实验四 过碘酸-雪夫反应
过碘酸-雪夫反应
过碘酸-雪夫反应01.过碘酸-雪夫反应的结果判读阳性结果为胞质内出现红色颗粒、块状或呈弥漫状红色。
①(-)胞质无色，无颗粒。
②(+)胞质淡红色或有少量红色颗粒，通常<10个颗粒。
③(++)胞质红色或有10个以上红色颗粒。
④(+++)胞质呈暗红色或有粗大红色颗粒，可出现红色块状。
⑤(++++)胞质呈紫红色或有粗大红色块状。
02.过碘酸-雪夫反应正常血细胞的染色反应1)粒细胞系统：原粒胞浆光镜下无颗粒。
所以POX阴性。
考察喜欢出这类题，哪个最强或最弱。
嗜酸阳性反应的程度强。
酸梅主要两点;粒系相关的酶;随着细胞成熟，阳性反应增强。
2)红细胞系统：幼红细胞和红细胞均呈阴性反应。
3)单核细胞系统：分化差的原始单核细胞呈阴性，其他单核细胞呈阳性。
绝大多数阳性，呈细颗粒状。
有时在胞质的边缘处阳性反应颗粒较粗大。
4)淋巴细胞：大多数淋巴细胞为阴性反应，少数淋巴细胞可呈(+)反应。
5)巨核细胞和血小板：巨核细胞为阳性反应，阳性反应物质为红色颗粒状，有时为红色块状。
血小板为阳性反应，阳性反应物质为细颗粒状，有时为红色小块状。
6)其他细胞：浆细胞一般为阴性反应，少数可呈阳性反应，阳性反应物质为红色细颗粒状。
巨噬细胞可呈阳性反应，阳性反应物质为红色细颗粒状。
03.过碘酸-雪夫反应的临床意义根据反应的阳性程度及阳性特点可进行红细胞系统、白细胞系统等疾病的辅助诊断及鉴别诊断，其阳性特点意义更大。
1.白血病类型鉴别急性粒细胞白血病原始粒细胞呈阴性或弱阳性反应，阳性以弥漫性为主;急性淋巴细胞白血病原幼淋巴细胞多呈块状阳性反应，也有少数呈阴性反应;急性单核细胞白血病原幼单核细胞呈阳性反应，其颗粒细小，弥散分布。
2.淋巴系统增生疾病鉴别淋巴系统恶性增生如恶性淋巴瘤、霍奇金病、慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病时，其淋巴细胞阳性反应均有明显增高，呈粗颗粒状或块状。
传单时淋巴细胞的PAS轻度增高，而其他病毒感染时常在正常范围。
血液学检验糖原染色2.2.4 过碘酸-雪夫反应(PSA)
2、对疾病诊断的意义
白血病类型的鉴别：
急性粒细胞白血病：原始粒细胞呈阴性或弱阳性反应，以弥
散性为主；
急性淋巴细胞白血病原、幼淋巴细胞多呈粗颗粒、块状阳性
反应；
急性单核细胞白血病原、幼单核细胞呈阳性反应，其颗粒细
小，弥散分布，细胞边缘常可见少量粗大的阳性颗粒。
ALL
鉴别幼红细胞增生的性质
红血病和红白血病时，异常幼红细胞可呈阳性反应。 巨幼红细胞性贫血时巨幼红细胞为阴性反应。
鉴别戈谢细胞、尼曼-皮克细胞
戈谢细胞 强阳性 尼曼-皮克细胞 弱阳性
糖原染色(过碘酸-雪夫反应)
原理
多糖中乙二醇基 经过碘酸氧化成二醛基与无色品红结合， 形成紫红色化合物。沉积于含糖原的胞浆中。 结果 ：胞浆中出现弥散状，颗粒状，块状红色为阳性。
无红色颗粒为阴性
临床意义
1、正常血细胞的染色反应 粒系：原粒细胞糖原含量很低，随着细胞的分化成熟，糖原含
量逐增加，至成熟阶段糖原含量十分丰富。 淋巴细胞：糖原常凝聚成颗粒或块状。 巨核细胞－血小板系统：PAS反应呈粗大的紫色颗粒或团块。 正常红系：阴性。
过碘酸-雪夫反应
