质粒DNA测定实验报告
质粒DNA测定
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称质粒DNA的提取、定量、酶切与PCR鉴定实验日期实验地点合作者指导老师评分教师签名批改日期一、实验目的1、掌握PCR基因扩增的原理和操作方法。
2、掌握碱裂解法提取质粒的方法。
3、了解紫外吸收法检测DNA浓度与纯度的原理、方法。
4、学习水平式琼脂糖凝胶电泳操作。
二、实验原理1.PCR：PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶链式反应，是指在DNA聚合酶催化下，以DNA为模板，特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，在体外复制DNA的过程。
包括：（1）退火：降低溶液温度，使合成引物在低温（35－70℃,一般低于模板Tm值的5℃左右），与模板DNA互补退火形成部分双链；（2）变性：加热使模板DNA在高温下90℃-95变性，双链解链；（3）延伸：溶液反应温度升至中温72℃，在 Taq酶作用下，以dNTP为原料，引物为复制起点，模板DNA的一条单链在解链和退火之后延伸为一条双链。
2.质粒DNA的提取与定量：（1）碱裂解法：①基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异；②高碱性条件下，染色体DNA和质粒DNA变性；③当以高盐缓冲液调节其pH值至中性时，变性的质粒DNA复性并保存在溶液中，染色体 DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心形成沉沉淀去除。
（2）离心层析柱：①硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，不吸附蛋白质、多糖等物质；②通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除；③低盐，高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
原理示意图3、质粒DNA的定量测定——紫外分光光度法（1）物质在光的照射下会产生对光的吸收效应；（2）物质对光的吸收是具有选择性的；（3）各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱。
因此不同波长的单色光通过溶液时其光的能量就会被不同程度的吸收，光能量被吸收的程度和物质的浓度有一定的比例关系。
质粒DNA测定实验报告.doc
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称实验日期实验地点合作者指导老师评分教师签名批改日期格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。
需强调的地方请用蓝颜色标出。
不得出现多行、多页空白现象。
一、实验目的1.掌握PCR基因扩增的原理和操作方法2.掌握碱裂解法提取质粒的方法3.了解紫外吸收法检测DNA浓度与纯度的原理、方法4.学习水平式琼脂糖凝胶电泳操作二、实验原理1.PCR(多聚酶链式反应)在DNA聚合酶催化下，可以DNA为模板，以特定引物为延伸起点，以dNTP为原料，通过变性、退火、延伸等步骤，在体外（缓冲液中）复制DNA，使目的DNA按2n方式呈指数形式扩增。
PCR一次循环的具体反应步骤为：A.变性：加热反应系统至95℃，使模板DNA在高温下完全变性，双链解链。
B.退火：逐渐降低溶液温度，使合成引物在低温（35－70℃,一般低于模板Tm值的5℃左右），与模板DNA互补退火形成部分双链。
C.延伸：溶液反应温度升至中温72℃，在Taq酶作用下，以dNTP为原料，引物为复制起点，模板DNA的一条单链在解链和退火之后延伸为一条双链。
2.质粒DNA的提取与制备(1)碱裂解法：染色体DNA与质粒DNA的变性与复性存在差异：A.高碱性条件下，染色体DNA和质粒DNA均变性；B.当以高盐缓冲液调节其pH值至中性时，变性的质粒DNA复性并保存在溶液中，染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，可通过离心形成沉沉淀去除。
