人胰高血糖素样肽1(GLP-1)酶联免疫检测
胰高血糖素样肽-1受体激动剂(GLP-1RAs)——艾塞那肽在2型糖尿病中的应用现状
胰高血糖素样肽-1受体激动剂（GLP-1RAs）——艾塞那肽在2型糖尿病中的应用现状摘要】健康人体内餐后胰岛素分泌总量中约有60%～70%是肠降血糖素所致，在血糖升高时，肠降血糖素抑制胰高血糖素分泌，减少肝糖生成与输出。
GLP-1RAs在治疗T2DM（2型糖尿病）时具有独特的机制：增加胰岛素分泌；减少胰高血糖素释放；降低食欲和延迟胃排空。
据有关GLP-1RAs治疗T2DM的报告：艾塞那肽可使ALC（糖化血红蛋白）下降0.8～1.1%，体重减轻1.6～3.2kg。
本文旨在简要介绍GLP-1RAs的药物动力学，药效和安全性。
【关键词】胰高血糖素样肽-1受体激动剂；艾塞那肽；糖化血红蛋白【中图分类号】R37 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）26-0192-02早在一百多年前Bayliss和Starling二人就已发现肠管萃取物可促使胰岛素分泌降低血糖。
1930年Barre, Still合作研究发现胰岛素分泌受肠道调节。
1994年Elrick等证明口服葡萄糖比静脉注射葡萄糖更能激起胰岛素应答。
随后发现主要有二种肠降血糖素：GLP-1（胰高血糖素样肽-1）和GIP（葡萄糖依赖促胰岛素分泌肽）胰高血糖素样肽-1(GLP-1)是由回肠远端和结肠的神经内分泌L细胞分泌的30或31个氨基酸残基组成，有GLP-1(7-36)NH2和GLP-1（7-37）两种亚型，前者体内稳定性好，促胰岛素分泌作用强。
GLP-1受体存在于beta细胞内，尚存在与胃、脂肪组织、骨骼肌、心、肺、脑的细胞内。
血糖增高时胰岛素释放增加，血糖降低时胰岛素释放也相应减少，改善组织对胰岛素的敏感性，减少胰岛素抵抗，促进前体细胞转化导致beta细胞增殖/新生和抑制beta细胞凋亡，延迟胃排空使胃内容物限时速进入肠道从而减少餐后血糖漂移，刺激下丘脑释放五羟色胺抑止alpha细胞释放胰高血糖素减少肝糖输出，通过中枢作用产生饱胀感减少食欲而致体重下降目前已被批准用于治疗T2DM 的GLP-1RAS有：艾塞那肽缓释艾塞那肽等种类。
胰高血糖素样肽-1(7-36)
活性GLP-1（7-36）特异性酶免试剂盒EDI™ Active GLP-1 (7-36) Specific ELISA KitEnzyme Linked ImmunoSorbent Assay (ELISA) for the Measurement the Level ofHuman Osteocalcin (1-43) and Osteocalcin (1-49)美国Epitope Diagnostics, Inc.For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedure KT 871活性GLP-1（7-36）特异性酶免试剂盒【预期用途】该高灵敏度ELISA（酶联免疫吸附测定）试剂盒是专门用来定量检测血清样本中的胰高血糖素样肽-1（7-36）[GLP-1（1-36）]的浓度。
哺乳动物中的GLP-1肽链的基本氨基酸序列完全相同，如：小鼠、大鼠、猪、狗、猴、人等。
该试剂盒仅适用于科学研究。
【实验原理】这个ELISA的设计，研发和生产的目的是对血浆样品中的活性GLP-1（7-36）进行定量检测。
该试剂盒是基于运用两个GLP-1(7-36)特异性抗体分别与两个位点结合的“双位点夹心”技术。
将标准品、质控品、和待测样品加入链霉亲和素包被的微孔板中。
随后，将生物素偶联的的GLP-1（7-36）特异抗体和HRP标记的GLP-1(7-36)特异抗体混合物添加到各个孔中。
经过第一个保温孵育期后，形成了“链霉亲和素-生物素抗体- GLP-1（7-36）-HRP标记抗体”的“双位点夹心”结构，该复合体被微孔板的内壁吸附住。
游离的HRP标记抗体和缓冲基质则在洗涤过程中被冲走。
微孔板加入过氧化物酶基质（3,3',5,5'-四甲基联苯胺，TMB）并经过一段时间的反应后，用酶标仪测量吸光度。
微孔板内壁的免疫复合体的酶活性与样本中的GLP-1（7-36）浓度成正比。
glp-1试剂盒说明书
