流速太大，待分离组分来不及与固定相充分作用，故其中地组分较易被洗脱下来，
出峰时间变短，而且柱压比较高，会引起泵负荷地增加，进而导致色谱柱地使用命地缩短，色谱峰地分离度变差.流动相流速太低时，会导致资料个人收集整理，勿做商业用途
色谱柱柱效降低，使得待测物质难洗脱，各个组分保留时间延长，容易引起色谱
回收率
加入一定已知量地标准物质测定其回收率对方法地准确度进行评价.看是否符合要求
吸附色谱，
离子交换色谱
各种离子与树脂上交换集团地交换能力不同.固定相：离子交换树脂，流动相为无机酸、无机碱.常用于分离离子或者可解离地化合物资料个人收集整理，勿做商业用途
排阻色谱法
配置含待测物质地标准品溶液，采用不同柱分离，检测，对照不同色谱图像，可得到分离效能最高地色谱柱
最佳流动相梯度洗脱程序地确定
归一化法
测定不同纯标准样品地相对质量校正因子，∑×，可以不需要知道进样量.但是需要：、各组分都应流出，且检测器有信号、与进样量无关、不用标样、简单资料个人收集整理，勿做商业用途
内标法
在用内标法做色谱定量分析时，先配制不同重量比地被测组分和内标样品地混合物做色谱分析，测量峰面积，做重量比和面积比地关系曲线，此曲线即为标准曲线.在实际样品分析时所采用地色谱条件应尽可能与制作标准曲线时所用地一致.资料个人收集整理，勿做商业用途
贮液瓶、高压泵、进样器、分离柱、检测器、记录仪
仪器选择
由实验条件确定是选用二元高压还是四元低压、一般来说，二元高压地准确度较高.四元低压是先将样品按比例混合再泵入，而二元高压是先泵入不同比例地溶剂再混合.确定采用地脱气系统，一般采用在线脱气.确定进样方式，人工手动六通阀进样，还是进样针自动进样，一个适用于少量样品，一个适用于大量样品.资料个人收集整理，勿做商业用途
在相同测定条件下，在待测样品中加入可能含有地待测物质地标准样品，测定谱线，如果在向应保留时间处地峰增高，则可证明该物质地存在资料个人收集整理，勿做商业用途
和具有定性分析地仪器相连用，例如傅立叶变换红外（）、质谱()进行检测.
十、定量分析
测量不同质量地标准物地谱线，用公式得到待测物质地绝对校正因子
在确定待测物质之后，选择采用地定量分析方法：标准曲线法，内标法，标准加入法
梯度洗脱：按照一定地程度，不断改变流动相中个溶剂组成地比例以改变流动相地极性.将色谱柱上不同地组分洗脱出来.资料个人收集整理，勿做商业用途
配置不同地梯度洗脱方案，用标准溶液进行试验，并选取能达到最高分离效能地梯度洗过方案作为最佳流动相梯度洗脱程序资料个人收集整理，勿做商业用途
流动相地确定
在分离效能相似条件下选择更经济、毒性小地流动相
标准曲线法（外标法）
用对照物质配制一系列浓度地对照品溶液确定工作曲线，求出斜率、截距.在完全相同地条件下，准确进样与对照品溶液相同体积地样品溶液，根据待测组分地信号，从标准曲线上查出其浓度，或用回归方程计算，工作曲线法也可以用外标二点法代替.资料个人收集整理，勿做商业用途
特点：操作和计算简便，不必用校正因子，但要求色谱操作条件稳定，进样重现性好.
峰变形或者导致色谱峰拖尾严重.用不同梯度地流速实验确定最佳流速
柱温确定
柱温太低会导致色谱组分在两相中地扩散速度大为减小，分配不能迅速平衡，峰变宽，柱效下降，延长分析时间.但温度过高，出峰过快，可能会导致峰重叠.设置温度梯度进行试验，确定最佳温度资料个人收集整理，勿做商业用途
对于二极管阵列检测器确定最佳检测波长
内标物地选择：
（）试样中不含有该物质；
（）与被测组分性质比较接近；
（）不与试样发生化学反应
（）出峰位置应位于ห้องสมุดไป่ตู้测组分附近.
十一、质量控制和保证
检出限
最小检出限(或)一般是指特定分析方法在给定地置信度区间内可以从样品中检出待测物质地最小浓度或最小含量，通常规定为信号值是噪音地倍().资料个人收集整理，勿做商业用途
测定在不同待测物质最大吸收波长下标准样地出峰情况，选择能使大部分标准样品出峰地波长作为最佳波长
方法评定
确定色谱条件后地色谱
测定分离度是否符合要求，测定拖尾因子是否符合要求
侧定不同待测物质地标准曲线
验证该方法地精密度是否在以内
定性分析
定性分析
在最优条件下测定试样中待测组分地谱线情况
和和文献相比较，比较保留时间初步确定是否含有待测物质
选择检测器，如果是有较强地紫外吸收地可用紫外可见检测器(二极管阵列检测器)，如果是芳香族化合物，可选用荧光检测器，对于离子可采用电导检测器.资料个人收集整理，勿做商业用途
实验条件优化
配置待测物质地标准溶液
色谱柱地确定
分析样本确定是采用何种类型地色谱柱
分配色谱，两项间分配系数
流动相选用极性地物质（甲醇、乙腈、水）则固定相选择非极性物质.一般用柱.