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蛋白质芯片在临床诊断中的研究进展
１ 病毒性疾病的诊断 ． ２
由于 目前 尚无 杀 灭病 毒 的特 效 药 ， 病毒 性 疾 各
病 多 以预 防 为主 ， 已感 染个 体 的早 期 确 诊具 有 重 而 要 意义 。李禾 等将 血清 中艾 滋病 毒 、 型肝 炎病毒 、 丙
内 、 的研 究 员 都 对 此 做 了大 量 的研 究 ， 其 在疾 外 尤 病诊 断 与监测 方 面 。 １ 癌 症 的诊 断 ． １
巨细 胞病 毒 、 纯疱 疹 Ｉ 、 单 型 Ⅱ型 等 五种病 毒 的抗原
作者简 介 ： 夏媛媛 （ ９ ７ ）２ ０ １ ８ ～ ，０ ９级硕 士研 究生 。
喷 印 到 活 化 的醛 基 化 玻 片表 面 ，制 成 蛋 白质微 列 阵 ， 测 相 应 的 特 异 性 抗 体 ， 为其 特 异 性 、 敏 检 认 灵
诊 断 的重要 手段 之 一 。有 人将 它 与质 谱技 术 （ Ｅ — Ｓ Ｌ
Ｄ — Ｏ — ） 合 应 用 ， 过 比较 病 变 组 织 与 非 病 ＩＴ Ｆ ＭＳ联 通
变 组织 的蛋 白质 表 达谱 ， 寻找 肿瘤 标 志 物 。迄 今 为 止， 人们 已经 利 用 此 技 术对 肺 癌 、 胃癌 、 癌 、 列 肠 前 腺 癌 、 腺癌 等 常见 肿 瘤 的蛋 白质标 志 物进 行 了筛 胰
素 １ ０ ＋先锋 ４ ； ０ｇ ｇ 在本病 常发地 区 的猪场 ， 猪断奶 仔
前 后每 吨饲料 加 入 ８ ％泰妙霉 素 １０ ＋ ５ ０ ０ ｇ １ ％金霉素
２ ０ｇ ５ ０ ＋阿莫西林 ２ ０ ， 良好 作用 。 ５ ｇ有 ２ １ 年 第 ４期 （ ７ ０１ ≥ｌ
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大 的推动 作 用 ， 而本 文 主要 就 其 在 临床 诊 断方 面 的
蛋白芯片技术的研究现状PPT课件
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4、采用接近生物系统内部环境的完全液相反应体系，稳 定性好。液相环境更有利于保持蛋白质的天然构象，不仅 有利于探针和被检测物的反应，也更能保证反应的特异性 和稳定性。
5、操作简便，不需洗涤，耗时短。常规ELISA或固相芯片 技术，每一步反应之后都需充分洗涤以去除非特异结合成 分，耗时且易造成污染。而液相芯片技术可以避免这些过 程和弊端。
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2、通量大，可同时检测多种目标物，所需成本较低，减 少人力消耗，可对同一样品中多达100种分子同时进行分 析。液相芯片系统采用96孔板为反应容器，在35-60min内 ，可对96个不同的样品进行检测，所需样品用量比常规方 法少。
3、可进行多元化分析，灵活性好，可适用于各种蛋白质 分析，应用广泛。通过对微球表面的修饰，可固定各种抗 体或受体分子，从而满足不同检测和功能的研究需要。
14蛋白芯片的应用研究holt等利用蛋白芯片技术筛选能够相互结合的特异抗体抗原成分他们利用12种表达较强但尚未接触任何抗原的抗体片段筛选含有27648种人胎脑蛋白的蛋白芯片从中找出了4组高度特异性的抗原蛋白抗体复合物其中有3种抗体结合的蛋白质功能未明但是由于表达水平都较低说明这种抗原抗体的结合技术是一种具有较高特异性和敏感性的筛选方法可以用于高通量筛选分离各种不同的抗体成分或检测基因的表达和蛋白分子间的相互作用这将有助于对某些疾病包括肿瘤的发病分子机理的研究以及协助寻找疾病诊断和治疗的靶分子
