细胞毒性及细胞增殖实验耗材清单
细胞培养所需物资统计
铝泊纸
器具灭菌
脱脂棉
细胞培养
牛皮纸
细胞培养
灭菌指示带
细胞培养
不锈钢弯头止血钳
细胞培养
不锈钢剪刀
细胞培养
称量纸
培养基配制
不锈钢药勺（一套）
培养基配制
试剂
培养基
细胞培养
根据细胞种类确定
胰蛋白酶
细胞培养
根据细胞种类确定
胎牛血清
细胞培养
根据细胞种类确定
PBS
细胞培养
根据细胞种类确定
碳酸氢钠
细胞培养
根据细胞种类确定
培养基配制
蓝盖血清瓶（100ml\250ml\500ml\1000ml）
培养基配制
烧杯（100ml\250ml\1000ml）
培养基配制
玻璃棒
培养基配制
封口膜
细胞培养
冻存管
细胞冻存
记号笔
细胞培养
一次性针头滤器（0.22um）
试剂配制
一次性针头注射器（10ml\50ml）
试剂配制
细胞计数板
细胞培养
盖玻片
细胞培养所需物资统计
分类
名称
用途
备注
仪器
超净工作台
细胞培养
二氧化碳培养箱
细胞培养
倒置显微镜
细胞培养
台式低速离心机
细胞培养
移液器（1000ul\200ul\10ul）
细胞培养
高压锅
细胞培养
烘箱
细胞培养
蠕动泵（及配套硅胶管）
细胞培养
电子天平
细胞培养
-80℃冰箱
细胞冻存
液氮灌
细胞冻存
冰箱（冷藏+冷冻
细胞制备常用耗材材料
细胞制备常用耗材材料
细胞制备过程中需要使用多种耗材材料，这些材料对于细胞制备
的成功至关重要。
下面就为大家介绍常用的耗材材料及其作用。
1、细胞培养基
细胞培养基是细胞生长、分化、增殖所必须的基础。
不同类型的
细胞需要使用不同种类的培养基，例如EMEM培养基可用于培养小鼠成纤维细胞，DMEM培养基可用于培养人类细胞等。
在使用培养基时需要注意培养基的配制和储存条件，以保证细胞的健康生长。
2、细胞冻存液
细胞冻存液是将细胞保存在低温条件下的重要介质，可以延长细
胞的寿命。
细胞冻存液的配制要与细胞类型相匹配，含量的浓度、PH
值和添加物的选择具有很大关联。
一般情况下，细胞冻存液中含有10% DMSO和20%人血清可以有效保护细胞。
3、消毒液
消毒液主要用于对培养室、培养箱、培养器、试管等实验室设备
进行消毒。
为防止不同菌株的污染对细胞的影响，消毒液的选择应根
据不同细胞类型和实验要求来决定。
一般工作台、镊子、移液管、培
养板应每天进行消毒。
4、细胞培养器皿
细胞培养器皿一般包括培养瓶、培养箱、平板、离心管等。
正确
选用容器可以确保细胞生长环境卫生、稳定。
注意过期日期，选择质
量可靠的细胞培养器皿，以免对细胞生长带来影响。
细胞制备耗材材料是细胞培养的基础，要保证细胞培养以顺利的
进行，科学的选择和使用这些耗材材料具有重要意义。
选择定期更新，正确使用和保养这些耗材材料，可以更好的保证细胞培养的成功。
细胞增殖-毒性实验步骤CCK
细胞增殖-毒性实验步骤1、细胞传代、细胞计数、细胞增殖-毒性实验步骤：实验准备：用75%酒精擦生物安全柜台面2遍，紫外线消毒30分钟（枪、枪头、15ml及50ml离心管、剪刀、封口膜、记号笔、打火机、酒精灯、培养瓶），复温实验所需试剂[细胞培养液（DMEM、1640）、磷酸缓冲盐溶液（PBS）、胰酶（0.25% Trypsin-EDTA）、胎牛血清（FBS）、双抗]，所有的试剂、仪器放入生物安全柜前要用酒精喷洒消毒。
显微镜下看细胞生长状态，有无污染。
1）倒去培养瓶内的培养液；2）加入PBS 2ml洗涤培养瓶内细胞2次；3）加入胰酶500ul/0.5ml 2～10min（具体时间因细胞而异，可在显微镜下看是否贴壁，必要时轻拍培养瓶促使细胞脱落）；4）加入含10%FBS的培养液1～1.5ml[培养液：胰酶=（2～3）:1]中和胰酶；5）轻轻吹打成单细胞悬液，吹打力度以不起气泡为宜；6）将单细胞悬液吸入10～15ml离心管中，低速离心800rpm 3分钟，倒去上清液；7）加入含10%FBS细胞培养液1～2ml吹打悬浮细胞至单细胞悬液；8）吸取20ul细胞悬液（10ul细胞悬液+10ul台盼兰液：给坏死细胞染色，判断细胞活力）至细胞计数板，进行细胞计数；CCK-8实验：9）在96孔板中，给每孔加100μL（约7000个）的细胞悬液，将培养板放在培养箱预培养24-72小时（37℃，5%CO2），使细胞贴壁；10）向培养板中加入10μL不同浓度（5、10、20、40、80、160ug/ml）的待测药物；11）将培养板在培养箱孵育一段适当的时间24小时（例如：6、12、24或48小时）（药物起作用）；注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。
当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
细胞增殖与毒性检测实验方法及经验总结
细胞增殖与毒性检测实验方法及经验总结实验原理：Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。
其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。