过碘酸-雪夫反应一、正常血细胞的染色反应1、粒细胞系统分化差的原粒细胞阴性，分化好的原粒细胞至中性分叶核粒细胞均呈阳性反应，并随着细胞的成熟，阳性反应程度逐渐增强，阳性呈细颗粒、均匀红色；嗜酸性粒细胞中的嗜酸性颗粒本身不着色，而颗粒之间的胞质呈红色；嗜碱性粒细胞中的嗜碱性颗粒呈阳性，而颗粒之间的胞质不着色。
2、红细胞系统幼红细胞及红细胞均呈阴性。
3、单核细胞系统分化差的原单细胞呈阴性，其他阳性，绝大多数阳性呈细颗粒，有时分布于细胞边缘的阳性颗粒较粗大。
4、淋巴细胞系统大多数淋巴细胞系统的细胞呈阴性，少数淋巴细胞呈阳性（阳性率常小于0.20），阳性呈粗颗粒状或块状。
5、巨核细胞系统巨核细胞系统的细胞（包括血小板）呈阳性，阳性呈颗粒状或块状。
6、其他细胞浆细胞一般呈阴性，少数呈阳性，呈细颗粒状；巨噬细胞可阳性，呈细颗粒状。
二、临床意义1、红细胞系统疾病红血病、红白血病、骨髓增生异常综合征中幼红细胞可阳性（呈均匀红色或块状），有时幼红细胞阳性反应强且阳性率高，甚至红细胞也呈阳性。
在某些红系良性疾病，如缺铁性贫血、地中海贫血中幼红细胞也可呈阳性，有时阳性率也较高；巨幼细胞性贫血、溶血性贫血、再生障碍性贫血等中幼红细胞常呈阴性，有时个别细胞可呈阳性。
2、白细胞系统疾病主要用于辅助鉴别急性白血病的细胞类型等作用，因为不同细胞类型的急性白血病其阳性反应可不同。
急性淋巴细胞白血病时原淋及幼淋巴细胞的阳性率升高，呈粗颗粒状或块状；急性粒细胞白血病时少数原粒细胞呈阳性，阳性呈细颗粒状或均匀红色；急性单核细胞白血病时原单及幼单细胞可呈阳性，阳性呈细颗粒状、弥散分布，有时胞质边缘处颗粒较粗大。
慢性淋巴细胞白血病时淋巴细胞的阳性率增加，呈粗颗粒状或块状；恶性淋巴瘤时淋巴瘤细胞阳性率高、阳性强，呈块状或粗颗粒状。
3、其他细胞戈谢细胞呈强阳性，尼曼-皮克细胞呈阴性或弱阳性；巨核细胞强阳性，Reed-Sternberg细胞阴性或弱阳性；骨髓转移性腺癌呈强阳性。
过碘酸-雪夫(糖原pas)染色液说明书
仅供科研使用版本号：161209糖原PAS染色液【产品组成】Component SBJ-0407S4×50mlSBJ-0407M4×100mlStore at试剂(A): 过碘酸溶液50ml 100ml 4℃,避光试剂(B): Schiff Reagent 50ml 100ml 4℃,避光试剂(C): 苏木素染色液50ml 100ml 室温,避光试剂(D): 酸性乙醇分化液50ml 100ml 室温【保存条件】4℃,避光,6个月【产品概述】糖原染色是病理学中常规的染色方法之一，Mc Manus在1946年最先使用高碘酸-雪夫技术显示黏蛋白，该法常用来显示糖原和其他多糖，该染色试剂盒不仅能够显示糖原，还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质以及软骨、垂体、霉菌、真菌、色素、淀粉样物质、基底膜等。
过碘酸(又称高碘酸)是一种强氧化剂，它能氧化糖类及有关物质中的1，2-乙二醇基，使之变为二醛，醛与Schiff试剂能结合成一种品红化合物，产生紫红色。
由于高碘酸还可氧化细胞内其他物质，使用时应注意选择好高碘酸浓度和氧化时间，使氧化控制在既能把乙二醇基氧化成醛基又不至于过氧化，这是很关键的步骤。
糖原PAS染色液特点是采用特有配方技术，大大增强了染色效果；性能稳定，特异性强；操作简捷，仅需1h左右。
【使用方法】1、常规固定，常采用10%的福尔马林，常规脱水包埋。
