无菌和无菌操作技术
无菌技术护理操作
无菌技术【目的】1．无菌持物钳使用：取放和传递无菌物品。
2．无菌容器使用：用于盛放无菌物品并保持无菌状态。
3．无菌包使用：用无菌包布包裹无菌物品，以保持物品的无菌状态，供无菌操作用。
4．铺无菌盘：将无菌巾铺在清洁干燥的治疗盘内，形成无菌区，放置无菌物品，供治疗护理用。
5．取无菌溶液：保持溶液的无菌状态，供无菌操作使用。
6．戴无菌手套：在执行严格的医疗护理操作时确保无菌效果，保护患者和医护人员免受感染。
【用物准备】治疗盘、无菌持物钳及盛放容器、无菌容器（内盛棉球）、无菌包（内包治疗巾）、无菌治疗碗、无菌溶液、无菌手套、消毒液、棉签、启瓶器、弯盘、记录纸、笔。
【注意事项】严格遵循无菌操作原则1．无菌持物钳使用(1)取远处物品时，连同容器一起移至操作处，就地使用。
(2)无菌持物钳不可夹取油纱布，不可用于换药及消毒皮肤，以防被污染。
污染后重新灭菌，无菌持物钳不能夹取非无菌物品。
(3)湿式使用法，无菌持物钳及浸泡容器需每周清洁、消毒2次，同时更换消毒液，使用频率较高的部门应每天清洁、灭菌。
2．无菌容器使用(l)手指不可触及无菌容器的内面及边缘。
(2)无菌容器应定期消毒灭菌，打开后有效使用时间为24小时。
3．无菌包使用(l)打开包布时，手只能接触包布四角的外面，不可触及包布内面，不可跨越无菌面。
包内物品未用完时，应按原折痕包好，系带横向扎好，并注明开包日期及时间，限24h内使用。
(2)如包内物品超过有效期、被污染或包布受潮，则须重新灭菌。
4．铺无菌盘(1)铺无菌盘区域须清洁干燥，无菌巾避免潮湿、污染。
(2)不可跨越无菌区。
(3)铺好的无菌盘尽早使用，有效期不超过4小时。
5．取无菌溶液(l)不可将物品伸入无菌溶液内蘸取溶液；倾倒液体时不可直接接触无菌溶液瓶口；己倒出的溶液不可再倒回瓶内，以免污染剩余溶液。
(2)已开启的溶液瓶内的溶液，24小时内有效。
6．戴无菌手套(1)注意修剪指甲以防刺破手套，迭择合适手掌大小的手套尺码。
无菌操作技术操作步骤
无菌操作技术操作步骤无菌操作技术操作步骤无菌操作技术是在实验室研究、制药和医疗领域中至关重要的一项技术。
它的目的是确保实验或制造过程中的杂菌不会污染实验样品或生产产品。
无菌操作技术严格遵循一系列步骤和原则，以确保实验环境和操作器材的无菌状态。
在本文中，我们将介绍无菌操作技术的几个关键步骤，并分享一些附加的实用建议。
1. 清洁工作区域清洁是无菌操作的基础。
在进行无菌操作之前，必须仔细清洁操作台面、实验器具和实验人员所需的材料。
使用消毒剂擦拭工作区域，确保杀灭表面上的细菌和其他微生物。
2. 穿戴无菌实验衣在进行无菌操作之前，所有从事实验的人员都必须穿戴无菌实验衣。
这包括无菌手套、无菌口罩、无菌帽子和无菌长袖护臂套。
这些装备旨在防止人员身上的细菌进入实验环境，同时也保护实验人员免受外界细菌的污染。
3. 灭菌操作器具接下来，必须对将用于实验的仪器、培养基瓶和其他耗材进行灭菌处理。
可以使用高压蒸汽灭菌器（如常见的高压锅）或自动灭菌器进行灭菌。
将操作器具放入灭菌器中，并按照灭菌器的使用说明进行操作。
确保灭菌器将物品完全灭菌。
4. 注意操作手法无菌操作要求操作者对手法非常细致和规范。
在操作过程中，操作者应注意以下几点：a. 尽量避免打开或触摸非无菌区域，避免将细菌带到无菌区域。
b. 打开培养基瓶或实验设备时，应尽量避免与瓶口或设备表面接触。
c. 仅在无菌操作台上进行实验。
台面上的防护膜会防止空气中的微生物进入试验样品。
d. 当操作液体时，注意快速且轻柔地移动容器，以减少空气中的微生物进入。
5. 使用 Bunsen 灯在无菌操作期间，使用 Bunsen 灯是常见的实践，旨在提供一个无菌操作区域。
燃烧 Bunsen 灯会产生上升的气流，将空气中的微生物带走，并创造出一片相对干净的无菌区域。
将 Bunsen 灯置于操作台一侧，并将黄色火焰保持在最适宜的高度。
6. 完成操作后的处理无菌操作完成后，需要对实验区域进行适当的处理。
无菌技术操作培训
无菌容器使使用方法
经灭菌处理, 用来盛放无菌物品容器称无菌容器。
无菌技术操作培训
无菌罐
无菌 贮槽
