基因工程简答题综述.doc
基因工程简答题
(1)修复反应，制备平末端
可用Klenow酶修复限制性内切核酸酶或其他方法产生的5'或3'突出末端，制备平末端，这样可以使原来具有不相容的黏性末端的DNA片段通过平末端重组。如在反应系统中加入放射性同位素标记的脱氧核苷酸，用这种末端填补的方法可以制备3'末端标记的探针。
答：
基因型是lac-．原因是在该密码子中插入了两个碱基，造成了移码突变，所以Lac的基因是缺陷的
27．在基因工程中，为了在细菌细胞中表达真核生物的基因产物，为什么通常要用cDNA
而不用基因组DNA?为什么要在cDNA前加上细菌的启动子?
答：
这是因为细菌没有内含子剪接系统，并且不能识别真核生物的启动子之故。
10． 列举质粒载体必须具备的4个基本特性。
．答：
(1)独立复制； (2)有选择标记； (3)有独特的酶切位点； (4)能转化但不扩散。
11． 什么叫穿梭载体？
答：
含有细菌质粒和克隆的真核生物DNA片段的杂种质粒，有两个复制起点和既能在细菌又能在真核细胞中进行选择的选择标记，所以，很容易从一宿主转到另一个宿主(来回穿梭)。
条件的改变会出现第二活性的酶的右上角加一个星号表示，因此第二活性又称为星
活性。
概括起来，诱发星活性的因素有如下几种：(1)高甘油含量(>5％, v／v)；(2)限制性
内切核酸酶用量过高(>100U／ugDNA)；(3)低离子强度(<25 mmol／L)；(4)高pH(8．0
如果你的杂交探针是双链的，可能因为在加人杂交混合物之前忘记将探针变性而得到空白的放射自显影结果。
23．切口移位(nick translation)标记探针的主要步骤有哪些?
基因工程技术考试试题
基因工程技术考试试题一、选择题（共10题，每题2分，共计20分）1. DNA是由以下哪种分子组成的？A. 蛋白质B. 脂质C. 糖类D. 细胞膜2. 下列哪种是基因工程技术的一种应用？A. 组织工程B. 基因治疗C. 生物降解D. 太阳能发电3. PCR技术用于什么目的？A. 基因克隆B. 基因敲除C. 基因突变D. 基因治疗4. 基因工程技术最早起源于哪个国家？A. 美国B. 英国C. 中国D. 日本5. 下列哪种是基因编辑的一种主要方法？A. RNA干扰B. 全基因组测序C. 基因枪D. CRISPR-Cas96. 基因工程技术在农业领域的主要应用是什么？A. 作物抗虫性改良B. 增加作物产量C. 提高作物口感D. 减少作物生长周期7. 双链RNA干扰主要用于什么目的？A. 基因敲除B. 基因突变C. 基因治疗D. 基因表达调控8. 基因工程技术在医药领域的主要应用是什么？A. 生产抗生素B. 疾病诊断C. 组织工程D. 基因改良9. 基因工程技术是否可以用于人类克隆？A. 可以B. 不可以10. 基因工程技术是否会对生态环境造成影响？A. 会B. 不会二、简答题（共5题，每题10分，共计50分）1. 请简要介绍基因工程技术的原理和主要方法。
2. 基因工程技术在农业领域的应用有哪些？请举例说明。
3. 什么是基因编辑？请详细描述CRISPR-Cas9基因编辑系统的工作原理。
4. 简要介绍基因工程技术在医药领域的应用，包括基因治疗和药物生产。
5. 基因工程技术是否存在伦理道德问题？请阐述你的观点。
三、论述题（共1题，30分）请阐述基因工程技术对人类社会和生态环境的影响，包括积极和消极两方面。
生物基因工程知识点总结
生物基因工程知识点总结生物基因工程是一种通过改变生物体的遗传物质来改变其性状的技术。
它涉及到许多关键的知识点，如下：1. 基因：基因是生物体内控制特定性状的遗传信息单位。
它是DNA分子中的一个特定序列，负责编码产生蛋白质。
2. DNA：脱氧核糖核酸（DNA）是生物体内存储遗传信息的分子。
它由四种碱基（腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌呤和胞嘧啶）组成的两条螺旋状链结构。
