TB IGRA酶联免疫分析试剂盒说明书
人胰岛素定量检测试剂盒(酶联免疫法)说明书V9.0
终止溶液
1瓶
7mL
准备好使用
0.5M 硫酸
酶结合物 1×溶液的制备
按下表，用酶结合物缓冲液稀释酶结合物 11×（1+10），来制备所需体积的酶结合物 1×溶 液。当为整个平板制备酶结合物 1×溶液时，将所有酶结合物缓冲液倒入酶结合物 11×瓶中， 轻柔混合。
条数量 12 条 8条 4条
酶结合物 11× 1瓶 700 μL 350 μL
5 mL
准备好使用
酶结合物 11×
1瓶
过氧化物酶结合的鼠抗 apoB 单克隆抗体
酶结合物缓冲液
1瓶
蓝色
1.2mL 12mL
制备，见下文 准备好使用
洗涤缓冲液 21×
1瓶
稀释后储存：2-8℃，8 周
底物 TMB
1瓶
无色溶液
注意！光敏！
50 mL 22mL
制备 1×的洗涤缓冲 液需加入 1000mL 重 蒸水稀释 准备好使用
按下表，用酶结合物缓冲液稀释酶结合物 11×（1+10），来制备所需体积的酶结合物 1×溶 液。轻柔混合，1 天内使用。
板数量
酶结合物 11×
酶结合物缓冲液
10 个平板 5 个平板 3 个平板 2 个平板 1 个平板
1瓶 5.0 mL 3.0 mL 2.0 mL 1.0 mL
1瓶 50 mL 30 mL 20 mL 10 mL
酶结合物缓冲液
1瓶
蓝色
12mL 120mL
制备，见下文 准备好使用
洗涤缓冲液 21×
2瓶
200 mL
制备 1×的洗涤缓冲 液需加入 1000mL 重
稀释后储存：2-8℃，8 周
蒸水稀释
底物 TMB
绵羊免疫球蛋白A(IgA)酶联免疫分析
绵羊免疫球蛋白A(IgA)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T0.8μg/ ml -24μg/ ml使用目的：本试剂盒用于测定绵羊血清、血浆及相关液体样本中免疫球蛋白A(IgA)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中绵羊免疫球蛋白A(IgA)水平。
用纯化的绵羊免疫球蛋白A(IgA)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入免疫球蛋白A(IgA)，再与HRP标记的免疫球蛋白A(IgA)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的免疫球蛋白A(IgA)呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中绵羊免疫球蛋白A(IgA)浓度。
试剂盒组成标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
人B淋巴细胞表面抗原酶联免疫分析
人B淋巴细胞表面抗原酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T5 pg/ml - 125pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中B淋巴细胞表面抗原含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人B淋巴细胞表面抗原水平。
用纯化的人B淋巴细胞表面抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入B淋巴细胞表面抗原，再与HRP标记的B淋巴细胞表面抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的B淋巴细胞表面抗原呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人B淋巴细胞表面抗原浓度。
标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
宁波天润狂犬病毒抗体检测试剂盒说明书
人狂犬病病毒IgG抗体测定试剂盒（酶联免疫法）说明书1、产品名称通用名：人狂犬病病毒IgG抗体测定试剂盒（酶联免疫法）2、包装规格 96人/份3、预期用途：用于体外定性测定人血清中狂犬病毒IgG抗体。
人狂犬病疫苗免疫效果的临床检测中，应于暴露前0、7、21天全程接种人狂犬病疫苗14天后采血进行狂犬病病毒IgG抗体检测；或于暴露后0、3、7、14、30天全程接种人狂犬病疫苗14天后采血进行狂犬病病毒IgG抗体检测。
人狂犬病疫苗免疫后血清IgG抗体测定一般采用ELISA法或免疫荧光法。
4、检测原理本试剂盒采用间接ELISA法，以纯化狂犬病毒抗原包被，与抗人IgG单克隆抗体酶结合物等试剂组成，用于检测狂犬病疫苗免疫后人血清或血浆中IgG 抗体的IgG抗体。
5、主要组成成分抗原包被板：狂犬病毒抗原包被板 1块酶标工作液：小鼠抗人IgG单克隆抗体辣根过氧化物酶结合物 1瓶样品稀释液：小牛血清、吐温-20、PBS 1瓶阳性对照液：1:20稀释的狂犬病毒抗体阳性人血清 1瓶阴性对照液：1:20稀释的狂犬病毒抗体阴性人血清 1瓶20倍洗涤液：20倍浓缩的PBS-吐温-20 1瓶底物A: 过氧化氢 1瓶底物B： TMB 1瓶终止液：硫酸 1瓶6、储存条件及效期2-8℃避光保存，自检定合格之日起，有效期为2个月7、适用仪器洗板机：≥300ul酶标仪：波长应包含450nm和630nm恒温箱：37±0.5℃移液器：5-100ul8、样本要求试验样本应为新鲜采集，无污染、无溶血、无血脂的血清。
如不能及时检测，样本密闭置2-8℃保存，尽量不超过1周，以免影响检测结果；如冷冻长期保存，切勿反复冻融，冻融次数不超过2次。
9、检验方法9.1每次试验设阴性对照1孔，阳性对照1孔，以样品稀释液设空白1孔，每孔加相应液体100ul，在其余孔中加入样品稀释液，每孔100ul，再加入5ul 待检样品，振荡混匀后贴上封口膜，置37℃温育30分钟。
检测试剂盒(酶联免疫法)说明书
清洗去除非特异抗体。
抗人 IgM 的辣根过氧化物(HRP)结合物加入后在 37℃下孵育 1 小时。此步骤与之前形成的抗原抗 体复合物结合。
洗去未结合物。
加入 TMB 底物，底物由过氧化物酶水解，减少底 物的液体产生蓝色产物。
加入终止液，蓝色变为黄色并且在由 ELISA 读数 仪在波长为 450nm 上读取吸光度。 吸光度与结合到包被抗原的特异性抗体的水平成
公式计算：
COL=样本吸光度/COV COV:临界值 NC:阴性质控 COL:临界指数 3. 结果解释： 图 1：肺炎衣原体抗体与 450nm 下吸光度之间的关系
吸光度 （450nm） O.D<1.4XC
OV 1.4XCOV≤ O.D≤1.5×
COV
COL
<1.4
1.41.5
结果
阴性 没有检 测 IgM 抗体 临界值 低水 平的 IgM 抗体
1) 阳性质控：吸光度应在 450nm 波长下≥0.8。 2) 阴 性 质 控 ： 阴 性 质 控 的 吸 光 度 平 均 值 在 450nm 波长下为 0.1< NC ≤ 0.4 2. 计算 COV 和 COL 值：
COV=NC×2 NC=在 450nm 波长下检测两个阴性质控吸光度的平均 值
牛结核抗体TBAb酶联免疫分析
牛结核抗体（TB Ab)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T0.3ng/L-8.0ng/L使用目的：本试剂盒用于测定牛血清、血浆及相关液体样本中结核抗体（TB Ab)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中牛结核抗体（TB Ab)水平。
用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入结核抗体（TB Ab)，再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的结核抗体（TB Ab)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中牛结核抗体（TB Ab)浓度。
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
兔子免疫球酶联免疫分析试剂盒使用说明书
兔子免疫球酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T20ng/ml - 600ng/ml使用目的：本试剂盒用于测定兔子血清、血浆及相关液体样本中免疫球G(IgG)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中兔子免疫球G(IgG)。