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无菌容器使使用方法
手托底部, 手指 不能触及容器边 缘及内面
无菌技术操作培训
手持无菌容器
无菌容器一经 开盖后, 24小时 内有效
打开无菌容器
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无菌容器使使用方法
无菌容器注意事项
保持无菌容器盖内面无菌, 防止灰尘落入无菌容器 内。
3、消毒液面浸没无菌持物钳轴节以上 2～3cm或镊子长度1／2
4、每个容器只能放置一把无菌持物钳 ，
以免相互碰撞
5、容器及无菌持物钳应保持无菌，每七天消毒、灭菌一次，同时
更换消毒液。手术室、门诊换药室、注射室等每日消毒、灭菌。
2-3cm
方法二 ：干燥 保留法
将盛有没有菌持物钳无菌干罐保留在无菌包内，在集中 治疗前开包，4～8h更换一次
无菌技术基本操作方法
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无菌技术操作培训
无菌技术基本概念
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无菌技术基本概念
无菌技术
指在医疗护理操作中, 预防一切微生物 侵入人体和保持无菌物品、无菌区域不被污 染操作技术。
目标
1、预防一切微生物侵入人体 2.预防无菌物品、无菌区域被污染， 即：保持原有无菌状态
无菌技术操作培训
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无菌技术操作培训
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无菌手套使用方法
带无菌手套
无菌技术操作培训
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无菌手套使用方法
脱无菌手套
无菌技术操作培训
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无菌手套使用方法
带无菌手套注意事项
戴手套时应注意未戴手套手不可触及手套外面, 而戴好手 套手则不可触及未戴手套手及手套内面。
无菌操作基本技术
无菌操作基本技术1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 %ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。
每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。
实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。
操作间隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。
2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。
实验用品以70 % ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。
实验操作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。
3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。
勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。
容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。
对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。
操作过程中，应避免引起aerosol 之产生，小心毒性药品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖锐针头之伤害等。
