ch06工作曲线法测定芦丁含量讲解
芦丁标准曲线测黄酮含量方法
芦丁标准曲线测黄酮含量方法芦丁是一种黄酮类化合物，具有抗氧化、抗炎、抗癌等多种生物活性，因此在药物、保健品和食品等领域有着广泛的应用。
测定芦丁含量是对相关产品质量的重要指标之一。
本文将介绍一种测定芦丁含量的标准曲线方法，以供参考。
1. 实验原理。
芦丁的含量测定一般采用紫外分光光度法。
在一定波长下，芦丁溶液对紫外光的吸收量与其浓度成正比。
通过构建芦丁的标准曲线，可以准确测定样品中芦丁的含量。
2. 实验步骤。
（1）准备工作。
将实验所需的仪器和试剂准备齐全，包括分光光度计、芦丁标准品、乙醇、紫外吸收比色皿等。
（2）制备标准曲线。
取一系列不同浓度的芦丁标准溶液，分别用乙醇稀释至不同浓度。
分别用分光光度计测定各标准溶液的吸光度，并绘制标准曲线。
（3）测定样品。
将待测样品溶解于乙醇中，用分光光度计测定其吸光度，并根据标准曲线计算出芦丁的含量。
3. 实验注意事项。
（1）实验中应注意避光操作，防止芦丁溶液被光照射而发生降解。
（2）使用乙醇时需注意防止挥发，以免浓度发生变化。
（3）在制备标准曲线时，应确保各标准溶液浓度范围覆盖待测样品的含量范围。
4. 结果分析。
通过标准曲线测定出的样品芦丁含量，可以为相关产品的质量控制提供重要参考。
同时，标准曲线的斜率和截距也可以反映出测定方法的灵敏度和准确性。
5. 实验应用。
本方法可以应用于药物、保健品、食品等领域中芦丁含量的测定，具有简便、快速、准确的特点，适用范围广泛。
总结，标准曲线测定芦丁含量是一种简便有效的方法，通过合理的实验操作和数据处理，可以得到准确的结果。
在实际应用中，可以帮助生产厂家和监管部门对相关产品的质量进行有效监控，保障产品的安全和有效性。
希望本文所介绍的方法能够对相关领域的研究和生产工作有所帮助。
芦丁测黄酮的标准曲线
芦丁测黄酮的标准曲线
芦丁是一种黄酮类化合物，具有抗氧化、抗炎和抗癌等多种生物活性，因此在
药物和食品工业中具有广泛的应用价值。
而测定芦丁的含量则是评价其品质的重要指标之一。
本文将介绍如何建立芦丁的标准曲线，以便后续的含量测定。
首先，准备工作。
取得芦丁的纯品，并按照一定的浓度系列进行稀释，以便后
续的测定。
同时，准备好所需的实验仪器和试剂，包括分光光度计、玻璃仪器、溶剂等。
其次，制备标准溶液。
将事先准备好的芦丁标准品溶解于适量的溶剂中，得到
一系列不同浓度的标准溶液。
在此过程中，要注意控制溶解温度和时间，以免影响溶液的稳定性。
接着，进行分光光度法测定。
将不同浓度的标准溶液分别置于分光光度计中进
行测定，记录下吸光度与浓度的对应数值。
在此过程中，要注意保持仪器的稳定性，避免外界因素对测定结果的影响。
然后，绘制标准曲线。
利用所得的吸光度与浓度数据，采用适当的数学方法进
行数据处理和曲线拟合，得到芦丁的标准曲线。
在此过程中，要注意选择合适的拟合模型和评价指标，以确保曲线的准确性和可靠性。
最后，验证标准曲线。
利用所建立的标准曲线，对未知样品进行测定，并通过
回归分析等方法验证曲线的可靠性和适用性。
在此过程中，要注意选择合适的验证方法和指标，以确保测定结果的准确性和可靠性。
通过以上步骤，我们可以成功建立芦丁的标准曲线，为后续的含量测定提供可
靠的依据。
同时，这也为其他类似化合物的标准曲线建立提供了参考和借鉴。
希望本文能对相关研究和实验工作提供一定的帮助和指导。
标准曲线法测定芦丁含量
标准曲线法测定芦丁含量引言：芦丁是一种黄酮类化合物，具有多种生物活性，被广泛应用于药品、保健品、化妆品和食品等领域。
因芦丁来源性质的不同，其纯度与含量也不相同，因此需要采用准确、快速、简便、重复性好的方法测定芦丁含量。
标准曲线法是一种常用的测定芦丁含量的方法，其原理是利用标准品芦丁与待测样品的吸收率之间的关系制定标准曲线，并用该曲线计算待测样品中的芦丁含量。