人胰高血糖素样肽1（GLP-1）ELISA 定量检测试剂盒点击放大产品型号： 48T/96T产品报价：产品特点： 本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA ），定量检测人血清、血浆及相关液体样本中胰高血糖素样肽1（GLP-1）的含量本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。
人胰高血糖素样肽1（GLP －－1）定量检测试剂盒（ELISA ）使用说明书【试剂盒名称】人胰高血糖素样肽1（GLP-1）定量检测试剂盒（ELISA ）【试剂盒用途】定量检测人血清、血浆及相关液体样本中胰高血糖素样肽1（GLP-1）的含量。
【检测原理】本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA ）。
将标准品、待测样本加入到预 先包被人胰高血糖素样肽1（GLP-1）单克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤 除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。
依次加 入底物A 、B ，底物（TMB ）在辣根过氧化物酶（HRP ）催化下转化为蓝色产物，在酸的作 用下变成黄色，颜色的深浅与样品中人胰高血糖素样肽1（GLP-1）浓度呈正相关，450nm 波 长下测定OD 值，根据标准品和样品的OD 值，计算样本中人胰高血糖素样肽1（GLP-1）含量。
【试剂盒组成】1 酶标包被板12孔×8条7 显色剂A液6mL2 标准品0.3mL×6管8 显色剂B液6mL3 20倍浓缩洗涤液25mL 9 终止液6mL4 样本稀释液6mL 10 说明书1份5 特殊稀释液6mL 11 封板膜2张6 酶标试剂6mL 12 密封袋1个备注：标准品（1号→6号）浓度依次为：8、4、2、1、0.5、0.25pmol/L【需要而未提供的试剂和器材】1、37℃恒温箱2、标准规格酶标仪3、精密移液器及一次性吸头4、蒸馏水5、一次性试管6、吸水纸【操作步骤】1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。
胰高血糖素样肽1_受体激动剂治疗代谢相关脂肪性肝病作用机制研究进展
胰高血糖素样肽1受体激动剂治疗代谢相关脂肪性肝病作用机制研究进展李秀1，2，李兴茂1，2，王婷3，李森21 潍坊医学院临床医学院，山东聊城252000；2 聊城市人民医院内分泌科3 聊城市人民医院中西医结合儿科重点实验室摘要：代谢相关脂肪性肝病（MAFLD）目前以控制生活方式及减重作为基础治疗，后续疾病加重及恶化不可控，亟需确切有效的药物遏制其向肝炎甚至肝纤维化等进展。
胰高血糖素样肽1受体激动剂（GLP-1RAs）因其独特的降糖机制被批准用于治疗2型糖尿病。
GLP-1RAs能够抑制食欲、减少食物摄入，具有一定减重效果；GLP-1RAs还具有减少肝脏脂肪堆积、增强脂质氧化和产热、减轻炎症的能力，从而发挥治疗MAFLD的作用。
然而现有的GLP-1 RAs治疗MAFLD相关动物实验成果不具有完全代表性，仍需要临床试验加以验证。
关键词：代谢相关脂肪性肝病；胰高血糖素样肽1受体激动剂；胰岛素抵抗；肝纤维化；肝脏炎症；细胞自噬doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2023.32.021中图分类号：R575.5 文献标志码：A 文章编号：1002-266X（2023）32-0088-04代谢相关脂肪性肝病（MAFLD）是代谢性疾病的一种［1-3］，已成为全球慢性肝病的主要原因。
MAFLD是肥胖、高血糖、高脂血症及高血压等症候群的肝脏表现，其发病机制最经典的学说为“二次打击”学说，即首次打击是胰岛素抵抗导致脂肪在肝脏实质细胞内的过度聚集，二次打击是脂肪过度沉积导致活性氧诱导肝脏实质细胞炎症反应。
MAFLD 与2型糖尿病（T2DM）、心血管疾病、慢性肾脏疾病和某些类型肝外恶性肿瘤的发病密切相关［4］。
目前MAFLD的基础治疗以减重、改善生活方式为主，尚无确切、高效的治疗药物阻遏其发展或促进恢复。