2、石蜡切片脱蜡入蒸馏水；冰冻切片直接入蒸馏水。
3、自来水冲洗2～3min，再用蒸馏水浸洗2次。
4、入过碘酸溶液，室温放置5～8min，一般不宜超过10min。
5、自来水冲洗1次，再用蒸馏水浸洗2次。
6、入SchiffReagent，置于室温阴暗处浸染10～20min。
7、自来水冲洗10min。
8、入苏木素染色液，染细胞核1～2min。
9、酸性乙醇分化液分化2～5s。
10、自来水冲洗10～15min，更换蒸馏水清洗，使其返蓝。
11、逐级常规乙醇脱水。
过碘酸雪夫反应(PAS)显示糖元和其它多糖物质
2.Schiff 氏酒精溶液配法（配后略带红色无妨）
Schiff 氏原液
11.5 毫升
1N 盐酸
0.5 毫升
纯酒精
23.0 毫升
或用 Schiff 氏原液，配法与 Feulgen 反应所用相同。
3.采取唾液的方法
刷牙、喇口之后，用 1%的醋酸在舌尖部稍稍接触，唾液开始分泌之后，用烧杯盛接之，
此唾液经过过滤后即可应用。
实验方法
石蜡切片
↓
溶蜡二甲苯 I
（3-5min）
↓
溶蜡二甲苯Ⅱ
(3-5min)
↓
1/2 纯酒精+1/2 二甲苯
(3-5min)
↓
纯酒精Ⅰ
（2-3min）
↓
纯酒精Ⅱ
(2-3min)
↓
95%酒精
(2-3min)
↓
83%酒精
(2-3min)
↓
70%酒精
(2-3min)
↓
对照组
蒸 馏 水————————→ 5%三氯醋酸，90℃，15min
(1min)(此步要快，以免过染)↓
蒸馏水
↓
70%酒精
↓
83%酒精
↓
95%酒精
↓
纯酒精Ⅰ
↓
纯酒精Ⅱ
↓
纯酒精Ⅲ
↓
透明二甲苯Ⅰ
↓
透明二甲苯Ⅱ
↓
封片
（贴上标签，注明材料，反应名称，作者姓名及日期）
显微镜下检查：
实验组：细胞核呈紫红色。
核仁及细胞质呈绿色
对照组：由于 DNA 被提取破坏，所以细胞核无紫红色。
∣实
↓
∣验
70%酒精(2-3min)
↓组
↓
细胞生物学实验手册：细胞组分的化学反应
实验七细胞组分的化学反应【实验目的】了解核酸、蛋白质、糖及酶的细胞化学反应原理，掌握Brachet反应及碱性蛋白、酸性蛋白、糖原和过氧化物酶的细胞化学染色方法。
【实验用品】一、材料和标本蟾蜍、小白鼠各一只、肝脏石腊切片、培养的Hela细胞。
二、器材和仪器光学显微镜、解剖器材、蜡盘、载玻片、吸水纸、染色缸、盖玻片、水浴箱。
三、试剂PBS缓冲液(pH7.2)、甲基绿一呱咯宁醋酸缓冲液、纯丙酮、l/2丙酮+1/2二甲苯、纯二甲苯、70％乙醇、5％三氯醋酸、0.1％碱性固绿、0.1％酸性固绿、0.5％硫酸铜、联苯胺混合液、1％番红、无水乙醇、过碘酸酒精液、Schiff 氏酒精液、亚硫酸水、Ehrlieh苏木精、95％乙醇、Carnoy固定液(甲醇：冰醋酸=3:1，体积比)【实验内容】细胞的组织化学方法，是研究细胞成分常用的方法之一。
它是利用化学试剂与细胞内的某些物质进行化学反应，从而在细胞局部形成有色沉淀物，再通过显微镜对组织内的生物化学成分进行定性、定位、定量研究。
一、Brachet反应一显示细胞内的DNA和RNA(一)原理细胞经甲基绿一呱咯宁混合液处理后，其中的DNA和RNA出现不同的呈色反应，一般认为这是由于带有负电荷的核酸对碱性染料呱咯宁和甲基绿具有亲和力，且这两种染料的作用有选择性，甲基绿染高聚分子的DNA呈蓝绿色，呱咯宁染低聚分子的RNA呈红色。