本文将详细介绍标准曲线法测定芦丁含量的步骤和所需实验材料、仪器设备以及注意事项。
实验材料：1. 芦丁标准品（纯度≥95%，国药准字H44022825）；2. 待测芦丁样品；3. 甲醇（高效液相色谱用）；4. 硝酸钠（NaNO3）；5. 氯化铝（AlCl3）；6. 氢氧化钠（NaOH）；7. 甲酸（HCOOH）；8. 蒸馏水；9. 恒温水浴；10. 紫外可见分光光度计；11. 量筒、移液管、滤纸等通用实验室器具。
步骤：1. 制备芦丁标准品溶液：取芦丁标准品适量，用甲醇稀释至一定浓度（通常为1mg/mL）。
将该溶液过滤，即得到芦丁标准品溶液。
2. 制备标准曲线：按照下列表格制备芦丁标准品浓度溶液及对应吸收峰值：浓度（μg/mL）吸收峰值（nm）0 02.5 3045 4927.5 66410 840将上述数据绘制成图表，即为芦丁标准曲线。
通常使用双对数坐标纸，用直线拟合各浓度对应的吸收峰值，以得到一条直线。
标准曲线的方程为：y = ax + b，其中y为吸收峰值，x为浓度，a为斜率，b为截距。
3. 测定待测样品的吸收峰值：取适量待测样品，用甲醇稀释至一定浓度（通常为0.1mg/mL）。
将该溶液过滤后，用紫外可见分光光度计分别测定吸收波长为305nm的吸收峰值，记录吸收峰值（y）。
4. 计算待测样品中芦丁的含量：根据标准曲线，计算待测样品中芦丁的浓度（x）。
由于待测样品的浓度已知，因此可以根据计算出的浓度和待测样品的体积计算出待测样品中芦丁的含量。
分光光度法测定芦丁的含量
新乡医学院分析化学实验课教案首页授课教师姓名及职称：新乡医学院化学教研室年月日实验分光光度法测定芦丁的含量一、实验目的1．掌握比色分析的一般操作方法；2．学习分光光度计的使用方法。
二、实验原理分光光度法定量分析分为单组分定量分析，多组分定量分析，本实验是单组分定量分析，单组分定量分析方法包括吸光系数法、校正曲线法、对照法等，分析中最常用的是校正曲线法。
校正曲线法：先配制一系列不同浓度的标准溶液，然后在选定的分析条件下测定吸光度，然后以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得到一条通过原点的直线，这条直线称为校正曲线，在相同的测定条件下，测得样品溶液的吸光度，通过校正曲线就可以求出样品的浓度了。
本实验通过校正曲线法测定芦丁的含量，芦丁溶液的颜色较浅。
不能直接用分光光度法进行测定，那么，需要用显色剂将其变为有颜色的溶液，芦丁与Al3+在亚硝酸钠碱性溶液中生成红色配合物，该红色配合物最大吸收波长在510nm，所以可以在510nm测定吸光度。
三、仪器与试剂721型分光光度计，容量瓶；芦丁标准品，60%乙醇，亚硝酸钠溶液（1:20），硝酸铝溶液（1:10），1 mol∙L-1氢氧化钠。
四、实验步骤1．标准溶液的制备取120℃真空干燥至恒重的芦丁标准品约50mg精密称定，置于50mL容量瓶中，加60%乙醇适量，水浴上微热，使溶解，放冷后用60%乙醇稀释至刻度，摇匀。
2．绘制标准曲线精密吸取标准溶液0.00，1.00，2.00，3.00，4.00及5.00mL，分别置于50mL容量瓶中，各加60%乙醇使成5.0mL，各精密加入亚硝酸钠溶液（1:20）0.5mL，摇匀，放置6分钟后，加硝酸铝溶（1:10)1.5mL，摇匀，放置6分钟，加1 mol∙L-1氢氧化钠试液4mL，蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置15分钟。
在510nm 波长下测定各溶液的吸光度。
以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，绘制标准曲线。
3．样品测定精密称取芦丁约50mg，置于50mL容量瓶中，加60%乙醇适量。