3. 基因表达：基因表达是指基因通过转录和翻译的过程将DNA的遗传信息转化为蛋白质的过程。
4. 转基因：转基因是指将外源基因导入到另一种生物体的基因组中，使其表达新的性状。
转基因技术是生物基因工程的核心。
5. 基因编辑：基因编辑是一种通过直接修改组织或细胞中的基因序列来改变生物体遗传信息的技术。
常用的基因编辑工具包括CRISPR/Cas9、TALENs和ZFNs。
6. 载体：载体是一种用于将外源基因导入到生物体中的工具。
常用的载体包括质粒、病毒和细胞。
7. 克隆：克隆是指通过人工手段复制一个生物个体的基因组。
克隆技术可以用于繁殖优良的动植物品种和疾病模型的制备。
8. 基因检测：基因检测是一种用于检测个体的遗传信息的技术。
它可以用于遗传病的筛查、个体的亲缘关系鉴定和种群遗传学的研究。
9. 合成生物学：合成生物学是一种基于工程原理设计和构建新的生物系统的学科。
它通过组合基因和其他生物部件来设计具有特定功能的新生物体。
10. 生物安全：生物安全是指在进行生物基因工程研究和应用时保护人类和环境的安全。
它包括对实验室条件的控制、对转基因生物体的监管和对风险评估的实施。
以上是生物基因工程的一些主要知识点，它们一起构成了生物基因工程这个学科的基础和核心。
基因工程试题(完整)
答案：基因操作。
将在细胞外产生的核酸（物质）分子插入到病毒，质粒或其它载体系统中，再整合到特定的宿主中，从而形成一种新的可连续繁殖的有机体。
名词解释问题： Interrupted genes参考答案：间断基因。
序列中间插入有与氨基酸编码无关的DNA 间隔区，使一个基因分隔成不连续的若干区段。
我们称这种编码序列不连续的基因为间断基因。
名词解释问题： Promotor参考答案：启动子。
DNA 分子可以与RNA 聚合酶特异结合的部位，也就是使转录开始的部位。
名词解释问题： Subcloning参考答案：亚克隆。
当初始克隆中的外源DNA 片段较长，含有许多目的基因以外的DNA 片段时，在诸如表达、序列分析和突变等操作中不便进行，将目的基因所对应的一小段DNA 找出来，这个过程叫“亚克隆”。
填空题问题：基因操作（Gene manipulation）的核心部分是基因克隆（gene cloning），gene cloning 的基本要点有（），（）和（）。
参考答案：克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择填空题问题：（）是遗传物质的基本单位,也是作为遗传物质的核酸分子上的一段片段。
它可以是连续的，也可以是（）；可以是（），也可以是RNA；可以存在于染色体上，也可以（）参考答案：基因；连续；DNA；存在于染色体之外（如质粒，噬菌体等）填空题问题：基因操作并不是一个法律概念，除了包括基因克隆外，还包括基因的（）、（）、（）和（）等与基因研究相关的内容。
参考答案：表达；调控；检测；改造填空题问题：启动子（Promotor）是指（）。
通常一个Gene 是否表达，（）是关键的一步，是起决定作用的。
在转录过程中，Promoter还是（）的结合位点。
参考答案：基因转录过程中控制起始的部位；转录起始；RNA 聚合酶填空题问题：原核生物的RNA polymerase 主要由两部分组成：（）和（），其中σ-因子并不参与RNA 的合成，它的作用主要是（）。
基因工程简答题
基因工程1、转基因抗病香蕉的培育过程如图所示。
质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等四种限制酶切割位点。
请回答：（1）构建含抗病基因的表达载体A时，应选用限制酶，对进行切割。
（2）培养基中的卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长，欲利用该培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，应使基因表达载体A中含有，作为标记基因。