由此对细胞中的DNA和RNA进行定位、定性、和定量分析。
(二)方法l．接种Hela细胞于盖片上并培养24～48小时，使长成单层。
2．取出盖片，用PBS(pH7.2)轻轻冲洗盖片表面去除残渣。
3．放入Carnoy固定液中固定l小时。
4．浸入甲基绿一呱咯宁醋酸缓冲液中30分钟染色。
免疫组化试题(有答案)
免疫组织化学试题参考答案一、名词解释：1.PAS 反应：即过碘酸--雪夫反应显示糖原，简称证。
PAS 反应。
其原理是通过利用过碘酸的氧化作用，7.诱发荧光：组织细胞中的某些物质本身不发荧使糖分子中的二醇基氧化为二醛基，释放出醛基，光，但在经过一定的化学反应后可以转变成荧光分与碱性品红反应，生成紫红色化合物沉淀。
子。
此技术目前主要应用在生物胺的显示中。
其中2.Feulgen 法：即福尔根反应显示DNA 法。
其原最重要的是甲醛和乙醛酸诱发多巴胺、去甲肾上腺理是组织用1NHCl 60℃水解，将DNA分子中脱氧素、肾上腺素和5—羟色胺荧光，以及邻苯二醛诱核糖核酸与嘌呤间的连链打开，使之释放出醛基与发组织胺荧光的反应。
碱性品红发生反应，生成紫红色化合物沉淀。
8.定量分析：定量判断是结果判断中最重要也是具3.PAP 法：即过氧化物酶一抗过氧化物酶法，该技有意义的判断，其判断结果有助于统计学的分析处术原理与其他免疫定位技术相同，即通过抗体使标理。
组织细胞化学结果的定量分析又称定量组织细记分子（抗辣根过氧化物酶）定位于抗原附件。
其胞化学，指在组织细胞化学阳性结果的基础上，对不同点为三步法，且有放大作用，反应完全依赖于阳性结果（最终阳性产物）进行测量，以数值反应免疫学结合，不需要标记任何抗体，反应灵敏度高，被检测物质的含量。
此法是阳性结果的进一步检测背景低。
注意一抗与复合物中的抗体必须来源于同和分析，更加直观地反应实验结果，更有力地说明一种动物，且二抗必须过剩。
实验结果。
常用有人工定量分析与仪器定量分析两4.核酸探针：指能与特定核酸序列发生特异性互补类。
的已知标记的核酸片段，可检测待测样品中特定的9.固定：为了更好的保持细胞和组织原有的形态结基因序列。
无标记的探针称裸探针。
构，防止组织自溶，有必要对细胞和组织进行固定，5.核酸分子杂交：指具有互补序列的两条核酸单链其作用不仅是使细胞内蛋白质凝固，终止或抵制外在一定条件下按碱基配对原则形成双链的过程。
实验十二常用血细胞化学染色
实验十二常用血细胞化学染色Cytochemistry stain for blood cells一、过氧化物酶染色染色原理粒细胞和部分单核细胞的溶酶体颗粒中含有髓过氧化物酶(myeloperoxidase, POX或MPO),能将底物H202分解，产生新生态氧，新生态氧可氧化四甲基联苯胶成联苯胺蓝。
联苯胺蓝自我脱氢氧化形成棕色的四甲基苯酿二胺，后者与亚硝基铁氧化纳结合，再进一步氧化形成稳定的蓝色颗粒，沉淀于细胞质内酶所在的部位。
试剂器材1．1%TMB(3,5,31,5f一四甲基联苯胶)乙醇溶液:0.1g TMB溶于100mL88%乙醇溶液中，置棕色瓶内，冰箱保存。
2．亚硝基铁氧化锅饱和溶液在少量蒸馏水中加入亚硝基铁氰晶体，至不再溶解为止，置棕色瓶内，冰箱保存。
3．1%过氧化氢溶液取30%H2021mL加入蒸馆水29mL。
4．稀过氧化氢溶液1%H2021滴，加10 mL蒸馏水稀释(新鲜配制)。