中药饮片中芦丁的含量检测
中药饮片中芦丁的含量检测作者：贾洪文来源：《中国科技博览》2014年第13期[摘要]目的测定20种中药饮片中芦丁的含量。
方法采用反相高效液相色谱法，以Hypersil GOLD柱（5μm 250mm×4.60mm）为分析柱，乙腈∶水（加磷酸调pH至2.6）（8∶92～30∶70）为流动相，流速：0.8ml/min；检测波长为254nm，柱温30℃。
结果芦丁浓度在（0.0095～0.3800）μg范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系。
结论该方法简易准确，重现性好，在本色谱条件及样品处理方法下，可以准确测出该20种中药饮片中芦丁的含量。
[关键词]中药；芦丁；高效液相色谱法中图分类号：G005 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）13-0355-01芦丁，即芸香苷，是中药饮片中较多见的一种黄酮类成分，有抗炎、降血脂、抗病毒及维生素P样等作用。
有关芦丁的HPLC测试方法已有很多报道，笔者采用反相高效液相色谱法在50余种常用中药饮片中分离、检测芦丁成分，经在时间轴上（调节色谱条件以使出峰保留时间在10～35min范围内改变）反复与芦丁对照品比较，最后确认其中的20种中药饮片中含有较高的黄酮类物质芦丁。
文献曾报道该20种药材中的8种含有芦丁，但具体含量不详，笔者查阅国内有关文献，未发现在另12种药材中也含有芦丁的最新报道。
实验结果可供有关科研和临床工作者参考。
1 实验研究1.1 仪器和试药 Waters高效液相色谱仪，包括510泵，484紫外检测器，680梯度控制器。
芦丁对照品（中国药品生物制品检定所），50种药材样品分3次每次50种分别购自浙江中医学院实验药厂、浙江省中医院和浙江中医学院门诊部。
经鉴定并确认。
乙腈为色谱醇，磷酸为分析醇，水为纯净水。
1.2 色谱条件 Hypersil GOLD柱（5μm 250mm×4.6mm）；流动相：乙腈∶水（8∶92～30∶70），加磷酸调pH至2.6；流速：0.8ml/min；检测波长为254nm，柱温为30℃。
实验九 HPLC法测定中药饮片中芦丁的含量
实验九HPLC法测定中药饮片中芦丁的含量一、实验目的1 ．理解反相色谱的原理和应用。
2 ．掌握外标定量方法。
二、实验原理芦丁，即芸香苷，是中药饮片中较见的种黄酮类成分，有抗炎、降血脂、抗病毒及维生素P样等作用。
高效液相色谱分离是利用试样中各组分在色谱柱中的淋洗液和固定相间的分配系数不同，当试样随着流动相进入色谱柱中后，组分就在其中的两相间进行反复多次（103-106）的分配（吸附－脱附－放出），由于固定相对各种组分的吸附能力不同（即保存作用不同），因此各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱长后，便彼此分离，顺序离开色谱柱进入检测器，产生的离子流信号经放大后，在记录器上描绘出各组分的色谱峰。
三、实验试剂、仪器及设备仪器: LC100高效液相色谱仪（UV检测器;二元梯度泵），上海五丰。
样品:桑叶、芦丁标准品。
试剂:甲醇(HPLC纯) ,重蒸馏水。
四、实验内容1. 标准液制备及标准曲线制备: 准确称取制备好的芦丁标准样品10mg，加蒸馏水溶解后移人10mL的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇晃使其浓度均匀，制得1mg/ml芦丁标准液，分别取该标溶液2μL, 4μL, 8μL, 16μL进样,分别测出峰面积, 不强制过原点，以浓度对峰面积进行回归, 得标准曲线和回归方程。
数据处理机给出峰面积值,以标准品进样量(μg) 为纵坐标( Y) ,峰面积为横坐标( X) ,得标准曲线。
