酶联免疫试剂盒
人降钙素基因相关肽(CGRP)酶联免疫分析试剂盒 说明书
人降钙素基因相关肽（CGRP）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用检测范围：1.56pg/ml-100pg/ml最低检测限：0.39pg/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人CGRP，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中CGRP 含量。
说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗CGRP抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗CGRP抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的CGRP呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板（Assay plate）：一块（96孔）。
2.标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。
3.样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）8.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
酶联免疫检测试剂盒的原理和应用(广州培训)
袋重新密封；标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露 在光线下。 9、试剂变质的迹象显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0标准的 吸光度值小于个单位（OD450nm<0.5 ）时，表示试剂可能变质。
二、磺胺类药物等 ELISA检测方法 的介绍与注意事项
1、磺胺类药物ELISA试剂盒 2、氟喹诺酮类药物ELISA试剂盒 3、莱克多巴胺ELISA试剂盒 4、克仑特罗ELISA试剂盒 5、样本前处理与酶标分析注意事项
残留限量要求
磺胺类药物：在肌肉、肝脏样品中总量最高残留限量为100 g/kg 恩诺沙星、环丙沙星：在肌肉样品中最高残留限量为100 g/kg 莱克多巴胺：在猪肉样品中为不得检出。 克仑特罗：在猪肉样品中中为不得检出。
------农业部第235号文件
1、磺胺类药物试剂盒
试剂盒种类：磺胺三合一（SM2,SDM,SM1）、磺胺七合一(SMZ,SDZ,SMM,ST等)、 磺胺喹恶啉
的洗板顺序操作是ELISA测定程序中的要点。在洗板过程中如果出现板孔干燥 的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板排干后应立即 进行下一步操作。
5、注意事项
6、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。 7、不要使用过了有效日期的试剂盒，稀释或搀杂使用会引起灵敏度、
OD值的变化。不要交换使用不同批号的盒中试剂。 8、储存条件保存试剂盒于2-8℃，不要冷冻；将不用的微孔板放进自封
酶联免疫试剂盒elisa原理
酶联免疫试剂盒elisa原理
酶联免疫试剂盒（ELISA）是一种常用的生物化学检测方法，通常用于检测血清中某种特定的蛋白质或分子。
其原理如下：
1. 血清处理：血清样品需要进行预处理，例如稀释、蛋白质纯化等步骤。
2. 固定抗体：在试验板的孔中涂上特异性的抗原抗体，它们能够特异性地结合要检测的蛋白质。
3. 样品加入：将处理后的血清样品加入到试验孔中，样品中的目标蛋白质会与固定在孔中的抗体结合。
4. 清洗：将孔中的样品去除，并进行多次洗涤，以去除非特异性结合的成分。
5. 探针抗体加入：加入与目标蛋白质结合并标记有酶的探针抗体，这些抗体会特异性地结合在目标蛋白质上。
6. 再次清洗：将无法结合的探针抗体去除，并进行多次洗涤。
7. 反应溶液加入：加入适当的底物（如染色剂），使酶与底物发生反应，产生可视的信号（如颜色变化）。
8. 信号检测：通过光密度仪或其他相关仪器测量底物的反应产物的吸光度，将其转换为相对的蛋白质含量，从而得出目标蛋白质的相对浓度。
ELISA试剂盒原理的关键步骤是固相法，即将抗原或抗体固定在试验孔表面，从而使其能够与待检测物质特异性地结合。
通过结合酶标记的探针抗体和底物的反应，可以将待检测物质转换为可视的信号，并通过测量该信号的强度来确定目标物质的浓度。
酶联免疫试剂盒检测通则
酶联免疫试剂盒检测通则酶联免疫试剂盒（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）是一种常用的分析检测技术，广泛应用于生物医学领域。
本文将介绍酶联免疫试剂盒的基本原理、操作流程、质量控制和解释结果的方法。
一、酶联免疫试剂盒的基本原理酶联免疫试剂盒主要利用抗体与抗原之间的特异性识别和结合，通过酶标记物的检测实现对抗原或抗体的定量检测。
一般分为直接法、间接法、竞争法和间接荧光法等几种。
1.直接法：将酶标记的特异性抗体与待检测样品中的抗原结合，然后通过染色反应来测定酶标记物的含量。
直接法的优势是操作简单，但灵敏度较低。
2.间接法：在待测样品中加入抗原，待抗原与样品中特异性抗体结合后，再加入与该特异性抗体结合的酶标记的二抗。
该方法的优点是灵敏度高，但操作相对复杂。
3.竞争法：待测样品中的抗原与酶标记的抗原竞争与特异性抗体结合，通过酶标记物的含量来定量待测样品中的抗原。
该方法适用于抗原多样性较高的情况。