（3）香蕉组织细胞具有，因此，可以利用组织培养技术将导入抗病基因的香蕉组织细胞培育成植株。
图中①、②依次表示组织培养过程中香蕉组织细胞的2、科学家将大麦细胞中的LTP1基因利用基因工程手段导入啤酒酵母菌中，使其产生LTP1蛋白，使酿出的啤酒泡沫更加丰富。
具体的操作过程如图所示,请据图回答问题。
(1)图中所示的基因工程操作步骤的A和C分别是______、________。
(2)由图中可以看出，所用的载体甲是______，载体甲的化学本质是_______。
(3)简要说明获得乙的方法步骤：。
(4)已知甲中含有抗青霉素基因(非LTPl基因的插入位点)，而啤酒酵母菌没有青霉素抗性，试说明如何检测和筛选出含有目的基因的啤酒酵母菌?。
(5)转基因啤酒酵母菌合成LTPl蛋白的场所是_____ ，原料是____。
LTPl基因在转基因啤酒酵母菌中的遗传信息传递过程是_________ 。
3、继哺乳动物乳腺生物反应器研发成功后，膀胱生物反应器的研究也取得了一定进展。
最近，科学家培育出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。
请回答：（1）将人的生长激素基因导入小鼠受体细胞，常用方法是。
（2）进行基因转移时，通常要将外源基因转入中，原因是。
（3）通常采用技术检测外源基因是否插入了小鼠的基因组。
（4）在研制膀胱生物反应器时，应使外源基因在小鼠的细胞中特异表达。
（5）为使外源基因在后代长期保持，可将转基因小鼠体细胞的转入细胞中构成重组细胞，使其发育成与供体具有相同性状的个体。
该技术称为。
基因工程题库及答案汇编
基因工程题库及答案汇编一、填空题1．基因工程是年代发展起来的遗传学的一个分支学科。
基因工程技术的诞生，使人们从简单地利用现存的生物资源进行诸如发酵、酿酒、制醋和酱油等传统的生物技术时代，走向的时代。
2．随着基因工程技术的诞生和发展，人类可以通过、和等三种主要生产方式，大量取得过去只能从组织中提取的珍稀蛋白，用于研究或治病。
3．Cohen等在年构建了第一个有功能的重组DNA分子。
4．基因工程的两个基本特点是：(1)，(2)。
5．基因克隆中三个基本要点是：；和。
6．年，美国斯坦福大学等在上发表了题为：“将新的遗传信息插入SV40病毒DNA的生物化学方法：含有λ噬菌体基因和E．coli半乳糖操纵子的环状SV40DNA”的论文，标志着基因工程技术的诞生。
这一工作具有划时代的意义，但是他们并没有。
7．克隆基因的主要目的有四：(1)；(2)；(3)；(4)。
填空题答案1．70；按人们的需要而定向地改造和创造具有新的遗传性品种。
2．细菌发酵；真核细胞培养；乳腺生物反应器。
3．19734．(1)分子水平上的操作；(2)细胞水平上的表达。
5．克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择6．1972；P．Berg；Proc．Natl．Acad．Sci．USA；证明体外重组的DNA分子具有生物学功能7．(1)扩增DNA；(2)获得基因产物；(3)研究基因表达调控；(4)改良生物的遗传性二、选择题(单选或多选)1．因研究重组DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是()(a)A．Komberg(b)W．Gilbert(c)P．Berg(d)B．McClintock2．第一个作为重组DNA载体的质粒是()(a)pBR322(b)ColEl(c)pSCl01(d)pUCl83．第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是()(a)EcoRI(b)EcoB(c)EcoC(d)EcoRⅡ4．P Berg构建SV40二聚体时用了几种不同的酶，其中()的作用是制造隐蔽的5’端。