5．瑞氏(Wright)染色液。
6．新鲜涂片(骨髓或血片)、染色架、洗耳球、光学显微镜等。
操作步骤1．取0.1%TMB乙醇溶液1mL，加亚硝基铁氰化钠饱和溶液10μL，溶液呈淡棕黄色，染色液应临用前配制。
2．在新鲜干燥的血片或骨髓涂片上，加0.1%TMB一亚硝基铁氰化钠饱和溶液0.5mL，放置lmin，再加稀H202溶液0.7mL，吹匀，染色6min。
3．自来水冲洗，待干，用瑞氏染液复染15~20 min。
4．自来水冲洗，待干，用油镜镜检。
注意事顶1．血涂片或骨髓涂片应新鲜制作，涂片应厚薄适宜。
2．TMB配制在85%~88%的乙醇溶液中染色效果较好，勿用90%~95%乙醇，否则细胞表面蛋白质很快凝固，妨碍试剂向胞内渗入而导致染色效果差。
3．H202需新鲜配制，其浓度与加入量不能随意更改。
涂片中粒细胞看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，即表示H202过浓。
若H202加于血片上不产生气泡，则示无效。
4．染色液pH应为5.5。
细胞内糖类染色方法―过碘酸席夫反应法
细胞内糖类染色方法―过碘酸席夫反应法细胞内糖类染色方法—过碘酸席夫反应法基本原理：过碘酸是一种强氧化剂，过碘酸的氧化作用先使糖分子的乙二醇基变为乙二醛基，乙二醛基继而与Schiff试剂结合，Schiff试剂本为无色亚硫酸品红复合物，但它与乙二醛基结合后形成紫红色反应物。
颜色反应的深浅取决于组织内多糖（包括糖原、黏多糖、黏蛋白、糖蛋白、糖脂等）的乙二醇分子的多寡。
基本原理：1. 席夫试剂的制备（1）称取0.5g碱性品红加入100ml沸水中，不断搅拌下煮5min，使其充分溶解；（2）待溶液冷却至50℃时过滤，加入浓度为1mol/L的HCl 10ml；（3）当溶液冷却至25℃时再加入0.5g偏重亚硫酸钠，在室温下放置24h，其颜色呈褐色或淡黄色；（4）再将0.5g活性炭加入呈色液中振摇1min后过滤，滤液为无色；（5）将滤液置于棕色瓶内于4℃密封保存，一般可保存数月；2. 卡诺固定液配制将30ml氯仿和10ml苯乙酸加入60ml纯乙醇中即得；3. 甲醛钙固定液配制甲醛10ml和1g CaCl2混合加水定容至100ml即得；染色步骤：1. 用Hanks液将盖玻片漂洗3次；2. 用卡诺（Carnoy）固定液或甲醛钙固定液固定5—10min；3. 加入0.5%过碘酸作用10—15min；4. 用蒸馏水漂洗1—2min；5. 移入席夫试剂中作用15—30min，盖片样品稍稍变红；6. 用自来水漂洗5—10min，盖片样品变红；7. 用蒸馏水反复冲洗；8. 用50%、70%、80%、90%、95%、100%的梯度乙醇逐级脱水各2min；9. 用二甲苯透明，用光学树脂封片后观察；结果：细胞含糖区呈紫红色。
细胞核呈粉红色至紫红色，胞质无色；提供：5. 原代细胞总蛋白质抽提物；6. 原代细胞总RNA；7. 原代细胞总DNA。
8过碘酸-雪夫(PAS)染色液(化学染色法)
红河州第一人民医院检验科质量管理体系文件 SOP文件1.检验原理血细胞内含乙二醇的糖类物质（PAS）能被过碘酸氧化，形成双基醛类物质。
后者与无色品红结合，形成紫红色沉淀物，沉淀物的显色深浅与乙二醛的含量成正比。