胰高血糖素样肽1（GLP-1）是一种肠促胰岛素分泌分子，因具有控制胰岛素分泌、调节胃排空和肠道蠕动、减重等作用，被用于T2DM的治疗。
glp-1简介
自上世纪60年代发现胰高血糖素样肽-1(简称GLP-1）以来，对GLP-1的研究层出不穷。
GLP-1早期研究主要聚焦GLP-1的肠促胰素概念及其直接的生物效应，而最近GLP-1研究逐步深入到GLP-1作为神经递质在中枢调控中的作用及其代谢产物如GLP-1（9-36）对其生理作用的承接。
本栏汇总了GLP-1生理作用和机制研究的最新进展，以丰富我们对GLP-1的全面理解。
GLP-1的分泌和表达GLP-1由胰高血糖素原基因表达，肠粘膜L细胞、胰岛α细胞、及神经元均有该基因存在。
胰岛α细胞中胰高血糖素原基因表达的主要产物是胰高血糖素（glucagon），而肠道L细胞和神经元中胰高血糖素原基因的表达产物是GLP-1(glucagon-likepeptide1)。
GLP-1有两种生物活性形式，分别为GLP-1（7-37）和GLP-1（7-36）酰胺，GLP-1约80%的循环活性来自GLP-1（7-36）酰胺。
GLP-1作为肠促胰素的概念广为所知：肠道L细胞分泌的，具有葡萄糖依赖的胰岛素促泌作用、抑制胰高血糖素分泌、刺激β细胞增殖分化和抑制β细胞凋亡、抑制食欲及摄食、延缓胃排空，能恢复2型糖尿病患者受损“肠促胰素效应”，是一类新型的糖尿病治疗药物。
中枢神经系统（CNS）分泌的GLP-1：早在1990年Liu等人借助放射免疫法证实在啮齿动物的下丘脑和脑干内存在高浓度的GLP-1，之后的研究证实在脑干和孤束核能够表达GLP-1（1）。
GLP-1受体也在中枢神经系统广泛表达，在嗅球、额叶皮层、伏隔核、隔核、杏仁核和海马等都有分布（1）。
Huiyuan Zheng等人的最新研究也证实人延髓中存在GLP-1的阳性神经元（2）。
作为神经递质存在的GLP-1，可能通过脑-肠-GLP轴的形式参与食欲抑制、中枢神经内稳态的信号调节。
胰岛α细胞也可分泌GLP-1：Marchetti等人发现正常的α细胞可分泌GLP-1，而Ellingsgaard等人也发现白细胞介素-6（IL-6）可诱导人α细胞生成GLP-1（3，4），目前尚不清楚正常完好无损胰岛α细胞分泌GLP-1的功能意义及程度。
人胰高血糖素样肽1(Glp-1)定量检测试剂盒(ELISA)
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。
人胰高血糖素样肽1(Glp-1)定量检测试剂盒（ELISA）使用说明书【试剂盒名称】人胰高血糖素样肽1(Glp-1)定量检测试剂盒（ELISA）【试剂盒用途】定量检测人血清、血浆及相关液体样本中胰高血糖素样肽1(Glp-1)的含量。
【检测原理】本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。
将标准品、待测样本加入到预先包被人胰高血糖素样肽1(Glp-1)多克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。
依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中人胰高血糖素样肽1(Glp-1)浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中人胰高血糖素样肽1(Glp-1)含量。
【试剂盒组成】1酶标包被板12孔×8条7底物夜A6mL2标准品：50ng/ml0.6mL8底物夜B6mL320倍浓缩洗涤液20mL9终止液6mL4标准品稀释液6mL10说明书1份5样本稀释液6mL11封板膜1张6酶标试剂6mL12密封袋1个备注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：50、25、12.5、6.25、3.12、1.56ng/ml【需要而未提供的试剂和器材】1、37℃恒温箱2、标准规格酶标仪3、精密移液器及一次性吸头4、蒸馏水5、一次性试管6、吸水纸【操作步骤】1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。
2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。