基因工程试题
基因工程一、判断题(1)迄今发现的质粒DNA都是环状的。
(╳)(2)用同一种酶切割载体和外源DNA得到粘性末端后，为防止它自身环化，要用CIP将它脱磷酸。
(╳)(3)完整的总RNA样品电泳应呈现三条带-28S、18S和5S。
(√)(4)由同尾酶产生的粘性末端序列很容易重新连接，但是两种同尾酶消化产生的粘性末端重新连接形成的新片段将不能被该两种酶的任何一种所识别。
(√)(5)Mg2+浓度对PCR扩增效率影响极大，浓度过高可能降低PCR扩增的特异性；浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败。
(√)(6)DNA连接子是一段人工合成的只有平头末端的长度一般为8bp~12bp双链核苷酸片段，其主要作用是在DNA末端添加一个限制性核酸内切酶识别位点，产生粘性末端便于连接。
(√)(7)在外源DNA导入细菌的方法中，CaCl2转化法的转化率比电转化转化率高。
(╳)(8)基因文库构建的材料来源可以是染色体DNA也可以是mRNA。
(√)(9)T-DNA区左右边界各为25bp的重复序列，是完全保守的，左边界缺失突变仍能致癌；但右边界缺失则不能致癌。
(√)(10)T4DNA连接酶和E.coil连接酶作用时都需要ATP和NAD-作为辅助因子。
(╳)东隅已逝 1 桑榆非晚！二、选择题1．在切口位移标记DNA探针时只能使用(B)A.Klenow酶B.DNA聚合酶C.DNA聚合酶ⅡD.DNA聚合酶Ⅲ2．在利用lcaZ失活的显色反应筛选法中，X-gal的作用是(Ｄ)A.作为酶的作用底物B.诱导宿主的ω肽的合成C.诱导宿主α肽的合成D.作为显色反应的指示剂3.现在关于多克隆位点(ＭＣＳ)的描述，不正确的一句是(Ａ)A.仅位于质粒载体中B.具有多种酶的识别序列C.不同酶的识别序列可以有重叠D.一般是人工合成后添加到载体中4.下列那种克隆载体对外源ＤＮＡ的容灾量最大(Ｃ)A.质粒B.黏粒C.酵母人工染色体D.λ噬菌体5.同一种质粒ＤＮＡ，以三种不同形式存在，电流时它们的迁移率是(Ｂ)A.OC DNA>SC DNA>L DNAB.SC DNA>L DNA>OC DNAC.L DNA>OC DNA>SC DNAD.SC DNA>OC DNA>L DNA6.下列关于cＤＮＡ文库的特点说法不正确的是(Ｃ)A.不含内含子序列B.可以在细菌中直接表达C.包含了所有基因D.比ＤＮＡ文库小的多，容易构建7.噬菌体的核酸主要存在形式(Ａ)A.双链线型ＤＮＡB.双链环型ＤＮＡC.单链环型ＤＮＡ东隅已逝 2 桑榆非晚！D.单链线型ＤＮＡ8.下列载体和外源ＤＮＡ插入片段的连接结果导入受体细胞后，哪种早受体细胞中不能存活(Ｂ)A.载体之间相互连接B.插入片段互相连接C.一个载体与几个插入片段重组D.几个载体与一个插入片段重组Ｅ.载体自身环化连接9.在ＰＣＲ引物设计时，下列说法错误的是(Ｄ)A.一般在引物的５’端可加入限制酶位点序列，以便进行克隆B.防止引物自身形成二级结构C.若３’端最末的碱基不肯定，可以次黄嘌呤核苷取代的引物D.５’端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格配对三.填空题1.只要知道基因组中某一特定核苷酸组成，用（PCR）技术可以将这段DNA 进行百倍的扩增。
基因工程复习提纲
1. 基因工程概念：基因工程是一门以分子遗传学为理论基础、以分子生物学和微生物学的现代技术方法为手段的新兴交叉学科，它诞生于1973年，其发展十分迅速，新知识、新概念、新技术不断涌现，并广泛渗透到生命科学的各个领域，带动了整个生命科学的发展，是现代生物技术中的核心技术。
它为人类创造新生物开辟了新天地。
2. 基因工程的定义：基因工程是将不同来源的基因（DNA分子），按照工程学的方法进行设计，在体外构建成杂种DNA分子，然后导入受体细胞，并在受体细胞内复制、转录、表达的操作。
基因工程又称DNA重组技术。