(2)离心层析柱：A.硅基质膜在高盐、低pH值状态下可选择性地结合溶液中的质粒DNA，而不吸附溶液中的蛋白质和多糖等物质；B.通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除；C.低盐，高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
3.质粒DNA的定量分析（紫外分光光度法）：A.物质在光的照射下会产生对光的吸收效应，且其对光的吸收是具有选择性；B.各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱:DNA分对波长260nm的紫外光有特异的吸收峰蛋白质对波长280nm的紫外光有特异的吸收峰碳水化合物对230nm的紫外光有特异的吸收峰C.A260/A280及A260/A230的比值可以反应DNA的纯度；A260/A280=1.8 DNA纯净A260/A280<1.8 表示样品中含蛋白质（芳香族）或酚类物质A260/A280>1.8 含RNA杂质，用RNA酶去除。
质粒dna的提取实验报告
质粒dna的提取实验报告质粒DNA的提取实验报告引言：DNA提取是分子生物学研究中的基础实验之一，通过提取DNA可以进一步进行PCR扩增、基因克隆等实验。
本实验旨在提取质粒DNA，质粒DNA是存在于细菌细胞质中的环状DNA分子，具有重要的研究价值。
本文将详细介绍实验的步骤、原理以及结果分析。
材料与方法：1. 细菌培养液：选择含有目标质粒的细菌进行培养，如大肠杆菌。
2. 细菌培养基：选择适宜的培养基，如LB培养基。
3. 细菌培养器具：如培养皿、离心管等。
4. DNA提取试剂盒：选择适合的DNA提取试剂盒，如酚/氯仿法或硅胶柱法。
5. 离心机：用于离心细菌培养液以获取细菌沉淀。
6. 紫外可见分光光度计：用于检测DNA的纯度和浓度。
实验步骤：1. 细菌培养：将含有目标质粒的细菌接种于LB培养基中，培养过夜，使细菌充分繁殖。
2. 收集细菌：将培养液离心，以12000转/分钟离心10分钟，将细菌沉淀收集。
3. 细胞裂解：加入适量的细胞裂解缓冲液，使细菌细胞裂解，释放DNA。
4. 蛋白质沉淀：加入酚/氯仿混合液，离心分离上层的DNA溶液和下层的蛋白质。
5. DNA沉淀：将DNA溶液转移至新的离心管中，加入等体积的冷乙醇，轻轻倒置离心管，使DNA沉淀出来。
6. DNA洗涤：用70%的乙醇洗涤DNA沉淀，去除残余的盐和杂质。
7. DNA溶解：用适量的去离子水溶解DNA沉淀，得到纯净的DNA溶液。
8. DNA浓度检测：用紫外可见分光光度计检测DNA的浓度和纯度。
结果与分析：通过实验，成功提取了质粒DNA，并进行了浓度检测。
根据实验结果，我们可以得到DNA的浓度和纯度信息，这对于后续的实验设计和操作非常重要。
此外，实验中还可以通过凝胶电泳等方法对提取的DNA进行进一步的分析，如确定DNA的大小和完整性。
结论：本实验成功提取了质粒DNA，并获得了纯净的DNA溶液。
通过浓度检测和进一步的分析，我们可以进一步了解DNA的特性和应用。
质粒dna的提取与鉴定实验报告
质粒dna的提取与鉴定实验报告质粒DNA的提取与鉴定实验报告引言：DNA是生物体内重要的遗传物质，其中质粒DNA作为细菌细胞外的环状DNA 分子，在基因工程、遗传学和生物技术研究中具有重要的应用价值。
本实验旨在通过提取和鉴定质粒DNA，探究其结构和功能。
材料与方法：1. 细菌培养液：含有质粒DNA的细菌培养物。
2. 离心管：用于离心细菌培养物。
3. 离心机：用于离心细菌培养物。
4. 细胞裂解液：用于破坏细菌细胞壁，释放质粒DNA。
5. 蛋白酶K：用于降解蛋白质，去除细胞核酸。
6. 高盐溶液：用于沉淀质粒DNA。
7. 乙酸：用于沉淀DNA。
8. 冷乙醇：用于沉淀DNA。
9. 紫外分光光度计：用于测定DNA的浓度和纯度。
10. 凝胶电泳仪：用于鉴定提取的质粒DNA。
实验步骤：1. 取适量细菌培养液，离心细菌培养物，收集菌体沉淀。
2. 加入适量细胞裂解液，充分混匀，使细菌细胞壁破裂，释放质粒DNA。
3. 加入适量蛋白酶K，降解蛋白质，去除细胞核酸。
4. 加入高盐溶液，使质粒DNA沉淀。
5. 离心沉淀，收集质粒DNA。
6. 加入适量乙酸和冷乙醇，沉淀DNA。
7. 离心沉淀，收集DNA。