4.间接荧光法：将荧光标记的抗体与待检测样品中的抗原结合，形成荧光抗原-抗体复合物。
再通过荧光检测系统进行荧光信号的定量。
该方法具有高灵敏度和高特异性的优势。
二、酶联免疫试剂盒的操作流程酶联免疫试剂盒的操作流程一般包括预处理样品、样品孵育、酶标物孵育、洗涤、加色反应和停止反应等步骤。
具体流程如下：1.预处理样品：将待检测样品进行灭活、稀释或提取，以便获得合适的样品浓度。
2.样品孵育：将预处理后的样品加入酶标板的孔中，有效接触酶标板的吸附相，孵育一段时间，使待测物与酶标特异抗体结合。
3.酶标物孵育：将酶标物与样品中的待测物相互作用，特异性结合，并形成抗原-抗体-酶标物复合物。
4.洗涤：用洗涤缓冲液多次洗涤酶标板孔，去除未结合的物质，提高试剂盒的特异性和灵敏度。
5.加色反应：将底物溶液加入酶标板孔，与酶标物反应，形成可见的色素。
6.停止反应：通过加入停止溶液停止酶反应，防止颜色继续发展，并使酶标板中的颜色稳定。
酶联免疫分析试剂盒说明书
人chemerin酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用预期应用ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关液体中chemerin含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中chemerin水平。
用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入chemerin抗原、生物素化的抗人chemerin抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的chemerin呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板：一块（96孔）2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为20,000pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释10,000pg/ml，5,000pg/ml，2,500pg/ml，1,250pg/ml，625pg/ml，312.5pg/ml，156pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0pg/ml，临用前15分钟内配制。
如配制10,000pg/ml标准品：取0.5ml20,000pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3.样品稀释液：1×20ml/瓶。
4.检测稀释液A：1×10ml/瓶。
5.检测稀释液B：1×10ml/瓶。
6.检测溶液A：1×120ul/瓶（1:100）临用前以检测稀释液A1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
如1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
7.检测溶液B：1×120ul/瓶（1:100）临用前以检测稀释液B1:100稀释。
小鼠白细胞介素10(IL-10) 酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒)
仅供科研使用，不得用于临床检验。
小鼠白细胞介素10（IL-10 ）酶联免疫试剂盒（ELISA试剂盒）说明书黄石市艾恩斯生物科技有限公司【产品名称】通用名称：小鼠白细胞介素10（IL-10 ）酶联免疫试剂盒（ELISA试剂盒）英文名称：Mouse Interleukin 10（IL-10 ）ELISA KIT【包装规格】48人份/盒，96人份/盒【预期用途】仅供科研使用，定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中小鼠白细胞介素10（IL-10 ）的浓度。
【检验原理】本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。
在预包被抗小鼠白细胞介素10（IL-10 ）抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入小鼠白细胞介素10（IL-10 ）校准品和待测样本，再加入另一株HRP标记的抗小鼠白细胞介素10（IL-10 ）抗体（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。
加底物A和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中小鼠白细胞介素10（IL-10 ）的浓度正相关。
拟合校准品曲线，可以计算出样本中小鼠白细胞介素10（IL-10 ）的浓度。
【主要组成成分】主要成分校准品检测范围：15.6-1000pg/ml。
校准品已经通过测试，结果表明HBs抗原阴性，HIV1、HIV2和HCV抗体阴性，由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质，本品必须按照具有潜在的感染性进行处理，处理过程应当遵循通用的安全措施。
需要但未提供的材料及耗材1、酶标仪2、精密移液器及一次性吸头3、蒸馏水4、洗瓶或者自动洗板机5、37℃水浴锅或恒温箱6、500ml量筒7、无粉一次性乳胶手套【储存条件及有效期】1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。