2. 样品液制备:精取桑叶叶粉末(过20目筛) 5.00 g置于250ml烧瓶中，加入50ml甲醇水浴回流提取30min,过滤，取续滤液20ml，氮气吹干后，用甲醇定容至5.00ml,用滤头过滤后即为供试液。
3. 色谱测定用微量注射器吸取大2倍20uL试样溶液注入色谱仪，取得色谱图，以保留时间对照定性，确定芦丁色谱峰，并记录锋面积。
五、 实验过程原始记录1 .记录色谱条件:色谱柱Agilent XDB-C18 色谱柱(4.6mm ×250 mm ,5 μm) ;流动相甲醇:水 = 50∶50 ; 柱温为30℃;流速1 mL/min ;检测波长254nm ;进样量20μL 。
芦丁标准曲线的绘制
芦丁标准曲线的绘制
芦丁是一种常用的生物碱，广泛应用于药物和食品工业。
在实验室中，我们经
常需要对芦丁进行检测和分析。
而芦丁的标准曲线是进行定量分析的重要基础，下面我们就来介绍一下芦丁标准曲线的绘制方法。
首先，我们需要准备一定浓度范围内的芦丁标准溶液。
可以选择不同浓度的芦
丁标准品，按照一定比例稀释成一系列浓度不同的标准溶液。
在实验室中，通常会选择5个不同浓度的标准溶液，以覆盖待测样品中芦丁的浓度范围。
接下来，我们需要利用分光光度计或高效液相色谱仪等仪器进行实验。
首先，
将各个浓度的标准溶液分别置于仪器中进行检测，得到各自的吸光度数值。
然后，将这些吸光度数值作为横坐标，对应的标准溶液浓度作为纵坐标，绘制出吸光度与浓度的标准曲线。
在绘制标准曲线时，我们需要注意以下几点。
首先，要保证实验条件的一致性，包括仪器的稳定性、试剂的纯度等。
其次，要进行多次重复实验，取平均值作为吸光度数值，以提高数据的准确性。
最后，要选择合适的拟合方法，如线性拟合、二次拟合等，以确保标准曲线的拟合度和预测能力。
绘制好芦丁的标准曲线后，我们就可以用于待测样品的浓度分析了。
只需要将
待测样品的吸光度数值代入标准曲线方程中，就可以得到样品中芦丁的浓度值。
这样，我们就能准确地进行定量分析，为后续的实验和生产提供可靠的数据支持。
总之，芦丁标准曲线的绘制是进行定量分析的重要步骤，通过合理选择标准溶液、仪器检测和曲线拟合，可以得到准确可靠的分析结果。
希望本文的介绍能对大家有所帮助，谢谢阅读！。
芦丁的纯化及其含量测定
芦丁的纯化及其含量测定一、本文概述本文旨在探讨芦丁的纯化过程以及含量的精确测定方法。
芦丁，作为一种具有广泛应用价值的化合物，其在医药、化妆品和食品工业等领域都有着重要的应用。
然而，芦丁的天然来源有限，且其提取物中常含有其他杂质，因此，对芦丁进行纯化并准确测定其含量就显得尤为重要。
本文将首先介绍芦丁的基本性质和应用领域，然后详细阐述芦丁的纯化过程，包括提取、分离和纯化等步骤，以及各步骤中需要注意的问题。
在此基础上，本文将介绍芦丁的含量测定方法，包括常用的光谱法、色谱法等，并对各种方法的优缺点进行比较和讨论。
通过本文的研究，我们期望能够为芦丁的纯化和含量测定提供一套有效、可行的方法，为芦丁的应用提供更为可靠的质量保证。
我们也期望通过本文的研究，能够推动芦丁提取和纯化技术的发展，为相关产业的发展提供技术支持。
二、芦丁的纯化方法芦丁的纯化是提取过程中的关键步骤，其目的在于从复杂的植物提取物中分离出高纯度的芦丁。
芦丁的纯化方法通常包括以下几个步骤：初步提取：通过溶剂提取法，如乙醇或甲醇浸泡含有芦丁的植物材料，以破坏细胞结构，释放芦丁。
此步骤后，可获得含有芦丁的粗提物。
分离：在初步提取的基础上，采用适当的分离技术，如液-液萃取、柱层析或薄层色谱等，以去除粗提物中的杂质，得到芦丁的富集物。
精制：为了进一步提高芦丁的纯度，可以采用重结晶、制备型高效液相色谱（HPLC）或薄层色谱的精制方法。
这些方法可以进一步去除富集物中的微量杂质，得到高纯度的芦丁。
