流式细胞术的质量控制
流式细胞术的质量控制
流式细胞术的质量控制流式细胞术是一种在液流中快速检测和分析细胞特性的技术，广泛应用于医学、生物技术、免疫学等领域。
然而，要确保实验结果的准确性和可靠性，必须实施严格的质量控制措施。
本文将探讨流式细胞术的质量控制。
1、样本制备的质量控制样本制备是流式细胞术的关键步骤之一，包括细胞样本的收集、处理和标记。
在此过程中，应遵循标准化操作流程，并注意以下几点：（1）样本的收集和保存：应尽可能缩短样本采集到分析的时间，避免细胞状态的改变。
对于血液样本，应使用肝素抗凝，避免细胞聚集。
（2）细胞的分离和洗涤：应根据实验需求，采用合适的分离方法（如密度梯度离心法、贴壁培养法等）对细胞进行分离。
在洗涤过程中，应使用无菌、无内毒素的缓冲液洗涤细胞，去除杂质和死细胞。
（3）抗体标记：选择高质量的抗体，并遵循制造商的建议进行标记。
应避免抗体非特异性结合，确保标记的特异性和敏感性。
2、仪器设备的质量控制流式细胞仪是流式细胞术的核心设备。
为确保实验结果的准确性，应对仪器进行定期校准和维护。
具体措施包括：（1）校准激光功率：定期使用标准样本对激光功率进行校准，确保光路准直，提高光散射数据的准确性。
（2）清洗流动室：定期清洗流动室，防止样品残留物堵塞喷嘴，影响流速稳定性。
（3）校准光电倍增管：使用标准样本校准光电倍增管，确保光电倍增管输出的线性范围。
3、数据分析的质量控制数据分析是流式细胞术的关键步骤之一，包括数据的获取、处理和解析。
在此过程中，应遵循标准化操作流程，并注意以下几点：（1）数据获取：设置合适的参数和门控，确保获取最佳的数据。
（2）数据预处理：去除噪声和无效数据，进行数据归一化处理，提高数据质量。
（3）数据分析：选择合适的数据分析方法（如聚类分析、主成分分析等），对数据进行深入挖掘。
同时，应使用多个对照样本，评估实验结果的可靠性和稳定性。
4、实验室环境的质量控制实验室环境对流式细胞术的结果也有重要影响。
为确保实验结果的准确性，应采取以下措施：（1）温度控制：保持实验室温度稳定，避免温度波动对细胞状态的影响。
流式细胞分选技术的质量控制
理论与方法252 2015年24期流式细胞分选技术的质量控制汪艳胡锐刘伟乔志仙李婷婷中国科学院水生生物研究所，湖北武汉 430072摘要：越来越多科研者利用流式分选技术进行分选染色体、纯化细胞株、单细胞克隆、分选干细胞等稀有细胞或细胞富集，将获取细胞主要用于细胞基因、蛋白、功能水平的研究，为了保证分选的细胞直接用于培养、移植、核酸提取、单细胞PCR 扩增或原位杂交等后续实验，我们有必要考虑分选细胞的生物学活性、回收率、纯度等相关分选指标。
实际上，流式细胞仪在分选细胞过程中，通常受到细胞本身状态、仪器性能、操作者等多种因素的干扰，无法获取流式细胞仪理想的分选参数值，即高速、高纯度、高活性、高得率，这些参数往往是相互制约，不能同时满足，需要考虑和平衡实验目的侧重选择。
我们将从流式分选术影响因素来阐述分选的质控。
关键词：流式细胞仪；细胞分选；质量控制中图分类号：TN24 文献标识码：A 文章编号：1671-5780(2015)24-0252-02流式细胞术（flow cytometer）利用流式细胞仪对快速流动的状态的单个细胞或生物颗粒进行多参数、高通量、高速分析和分选的一门技术[1]。
随着单克隆抗体和流式细胞仪研制整体水平的发展，分选型流式细胞仪的性能逐步完善，特别是分选功能智能化、高速化、高精度，流式细胞分选技术真正实现自动监控技术，复杂的分选技术简单化[2，3]。
因而，许多科研者利用流式分选技术进行深层次单细胞水平研究，如分选染色体、纯化细胞株、单细胞克隆、分选干细胞等稀有细胞或细胞富集等[4，5，6]。