2.主要组成成分2.1、PAS固定液：2.5ml×5(含甲醇等)2.2、PASI液：2.0ml×5(含过碘酸等)2.3、PASII液：30ml×5(含碱性品红、偏重亚硫酸钠等)2.4、苏木素复染液：2.5ml×5(含苏木精等)2.5、说明书：1份注：不同批号试剂盒中PASS固定液，苏木素复染液可以互换。
2.储存条件及有效期有效期：一年（十二个月）。
储存条件：本试剂盒应储存于2～8℃低温环境。
4.检验方法4.1、涂片滴加固定液5-8滴盖满血膜即可。
5分钟水洗待干。
4.2、滴加I液十分钟水洗待干。
4.3、置入II液内室温（20-25℃为宜）暗处放置30分钟，流水冲4.4、洗数分钟。
4.5、苏木素复染1-2分钟，水洗待干，镜检。
5.临床意义用于营养性巨幼细胞贫血与红(白)血病的鉴别,前者的正常红细胞及有核红细胞常为阴性,而后者可呈强阳性反应.用于鉴别急性淋巴细胞性白血病与急性非淋巴细胞性白血病,前者的原淋巴细胞和幼稚淋巴细胞可见大块红色物质.后者的原始阶段细胞常为阴性.高雪氏细胞呈强阳性,而尼曼匹克氏细胞呈微弱阳9.49g溶解于1L水中80ml,再加0.07MKH2PO4(即9.08g溶解于1L水中)20ml,混匀.6.注意事项6.1、本产品仅供体外诊断使用。
6.2、样本和使用器材应避免带醛基和还原性的物质污染，以免出现假阳性。
6.3、滴加I液后水洗应充分，然后待涂片完全干燥后才能置入II液内。
6.4、涂片染色后，复染时可采用血膜纵向一半复染，另一半勿复染，以利于弱阳性的检出。
6.5、PAS II液保存不当或时间过久将会变红，并使阳性强度降低，且不能反复使用。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验四 过碘酸-雪夫反应 (糖原染色)
[目的要求] 1．掌握本实验的原理和临床意义。 2．熟悉本实验的操作方法及注意事项。 [实验原理]
糖原中的1，2-乙二醇基经高碘酸氧化后产生醛基，此醛基进而 与雪夫 (Schiff) 液作用，使无色品红变为红色的化合物，定位于 胞浆中。 [实验器材和试剂] 1．10g／L高碘酸液 2．雪夫 (Schiff) 染液 3．亚硫酸液 4．20g／L甲绿 5．染色架、洗耳球、接水盘及吸水纸。 6．光学显微镜、香柏油、乙醚和擦镜纸。
[实验原理] 细胞内的过氧化物酶能将底物的过氧化氢
分解，产生新生态氧。后者将试剂中的联苯胺 氧化为联苯胺蓝，它是一种不稳定的中间产物， 再与亚硝基铁氰化钠结合进而生成蓝黑色化合 物沉淀于酶的所在部位。
[实验器材和试剂]
1. 0.3％ 联苯胺乙醇溶液 联苯胺 88％ 乙醇
0.3 g 加至100 ml
5．流水冲洗、待干、镜检。
6．结果
(1)在红色背景下铁粒呈蓝绿色。
(2)细胞外铁：用低倍镜观察涂片，特别是涂片尾部和髓粒附近， 注意翠蓝色颗粒的存在，可分五级标准。
(-)：无颗粒所见。
(+)：有少数铁颗粒或偶见铁小珠。
(++)：有较多的铁颗粒和小珠。
(+++)：有很多的铁颗粒、小珠和少数小块状。
(++++)：有极多铁颗粒、小珠，有很多的小块，密集成堆。
磷酸萘酚，生成萘酚，后者与重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀 定位于胞浆中的酶活性处。
[实验步骤]