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高通量分析平台蛋白芯片技术的建立将为蛋白质功能及其 相关的研究提供快速、高信息量和更为直接的研究方法， 与其他的分子生物学分析方法相比，蛋白芯片技术具有快 速、平行的优越性。该方法的建立和应用将有助于人类揭 示疾病发生的分子机制及寻找更为合理有效的治疗手段和 途径。
《蛋白质芯片技术》课件
蛋白质芯片技术将蛋白质的检测和分析提升到了一个全新的水平。本课件将 介绍蛋白质芯片技术的定义、背景和应用领域。
蛋白质芯片技术的原理和工作原理
1
蛋白质捕捉
使用特定的探针将目标蛋白质捕捉在
蛋白质检测
2
芯片表面。
通过不同的检测方法（如质谱法和光
学传感器），定量和鉴定捕获的蛋白
质。
3
数据分析
蛋白质芯片技术的未来发展方向
1
高通量筛选
加速药物筛选过程，发现更多具有潜力的药物靶点。
2
疾病标志物发现
通过广泛的蛋白质组学分析，发现新的疾病标志物，促进早期诊断和治疗。
3
个性化医疗
结合基因组学和蛋白质组学，实现个体化的医疗方案。
总结和展望
蛋白质芯片技术的发展为蛋白质研究和生物医学领域带来了巨大的机遇和挑 战。我们期待在未来看到更多创新和突破。
高通量、高灵敏度、精准定量、并行分析多种蛋白质。
2 挑战
技术复杂性、芯片设计和制备的困难、数据分析的挑战。
蛋白质芯片技术的最新研究进展
单细胞蛋白质芯片
实现对单个细胞中蛋白质 的高通量检测。
多组学整合
将蛋白质芯片技术与基因 组学、转录组学等多个组 学领域进行整合。
微流控芯片
通过微型流体控制，在芯 片上实现更复杂的蛋白质 反应和分析。
对蛋白质芯片产生的海量数据进行分 析和解读，从中发现关键的生物学信 息。
蛋白质芯片技术的应用领域
癌症研究
药物研发
通过分析肿瘤标记物等蛋白质， 提供个体化的治疗方案。
加速药物靶点的鉴定和药效评 估，提高药物研发效率。
Байду номын сангаас
蛋白芯片研究进展
作 、 测及应用 。并 展望 了其 发展前景 。 检
人 类 基 因组计 划 （ Ｐ 的提前 完 成是 科 学 发 展史 上 的重 要 里程 碑 ， 标 志着 人 类 对 自身 ＨＧ ） 它 的认 识 上 升 到 了一个 新 的 层 次 。但是 在 很 多方 面 它 只是 真 正意 义 上 的 医学挑 战的 开始 。我们 需 要 了解 的是 身 体 里在 起 作用 的数 百万 种 蛋 白质 ， 而基 因 只是 一种 编 码 ， 由它指 导 细胞 合 成 蛋
行研究 。例如 ， 为了解体系中有哪些 蛋 白质 能与蛋 白质 ｘ结合 ， 则将制成 的蛋 白功能芯片 与 荧 光标 记 的 蛋 白质 ｘ温 育 ， 经荧 光 显 微 镜 扫 描 检 测 可 知 ， 片上 的亮 点 即 为 蛋 白质 ｘ 的潜 在 芯 结合物。（ ）蛋白检测芯片 ， ２ 这种芯片不是将天然蛋 白质本身点加在基 片上 ， 而是将具有高度 亲和特异性 的探针分子 （ 例如单克隆抗 体） 固定在基片上 ， 以识别复杂生物样品溶 液（ 用 例如 细胞提取物） 中的 目标多肽 ， 当放射性 同位 素或荧 光标记 的靶分子 与芯片上的探针 分子结合 后， 通过激光共聚焦扫描或 电荷耦合检测装 置（ Ｃ 对信号的强度进行检 测 ， 而判断样品 Ｃ Ｄ） 从 中靶分子的数量 。这种类型作为一种分析工具有些类似于 Ｄ Ａ芯片 ， Ｎ 可以高通量地监测生物 样 品 中 的蛋 白质 水 平 ， 于蛋 白质谱 研究 。 用