实际上，流式细胞仪在分选细胞过程中，通常受到细胞本身状态、仪器性能、操作者等多种因素的干扰，无法获取流式细胞仪理想的分选参数值，即高速、高纯度、高活性、高得率，这些参数往往是相互制约，不能同时满足，需要考虑和平衡实验目的侧重选择。
我们将从流式分选术影响因素来阐述分选的质控。
1 样本质控流式细胞仪分析和分选样本必须制备成单细胞悬液，来源不同的样本如细胞、组织、外周血、骨髓等，必须经过一系列消化、离心、染色等步骤进行前处理，在一定程度上影响细胞的活性状态，其中染色过程对细胞活性有极大的损伤[7，8]。
流式细胞术质量控制
流式细胞术质量控制2010-01-08 14:04:03流式细胞术（flow cytometry,FCM）越来越广泛的应用在临床检验中。
由于临床检验本身的性质，它要求临床检验的管理者和操作人员必须把好常规操作已经结果分析的质量关。
同时还必须懂得如何判断分是在控还是失控。
作为临床检验工作，其工作的质量标准就是使检验的结果最佳地符合病人有无病变的实际情况。
在临床检验中分为分析前、分析中、分析后的质量控制。
分析前的质量控制主要内容是标本采集、保存和传送等；分析中的质量控制即实验操作过程的控制；分析后的质量控制主要是对数据结果的处理，对检验结果的可信度评价和及时将报告送给临床并听取反馈意见。
为此，从临床医师开出化验单，，直至拿到检验报告的整个过程都在质量控制的范畴之中，即所谓全程质量控制。
它包括质量保证、质量控制和质量评估。
质量保证，指围绕所有的步骤，监测和评估实验室规章制度与操作流程的效力。
主要利用质量控制和质量评估。
质量控制指建立一套完善的实验室监控方法，保证结果的可靠性，提高准确度、精密度、重复性和室间结果的可比性。
对于一个实验，应建立一套包括各种可变因素（仪器设备、样本处理、试剂、操作过程、数据分析等）的操作规程。
质量评估是由一个区域性的、国家的或国际性的机构，组织通过一系列的方法来比较实验室内或不同实验室之间的结果而建立的一套评价系统。
其主要目的是建立室间和仪器设备之间的可比性。
当一个标准品或参考标准存在时，质量评估通常被称为熟练度测试。
因此，严格的质量控制是先进的临床检验分析技术真正发挥作用的保证。
FCM作为一项先进的检测技术，对质量控制自然也不例外。
目前，FCM应用于临床检验的项目主要集中在几个方面：1，免疫表型分析，包括外周血淋巴细胞表型分析、白血病/淋巴瘤免疫分型、血小板膜糖蛋白分析、HLA-B27检测、阵发性血红蛋白尿（PNH）的检测等等。
2，细胞DNA、RNA检测及细胞周期分析，包括DNA倍体检测、细胞周期分析、网织红细胞检测、网织血小板检测等等。
白血病微小残留检测及其质量控制(流式细胞术)
2. 流式细胞术是直接进行定量，更为精确；而PCR是根据 产物的量进行推算。
3. 流式细胞术检测时可以区别活细胞和经化疗将要死亡的 细胞以及死亡细胞的碎片（而这些死亡的细胞以及细胞 碎片在PCR检测中都可能形成阳性信号）。
上 海 市 临 床 检 验 中 心
Shanghai Centre for Clinical Laboratory
Fluorescent Standard
Obtain Results
Troubleshoot Maintenance
Color Compensation
Generate Report
FAIL
Process/ Method Control
PASS
Test Reimbursement
上 海 市 临 床 检 验 中 心
Shanghai Centre for Clinical Laboratory
Elaine Coustan-Smith, etal. Clinical importance of minimal residual disease in childhood acute lymphoblastic leukemia. Blood. 2000, 96(8):2691-2696