2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。
检测试剂盒(酶联免疫法)说明书
清洗去除非特异抗体。
抗人 IgM 的辣根过氧化物(HRP)结合物加入后在 37℃下孵育 1 小时。此步骤与之前形成的抗原抗 体复合物结合。
洗去未结合物。
加入 TMB 底物，底物由过氧化物酶水解，减少底 物的液体产生蓝色产物。
加入终止液，蓝色变为黄色并且在由 ELISA 读数 仪在波长为 450nm 上读取吸光度。 吸光度与结合到包被抗原的特异性抗体的水平成
公式计算：
COL=样本吸光度/COV COV:临界值 NC:阴性质控 COL:临界指数 3. 结果解释： 图 1：肺炎衣原体抗体与 450nm 下吸光度之间的关系
吸光度 （450nm） O.D<1.4XC
OV 1.4XCOV≤ O.D≤1.5×
COV
COL
<1.4
1.41.5
结果
阴性 没有检 测 IgM 抗体 临界值 低水 平的 IgM 抗体
1) 阳性质控：吸光度应在 450nm 波长下≥0.8。 2) 阴 性 质 控 ： 阴 性 质 控 的 吸 光 度 平 均 值 在 450nm 波长下为 0.1< NC ≤ 0.4 2. 计算 COV 和 COL 值：
COV=NC×2 NC=在 450nm 波长下检测两个阴性质控吸光度的平均 值
人可溶性糖蛋白 130（sgp130;sCD130）酶联免疫分析(ELISA) 试剂盒使用说明书
人可溶性糖蛋白130（sgp130;sCD130）酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆、组织等样本中可溶性糖蛋白130（sgp130;sCD130）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人可溶性糖蛋白130（sgp130;sCD130）水平。
用纯化的人可溶性糖蛋白130（sgp130;sCD130）捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入人可溶性糖蛋白130（sgp130;sCD130），再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的人可溶性糖蛋白130（sgp130;sCD130）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人可溶性糖蛋白130（sgp130;sCD130）含量。
注：标准品浓度依次为：800、400、200、100、50、0 ng/mL.样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
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准确度和精密度：
准确度即对检测对象的有无、含量的判定
结果和实际情况的符合程度。（灵敏度、 特异性、回收率）
精密度：对同一个样品多次重复检测、不
同时间段检测、不同批次产品对同一样品 检测的结果相近程度。（检测结果稳定可 靠）
使用便捷性：
样品前处理的繁琐程度：
花费时间：少量样品和大量样品的时间差。 对设备和环境的要求：专用设备、反应环
enzyme-linked immunosorbent assay ELISA 在康正，我认为需要对酶联免疫试剂盒主 要进行两方面的了解： 酶联免疫试剂盒本身 ①酶联免疫的原理、②分类、③试剂盒
1.
检测样品以及试剂盒性能指标 ①检测限、②准确度和精密度、 ③使用便捷性、④有效期
2.
标准曲线 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 0 5 10 标准品浓度 15 y = -13.279Ln(x) + 67.033 R 2 = 0.9984
百分吸光值（B/B0）
20
25
标准曲线（半对数） 90 80 y = -13.279x + 67.033 R 2 = 0.9984
（三）竞争法
（一）双抗体夹心法
试剂盒：
酶标板（包被物）、标准品、抗体、酶标
物、洗涤液、底物溶液、终止液、文件。
样品稀释液、样品处理液。
包装。
试剂盒检测限：
试剂盒本身酶联反应能够达到的下限。 样品处理过程中对检测对象的稀释倍数。
目前在试剂盒应用中对不同的对象检测限不同： 对于国家规定禁用的检测对象，追求检测限最低 化；而针对国家规定限量的检测对象，如果自身 检测限指标很好则强调低检测限（很多客户都很 重视这一点），如果检测限不如竞争对手，则强 调该试剂盒完全能够满足检测需要。
基本原理
酶联免疫采用抗原与抗体的特异反应将待
测物与酶连接，然后通过酶与底物产生显 色反应，测定的对象可以是抗体也可以是 抗原。
实现定量/半定量检测
检测对象的多少会影响显色反应的程度，
在一定的范围内，他们二者之间的这种关 系符合某种数学规律（二元方程），使用 该二元方程可以同过其中一个互相计算出 另一个对应的数值。在同一块酶标板上， 我们可以通过数个已确知数值的检测对象 和它们的反应结果得到方程，然后通过其 他检测对象的反应结果计算出检测对象的 数值。
境。 操简单：步骤多少。 保护操作人员的健康：无有害试剂。
有效期：
运输、保存方式。
完整试剂盒保存时间。 才开后重复多次使用的保存时间。
谢 谢！
百分吸光值（B/B0）
70 60 50 40 30 20 10 0 -1.5 -1 -0.5 0 0.5 1 1.5 标准浓度对数值 2 2.5 3 3.5
酶联免疫的分类：
（一）双抗体夹心法
（二）间接法 （三）竞争法 （四）双位点一步法 （五）捕获法测IgM抗体 （六）应用亲和素和生物素的ELISA