泰 石志红 ：北京大学化学 与分 子工程学 院博 士研 究生 。 张新 祥 ：北京大学化学 与分 子工程学 院教授 ， 嘹 博士生导师 。 糊嘹 常文保 ：北京大学化学 与分 子工程学院教授 ， 士生导师 。 博
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在分 析 速 度 、 检测 通 量 、 敏度 和 灵 活性 等 方 面还 很 不 理 想 。尤 其 在 样 品处 理 过 程 中 ， 灵 由于 蛋
蛋白质芯片技术研究及应用
蛋白质芯片技术研究及应用近年来，蛋白质芯片技术在生命科学领域研究中扮演越来越重要的角色。
蛋白质是组成细胞的重要基础，存在于细胞的各个组分中，包括核糖体、线粒体、内质网等。
蛋白质芯片技术能够对蛋白质进行高通量分析和筛选，能够为研究蛋白质结构和功能提供重要的支持和帮助。
本文将介绍蛋白质芯片技术的基本原理、发展历程、应用领域以及未来的发展趋势。
一、蛋白质芯片技术的基本原理蛋白质芯片技术基于DNA芯片技术的基础上，采用微阵列技术制备出数千到数百万种蛋白质的阵列芯片，通过特异性结合的方法检测样品中的蛋白质分子。
其基本原理类似于ELISA法，但在ELISA法中，检测蛋白质需要用到特异性的抗体，而蛋白质芯片技术则是利用特异性的配体（如抗体、酶、选择性结合因子等）对蛋白质进行特异性识别和检测。
二、蛋白质芯片技术的发展历程蛋白质芯片技术起源于上世纪90年代，最早由美国的Affymax公司和Genentech公司研发而来。
最初只是在微阵列技术基础上对蛋白质进行筛选，后来随着科技的发展，蛋白质芯片技术发展成为一种高通量、能够同时检测多种蛋白质的技术。
目前，蛋白质芯片技术已经成为快速筛查疾病诊断、病原体检测和药物筛选等领域中的重要手段。
三、蛋白质芯片技术的应用领域3.1 疾病诊断蛋白质芯片技术在医学领域中的应用越来越广泛。
对于一些蛋白质变化与疾病相关的情况下，利用蛋白质芯片技术进行快速定量检测、疾病诊断和疾病预测，具有极高的灵敏度和特异性。
3.2 药物筛选蛋白质芯片技术可以应用在药物筛选和新药研发中。
在药物筛选中，比较不同药物分子的相互作用性能，选取作用效果最好、最适合治疗特定疾病的药物。
同时，蛋白质芯片技术也能够对药物通量、结合常数以及与靶标的特异性等进行快速检测。
3.3 生命科学在生命科学领域中，蛋白质芯片技术也被广泛应用。
例如，在分离和鉴定蛋白质互作关系、研究蛋白质结构与功能、为体外抗体生产提供高通量筛选手段等方面发挥着重要作用。
蛋白质芯片的研究进展及其应用综述
蛋白质芯片的研究发展及其应用班级：检验1009班学号：033111009011 姓名：崔江培摘要:蛋白质芯片技术是蛋白质组学【6】研究的主要焦点之一。
它是一种高通量快速地表达有功能的蛋白质技术。
蛋白质芯片与传统的研究方法相比是一种高通量和大规模的研究方法，具有灵敏度高，准确性好的优点【3】。
可以实现成千上万个蛋白质样品高通量平行分析。
本文详细综述了蛋白质芯片技术发展简史，蛋白质芯片制备与分析过程的研究进展，介绍了蛋白质分类，并探讨了蛋白质芯片的应用。