8. 使用紫外分光光度计测定DNA的浓度和纯度。
9. 使用凝胶电泳仪鉴定提取的质粒DNA。
结果与讨论：通过实验，我们成功提取了质粒DNA，并进行了鉴定。
首先，通过紫外分光光度计测定，我们得到了DNA的浓度和纯度。
浓度的高低反映了提取的DNA量，纯度则表示DNA中杂质的含量。
高浓度和高纯度的DNA适合用于后续实验。
其次，通过凝胶电泳仪鉴定，我们观察到了DNA的迁移带，根据迁移带的大小和形状，可以判断DNA的大小和完整性。
此外，我们还可以通过与已知大小的DNA标准品对比，确定提取的质粒DNA的大小。
质粒DNA的提取与鉴定是基因工程和生物技术研究中的重要步骤。
通过提取质粒DNA，我们可以获取特定基因的DNA序列，用于进一步的分析和研究。
质粒dna的提取与鉴定实验报告
质粒DNA的提取与鉴定实验报告引言质粒DNA的提取与鉴定是分子生物学实验中常用的技术之一。
质粒DNA是一种圆形的DNA分子，广泛存在于细菌和真核生物中。
提取和鉴定质粒DNA能够帮助研究人员进行基因克隆、基因表达调控等实验。
本实验旨在介绍质粒DNA的提取与鉴定步骤，以供初学者了解和学习。
实验材料•细菌培养物•质粒DNA提取试剂盒•去离子水• 1.5 mL离心管•微量离心管•离心机实验步骤步骤一：培养细菌并收获培养物1.取一支含有目标质粒的细菌培养物，将其接种至含有适当抗生素的培养基中。
2.在37℃恒温摇床上培养过夜，确保细菌得到充分生长。
步骤二：收获细菌培养物1.将培养基离心机中以12000转/分钟离心2分钟，以沉淀细菌细胞。
2.弃去上清液，将细菌细胞沉淀保留在离心管中。
步骤三：质粒DNA的提取1.选择一款质粒DNA提取试剂盒，按照说明书中的步骤操作。
不同试剂盒所用方法有所差异，详细操作请参照试剂盒说明书。
2.在质粒DNA提取试剂盒提供的试剂中加入细菌细胞，充分混合。
3.通过离心将细菌细胞裂解，释放出质粒DNA。
不同试剂盒所用离心条件有所不同，一般为高速离心1-3分钟。
4.弃去上清液，留下含有裂解细胞的混悬液。
步骤四：质粒DNA的纯化1.将质粒DNA混悬液转移到新的离心管中。
2.加入适量的洗涤缓冲液，充分混合。
3.通过离心将质粒DNA沉淀，弃去上清液。
4.加入适量的洗涤缓冲液，充分混合。
5.通过离心将质粒DNA沉淀，弃去上清液。
6.加入适量的洗涤缓冲液，充分混合。
7.通过离心将质粒DNA沉淀，弃去上清液。
8.加入适量的洗涤缓冲液，充分混合。
9.通过离心将质粒DNA沉淀，弃去上清液。
10.加入适量的洗涤缓冲液，充分混合。
11.通过离心将质粒DNA沉淀，弃去上清液。
12.使用去离子水溶解沉淀的质粒DNA，使其浓度适宜。
步骤五：质粒DNA的鉴定1.使用紫外可见光分光光度计测定溶解后的质粒DNA的浓度。
2.准备一份对照组，即只含有去离子水的样品。
质粒dna提取实验报告
质粒dna提取实验报告实验目的：本实验旨在通过提取细菌质粒DNA，了解细菌质粒的结构、基因组成和使用纯度较高的质粒DNA的重要性，为后续分子生物学实验打下基础。
实验器材：- 细菌- LB液体培养基- 1.5mL微量离心管- 离心机- 动态温度水浴仪- 恒温振荡器- 超声波清洗器- 洁净平台和无菌技术用品- 始终细切割刀和取样刷- 蒸馏水、2% SDS、醋酸铵、90%乙醇、异丙醇和干燥机实验步骤：1. 制备细菌：在LB液体培养基中培养要提取质粒DNA的细菌，由于质粒DNA在对数生长期达到最高含量，因此在显微镜下观察到对数生长期的细菌时进行取样。
2. 细胞打破和溶解质粒：离心细胞，倒去培养基，加入10mL蒸馏水，用振荡器在4℃下以300rpm摇晃3小时。
然后沉淀细胞，在70℃下干燥30分钟。
随后加入150μL1%SDS和其他化学试剂混合物，使用至少15次的起始细切割刀切成绒毛状的颗粒，浸泡在低盐度醋酸铵中2小时以上。
3. 质粒DNA纯化：将浸泡了细菌绒毛颗粒的混合物离心，抽取上清液，将其加入2x体积的异丙醇与等体积的75%，然后用再生明胶抑制蛋白质在异丙醇中凝聚。
离心，除去异丙醇上清液，加入70%乙醇洗涤。
最后用干燥机吸干。
4. 质量分析：分析提取到的质粒DNA的浓度和纯度，使用分光光度计对其进行光谱分析，以检测质粒DNA的A260/A280比例和A260/A230比例。
通过比较纯度，然后将质粒DNA冻保存至-20℃或-80℃。