流式细胞术检测白血病MRD原理
利用抗原表达的差异，以直观的方式区分白血病 细胞和正常的骨髓细胞（正常生理状态下和骨髓重建期）
跨系表达的抗原 质的差异 时相混乱的抗原 与染色体异常相关的抗原 抗原表达量异常高 量的差异 抗原表达量异常低
上 海 市 临 床 检 验 中 心
Shanghai Centre for Clinical Laboratory
差异
流式细胞术的质量控制
流式细胞术的质量控制流式细胞术的质量控制介绍:流式细胞术是一种广泛应用于生物学研究中的实验技术。
它利用机器读取细胞表面或细胞内的特定标记以获得细胞的详细信息。
在进行流式细胞术之前，需要进行一系列的质量控制步骤来确保实验结果的准确性和可靠性。
本文将详细介绍流式细胞术中的质量控制步骤。
⒈样本制备和处理⑴样本收集和保存●确保样本采集时的准确性和一致性，尽量避免引起细胞损伤或死亡的因素。
●根据所选择的荧光探针或抗体，选择合适的保存液保存样本，并按照推荐的存储温度和时间进行保存。
⑵细胞处理●避免细胞在处理过程中受到机械或酶的损伤。
选择适当的细胞处理方法（如胶凝、裂解或染色）。
⒉样本质量控制⑴细胞数目和浓度●使用细胞计数仪或显微镜对观察区域内的细胞进行计数，并计算细胞的浓度。
⑵细胞活性●使用细胞活性染料（如细胞渗透性染料）检测细胞的活性。
确保细胞在实验过程中保持完整和活跃。
⑶细胞纯度●利用细胞表面标记物或细胞核染色物进行细胞表型分析，以检测细胞样品中的污染物。
⑷细胞均一性●对样本进行混合和搅拌，确保细胞在整个样本中均匀分布。
⒊仪器校准和控制⑴流式细胞仪校准●使用流式细胞仪提供的校准粒子进行仪器校准，包括流速、散射光校准和荧光信号校准等。
⑵仪器控制●使用流式细胞仪的软件设置合适的参数，如触发门、荧光通道选择和数据采集速率。
⒋数据分析和解释⑴数据收集●使用流式细胞仪采集样本数据，并确保数据的完整性和正确性。
⑵数据分析●使用专业的数据分析软件对采集到的数据进行分析和解释。
⑶数据报告●根据实验需求和要求，使用适当的图形、表格和文本来呈现数据结果。
附件：⒈样本收集和保存记录表⒉样本质量控制记录表⒊仪器校准记录表法律名词及注释：⒈样本：指用于流式细胞术的生物样本，如细胞悬液或洗涤液。
⒉流式细胞仪：一种用于分析和计数细胞的仪器，透过仪器对细胞进行流式测量。
⒊标记物：用于识别和分析特定细胞类型或分子的抗体或染料。
⒋数据分析软件：用于处理流式细胞术数据并图形和数据表的计算机程序。
流式细胞术 标准微球
流式细胞术标准微球流式细胞术（流式细胞仪）是一种用于分析和计数细胞的高效技术，它可以帮助科研人员更好地理解细胞的特性和功能。
在流式细胞术中，标准微球是一个非常重要的组成部分，它可以用来进行质量控制、标定和校准流式细胞仪，保证实验结果的准确性和可靠性。
标准微球是一种直径均一的微小颗粒，通常由聚合物或玻璃材料制成。
它们具有精确的尺寸和荧光强度，可以用来模拟细胞在流式细胞仪中的信号。
通过将标准微球与待测样品一起送入流式细胞仪，我们可以根据标准微球的信号特性来校准和标定仪器，从而确保测量结果的准确性。
在流式细胞术中，标准微球通常用于以下几个方面：1. 质量控制，标准微球可以作为内部质量控制的参考物质，用来评估流式细胞仪的稳定性和准确性。
通过定期检测标准微球的信号强度和分布情况，我们可以及时发现仪器的偏差和故障，确保实验结果的可靠性。
2. 标定仪器，流式细胞仪需要经常进行标定，以确保测量结果的准确性和可比性。
标准微球的精确尺寸和荧光强度可以帮助我们确定仪器的灵敏度和线性范围，从而进行准确的标定。
3. 校准参数，流式细胞仪的参数设置对实验结果有着重要影响，而标准微球可以帮助我们确定荧光信号的阈值、补偿和比率，确保仪器参数的准确性和一致性。