干燥：将精制后的芦丁进行干燥处理，以去除残留的水分和溶剂，得到最终的芦丁纯化物。
在纯化过程中，需要注意操作条件的控制，如温度、pH值、溶剂选择等，以确保芦丁的稳定性和纯度。
纯化方法的选择和优化也需根据具体的植物来源、芦丁的含量和杂质成分等因素进行调整。
通过以上步骤，可以有效地纯化芦丁，为后续的含量测定和其他研究提供高质量的样品。
三、芦丁的含量测定方法芦丁的含量测定是评估其纯度以及确定其在药物制剂中的准确含量的重要步骤。
不同方法测定芦丁片中芦丁含量的比较
不同方法测定芦丁片中芦丁含量的比较高召军;齐永秀【摘要】目的采用高效液相色谱法(HPLC)和紫外分光光度法(UV)分别测定芦丁片中芦丁的含量并进行比较.方法 HPLC法采用色谱柱为Venusil MPC18(5μm,4.6×250 mm),流动相为甲醇-0.2％冰醋酸(40:60),流速为1.0 ml/min,检测波长为254 nm,柱温为30℃,进样量20μl.紫外分光光度计法以75％的乙醇为溶剂,检测波长为500 nm.结果紫外分光光度法中芦丁浓度在5～100μg/ml时,吸光度和浓度呈良好的线性关系(r=0.9990),平均回收率为99.36％,RSD为1.25％.芦丁浓度在20～100μg/ml时,高相液相色谱法测得线性关系良好(r=0.9996),平均回收率为100.3％,RSD为1.58％.结论采用F检验对HPLC法和UV法的芦丁含量测定结果进行检查,结果显示两者测得结果没有显著性差异,两种方法均可用于芦丁片中芦丁的含量测定.【期刊名称】《泰山医学院学报》【年(卷),期】2018(039)006【总页数】3页(P644-646)【关键词】芦丁片;紫外分光光度法;高效液相色谱法;含量测定【作者】高召军;齐永秀【作者单位】泰山医学院,山东泰安 271016;泰山医学院,山东泰安 271016【正文语种】中文【中图分类】R917芦丁(Rutin)，别名：芸香苷，是一种从植物中提取的黄酮类化合物，其具有很多方面的生理活性，具有抗紫外线、抗血栓形成、维持血管弹性、增强毛细血管抵抗力的能力，并有降低血管脆性和通透性及对癌症的辅助治疗等作用[1-2]。
正因为芦丁有如此好的医学作用，富含芦丁的植物，如槐米、苦荞麦，可作为保健品使用。
此外，芦丁还能作为抗氧化剂和天然食用色素[3]。
目前文献报道芦丁片的含量测定方法有HPLC法和UV法，本研究采用HPLC法和UV法分别测定芦丁片中的芦丁含量，并用F检验的方法对这两种方法进行比较。
芦丁的纯化及其含量测定
芦丁的纯化及其含量测定【摘要】目的制备高纯度芦丁的目的是用作对照品或满足其它特殊需要的试剂。
方法从槐米中提取芦丁，并将其制备成对照品。
采用既简便又经济的酸提碱沉法从槐米中提取芦丁，经过精致，分离得芦丁对照品，并用一般方法、薄层层析法、核磁共振法进行鉴定，高效液相法测定其含量。
结果经化学法、薄层层析法鉴定，核磁共振鉴定表明芦丁样品与芦丁标准品图基本一致；高效液相测得含量98.05%。
结论此种实验室制备芦丁对照品的方法操作简单易行，产品纯度较高可作为对照品代替标准品用。
【关键词】芦丁；分离；纯化；高效液相色谱法；含量测定Abstract：ObjectiveTo establish the methods for purification，identification and determination of rutin reference substance.Methods Extract rutin from Sophora japonica L. by the alkali extraction and acid precipitation. Then refinement and separation of the rutin reference substance was done. Identified the