实验结论：本实验成功提取了细菌的质粒DNA，并进行了纯化和分析。
质粒DNA的提取和纯化是基于一系列物理和化学方法和技术的，实际操作中需要仔细操作，耐心等待，严格注意洁净操作，才能达到最佳的提取和纯化效果。
通过本实验，我进一步了解了在分子生物学和遗传学中质粒DNA的重要性，它可适用于多种研究项目和应用，例如质粒克隆、基因编辑、基因表达、和质粒蛋白质互作等。
实验一、质粒DNA的提取及检测实验报告
实验一、质粒DNA的提取及检测【实验目的】1、掌握碱裂解法提取质粒的原理和步骤2、掌握琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术3、学会PCR操作的基本技术第一部分质粒DNA的提取一、实验原理：碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。
在pH值介于12.0～12.5这个狭窄的范围内，线性的DNA双螺旋结构解开而被变性，尽管在这样的条件下，共价闭环质粒DNA的氢键会被断裂，但两条互补链彼此相互盘绕，仍会紧密地结合在一起。
当加入pH4.8的乙酸钾高盐缓冲液恢复pH至中性时，共价闭合环状的质粒DNA的两条互补链仍保持在一起，因此复性迅速而准确，而线性的染色体DNA的两条互补链彼此已完全分开，复性就不会那么迅速而准确，它们缠绕形成网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA，蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
二、仪器与试剂1、仪器恒温摇床、台式离心机2、试剂溶液I、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ、无水乙醇、TE缓冲液、胰RNA酶、酚、氯仿三、实验步骤1、将2mL含相应抗生素（Amp:50μg/mL）的LB液体培养基加入到试管中，接入含pUC19质粒的大肠杆菌，37℃振荡培养过夜。
2、取1.5mL培养物倒入微量离心管中，4000r/min离心2min。
3、吸去培养液，使细胞沉淀尽可能干燥。
4、将细菌沉淀悬浮于100μL溶液I中，充分混匀，室温放置10 min。
5、加200μL溶液Ⅱ（新鲜配制），盖紧管皿，混匀内容物，将离心管放冰上5min。
6、加入150μL溶液Ⅲ（冰上预冷），盖紧管口，颠倒数次使混匀。
冰上放置15min。
7、12000r/min，离心15min，将上清转至另一离心管中。
8、向上清中加入等体积酚：氯仿（1：1）（去蛋白），反复混匀，12000r/min，离心5min，将上清转移到另一离心管中。
9、向上清加入2倍体积无水乙醇，混匀后，室温放置5～10min。
质粒检测实验报告
一、实验目的1. 掌握碱裂解法提取质粒DNA的原理和操作步骤。
2. 学习琼脂糖凝胶电泳技术，用于检测质粒DNA的大小和纯度。
3. 了解质粒DNA的酶切分析及其在分子生物学实验中的应用。
二、实验原理质粒是细菌染色体外的环状DNA分子，它们能够在宿主细胞中独立复制。
质粒DNA 的提取是分子生物学实验中常用的技术，用于基因克隆、基因表达分析等。
碱裂解法是一种常用的质粒DNA提取方法，其原理是利用碱处理使细菌细胞裂解，释放质粒DNA，并通过离心、洗涤等步骤纯化质粒DNA。
琼脂糖凝胶电泳是一种分离和分析DNA分子的技术。
DNA分子在琼脂糖凝胶中的泳动速度取决于其分子大小和构型。
通过比较已知分子量标准品和实验样品的泳动距离，可以确定质粒DNA的大小。
此外，酶切分析可以检测质粒DNA的序列和结构。
三、实验材料1. 仪器：离心机、凝胶电泳仪、紫外灯、微量移液器、微量离心管等。
2. 试剂：LB培养基、氯化钙、酚/氯仿/异戊醇混合物、无水乙醇、TE缓冲液、琼脂糖、DNA分子量标准品、限制性核酸内切酶等。
四、实验步骤1. 质粒DNA的提取（1）将含有pUC19质粒的大肠杆菌接种于LB培养基，37℃培养过夜。
（2）将培养物转移至微量离心管中，4000r/min离心2min，收集菌体。
（3）向菌体中加入1mL的酚/氯仿/异戊醇混合物，充分混匀，室温放置5min。
（4）12,000r/min离心5min，取上清液。
（5）向上清液中加入等体积的无水乙醇，混匀，室温放置15min。
（6）12,000r/min离心10min，弃去上清液。