关键字:蛋白质芯片，蛋白质组学，功能蛋白质Protein chip technology development and application of the brief Abstract: the protein chip technology is proteomics research is one of the main focus. It is a high throughput fast express functional protein technology. Protein chip compared with conventional method, is a kind of high throughput and the scale of the research method, has a high sensitivity, accuracy, good advantage. Can realize thousands of protein sample high-throughput parallel analysis. This paper reviewed the development of protein chip technology brief, protein chip preparation and research progress of analysis, this paper introduces the classification of protein, and probes into the application of protein chip.Key words: protein chip, proteomics, functional protein随着人类基因组计划(human genomic project,HGP)的完成【10】，人们将研究焦点转向生命活动的执行者，表现性状的体现者----蛋白质的研究【8】。
蛋白质芯片
蛋白质芯片技术的发展摘要：蛋白质芯片是高密度的蛋白质阵列，是蛋白质阵列的发展。
在几平方厘米的面积中可以包含几万个不同的蛋白质点，可用于大规模的分析。
蛋白质芯片是一种高通量的蛋白功能分析技术，可用于蛋白质表达谱分析，研究蛋白质与蛋白质的相互作用，甚至DNA－蛋白质、RNA－蛋白质的相互作用，筛选药物作用的蛋白靶点。
关键词：蛋白质芯片、蛋白质阵列、蛋白质功能芯片、固定域、疾病诊断、基因表达的筛选、特异性抗原抗体的检测、蛋白质的筛选及功能研究、生化反应的检测。
制备以及析过程：一,载体的选择及抗体或抗原的固化；二，载体与化学表面处理；三、捕获分子；四，微阵列设计与制备；五，抗原或者抗体的标记；六，蛋白质芯片检测方法。
应用用于基因表达的筛选AngelikaL等人从人胎儿脑的cDNA文库中选出92个克隆的粗提物制成蛋白质芯片，用特异性的抗体对其也进行检测，结果的准确率在87％以上，而用传统的原位滤膜技术准确率只达到63％。
与原位滤膜相比，用蛋白质芯片技术在同样面积上可容纳更多的克隆，灵敏度可达到pg级。
用于特异性抗原抗体的检测在CavinM等人的实验中，蛋白质芯片上的抗原抗体反应体现出很好的特异性，在一块蛋白质芯片上10800个点中，根据抗原抗体的特异性结合检测到唯一的1个阳性位点。
Cavin M．指出，这种特异性的抗原抗体反应一旦确立，就可以利用这项技术来度量整个细胞或组织中的蛋白质的丰富程度和修饰程度。
其次利用蛋白质芯片技术，根据与某一蛋白质的多种组分亲和的特征，筛选某一抗原的未知抗体，将常规的免疫分析微缩到芯片上进行，使免疫检测更加方便快捷。
用于蛋白质的筛选及功能研究常规筛选蛋白质主要是在基因水平上进行，基因水平的筛选虽已被运用到任意的cDNA文库，但这种文库多以噬菌体为载体，：通过噬菌斑转印技术(plaque life procedure)在一张膜上表达蛋白质。
但由于许多蛋白质不是全长基因编码，而且真核基因在细菌中往往不能产生正确折叠的蛋白质，况且噬菌斑转移不能缩小到毫米范围进行，所以这种方法的局限性，靠蛋白质芯片弥补。