substance by the normal way. TLC and NMR . HPLC was used to determine the content of rutin. Results After identified by chemical way， TLC， and NMR， the results showed that the chart of the sample of rutin and the chart of standard substance were unanimous， the mean content was 98.05%.ConclusionThis way of preparing rutin in the lab is simple and practical. The products are very pure，so it can be used in place of substance replaced standard substance.Key words：Rutin; Separation ; Purify ； HPLC； Determination芦丁是一种分布广泛的黄酮类化合物，主要存在于槐米，芸香，荞麦，沙棘等植物。
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芦丁的测定（标准曲线制备与芦丁测定一起完成） 精密移取芦丁标准溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、 5.0ml和样品液3.0ml置10ml容量瓶中→各加30%乙醇 使成5.0ml→各精密加入亚硝酸钠溶液（1→20） 0.3ml，摇匀，放置6分钟→各加硝酸铝（1→20） 0.3ml，摇匀，再放置6分钟→各加氢氧化钠试液4ml, 用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置15分钟。 在510nm波长下测定各瓶溶液的吸收度（以第一瓶 作空白）以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，绘制 标准曲线。测定样品的浓度。
要使得测定浓度准确 应当考虑影响测定准确的因素： 1 显色反应的完全程度（取决于）： 介质的pH 显色剂的用量 反应温度 反应时间 2 吸光度的物理测定条件
如何确定反应最佳条件
在建立方法时，需要通过实验确定最佳反应 条件，为此改变其中一个因素（例如介质的 pH值暂时固定其他因素，显色后测量相应溶 液的吸光值，通过吸光度-pH曲线确定反应 的酸度范围，其他几个影响因素的适宜值也 可以按这一方法分别确定。
实验六 工作曲线法测定芦丁含量
可见分光光度法
内容
一、分光光度法的特点 二、可见分光光度法与紫外的区别 三、分光光度计测定物质含量的原理 四、工作曲线法测定芦丁含量 五、本次实验注意事项
六、仪器的操作
分光光度法的特点（包括紫外和可见）
分光光度法与其他测定方法比较有这样一些特点 1、首先，它的应用广泛，在国际上发表的有关分析的 论文总数中，分光光度法占28%，我国约占所发表论 文总数的33%。 2、灵敏度高，由于新的显色剂大量合成，并在应用研 究方面取得了重要进展，使得测定物质的灵敏度提高。 3、选择性好，目前有些元素只要控制适当的显色条件 就可以直接进行光度法测定。 4、准确度高，浓度测量的相对误差在1～3%范围 5、分析成本低，操作简便快速。
结果 1、列出浓度C与吸光度A对应表格 2、用作图法绘制芦丁工作标准曲线 3、用计算器回归求标准曲线方程A=(a)C+( b), 要求r=0.998以上 4、从图中读出芦丁的浓度,并计算瓶中芦丁样 品的浓度 5、计算器回归求芦丁样品的浓度并计算瓶中芦 丁样品的浓度。