（7）用70%乙醇洗涤沉淀，12,000r/min离心5min，弃去上清液。
（8）空气干燥沉淀，用50µL的TE缓冲液溶解。
2. 质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳（1）制备琼脂糖凝胶，加入DNA分子量标准品。
（2）将质粒DNA样品和DNA分子量标准品混合，加样至琼脂糖凝胶。
（3）接通电源，进行电泳。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
生物化学实验报告
姓名：
学号：
专业年级：
组别：
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称质粒DNA的提取、定量与酶切鉴定
实验日期2014-12-11 实验地点第4实验室
合作者指导老师
评分教师签名批改日期
一、实验目的
1.掌握PCR基因扩增的原理和操作方法
2.掌握碱裂解法提取质粒的方法
3.了解紫外吸收法检测DNA浓度与纯度的原理、方法
4.学习水平式琼脂糖凝胶电泳操作
二、实验原理
（一）、第一部分聚合酶链式反应
1.PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶链式反应，是指在DNA聚合酶催化下，以DNA为模板，特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，在体外复制DNA 的过程。
1)加热使模板DNA，在高温下90℃-95变性，双链解链；
2)降低溶液温度，使合成引物在低温（35－70℃,一般低于模板Tm值的5℃
左右），与模板DNA互补退火形成部分双链；
3)溶液反应温度升至中温72℃，在Taq酶作用下，以dNTP为原料，引物为
复制起点，模板DNA的一条单链在解链和退火之后延伸为一条双链。
（二）、第二部分质粒DNA提取与定量
1.质粒（Plasmid）
1)独立于细菌染色体外，能独立自主复制的闭合环状DNA分子；
2)存在于细菌，放线菌，真菌以及一些动植物细胞中，在细菌细胞中最多。
2.碱裂解法、
1)基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异；
2)高碱性条件下，染色体DNA和质粒DNA变性；
3)当以高盐缓冲液调节其pH值至中性时，变性的质粒DNA复性并保存在溶
液中，染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心形成沉沉淀
去除。
3.离心层析柱
1)硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，不吸
附蛋白质、多糖等物质；
2)通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除；
3)低盐，高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
4.紫外光吸收法
1)物质在光的照射下会产生对光的吸收效应；
2)而且物质对光的吸收是具有选择性的；
3)各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱。
4)因此不同波长的单色光通过溶液时其光的能量就会被不同程度的吸收，光能
量被吸收的程度和物质的浓度有一定的比例关系。
（三）、第三部分酶切鉴定
1.限制性内切酶
1)限制性内切酶（restriction endonuclease）是DNA操作过程中所使用的基本
工具；
2)特异性地结合于一段被称为限制酶识别序列的特殊DNA序列之内或其附近
的特异位点上，并在此切割双链DNA；
3)分子克隆中常用的为II类限制酶，其识别位点长度为4、5或6个核苷酸的
反向重复序列。
（四）、第四部分琼脂糖凝胶电泳
1. 天然琼脂
1)天然琼脂（Agar）是一种多聚糖，主要由琼脂糖（Agarose ，约占80％）及
琼脂胶（Agaropectin）组成；
2)琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷；
3)琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖，由于这些基团带有电荷，在电