在选择标准微球时，我们需要注意以下几点：1. 尺寸和荧光强度，标准微球的尺寸和荧光强度需要具有一定的范围，以适应不同类型的流式细胞仪和实验需求。
通常，我们可以根据实验的样品类型和检测参数来选择合适的标准微球。
2. 稳定性，标准微球的稳定性对于长期实验和质量控制非常重要。
我们需要选择具有良好稳定性和一致性的标准微球，以确保实验结果的可靠性。
3. 兼容性，在选择标准微球时，我们需要考虑其与实验样品和流式细胞仪的兼容性，以确保实验的顺利进行和结果的准确性。
总的来说，标准微球在流式细胞术中扮演着非常重要的角色，它们可以帮助我们进行质量控制、标定仪器和校准参数，保证实验结果的准确性和可靠性。
流式细胞术的质量控制
流式细胞术的质量控制流式细胞术（Flow cytometry）是一种广泛应用于生物学和医学研究中的细胞分析技术。
它通过利用光传感器和激光来检测细胞悬浮液中的细胞数量、大小、形态和表面标记物等信息，从而实现对细胞的分析和分类。
为了保障流式细胞术的准确性和可重复性，质量控制是非常重要的。
样本制备的质量控制在进行流式细胞术之前，样本制备是流式细胞术质量控制的第一步。
样本质量对于结果的准确性和可重复性至关重要。
以下是一些常见的样本制备质量控制步骤：细胞样品准备细胞浓度的准确计数：使用细胞计数仪准确计数细胞数目，以确保每个样本含有足够数量的细胞进行分析。
细胞的适当处理：根据不同实验要求，对细胞进行适当的处理，如洗涤、培养基的选择等，以确保细胞状态的一致性。
样品标记物的质量控制标记物的选择：根据实验需要，选择合适的标记物，并确保其特异性、亲和力和荧光强度等符合要求。
样品标记物的浓度和时间：对于标记物的浓度和反应时间进行优化，避免过高或过低的浓度导致信号失真或信号强度不足。
流式细胞仪的质量控制流式细胞仪作为流式细胞术的核心仪器，其性能的稳定和准确也是流式细胞术质量控制的关键。
以下是常见的流式细胞仪质量控制步骤：光谱校正与补偿荧光信号校正：使用校正颗粒进行荧光信号校正，校正光谱重叠和荧光强度的变化，以提高结果的准确性。
荧光信号补偿：通过对不同通道之间的荧光信号进行补偿，避免荧光信号之间的交叉干扰，确保结果的准确性。
流速标定流速标定：使用标定颗粒进行流速标定，保证流速的准确性，以便对细胞进行准确的定位和计数。
指标质量控制正质量控制：使用已知正样本进行实验，确保仪器的稳定性和结果的准确性。
负质量控制：使用未标记的负样本进行实验，排除背景信号和非特异性结合，保证结果的准确性。
识别和排除异物：通过故障检查和核查流式细胞术结果，识别和排除可能存在的污染源和异常情况。
数据分析的质量控制流式细胞术之后，对数据的准确分析和解读也是质量控制的重要环节。
流式细胞仪质量控制及常见问题处理-薛向军
移液 抗体 溶解/固定
II 仪器设置
IV 样品分析
分析窗口 补偿
门的纯度和回收率 准确性和精确度 可靠性核查
标本及标本处理的质控
•第一，标本的种类及外观 •第二，单细胞悬液的获取 •第三，抗凝剂的选择 •第四，样本的保存 •第五，去除红细胞的方法 •第六，细胞与抗体的比例 •第七，细胞活性的鉴定
数据的获取和分析
•第一，细胞获取数量
•第二，阈值的设立通道和大小 •第三，分析区域 •第三，其它有用的参数，如平均荧光强度，荧光强度中位 数，CV，细胞浓度等
可靠性的核实
T SUM: %CD3+4+ + %CD3+8+ = %CD3 ± 5% T 细胞的平行测定 2% LYMPHOSUM: CD3+ + CD19+ + NK = 100% ± 5% 荧光微球的流速（样本内质控）
在质控方面移液的影响经常被忽略
单平台绝对记数法要求精确和准确的测定 , 推荐使用反向加样
法, 要定期检查移液枪的精确度和准确性.