蛋白质芯片研究进展
蛋白质芯片研究进展蛋白质芯片概述：蛋白质芯片的定义：蛋白质芯片, 又称蛋白质阵列或蛋白质微阵列，是指以蛋白质分子作为配基,将其有序地固定在固相载体的表面形成微阵列；用标记了荧光的蛋白质或其他它分子与之作用，洗去未结合的成分，经荧光扫描等检测方式测定芯片上各点的荧光强度，来分析蛋白之间或蛋白与其它分子之间的相互作用关系。
Telechem International Inc ArrayIt生物芯片的设想最早起始于80年代中期, 90年代美国Affymetrix公司实现了DNA探针分子的高密度集成,这是一项融微电子、微机械、化学、物理、计算机技术等于一体,是生物学技术与其它学科相互交叉和渗透的产物.生物芯片(B iochip)是指通过微电子、微加工技术在芯片表面构建的微型生物化学分析系统,以实现对细胞、DNA、蛋白质、组织、糖类及其他生物组分进行快速、敏感、高效的处理和分析DNA芯片与蛋白芯片最大的区别是靶分子和探针分子的结构差异相对于DNA 芯片, 蛋白质芯片技术面临更多困难。
第一, 相对于DNA 的碱基配对杂交机制, 蛋白质之间的相互作用呈现出更强的变化性。
而且, 蛋白质的活性以及相互作用的性质可能需要其它蛋白质的作用和翻译后修饰。
第二, 相对于PCR 技术这样可以大量扩增DNA 的技术, 尚未有可以大量扩增蛋白质的成熟技术。
第三, 蛋白质的表达和纯化工作十分艰巨, 而且经常不能保持蛋白质的完整功能。
最后, 许多蛋白质很不稳定, 给阵列制作本身带来很大的困难。
多数蛋白芯片通过接触印记合成，大于30 000 点的高密度阵列可以通过已有的DNA 的点样设备来实点间距为4. 5mm,点的直径250um,可以检测250nmol或l0Pg的待测蛋白质研究蛋白质芯片的意义1、蛋白质是基因表达的最终产物, 接近生命活动的物质层面；2、探针蛋白特异性高、亲和力强, 可简化样品前处理，甚至可直接利用生物材料(血样、尿样、细胞及组织等)进行检测；3、适合高通量筛选与靶蛋白作用的化合物；4、有助于了解药物或毒物与其效应相关蛋白质的相互作用。
蛋白芯片技术研究进展及其应用
蛋白芯片技术研究进展及其应用摘要蛋白芯片技术作为进行生命科学研究的一种新的技术平台,日益受到人们的关注。
目前这一技术已经应用于基因表达分析、单核苷酸多态性分析、基因突变检测、抗体筛选及临床诊断等许多领域。
生物芯片(biochip) 是近几年生命科学研究领域中崭露头角的一项新技术,它是指在固相基质上集成各种可以作为受体的生物信息,包括寡核苷酸、蛋白质/ 酶、抗原/ 抗体、细胞等,利用受体与连接物间的反应(包括核酸杂交反应、抗原/ 抗体亲和识别反应等)来进行生物学的检测。
它将生命科学研究中所涉及的许多分析步骤,综合运用微电子技术、微机械技术、计算机技术、分子生物学技术、半导体技术、共聚焦激光扫描技术、化学荧光标记技术,使样品制备、化学反应和分析检测等连续化、集成化、微型化、自动化。
生物芯片上可以集成的成千上万的密集排列的分子探针,能够在同一时间内分析大量的样品。
根据生物芯片固定的生物分子及材料不同可分为基因芯片、蛋白质芯片、芯片实验室、细胞芯片及组织芯片。
随着蛋白质组学概念的提出及其研究的进行,人们需要一种新的技术来进行大规模的蛋白质分析,蛋白质芯片技术于是应运而生。
蛋白质芯片是一种新型的生物芯片,是由固定于不同种类支持介质上的抗原或抗体微阵列组成,阵列中固定分子的位置及组成是以知的,用标记(荧光物质、酶或化学发光物质等标记) 的抗体或抗原与芯片上的探针进行反应,然后通过特定的扫描装置进行检测,结果由计算机分析处理。