1．取新鲜血片自然干燥后放入95％乙醇液固定10min，用流水冲洗，待干。 2．取基质液，预温至37℃，将血片置入，继续温育4～6h。 3．滴加20g／L硝酸钴，作用5 min，蒸馏水冲洗。 4．滴加20g／L硫化铵，作用5 min，蒸馏水冲洗。 5．用20g／L甲绿水溶液复染2～3 min或用10g／L伊红复染3～5 min。 6．水洗，待干，镜检。 7．结果 (1)正常人的血细胞碱性磷酸酶除中性成熟粒细胞(杆状核及分叶核)可见阳性 外，其它细胞均呈阴性。
2. 360g／L亚硝基铁氰化钠饱和液
• 3. 稀过氧化氢液（新鲜配制）
• 3％ 过氧化氢 • 蒸馏水
0.3 ml 25 ml
•
• 4. 瑞氏染液、PH 6.4～6.8磷酸盐缓冲液。
5. 光学显微镜、香柏油、乙醚和擦镜纸。 • 6. 染色架、洗耳球、接水盘及吸水纸。
• [实验步骤] • 1.取0.3％ 联苯胺乙醇溶液 1ml，360g／L亚硝基铁氰化钠饱
(3)细胞内铁：用油镜计数100个中、晚幼红细胞， 记录胞浆中含有蓝色铁粒的细胞(铁粒幼红细胞) 的百分率。并根据细胞内铁颗粒的数目、大小、 染色深浅和颗粒分布情况，将铁粒幼红细胞分 为四型： I型：幼红细胞内含铁粒1～2粒；Ⅱ 型：幼红细胞内含铁粒3～5粒；Ⅲ型：幼红细 胞内含铁粒6～10粒；Ⅳ型：幼红细胞内含铁 粒>10粒。
1/2以上。 （＋＋＋＋）胞浆内充满糖原。
(3) 阳性率和阳性积分：根据不同情况的需要，观察同一 类细胞100个，求出阳性率的百分比，将百分率与分级 数的积相加，其总和即为积分。
实验五 过氧化物酶 (POX) 染色
[目的要求]
• 1． 掌握本实验的原理和临床意义。 • 2． 熟悉本实验的操作方法及注意事项。
② 淋巴细胞分级标准： (－) 胞浆内无颗粒。 (+) 胞浆内呈弥散淡红或有少数细颗粒 (< 9个)。 (++) 胞浆内呈弥散较深的红色或有多数细颗粒 (>10个)。 (+++) 胞浆内有较粗颗粒或少数小块状。 (++++) 胞浆内呈多数粗颗粒并有大块红色物质。
③ 幼红细胞的分级标准： (－) 胞浆内无颗粒。 (+) 胞浆内有少数分散细小颗粒或浅红色弥漫物质。 (++) 胞浆内有1～10个中等颗粒或弥漫的红色。 (+++) 胞浆内有11～20个较粗颗粒或呈深红色。 (++++) 胞浆颗粒较多，20个以上，并且粗，致密且呈紫红色。
[实验步骤]
• 1．新鲜血片或骨髓片用95％乙醇固定10min，蒸馏水冲洗，待干。 • 2．10g／L高碘酸氧化15～20min，蒸馏水冲洗，待干。 • 3．置雪夫试液室温染色30～60min。 • 4．用亚硫酸溶液冲洗3次后，以自来水冲洗2～3min，待干。 • 5．20g／L甲绿复染10～20min。 • 6．水洗，待干，镜检。 • 7．结果 • (1) 阳性反应：在细胞浆内染红色，呈弥漫状、颗粒或块状。胞
• 细胞化学染色是细胞学和化学相结合的一门科学。 它是以细胞形态学为基础，根据化学反应的原理、应 用涂片染色的方法观察细胞的化学成分及其变化的重 要方法。
• 细胞化学染色研究的对象：细胞和组织中的化学物质
• 细胞化学染色的要求： • 1. 保持细胞的生前结构。 • 2. 保存细胞生前的化学成分和酶的活性。 • 3. 所用方法是已知的化学反应或物理变化。 • 4. 反应产物必须是一种有色物质，可以进行显微镜观察。 • 5. 反应产物不能移位，必须有一定的稳定性。
(3)计算积分值：油镜下计数100个中性杆状核、分叶核粒细胞，分别记录其 分级情况，全部阳性反应细胞之和即阳性率。将得出各种积分的百分率 乘以该积分数，然后相加即为总积分。