5. 定期检测下列项目：5.1. CO2 钢瓶之CO2 压力5.2. CO2 培养箱之CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)。
5.3. 无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜，预滤网(300小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。
6. 水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750)，定期更换水槽的水。
实验用品1. 种类︰1.1. 细胞培养实验用品均为无菌，除了玻璃容器与pasteur pipet 外，其它均为塑料无菌制品。
无菌技术操作规范
洗手步骤
1.准备：打开水龙头，调节合适水流和水温 2.湿手：在流动水下，使双手充分淋湿 3.涂剂：关上水龙头并取清洁剂均匀涂抹至整个手掌、手背、 手指和指缝 4.洗手：认真揉搓双手至少15秒，具体揉搓步骤为下图“七步 洗手法” 5.冲净：打开水龙头，在流动水下彻底冲净双手 6.干手:关闭水龙头，以擦手纸擦干双手，必要时取护手液护 肤
无菌包的注意事项
1.严格遵循无菌操作原则 2.无菌包包布通常选用质厚、致密、未脱脂的双层
棉布制成 3.打开无菌包时手只能接触包布四角的外面，不可
触及包布内面，不可跨越无菌区
无菌包的注意事项
4.包内物品未用完，应按原折痕包好，注明开包 日期及时间，限24小时内使用
5.无菌包应定期消毒灭菌，有效期7天，如包内 物品超过有效期，被污染或者包布受潮，则需 重新灭菌
无菌技术操作原则
使用一次性医用皱纹纸、一次性纸塑 袋、医用无纺布或硬质容器包装的无 菌物品，有效期宜为6个月;由医疗器 械生产厂家提供的一次性使用无菌物 品遵循包装上标识的有效期。
无菌技术操作原则
（四）操作过程中加强无菌观念 进行无菌操作时，应培养并加强无菌 观念 ①明确无菌区、非无菌区、无菌 物品、非无菌物品，非无菌物品应远 离无菌区 ②操作者身体应与无菌区保 持一定距离 ③取、放无菌物品时，应 面向无菌区 ④取用无菌物品时应使用 无菌持物钳。
毒剂，手消毒剂应符合国家有关规定的产品。
洗手指征
①直接接触每个患者前后 ②从同一患者身体的污染部位移动到清洁部位时 ③接触患者黏膜、破损皮肤或伤口前后 ④接触患者血液、体液、分泌物、排泄物、伤口敷料等之后 ⑤接触患者周围环境及物品后 穿脱隔离衣前后，脱手套之后 进行无菌操作、接触清洁、无菌物品之前 处理药物或配餐前
无菌技术操作
<五>铺无菌盘
概念：铺无菌盘是将无菌巾铺在清洁干燥的治疗盘内，形成一无菌区，
放置无菌物品，以供治疗之用，有效时限不超过4小时。
<六>戴无菌手套
戴手套时应注意未戴手套的手不可触及手套的外面，已戴手套的 手不可触及未带手套的手或另一手套的内面。
谢谢！
四、无菌持物钳的使用
（一）种类：临床上常用的无菌持物钳有卵圆钳、长、短镊子三种。 （二）目的：用于取放和传递无菌物品，保持物品的无菌状态。
1、无菌持物钳的存放方法
（1）经压力蒸汽灭菌后浸泡在内盛消毒液的大口有盖容器内，容器 深度与钳长度比例适合消毒液面浸没轴节以上2-3cm或镊子长 度的1/2，每个容器只能放置一把无菌持物钳。
（4）容器每周灭菌一次
开盖 盖盖
<三>取用无菌溶液
1、取用密封瓶装溶液： 检查：（1）外面：瓶签、瓶盖、瓶口 （2）内面：沉淀、浑浊、颜色 2、取用烧瓶装溶液：不可将无菌物品或非无菌物品伸入无菌溶液瓶 内蘸取或直接接触瓶口倒液，以免污染瓶内的溶液。
<四>无菌包使用
1、包扎发：十字形、一字行。 2、开包法：（1）放在清洁处打开 （2）托在手上打开 （3）一次性无菌物品开包法
一、概念
（一）无菌技术：是指在医疗，护理操作中，防止一切微生物侵入人 体和防止无菌物品，无菌区域被污染的操作技术。 （二）无菌物品：是指经过灭菌处理后未被污染的物品。
（三）无菌区域：是指经过灭菌处理后未被污染的区域。
（四）有菌区域：是指未经过灭菌处理或是经过灭菌处理而被污染的 区域。 （五）污染区：是指凡是直接或间接的与致病微生物相接触。
5、戴、脱无菌手套
<一>无菌持物钳的使用
无菌操作技术图文.