3. 基因工程的特点及实施条件：基因工程的最大特点是分子水平上的操作，细胞水平上的表达。
其实施包括四个必要条件：工具酶、基因、载体和受体细胞。
4. 基因工程的基本步骤：（1）分离制取带有目的基因的DNA片段；（2）DNA片段和载体DNA 在体外连接；（3）将重组DNA分子导入合适的受体细胞，并扩增繁殖；（4）从大量的细胞繁殖群体中，筛选出获得了重组DNA分子的重组体克隆；（5）外源基因的表达和产物的分离纯化。
5. DNA复制的特点：（1）DNA的复制是从特定的复制起始点开始并按5’-3’的方向进行；（2）DNA 分子的半保留复制；（3）DNA分子的半不连续复制；（4）DNA分子复制是通过DNA聚合酶及各种相关酶蛋白、蛋白因子的协同有序的工作完成的；（5）DNA分子复制具有高度的精确性和准确性。
6. DNA的变性、复性与杂交：在高温、强碱及某些试剂存在的条件下，双链DNA分子氢键断裂，两条链完全分离，形成单链DNA分子，这种情况称为DNA变性。
DNA的复性是指变性DNA在适当的条件下，二条互补链全部或部分恢复到天然双螺旋结构的现象，它是变性的逆转过程。
热变性DNA一般经缓慢冷却后即可复性，此过程称之为“退火”。
杂交的基本原理是应用核酸分子的变性和复性的性质，使来源不同的DNA（或RNA）片段按碱基互补关系形成杂交双链分子。
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基因工程简答题综述基因工程原理回顾，思考问题5，简要描述同型尾酶和同型裂解酶的区别。
同尾酶:不同来源的鉴定序列是不同的，但是它们可以切掉相同的粘性末端，并且在连接后不能被相关酶同时切掉。
分解酶:识别序列相同，切割位点有些相同，有些不同。
部分异构酶和不完全异构酶(PS:完全均裂酶:识别位置和切点完全相同。
不完全异构酶:识别位置是相同的，但切割点不同。
)6.连接酶的主要类型有哪些？有什么相同点和不同点？影响连接酶连接效果的主要因素是什么？类型:脱氧核糖核酸连接酶和核糖核酸连接酶的异同；同样的一点:脱氧核糖核酸可以用作模板，进行从5’到3’的核苷酸或脱氧核苷酸聚合。
差异:DNA聚合酶识别脱氧核苷酸，并在DNA复制中发挥作用。
核糖核酸聚合酶聚合核糖核苷酸，并在转录中发挥作用。
7.试着分析提高平端连接效率的可能方法。
(在线答案图例)1.低温下的长期连接效率优于室温下的短期连接。
2.向系统中加入少量载体切割酶，只要连接后原始酶切割位点消失。
这样，可以避免载体的自连接，并且平端连接的效率应该大大提高。
3.足够的向量和插入是最重要的。
4.平端的连接对离子浓度非常敏感。
5.尽可能减少连接反应的体积6.建议把它放在四度冰箱里连接两天。
效率高于14度。
8.基因工程中常用的主要DNA聚合酶是什么？1)大肠杆菌脱氧核糖核酸聚合酶2)克氏片段3)T7脱氧核糖核酸聚合酶4)T4脱氧核糖核酸聚合酶5)修饰的T7脱氧核糖核酸聚合酶6)逆转录酶7)Taq脱氧核糖核酸聚合酶第4章基因克隆载体系统1、作为基因工程的载体，它应该具备哪些条件？对受体细胞具有亲和力或亲和力(可转移性)；！有适当的筛选标志；！具有较高的外源DNA负载量；！具有多个克隆位点；！它具有适合特定受体细胞的复制位点或整合位点。
3.承运人的主要类型是什么？如何在基因工程操作中选择载体？基因工程中常用的载体主要包括质粒、噬菌体和病毒。
这些载体需要人工构建以去除致病基因并赋予一些新的功能，例如用于筛选的标记基因和单限制性内切酶。
4.质粒转化的原理以及影响转化率的因素是什么？一、化学法(氯化钙法)转换原理:正是Ca2和细菌外膜磷脂在低温下形成液晶结构。
后者因热脉冲而收缩，使细胞膜变空。
质粒或DNA重组分子可以进入细胞(感受态细胞)。
电穿孔转化原理:将待转化的质粒或DNA重组连接液加入到电穿孔转化仪的样品池中，在两极施加高压电场，在强电场的作用下，细菌细胞壁和细胞膜之间产生间隙，质粒或DNA重组分子可以进入细胞。