精确
准确
精确和准确
“Ringing phone syndrome”
Site A
“Change of operator syndrome”
Site B
“Stepper pipette syndrome”
系统性能参数----荧光线性
将不同荧光强度的微球混合，得到各个峰的平均荧光强度；根据标准微 球说明书提供的各个峰的MEFL荧光分子数，以及分析得到的各个峰的平 均荧光强度，做的线性回归。
Log Amplifier Linearity Verification 3
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流式细胞术的质量控制
流式细胞术的质量控制
一、引言
流式细胞术是一种重要的细胞分析技术，可以用于细胞计数、细胞表型分析和细胞排序等。
在进行流式细胞术之前，进行质量控制是非常重要的，以确保实验的准确性和可靠性。
本文将详细介绍流式细胞术的质量控制方法。
二、仪器校准
⒈流式细胞仪校准
●清洁流式细胞仪的样品室，并检查激光器和光路系统是否正常工作。
●使用粒子标准物质检查细胞仪的散射、荧光和时间参数的准确性。
●清洗和校准流式细胞仪的液体系统，确保流速和样本量的准确控制。
⒉样品准备
●均匀悬浮细胞样本，避免细胞团聚和沉积。
可通过离心和重新悬浮样本来实现。
●使用质量可靠的细胞染色方法，确保染色的准确性和一致性。
●调整样本的浓度，以避免过度聚焦和细胞过于稀疏而损失信号。
三、质量控制指标
⒈样本纯度的质量控制
●使用合适的负对照和正对照来评估染色的纯度。
例如，使用
未染色细胞作为负对照，使用已知阳性标记的细胞作为正对照。
●定期检查染色结果的一致性，确保负对照细胞没有阳性标记，正对照细胞有预期的阳性标记。
⒉流式细胞仪性能的质量控制
●定期检查流式细胞仪的性能参数，包括散射灵敏度、荧光检
测灵敏度和时间分辨率。
●使用校准颗粒检验流速的准确性和一致性。
●根据实验需要，使用合适的质检颗粒进行分辨率和强度的调整。
四、数据分析和结果解释
⒈数据质量控制
●检查数据文件的完整性，确保数据文件包含所有需要的参数和样本。
●清除实验过程中的噪声信号和非特异性染色的细胞。
●根据预设的阈值和门控策略进行数据清洗和筛选。
⒉数据解释和结果报告
●根据实验的目的和结果，选择合适的数据可视化方法，如频率直方图、散点图或密度图等。
●在报告中注明样本总数、阳性细胞比例、细胞亚群的比例等相关指标。
●提供结果的解释和分析，例如细胞表型的变化趋势、不同实验组间的比较等。
五、附件
附件1、样本染色方案
附件2、流式细胞仪校准记录表
附件3、数据分析结果表格
六、法律名词及注释
⒈ IRB：Institutional Review Board，即伦理审查委员会，负责审查人体试验和研究项目的合法性和伦理性问题。
⒉ HIPAA：Health Insurance Portability and Accountability Act，即健康保险流通责任法，为保护个人健康信息的隐私而制定的法律。