(3)第一遍刷完后,用流水冲净；共刷 洗3遍，每遍约3min，共约10min。
(4) 刷洗时应稍用力 ，并特别注意指甲 、 指间、手背、手掌等处。流水冲洗时， 双肘弯曲，手指向上，让水由手指处向 肘部流下，不得返流。
（5）在刷洗过程中，如果怀疑手、臂被 污染，应重新从第一遍开始刷洗。
（6）取消毒毛巾、擦干双手，将毛巾 对折，底口向肘部，用另一手拉对角， 缓缓向左右移动，然后将毛巾对折处 翻转，用毛巾另一面如上法擦干另一 手臂，高度应低于肘部7cm以下。
(2) 用戴着手套的右侧手指、插入左手套的 翻折处脱去左手套至手掌部 ( 勿触及左手 的皮肤 ),再用左手拇指、伸入右手套掌部 之下, 提起右手套的翻折部,将左右手手套 依此脱下。
(3)用流水冲洗掉手上的滑石粉，取消毒巾 擦干手及手臂，重新消毒手及手臂。 (4)如果手套已破裂或在脱手术衣时，手臂 不慎被污染，须重新刷洗、消毒手臂。
（4）末戴手套的手，不得拉衣袖或接触 其他处。
（5）手术进行中、参加手术人员如需互
换位置，须背对背转动。
2.连台手术脱手术衣法
(1)第一台手术结束后，洗净手套上的血迹， 先脱去手术衣，再脱去手套。脱手术衣时， 由他人解开背部带子，将手术衣自背部向 前反折脱下（将衣袖自腕部向手的方向翻 转脱下），使手套自然由腕部翻转于手上。
4.无菌物品-----指经过物理或化学方法 灭菌后, 保持无菌状态的物品。
无菌技术操作原则
操作前准备 保持操作的无菌性 无菌物品管理
（一）操作前准备
1.环境准备 进行无菌操作时，环境要清洁，操 作区要宽敞，安静，严禁人员频繁 走动。
2.操作者准备 (1)要有科学严谨的态度和认真求实的精神.
2. 手臂的消毒
无菌技术操作流程
无菌技术操作流程目的：避免污染污染无菌物品，无菌区域及无菌伤口，保持绝对无菌，防止感染交叉感染。
用物准备：治疗盘，无菌持物钳（镊），无菌罐，无菌包（包内根据需要准备），无菌溶液，无菌手套，注射盘，污物杯。
操作步骤：一、环境准备，戴好帽子，口罩，修剪指甲，洗手。
二、无菌持物钳（镊）使用；1、无菌持物钳（镊）盛放：无菌持物钳（镊）灭菌后，浸泡在盛有消毒溶液的泡镊筒内，钳轴节以上2-3cm或镊子长度的1/2应浸泡在消毒溶液中，一筒一钳（镊）。
2、使用无菌持物钳（镊）：取出无菌持物钳（镊）时，钳（镊）前端要闭合，不可触及容器边缘及液面以上的容器内壁。
3、使用无菌持物钳（镊）：使用时，持物钳（镊）前端稳向下，以免消毒液倒流污染钳（镊）端，用后立即放回容器中，打开轴关节，疑有污染需须重新灭菌后方能放入容器中。
三、无菌容器的使用：1、开启无菌容器盖，打开无菌容器时，盖面向上，放在稳妥的地方或拿在手中，手不可触及盖的内面及边缘。
不能在容器上面将盖翻转，以防尘埃落入容器内。
2、取出无菌物品：从无菌容器中取出物品时，需用无菌持物钳，持物钳不可触及容器的边缘。
物品取出后应立即盖好，避免手臂跨越无菌区。
3、取无菌溶液：a按需求准备无菌溶液。
b检查液体：查对药签，检查瓶盖有无松动，瓶体有无裂缝，溶液有无沉淀，浑浊，变色，絮状物等。
C开启瓶盖。
D用拇指和食指捏住橡皮塞边缘向外拉出，不可触及瓶塞内面。
E倒溶液：溶液标签向上，倒出少许冲洗瓶口后再将所需溶液倒入无菌容器内，倒时瓶口离容器约10cm高。
F盖好瓶盖，碘伏消毒边缘一周后盖好，注明开瓶日期，时间并签名。
四、无菌包使用及铺无菌盘1、打开无菌包：将无菌包置于清洁，干燥，平坦处，取下指示胶带（如有带子，放于包的下面）。
捏住包的外角，依次打开，手不可触及包布内面，查看化学指示片是否变色。