1 蛋白质芯片的制备及分析过程1.1 载体的选择及抗体或抗原的固化用于连接、吸附或包埋各种生物分子使其以水不溶状态行使功能的固相材料统称为载体。
制作蛋白芯片的载体材料必须符合下列要求: ①载体表面必须有可以进行化学反应的活性基因,以便于蛋白分子进行偶联; ②使单位载体上结合的蛋白分子达到最佳容量; ③载体应当是惰性的并且有足够的稳定性,包括物理、化学和机械的稳定性。
④载体具有良好的生物兼容性。
蛋白质芯片技术在自身免疫性疾病检测中的应用研究进展
Ｍａ ２ ２ ｖ ０１
科 技 通 报
ＢＵＬＬＥＴＩ ０Ｆቤተ መጻሕፍቲ ባይዱＳＣＩ Ｎ ＥＮＣＥ ＡＮＤ ＴＥＣＨＮ０Ｌ０ＧＹ
第２ ８卷 第 ５期
２ ２年 ５月 ０１
蛋 白质 芯 片 技 术在 自身 免 疫 性 疾病 检 测 中的
应 用 研 究 进 展
陈 敏 ， 方 序
Ｔ ｅｐ ｅ ｅ ｃ ｆａ ｔ ａ ｔ ｏ ｉｓ ｉ ａ ｈ ｌ ｒ ｄ ｓｉ ｃｉｅ ａ ｄ ｋ ｙ ｃ ａ ａ ｔｒｓ ｃ ｏ ｕ ｏｍｍｕ ｅ ｄ ｓ ａ ｅ ． ｅ ｒ ｔ ｉ ｈ ｐ ｈ ｒ ｓ ｎ ｅ ｏ ｕ ｏ ｎ ｉ ｄ ｅ ｓ ａｌ ｋ， ｉ ｎ ｔ ｎ ｅ ｈ ｒ ｃｅ ｉｔ ｆ ｔｉ ｂ ｍａ ｔ ｖ ｉ ａ ｎ ｉｅ ｓ ｓ Ｎ ｗ ｐ ｏ ｅｎ ｃ ｉ ｔｃ ｎ ｌ ｇ ｓ ａ ｎ ｗ ｕ ｉ ａ ｙ ｄ ａ ｎ ｓｉ ｔ ｏ ｏ ａ ｌｗ ｔ ｅ ｓｍｕ ｔｎ ｏ ｓ ｉ ｅ ｔ ｉ ａｉｎ ｍｅ ｓ ｒ ｍｅ ｔ ｏ ｕ ｏ ｎ ｉ ｏ ｉ ｓ ｅ ｈ ｏ ｏ ｉ ｅ ａ ｘｌ ｒ ｉｇ ｏ ｔ ｍｅｈ ｄ ｔ ｌ ｈ ｉ ｌ ｅ ｕ ｄ ｎ ｉ ｃ ｔ ／ ａ ｕ ｅ ｎ ｆ ａ ｔ ａ ｔ ｄ ｅ ｙ ｉ ｃ ｏ ａ ｆ ｏ ｂ ｗｉ ｒ ａ ｐ ｌ ａ ｉｎ ｏ ｉｃ ｖ ｒ ｎ ｕ ｎｉ ｔ ｅ ａ ａｙ ｉ．Ｐ ｏｅｎ ｃ ｉ ｅ ｈ ｏ ｏ ｙ ｉ ａ ｄ ｖ ｌｐ ｄ ｋｎ ｆ ｐ ｓ— ｔ ｂ ｏ ｄ ａ ｐ ｉ ｔ ｓ ｆｒ ｄ ｓ ｏ ｅ ａ ｄ ｑ ａ ｔ ａ ｉ ｎ ｌｓｓ ｒ ｔｉ ｈ ｐ ｔｃ ｎ ｌ ｇ ｓ ｅ ｅｏ ｅ ｉ ｄ ｏ ｏ ｔ ｈ ｃ ｏ ｙ ｔ ｖ ｇ ｎ ｍｅ ｒ ｓ ａ ｃ ｅ ｈ ｏｏ ｙ，ｗｈ ｃ ｓ ａ ｐ ｗｅｆ ｌ ａ ｄ ｃ ｎ ｅ ｉｎ ｅ ｈ ｉ ｕ ｉ ｉｈ ｔ ｒ ｕ ｈ ｕ ，ｅ ｓ ｉｉ ｎ ｐ ｃ — ｅ ｏ ｅ ｅ ｒ ｈ ｔｃ ｎ ｌ ｇ ｉ ｈ ｉ ｏ ｒ ｎ ｏ ｖ ｎ ｅ ｔｔｃ ｎ ｑ ｅ ｗ ｔ ｈ ｇ ｈ ｏ ｇ ｐ ｔ ｓ ｎ ｉ ｖ ｔ ａ ｄ ｓ ｅ ｉ ｕ ｈ ｔ ｙ ｉ ｔ ｉ ｒ ｔｏ ｃ ａ ｐ ｉ ｔ ｓ ｈ ｅ ｅ ｅｏ ｍｅ ｔ ｎ ａ ｐ ｉ ｔ ｓ ｏ ｒ ｔｉ ｈ ｐ ｆｒ ａ ｔ ｉ ｆ ｉ ｎ ｐ ｏｅ ｍｉ ｐ ｌ ａ ｉｎ ．Ｔ ｅ ｎ ｗ ｄ ｖ ｌｐ ｎ ｓ ｉ ｐ ｌ ａ ｉｎ ｆｐ ｏｅ ｎ ｃ ｉ ｏ ｕ ｏｍｍｕ ｅ ｄ ｓ ａ ｅ ｒ ｅ ｅｙ ｃ ｏ ｃ ｏ ｎ ｉｅ ｓ ｓ ａ ｅ ｒ — ｖｅ ｅ ｎ ｉ ｕｓ ｄｉ ｉ ｐ ｐ ｒ ｉ ｗ ｄ ａ ｄ ｄ ｓ ｓ ｅ ｎ ｔ ｓ ａ ｅ ． ｃ ｈ Ｋｅ ｒ ｓ ｒ ｔ ｉ ｈ ｐ；ａ ｔ ａ ｔ ｏ ｙ；ｃｉ ｉａ ｉｇ ｏ ｔ ｓ ｕ ｏｍｍｕ ｅ ｄ ｓ ａ ｅ ｙ ｗｏ ｄ ：ｐ ｏ ｅｎ ｃ ｉ ｕｏ ｎｉ ｄ ｂ ｌ ｃ ｌｄａ ｎ ｓｉ ；ａ ｔ ｉ ｎ ｃ ｎ ｉｅ ｓ