影响转化率的主要因素载体的性质及其空间构象；超螺旋构象的转化率最高。
2)插入尺寸:插入片段越大，转化效率越低。
3)受体细胞的类型和预处理；4)转换方法:电击法高于化学法。
5.选择重组分子的主要方法是什么？对其原理也作了简要描述。
一般来说，重组分子的选择和鉴定方法基本上可以分为以下几种:(1)在构建基于载体遗传标记检测方法基因工程载体系统时，载体DNA分子通常携带某些选择性遗传标记基因，且在转化或转染宿主细胞后，后者可表现出特殊的表型或遗传特征，从而可进行转化体或重组体的初步筛选。
(2)基于克隆DNA序列检测方法-5，简述同尾之间的区别同尾酶:不同来源的鉴定序列是不同的，但是它们可以切掉相同的粘性末端，并且在连接后不能被相关酶同时切掉。
分解酶:识别序列相同，切割位点有些相同，有些不同。
部分异构酶和不完全异构酶(PS:完全均裂酶:识别位置和切点完全相同。
不完全异构酶:识别位置是相同的，但切割点不同。
)6.连接酶的主要类型有哪些？有什么相同点和不同点？影响连接酶连接效果的主要因素是什么？类型:脱氧核糖核酸连接酶和核糖核酸连接酶的异同；同样的一点:脱氧核糖核酸可以用作模板，进行从5’到3’的核苷酸或脱氧核苷酸聚合。
差异:DNA聚合酶识别脱氧核苷酸，并在DNA复制中发挥作用。
核糖核酸聚合酶聚合核糖核苷酸，并在转录中发挥作用。
7.试着分析提高平端连接效率的可能方法。
(在线答案图例)1.低温下的长期连接效率优于室温下的短期连接。
2.向系统中加入少量载体切割酶，只要连接后原始酶切割位点消失。
这样，可以避免载体的自连接，并且平端连接的效率应该大大提高。
3.足够的向量和插入是最重要的。
4.平端的连接对离子浓度非常敏感。
5.尽可能减少连接反应的体积6.建议把它放在四度冰箱里连接两天。
效率高于14度。
8.基因工程中常用的主要DNA聚合酶是什么？1)大肠杆菌脱氧核糖核酸聚合酶2)克氏片段3)T7脱氧核糖核酸聚合酶4)T4脱氧核糖核酸聚合酶5)修饰的T7脱氧核糖核酸聚合酶6)逆转录酶7)Taq脱氧核糖核酸聚合酶第4章基因克隆载体系统1、作为基因工程的载体，它应该具备哪些条件？对受体细胞具有亲和力或亲和力(可转移性)；！有适当的筛选标志；！具有较高的外源DNA负载量；！具有多个克隆位点；！它具有适合特定受体细胞的复制位点或整合位点。
3.承运人的主要类型是什么？如何在基因工程操作中选择载体？基因工程中常用的载体主要包括质粒、噬菌体和病毒。
这些载体需要人工构建以去除致病基因并赋予一些新的功能，例如用于筛选的标记基因和单限制性内切酶。
4.质粒转化的原理以及影响转化率的因素是什么？一、化学法(氯化钙法)转换原理:正是Ca2和细菌外膜磷脂在低温下形成液晶结构。
后者因热脉冲而收缩，使细胞膜变空。
质粒或DNA重组分子可以进入细胞(感受态细胞)。
电穿孔转化原理:将待转化的质粒或DNA重组连接液加入到电穿孔转化仪的样品池中，在两极施加高压电场，在强电场的作用下，细菌细胞壁和细胞膜之间产生间隙，质粒或DNA重组分子可以进入细胞。
影响转化率的主要因素载体的性质及其空间构象；超螺旋构象的转化率最高。
2)插入尺寸:插入片段越大，转化效率越低。
3)受体细胞的类型和预处理；4)转换方法:电击法高于化学法。
5.选择重组分子的主要方法是什么？对其原理也作了简要描述。
一般来说，重组分子的选择和鉴定方法基本上可以分为以下几种:(1)在构建基于载体遗传标记检测方法基因工程载体系统时，载体DNA分子通常携带某些选择性遗传标记基因，且在转化或转染宿主细胞后，后者可表现出特殊的表型或遗传特征，从而可进行转化体或重组体的初步筛选。
(2)基于克隆的DNA序列的检测:λ噬菌体、YAC、BAC、粘粒等。
基因文库构建的一般步骤如下:(1)染色体DNA 大片段的制备(1)酶切法(2)物理切割法(2)载体与基因组DNA大片段的连接(1)粘性末端的直接连接(2)人工连接法(3)受体的转导(4)重组c DNA的筛选:以核糖核酸为模板合成的互补脱氧核苷酸序列。