2、取无菌物品：用无菌持物钳取出一块治疗巾，放在治疗盘内（保持内面无菌），按原折痕包好无菌包，注明开包日期，时间，开包24小时后不能再使用，若包内物品一次性取出，可将包拿在手中打开，另一手将包布四角抓住，将包内物品置于无菌治疗盘内。
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3、金属、玻璃器具 火焰灭菌法
4、液体或水溶性物质 过滤除菌法
1、玻璃、金属等器具--干热灭菌法
设备：电烘箱
用途：用于玻璃器皿、金属器具等
耐热物品的烤干和灭菌。
条件：160-165℃，灭菌 1-2小时。
2、玻璃、金属、含水物品等--高压蒸汽灭菌法
设备：高压蒸汽灭菌锅
项目六 无菌和无菌操作技术
无菌：没有活的微生物存在的状态。
无菌操作技术：用于防止微生物进 入无菌范围造成污染的操作技术。
一、无菌的环境
二、无菌的器具、培养基
三、无菌操作技术
四、基本规则
一、无菌的环境
1、无菌室
2、超净工作台
3、生物安全柜
4、火焰周围
1、无菌室
标准无菌室的要求：
房间设置（外面有缓冲室）、空气
提供局部无尘无菌工作环境。但它
设置了风槽，气流不会吹向使用者，
可以有效保护使用者。
生物安全柜
4、火焰周围
通常使用酒精灯、煤气灯，其火焰
周围是无菌区域（直径10cm左右）。 这并不是利用高温杀死细菌，而是 利用向上的单向气流形成一个无菌 区域。
火焰周围是无菌区域
二、无菌的器具、培养基
1、玻璃、金属等器具 干热灭菌法
过滤、墙面、墙角、微生物操作相
关设备、紫外灯等。
无菌室布局
如条件有限，可在微生物实验室内
专辟一个小房间作为无菌室。可以
用板材和玻璃建造，面积4-5 平方
米即可。
板材和玻璃隔出的无菌室
2、超净工作台
超净工作台是一种提供局部无尘无
菌工作环境的垂直单向流型空气净
化设备。
超净工作台
3、生物安全柜
生物安全柜外形与超净台类似，也
广泛。
红外接种环灭菌器
用接种环进行接种
用接种环 进行划线
4、涂布棒操作
灼烧灭菌：
可以沾酒精然后灼烧，灼烧范围要 包括其杆部。
涂布：
将菌液滴在培养基表面中央。右手 拿涂布棒将菌液沿一条直线来回推 动，然后沿一垂直线来回推动，平 板边缘处可改变方向再涂几次。
涂布
5、试管操作
单试管操作
（注意左右手的使用）
双试管操作
四、基本规则
不得留长指甲，头发需扎好；
无菌操作中不要大声笑、说话、打
喷嚏、打闹。
手不要在无菌物上方越过；
要了解拿无菌物的位置，不触碰其之外的位置；
不要将无菌物移出无菌范围。
用途：不耐高温的液体、水溶性物 质的除菌。
细菌过滤器
三、无菌操作技术
我们通过一定的技术来保证目的微
生物、培养基不被环境微生物污染，
这些技术就是无菌操作技术。
包括手部清洁消毒，用接种针、接 种环、吸量管、涂布棒等工具进行 各种操作等等。
1、手部清洁消毒
洗手：手部有可见灰尘时、饭前、
便后，用水和肥皂洗手； Handrub（揉手）：手部较清洁时， 75%乙醇或者醇基消毒剂揉手。
用途：培养基、生理盐水、废弃物、
采样器、纱布、衣物的灭菌。 条件：121℃ 水蒸气 15分钟
培养基一般使用高压蒸汽灭菌法
3、一些金属、玻璃器具--火焰灭菌法
即在火焰外焰上灼烧进行灭菌。
用途：接种环、接种针；涂布器； 试管管口、锥形瓶瓶口等的灭菌。
4、液体或水溶性物质--过滤除菌法
器具：细菌过滤器
动作：手掌-手背-指缝-手指-拇指 -指尖-手腕
2、培养皿操作
培养皿开合：单手打开和盖上皿盖，
包括持皿法和皿加法两种。 此操作用于制作培养基平板、接种 等。
持皿法
皿加法
3、接种环操作
包括灼烧接种环、接种、划线等。
灼烧接种环
先斜放外焰灼烧接种环，然后垂直 放置后继续灼烧，再斜烧金属杆。
现在红外接种环灭菌器使用也比较