场作用下能产生较强的电渗现象，加之硫酸根可与某些蛋白质作用而影响电
泳速度及分离效果。
琼脂糖透明无紫外吸收，因此，目前多用琼脂糖为电泳
支持物进行平板电泳。
2.基本原理
1)琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，可以形成具有刚性的滤孔，凝胶孔径的
大小决定于琼脂糖的浓度；
2)DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动；
3)DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。
不同的DNA，
分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带(迁移
速度与分子量的对数值成反比关系)。
三、材料与方法：
（一）实验材料
1.试剂
1)菌液：大肠杆菌DH5a菌株(含靶基因CHD5片段的pMD19-T)
2)引物：正向：5’ GTA AAA CGA CGG CCA GT 3’
反向: 5’ CAG GAA ACA GCT ATG AC 3’
3)2×Premix Taq：Taq酶：5U/μl
4×dNTP: 各10mmol/L
10×缓冲液（buffer）: 500mmol/L KCl，100mmol/L Tris-HCl
4)灭菌去离子水
5)含pMD19-T质粒的大肠杆菌DH5α
6)LB培养基（液体、固体）
7)AXYGEN试剂盒质粒提取试剂盒（爱思进，中国）
a)溶液P1（S1)
b)溶液P2 (S2）
c)溶液P3（S3）
d)去蛋白液PE（W1)
e)漂洗液WB(W2）
f)洗脱液EB（Eluent)
8)DNA Marker
9)电泳缓冲液
2.仪器与器材
1)PCR仪(BioRad MJ mini)
2)台式离心机
3)微量加样枪
4)灭菌的薄壁离心管
5)凝胶电泳系统
6)凝胶成像系统
7)恒温培养箱
8)恒温摇床
9)超净工作台
10)台式离心机
11)高压灭菌锅（二）方法与步骤
4.要根据质粒的大小、大肠杆菌菌株、裂解后用于纯化的技术和实验要求选择碱裂
解法方法来提取质粒DNA 。
5.在提取质粒DNA 时，菌液一定悬浮均匀，不能有结块。
6.在质粒DNA 提取的实验中，加入溶液S2时，时间不
能太久，动作要温柔，轻轻颠倒几次。
7.在质粒DNA 提取实验中，复性时间不能太长。
8.在质粒DNA 提取实验中，将上清液转移到吸附柱时，
需小心谨慎，避免有蛋白质掺和进去，需用微量加样枪
100ul 或200ul 分几次取。
9.执比色皿时，应该拿着比
色皿的粗糙面，不能触碰光滑面。
空白对照比色测定和样品比色测定应该在同一比色皿中检测。
四、结果与讨论：
1.实验记录
测量次数质粒DNA浓度 (μg/ml) Ratio值(A260/A280)
1 95.4 1.77
2 95.5 1.78
3 97.1 1.79
平均值95. 7 1.78
2.结果与计算
相关实验图片：
3.分析与讨论
1)图片分析
a)在图片三中，其他三类DNA与Maker相比较，可知质粒DNA的分子大小
在2000bp~3000bp，酶切反应的质粒DNA片段分子大小在3000bp左右，PCR
的DNA分子大小在450bp。
b)预期PCR产物大小约400~500bp，基本符合。
2)原因分析
a)PCR颜色较浅，有可能与点样前操作失误相关。
4.复习与思考
1)碱法提质粒中溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的作用？
溶液Ⅰ：葡萄糖悬浮细胞，EDTA鳌合金属离子使DNase失活。
溶液Ⅱ：细胞壁肽聚糖在碱性下水解，核酸和蛋白质变性。
溶液Ⅲ：酸性条件下质粒DNA复性，变性蛋白-SDS＋线性DNA沉淀，Na＋可中和DNA。
2)结合实验情况，如何提高限制性酶切的反应效率？
a)酶量的选择任何时候2种酶的总量不能超过反应体系的1/10体积，而且
最大反应体系最好不要小于20 ul；
b)减少能抑制酶反应的主要污染DNA的某些物质，如酚、氯仿、乙醇等；
c)合适离子强度，主要是反应缓冲液中的离子强度,如NaCl和Mg2+,可以
激发酶切反应；
d)一般应尽量减小反应体系，且酶切反应中甘油浓度应低于5%；
e)保温时间与温度。