注意事项
移液管，容量瓶的正确使用 NaOH每吸一次可以放两个，比色杯不要甩 容量瓶易翻倒，注意放好 注意放的时间 NaNO2加0.3ml，不是0.03ml 标准浓度（看黑板），各浓度要计算 蒸馏水要加至刻度后摇(用滴管)，容量瓶拿在手 上看刻度 浓度的测定，以1号为空白，从低浓度至高浓度 来测 数据当场交，报告回去做
芦丁的测定各试剂用量
编号 1 2 1.00 3 2.00 4 3.00 5 4.00 6 5.00 3.00 7
标准溶液(ml) 0 样品溶液(ml)
30%乙醇(ml)
NaNO2(ml) Al(NO3)3(ml) NaOH(ml)
5.00
4.00
3.00
2.00
1.00
2.00
都加0.30ml，摇匀后放置6分钟 都加0.30ml，摇匀后放置6分钟 都加4ml，摇匀后放置15分钟后在510nm条件下测定A
四、思考题 相同厚度的各比色皿透光性不一致时， 为什么要在经过多次洗涤后各皿透光率
差异无改变下才使用校正值？
工作曲线法和标准对比法分别适用何 种情况？从本实验结果看，能否用标准
对比法？
仪器的操作
1、预热： 仪器开机后灯及电子部分需热平衡，故开机预热30 分钟后才能进行测定工作 2、调零： 目的：校正基本读数标尺两端（配合100%T调节）进入正确测 试状态 调整时机：开机预热30分钟后，改变波长或测试一段时间，以 及做高精度测试之前 操作： 将拉杆拉出半格（或打开盖子）遮断光路，然后按 “0%”键，即能自动调整零位 3、调整100%： 目的：校正基本读数标尺两端（配合调零）进入正确测试状态 调整时机：同上 操作： 空白样品置入样品室光路中，盖下盖子（打开光门）然 后按“100%T”键，即能自动调整100%。 4、调波长：用↑、↓箭头调节波长，调至所需波长
可见分光光度法与紫外的区别：
1、光源不同，紫外用氢灯作光源，可见用钨灯 2、测定波长不同，紫外波长范围180～350nm 可见波长范围320～1000 3、可见需显色，紫外不需显色 可见分光光度测定中通常是被测物质与显色剂 反应，生成有色物质，然后测定其吸光度，进而 求得被测物质的含量。
三、实验内容
仪器 光电分光比色计 使用方法见附件 比色皿的校核 将同样厚度的四个比色皿分别编号 标记，都装空白溶液，在所用波长（510nm）下比较 各比色皿的透光率，应相同，若有显著差异，应将比 色皿重新洗涤后再装空白溶液测试，经洗涤可使透光 率的差异减小时，可通过多次洗涤使透光率一致。 若经几次洗，仍然不一致可如下校正：以透光率 最大的比色皿为100%透光，测定其余各皿的透光率， 分别换算成吸收度作为各比色皿的校正值。测定溶液 时，以上述100%透光率的比色皿作空白，用其他各 皿装溶液，测得吸收度值然后碱去所用比色皿的校正 值。
二、实验原理
芦丁又名芸香甙，维生素P，属黄酮类化合物，临床主 要用于治疗脑溢血，高血压，视网膜出血等疾病。 黄酮类化合物的结构性质 结构中含有酚羟基和环酮基结构，可与某些金属盐试 剂生成有色络合物，在510nm波长 处有吸收，用可见分光光度计测 其含量。 本实验利用黄酮甙与亚硝酸钠、 硝酸铝反应在碱性时显红色的 反应测定芦丁的含量。
标准曲线：一份称样量，但是可以定量很 宽的线性范围；中间可能存在的误差---称 样时引入的误差 标准对照法：2份或者2份以上的称样量， 只能定量90-110%的含量，且不能存在较大 的截距
分光光度计测定物质含量的原理： （紫外与可见基本相同）
均采用一个能产生多个波长的光源，通过系列
分光装置后产生特定波长的光源，其透过被测 样品后，部分光源被 吸收，计算样品吸光 值，由比尔-朗白定律
求得样品的浓度。
工作曲线法测定芦丁含量
一、实验目的
（1）掌握可见分光光度计的使用 （2）掌握光电比色的一般操作。 （3）学会用作图法及计算器回归法求 芦丁样品的浓度