用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入免疫球G(IgG)，再与 HRP标记的抗原，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。
TMB在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中G(IgG)呈正相关。
用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准的免疫球曲线计算样品中兔子免疫球试剂盒组成G(IgG)浓度。
30倍浓20ml×1瓶6ml×1瓶12孔×8条6ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1/瓶终止液6ml×1瓶2 酶标试剂标准品（1200ng/ml） 0.5ml×1瓶3 酶标包被板4 样品稀释液5 显色剂 A液6 显色剂 B液标准品稀释液1.5ml×1瓶1份10 说明书11 封板膜12 密封袋2张1个兔子免疫球酶联免疫分析试剂盒使用说明书标本要1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因 NaN3抑制辣根过（HRP）活性。
操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
600ng/ml300ng/ml150ng/ml75ng/ml5号标准品4号标准品3号标准品2号标准品1号标准品150µl的原倍标准品加入 150µl标准品稀释液150µl的 5号标准品加入 150µl标准品稀释液150µl的 4号标准品加入 150µl标准品稀释液150µl的 3号标准品加入 150µl标准品稀释液150µl的 2号标准品加入 150µl标准品稀释液37.5ng/ml2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔待测样品孔。
人抗组织转谷氨酰胺酶抗体IgGtTGIgG酶联免疫分析
人抗组织转谷氨酰胺酶抗体IgG（tTG-IgG）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T0.7U/L - 20U/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中抗组织转谷氨酰胺酶抗体IgG（tTG-IgG）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人抗组织转谷氨酰胺酶抗体IgG（tTG-IgG）水平。
用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入抗组织转谷氨酰胺酶抗体IgG（tTG-IgG），再与HRP 标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的抗组织转谷氨酰胺酶抗体IgG（tTG-IgG）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人抗组织转谷氨酰胺酶抗体IgG（tTG-IgG）浓度。
试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品（40U/L）0.5ml×1 瓶3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
20U/L 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液10U/L 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液5U/L 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液2.5U/L 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液1.25U/L 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
人免疫球蛋白酶联免疫分析试剂盒使用方法
人免疫球蛋白酶联免疫分析试剂盒使用方法本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T2.5μg/ml -80μg/ml使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中免疫球蛋白含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人免疫球蛋白水平。
用纯化的抗-IgG抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入免疫球蛋白，再与HRP标记的羊抗人抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的免疫球蛋白呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人免疫球蛋白浓度。
标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
人B淋巴细胞表面抗原酶联免疫分析
人B淋巴细胞表面抗原酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 96T5 pg/ml - 125pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中B淋巴细胞表面抗原含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人B淋巴细胞表面抗原水平。
用纯化的人B淋巴细胞表面抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入B淋巴细胞表面抗原，再与HRP标记的B淋巴细胞表面抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的B淋巴细胞表面抗原呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人B淋巴细胞表面抗原浓度。
标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
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人结核分枝杆菌Y-干扰素（TB-IGRA）酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T
10pg/ml-240pg/ml
使用目的：
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中结核分枝杆菌Y-干扰素（TB-IGRA）含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人结核分枝杆菌Y-干扰素（TB-IGRA）水平。
用纯化的人结核分枝杆菌Y-干扰素（TB-IGRA）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入结核分枝杆菌Y-干扰素（TB-IGRA），再与HRP 标记的结核分枝杆菌Y-干扰素（TB-IGRA）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的结核分枝杆菌Y-干扰素（TB-IGRA）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人结核分枝杆菌Y-干扰素（TB-IGRA）浓度。
试剂盒组成
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管
中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、
标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃
去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃
避光显色15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在
加终止液后15分钟以内进行。
操作程序总结：
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品
浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月。