胰高血糖素样肽-1
胰高血糖素样肽-1胰高血糖素样肽-1（GLP-1）是回肠内分泌细胞分泌的一种脑肠肽〃目前主要作为2型糖尿病药物作用的靶点。
由于GLP-1可抑制胃排空〃减少肠蠕动〃故有助于控制摄食〃减轻体重。
在19例肥胖患者中进行的前瞻性安慰剂对照、随机、双盲、交叉试验中〃GLP-1皮下注射给药可增加患者餐后的饱腹感〃并使每餐的饮食量平均减少15%。
但由于GLP-1是多肽〃不能口服给药是其一大缺憾。
胰高血糖素样肽-1历史早在上世纪60年代〃麦金太尔（（McIntyre）和埃尔里克（Elrick）等人就发现〃口服葡萄糖对胰岛素分泌的促进作用明显高于静脉注射〃这种额外的效应被称为“肠促胰素效应”（见上图）〃而珀利（Perley）等人进一步研究证实〃这种“肠促胰素效应”所产生的胰岛素占进食后胰岛素总量的50%以上。
1986年〃瑙克（Nauck）等人发现〃2型糖尿病患者肠促胰素作用减退〃这提示〃肠促胰素系统异常可能是2型糖尿病的发病机制之一。
随着细胞和分子生物学的发展〃肠促胰素这层神秘的面纱被慢慢揭开〃研究证实〃肠促胰素是人体内一种肠源性激素〃在进食后〃该类激素可促进胰岛素分泌〃发挥葡萄糖浓度依赖性降糖作用。
肠促胰素主要由GLP-1和糖依赖性胰岛素释放肽（GIP）组成〃其中GLP-1在2型糖尿病的发生发展中起着更为重要的作用。
GLP-1由胰高血糖素原基因表达〃在胰岛α细胞中〃胰高血糖素原基因的主要表达产物是胰高血糖素〃而在肠黏膜的L细胞中〃前激素转换酶（PC1）将胰高血糖素原剪切为其羧基端的肽链序列〃即GLP-1。
GLP-1有2种生物活性形式〃分别为GLP-1（7-37）和GLP-1 （7-36）酰胺〃这两者仅有一个氨基酸序列不同〃GLP-1约80%的循环活性来自GLP-1（7-36）酰胺[1,2]。
胰高血糖素样肽-1作用编辑GLP-1生物学特性如何?怎样发挥降糖效应?研究已证实〃肠促胰素以葡萄糖浓度依赖性方式促进胰岛β细胞分泌胰岛素〃并减少胰岛α细胞分泌胰高血糖素（glucagon）〃从而降低血糖。
2020《胰高糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂用于治疗2型糖尿病的临床专家共识》要点
2020《胰高糖素样肽-1（GLP-1）受体激动剂用于治疗2型糖尿病的临床专家共识》要点胰高糖素样肽‐1受体激动剂（GLP-1RA）不仅显著降低2型糖尿病（T2DM）患者的血糖，还可以改善多种心血管危险因素，部分GLP-1RA被证实具有明确的心血管保护作用。
《胰高糖素样肽-1（GLP-1）受体激动剂用于治疗2型糖尿病的临床专家共识》针对GLP-1RA降糖治疗的应用时机，与其他降糖药物联用时的注意事项，对T2DM合并动脉粥样硬化性心血管疾病（ASCVD）、心力衰竭（HF）或慢性肾脏疾病（CKD）患者治疗结局的影响，在T2DM特殊人群中的应用等临床问题给出了具体的推荐意见。
主要推荐意见胰高糖素样肽-1受体激动剂（GLP-1RA）可以单独使用，也可以作为除二肽基肽酶4抑制剂（DPP-4i）以外的其他降糖药物单药或联合治疗血糖控制不达标时的二联或三联用药选择之一。
（Ⅱa，B）在含有磺脲类（SU）或胰岛素在内的二联或三联降糖治疗方案中，加用GLP-1RA时，建议减少SU或胰岛素的剂量或停用其中一个降糖药物，以减少低血糖发生风险。
（Ⅱb，C）对于合并动脉粥样硬化性心血管疾病（ASCVD）或极高危心血管风险者，无论基线糖化血红蛋白（HbA1c）或个体化HbA1c目标值如何，建议联合具有心血管获益证据的GLP-1RA，以降低心血管事件风险。
（Ⅰ，A）GLP-1RA可以用于具有心力衰竭（HF）风险的2型糖尿病（T2DM）患者，但不能预防HF；在射血分数降低性心力衰竭（HFrEF）的失代偿期需慎用GLP-1RA。
（Ⅱb，B）GLP-1RA治疗可以显著减少尿白蛋白排泄量，从心血管保护和改善血糖控制的角度，T2DM合并慢性肾脏疾病（CKD）患者可以考虑使用GLP-1RA治疗。
（Ⅱb，B）大多数GLP-1RA可用于轻、中度肾功能不全患者，利拉鲁肽和度拉糖肽可用于肌酐清除率>15 ml/min的重度肾功能不全患者。