生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。
因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。
一、用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验等。
二、优点：1.使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；K-8法能快速检测；K-8法的检测灵敏度很高，甚至可以测定较低细胞密度；K-8法的重复性优于MTT 法，MTT 实验生成的formazan 不是水溶性的，需要使用DMSO 等有机溶剂溶解；5.而本方法产生的formazan 是水溶性的，不仅省去了溶解步骤，更因此而减少了该操作步骤带来的误差；K-8法对细胞毒性小，可以多次测定选取最佳测定时间，与MTT 方法相比线性范围更宽，灵敏度更高；K-8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。
三、所需设备及仪器：1. 10ul，100-200ul及多通道移液器2. 酶标仪（带有450nm滤光片）3. 96孔培养板4. 二氧化碳培养箱四、方法及步骤：实验一：细胞增殖分析1、制备细胞悬液：细胞计数。
2、接种到96孔板中：根据合适的铺板细胞数（约1-2×104），每孔约100ul细胞悬液，同样的样本可做4-6个重复。
3、37℃培养箱中培养：细胞接种后贴壁大约需要培养4小时，如果不需要贴壁，这步可以省去。
4、加入10ul CCK8：由于每孔加入CCK8量比较少，有可能因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议将枪头浸入培养液中加入且在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混匀。
细胞增殖毒性实验步骤cck8知识讲解
如有侵权请联系网站删除细胞增殖-毒性实验步骤1、细胞传代、细胞计数、细胞增殖-毒性实验步骤：实验准备：用75%酒精擦生物安全柜台面2遍，紫外线消毒30分钟（枪、枪头、15ml及50ml离心管、剪刀、封口膜、记号笔、打火机、酒精灯、培养瓶），复温实验所需试剂［细胞培养液（DMEM、1640）、磷酸缓冲盐溶液（PBS、胰酶（0.25% Trypsin-EDT）胎牛血清（FBS、双抗］，所有的试剂、仪器放入生物安全柜前要用酒精喷洒消毒。
显微镜下看细胞生长状态，有无污染。
1、倒去培养瓶内的培养液；2）加入PBS 2ml洗涤培养瓶内细胞2次；3）加入胰酶500ul/0.5ml 2〜10min （具体时间因细胞而异，可在显微镜下看是否贴壁，必要时轻拍培养瓶促使细胞脱落）；4）加入含10%FBS勺培养液1〜1.5ml［培养液：胰酶=（2〜3）:1］中和胰酶；5）轻轻吹打成单细胞悬液，吹打力度以不起气泡为宜；6）将单细胞悬液吸入10〜15ml离心管中，低速离心800rpm 3分钟，倒去上清液；7）加入含10%FBS ffl胞培养液1〜2ml吹打悬浮细胞至单细胞悬液；8）吸取20ul细胞悬液（10ul细胞悬液+10ul台盼兰液：给坏死细胞染色，判断细胞活力）至细胞计数板，进行细胞计数；CCK-8实验：9）在96孔板中，给每孔加100卩L （约7000个）的细胞悬液，将培养板放在培养箱预培养24-72 小时（37 C，5%CO2,使细胞贴壁；10）向培养板中加入10卩L不同浓度（5、10、20、40、80、160ug/ml）的待测药物；11）将培养板在培养箱孵育一段适当的时间24小时（例如：6、12、24或48小时）（药物起作用）；注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。
当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
细胞增殖-毒性检测(CCK8试剂盒法)操作步骤_MedChemExpress
WST-8 是 MTT 的一种升级替代产品，和 MTT 或其它 MTT 类似产品，如 XTT 、MTS 等相比有明显的优点。
第一，MTT 被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的 formazan 不是水溶性的，需要有特定的溶剂来溶解；而 WST-8 和 XTT 、MTS 产生的 formazan 都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。
第二，WST-8 产生的 formazan 比 XTT 和 MTS 产生的 formazan 更易溶解。
第三，WST-8 比 XTT 和 MTS 更加稳定，使实验结果更可靠。
第四，WST-8 和 MTT 、XTT 等相比线性范围更宽，灵敏度更高，并且更加稳定。
WST-8 对细胞无明显毒性。
加入 CCK-8 溶液显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读板，检测时间更加灵活，便于确定最佳测定时间。