实验七 铁染色
[目的要求] 1．掌握本实验的原理和临床意义。 2．熟悉本实验的操作方法及注意事项。
[实验原理]
骨髓小粒中的含铁血黄素称细胞外铁，其中的三价铁与分子中的 蛋白质பைடு நூலகம்合不牢，经稀盐酸处理后而游离，并能在酸性亚铁氰化 钾溶液中产生普鲁士蓝反应。细胞内铁也可用此法显示。根据反 应的强弱了解骨髓中铁的含量。
• 细胞化学染色的步骤： • 1. 固定：将细胞的生前结构和化学物质保存下来。 • 2. 显示：通过一系列化学反应形成稳定的有色沉淀。 • 3. 复染：使各种细胞都显示出来以便于观察。
• 细胞化学染色的实用价值
• 一、协助白血病的诊断 • 1.急性白血病细胞类型的鉴别。 • 检查顺序：POX PAS NAE+NaF NCE • 2.协助慢性白血病的诊断。NAP PAS • 二、协助贫血的诊断 • 1.缺铁性贫血：铁染色 • 2.再障：NAP • 3.铁粒幼细胞性贫血：铁染色 • 三、鉴别某些容易混淆的细胞以协助诊断 • 四、协助鉴别良性与恶性的淋巴细胞疾病 • 五、协助两种感染的鉴别
• 阳性反应强度的判断：
• 阴性：无颗粒。 • 弱阳性：颗粒小，分布稀疏。 • 阳性：颗粒略粗，分布较密集。 • 强阳性：颗粒粗大。
实验六 碱性磷酸酶 （NAP） 染色
[目的要求] 1． 掌握本实验的原理和临床意义。 2． 熟悉本实验的操作方法及注意事项。
[实验原理] 中性粒细胞胞质内的碱性磷酸酶在PH 9.6的碱性条件下能水解
④ 巨核细胞的分级标准： (－) 细胞内没有糖原，但细胞浆内有弥散性着色，此系其它多糖类
物质。 (+) 含少量糖原，即含数小块或一大块糖原，糖原常定位于近核膜
处。 (++) 胞浆内含有中等糖原，即含许多小块或少数大块糖原，约占
胞质的1/3。 (+++) 胞浆内含有大量糖原，呈大块状，其总面积约占胞浆面积的
[实验器材和试剂] 1. 甲醇 2．200g/L亚铁氰化钾溶液 3．浓盐酸 4. 2g/L核固红-硫酸铝溶液
[实验步骤]
1．选髓粒丰富的骨髓片，用甲醇固定10min。
2. 配制酸性亚铁氰化钾溶液：
200g/L亚铁氰化钾溶液 5份
浓盐酸
1份
3．玻片上滴满酸性亚铁氰化钾溶液，染色30min。
4．用蒸馏水冲洗后用2g/L核固红-硫酸铝溶液复染10～15min。
和液10µl，混匀。
• 2. 于新鲜干燥血涂片或骨髓片上滴加上述混合液0.5ml，使盖满整 个血膜，作用1～2min。
• 3. 滴加等量的稀过氧化氢液，混匀，染4～8min。
• 4. 勿倾去染液，直接用水冲洗。 • 5.干燥后再用瑞氏染液复染。
6.结果 在细胞的胞浆中出现蓝色或蓝黑色颗粒为阳性反应。
(4)环形铁粒幼红细胞的标准为含铁粒在6粒以 上，其中2／3以上的铁粒围核成完全或不完全 性环形(围核1／2以上的区域有铁粒环绕)。
(2)判断标准及分级： (-) 0分：胞浆呈淡红色，无任何棕黑色颗粒。 (+) 1分：胞浆呈均匀浅色，无颗粒或有少量棕黑色颗粒，但不超过胞浆总 面积的1／4。 (++) 2分：全部胞浆呈均匀棕黑色或出现较粗的黑色颗粒，不超过胞浆1／ 2。 (+++) 3分：胞浆中已基本充满棕黑色颗粒，但密度较低。 (++++) 4分：全部胞浆充满粗大棕黑色颗粒而呈深黑色甚至掩盖其胞核。