（Ⅱb，B）利拉鲁肽可用于轻、中度肝功能不全患者，利司那肽和度拉糖肽可全程用于肝功能不全患者。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
人胰高血糖素样肽1(GLP-1)酶联免疫检测
试剂盒使用说明书
使用前仔细阅读本说明书。
本酶联免疫试剂盒是基于生物素双抗体夹心技术原理，来检测人胰高血糖素样肽1(GLP-1))，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。
用途：用于人血清、血浆及相关液体样本中胰高血糖素样肽1(GLP-1)的测定。
工作原理
本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中人胰高血糖素样肽1(GLP-1)的水平。
向预先包被了人胰高血糖素样肽1(GLP-1)单克隆抗体的酶标孔中加入胰高血糖素样肽1(GLP-1)，温育；温育后，加入生物素标记的抗GLP-1抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅与样品中人胰高血糖素样肽1(GLP-1)的浓度呈正相关。
试剂盒组成
需要而未提供的试剂和器材
1．37℃恒温箱。
2．标准规格酶标仪。
3．精密移液器及一次性吸头
4．蒸馏水，
5．一次性试管
6．吸水纸
注意事项
1．从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。
酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
3．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
4．为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
5．不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
6．底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
洗板方法
手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。
根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
标本要求
1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
操作程序
1．标准品的稀释：（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比
2
复孔。
每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
3．加样：1）空白孔：空白对照孔不加样品，生物素标记的抗GLP-1抗体，链霉亲和素-HRP，只加显色剂A&B和终止液，其余各步操作相同；2）标准品孔：加入标准品50μl，链霉素-HRP50μl（标准品中已事先整合好生物素抗体，故不加）；3)待测样品孔:加入样本40μl，然后各加入抗- GLP-1抗体10μl、链酶亲和素-HRP50μl，盖上封板膜，轻轻振荡混匀，37℃温育60分钟。
4．配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
5．洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6．显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。
7．终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
8．测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止液后10分钟以内进行。
9.根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。
也可以使用各种应用软件来计算。
操作程序总结：
检测范围：0.5pmol/L→100pmol/L。
规格：96T/盒
保存：2-8℃
有效期： 6个月（2-8℃）。