产品编号HY-K0301-100T HY-K0301-500T HY-K0301-3000T HY-K0301-12000T包装1 mL 5 mL 5 mL × 6(5 mL × 6) × 4产品名称Cell Counting Kit-8Cell Counting Kit-8Cell Counting Kit-8Cell Counting Kit-8Cell Counting Kit-81包装清单产品概述Cell Counting Kit-8，简称 CCK-8 试剂盒，是一种基于 WST-8 而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。
CCK-8 溶液可以直接加入到细胞样品中，不需要预配各种成分。
WST-8 在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan (参考图1) 。
细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。
对于同样的细胞，颜色的深浅 (生成的 formazan 量) 和细胞数目呈线性关系 (图2) 。
关于不同细胞增殖和细胞毒性检测试剂盒的比较和选择
关于不同细胞增殖和细胞毒性检测试剂盒的比较和选择
C0009 C0036 C0038
产品名称MTT细胞增殖及细胞毒性
检测试剂盒
WST-1细胞增殖及细胞毒性
检测试剂盒
Cell Counting Kit-8
检测样品数500 500 500 价格246.00元496.00元612.00元
主要用途细胞增殖及细胞毒性检测细胞增殖及细胞毒性检测细胞增殖及细胞毒
性检测
形成的formazan的水溶性差好好检测灵敏度高很高最高
检测时间较长较短较短
检测波长560-600nm 420-480nm 420-480nm
细胞毒性高，细胞形态完全消失很低，细胞形态不变很低，细胞形态不变试剂稳定性一般较好很好大批量样品检测可以非常适合非常适合便捷程度一般比较便捷非常便捷
如果对细胞增殖或细胞毒性的检测要求不是很高，从经济角度可以选择C0009，即MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒。
C0009可以满足常规的细胞增殖或细胞毒性的检测，主要缺点是形成的formazan水溶性很差，需要额外的步骤溶解formazan。
如果对细胞增殖或细胞毒性的检测要求灵敏度非常高，并且希望非常便捷，在研究经费许可的条件下，建议选择使用C0038，即Cell Counting Kit-8。
如果既希望检测灵敏度很高并且检测比较便捷，但又希望价格不是太贵，可以选择C0036，即WST-1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒。
整理)MTS 细胞增殖及毒性试验
竹密岂妨流水过蛮鬼2018.3山高哪碍野云飞MTS 或CCK8细胞增殖及毒性试验一、所需试剂1、CellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay试剂盒（-20℃避光保存，4℃保存6周，黄色）（1）MTS：新一代四氮唑蓝盐化合物，即被活细胞线粒体中的多种脱氢酶还原成有色的甲瓒产物，其颜色深浅与某些敏感细胞株的活细胞数在一定范围内呈高度相关。
（2）PES：吩嗪硫酸乙酯，一种电子偶联剂，具有增强的化学稳定性，这使它可与MTS混合形成稳定的溶液2、Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）（保存条件同上，紫色）（1）WST-8：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐（2）1-Methoxy PMS：1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯3、药物或毒素（药物IC50等用到）4、96孔板二、实验步骤每种处理设置3个副孔（空白组可1个），加入100μl培养基：（1）细胞增殖实验：设置NC组，处理组，空白组，6天时间，平均每孔1000-2000个细胞（2）毒性或药物或放疗IC50：设置梯度给药组（包括不给药组），空白组，平均每孔5000-8000个细胞2、在37°C，5% CO2的环境下培养（1）增殖：8h或24h（细胞贴壁时间）,也可种板后直接测第一次，作为基准线，之后每隔24小时检测下一天的细胞量（MTS 每孔加20μl，CCK8加10μl）（2）毒性和药物：培养24h后加入药物培养48小时及以上3、增殖实验每天测量一次，以100全培养基：20MTS比例配制总管（CCK8以100:10）4、吸掉96孔板内待测孔内培养基，每孔加入120μl稀释后的MTS试剂（CCK8加入110μl）4、在37°C，5% CO2的环境下孵育1-4个小时（一般选2h）5、选取波长，MTS选492nm，CCK8选450nm，读取吸光度值，记录结果，以时间为横坐标，每日吸光值/基准值为纵坐标绘制细胞生长曲线。