CDNA文库:从某一生物基因组转录的所有基因都被反向转录，产生各种不同的基因，这些基因分别与克隆载体重组，并储存在受体细菌群体中，这种群体被称为基因文库。
cDNA文库和基因组文库的区别在于cDNA文库具有时效性。
cDNA文库的特点和优势:分离的目的基因可直接用于表达；它比DNA文库小得多，而且易于构建。
仅与编码序列相关；无法反映内含子；构建不能反映核糖体识别的启动子、终止子和序列的cDNA文库的一般步骤:(1)总RNA提取(2)mRNA分离和纯化(1)原理:从总核糖核酸(核糖核酸、核糖核酸等)中分离并纯化出核糖核酸。
)通过使用含有聚腺苷酸尾的信使核糖核酸。
(2)信使核糖核酸柱的分离和纯化(3)合成信使核糖核酸(1)合成信使核糖核酸第一链(2)降解信使核糖核酸模板(3)合成信使核糖核酸第二链(合成信使核糖核酸第二链有四种方法:自导向合成、置换合成、导向合成和引物衔接合成)。
(4)cDNA与载体相连:(5)包装噬菌体颗粒并化学合成用于转染或质粒转化的基因(导入宿主中进行繁殖):寡核苷酸单链的化学合成；探针的化学合成；连接器和接头的合成；基因的半合成；全长基因化学合成目标基因的分离；感兴趣的序列是已知的:通常，聚合酶链反应或分子杂交用于分离和克隆目标基因。
目标序列未知:差异表达序列；对于无差异表达的靶序列，可以采用文库筛选法、功能蛋白分离法和序列克隆法。
第七章高级动物基因工程1.基因导入细胞的方法物理方法:裸DNA的直接注射、电穿孔和显微注射的化学方法:磷酸钙共沉淀，DEAE-(1)染色体DNA大片段的制备①酶促裂解②物理裂解②载体与基因组DNA大片段之间的连接①内聚端直接连接②人工连接③受体转导(4)重组c DNA的筛选:以核糖核酸为模板合成的互补脱氧核苷酸序列。
CDNA文库:从某一生物基因组转录的所有基因都被反向转录，产生各种不同的基因，这些基因分别与克隆载体重组，并储存在受体细菌群体中，这种群体被称为基因文库。
cDNA文库和基因组文库的区别在于cDNA文库具有时效性。
cDNA文库的特点和优势:分离的目的基因可直接用于表达；它比DNA文库小得多，而且易于构建。
仅与编码序列相关；无法反映内含子；构建不能反映核糖体识别的启动子、终止子和序列的cDNA文库的一般步骤:(1)总RNA提取(2)mRNA分离和纯化(1)原理:从总核糖核酸(核糖核酸、核糖核酸等)中分离并纯化出核糖核酸。
)通过使用含有聚腺苷酸尾的信使核糖核酸。
(2)信使核糖核酸柱的分离和纯化(3)合成信使核糖核酸(1)合成信使核糖核酸第一链(2)降解信使核糖核酸模板(3)合成信使核糖核酸第二链(合成信使核糖核酸第二链有四种方法:自导向合成、置换合成、导向合成和引物衔接合成)。
(4)cDNA与载体相连:(5)包装噬菌体颗粒并化学合成用于转染或质粒转化的基因(导入宿主中进行繁殖):寡核苷酸单链的化学合成；探针的化学合成；连接器和连接的合成基因的半合成；全长基因化学合成目标基因的分离；感兴趣的序列是已知的:通常，聚合酶链反应或分子杂交用于分离和克隆目标基因。
目标序列未知:差异表达序列；对于无差异表达的靶序列，可以采用文库筛选法、功能蛋白分离法和序列克隆法。
第七章高级动物基因工程1.基因导入细胞的方法物理方法:裸DNA的直接注射、电穿孔和显微注射的化学方法:磷酸钙共沉淀，DEAE:腺病毒，SV40，腺相关病毒，逆转录病毒，人类痘苗病毒，疱疹病毒等。
逆转录病毒(单链核糖核酸病毒)的优势:a、宿主范围广(几乎所有类型的哺乳动物细胞)b、效率高，能感染大量细胞，通常一次能感染106 ~ 107个细胞c，外源DNA在整合过程中不重排，单位点少，拷贝整合率低(一般不超过5个)的缺点:A.只有分裂细胞B被感染，携带外源基因的长度是有限的(8kb)，载体病毒基因具有潜在的致病性。
例如，在载体和人内源性逆转录病毒(HERV)序列之间存在潜在的D和重组危险，以产生具有传染性的人逆转录病毒词范例。