破伤风梭菌
课件 破伤风梭菌
防治原则（二）
• 2）特异性预防： • ①人工主动免疫：对于儿童、军人和其他易受外伤的人 群，可以接种破伤风类毒素进行人工主动免疫。一般的儿 童可以注射白百破三联疫苗。在婴儿出生后第3个月，第4 个月和第5个月连续免疫三次，等到2岁和7岁时各加强一 次，建立基础免疫。 • ②人工被动免疫：而对于伤口较深或有污染的情况，应该 及时注射破伤风抗毒素（TAT），作为紧急预防手段。但 是在注射抗毒素之前必须要做皮试，因为破伤风抗毒素虽 然是一种抗体，可以抵抗破伤风外毒素的毒性，但是目前 它主要是用破伤风类毒素免疫马，将免疫后的马血清经物 理、化学方法精制而成，对我们机体而言同时又是一种抗 原成分，有时候会引起血清过敏性休克。所以注射破伤风 抗毒素之前一定要先做皮试。皮试阴性的可以直接注射抗 毒素。皮试阳性时，必要情况下脱敏后也要注射抗毒素
致病机理
破伤风痉挛毒素对脑干神经和脊髓前角细胞 有高度亲合力。毒素可由末梢神经沿轴索从神经 纤维的间隙逆行向上，到达脊髓前角，并可上行 到达脑干。 除神经途径外，毒素也可通过淋巴液和血液 到达中枢神经系统。毒素通过重链与脊髓及脑干 组织细胞表面的神经节苷脂结合。毒素进入细胞 后，通过轻链的毒性作用封闭抑制性突触的介质 释放 , 受刺激时伸肌与屈肌同时强烈收缩，肌肉 发生强直性痉挛，当全身痉挛时，病人因为胸部 肌肉发硬或喉痉挛妨碍正常呼吸引起缺氧和致死 性窒息，造成机体死亡。
破伤风的临床诊断主要结合创伤史和 观察特有的体征。微生物学检查对早期诊 断意义不大，一般不做。必要时可取伤口 渗出物或坏死组织涂片染色镜检及厌氧菌 培养，并以培养物滤液做动物试验，以确 定有无毒素产生
防治原则（一）
1. 预防 1）非特异性预防： 及时处理伤口，清创扩创，使用双氧 水清洗伤口，防止厌氧微环境的形成。
破伤风
二、流行病学
1、易感动物： 单蹄兽最易感，其次是猪，牛、羊和犬发病 较少见。幼龄动物较老龄动物更为易感。人的易 感性也很高。 2、传染源： 广泛存在于土壤、淤泥中。 3、传播途径 主要是由于创伤引起，特别是钉伤、断脐、 阉割、鞍伤、带鼻环及大手术等 。
三、临床症状
潜伏期： 一般1-2周，最短1天(幼马、幼驹) ，马属1 周左右，猪1-2周，牛1-4周，最长可达数月。 潜伏期长短与动物种类及创伤口位置有关， 创伤距头部越近，组织创伤口深而小，创伤损伤 严重，则潜伏期短，反之则长。
七、公共卫生
人的破伤风多由创伤感染引起，病初低热不 适、头痛、四肢痛、咽肌痉挛，继而出现张口困 难、牙关紧闭、呈苦笑状，随后颈背、躯干及四 肢肌肉发生阵发性强直痉挛，不能坐起，颈不能 前伸，两手握拳，两足内翻，咀嚼困难，饮水呛 咳，有时可出现便秘和尿闭，严重时呈角弓反张 状态。任何刺激均可引起痉挛发作或加剧。 一旦出现创伤后，应正确处理伤口，防止厌 氧环境形成，并及时注射破伤风抗毒素。
加强护理
将病畜置于光线较暗的厩舍内，避免各种 刺激。不能站立的用吊带吊起。发生褥疮时， 局部涂擦碘酊或龙胆紫，防止继发感染。给予 充足的饮水和易消化的饲料。不能采食者，用 胃管投给流食。
2、预防： 在本病常发地区对易感家畜定期接 种破伤风类毒素，牛马等大动物在阉割 等手术前一个月进行免疫接种。 对创伤深的伤口，做外科处理外，注 射破伤风抗血清。
破伤风杆菌在庖肉培养基上生长浑浊、变黑，菌繁殖体抵抗力不强，一般消毒药均能在 短时间内将其杀死，但芽孢体抵抗力极强，在土 壤中可存活几十年，煮沸经1-3h才能杀死。消毒 药10%漂白粉和10%碘酊10min、5%石炭酸15min、 1%升汞和1%盐酸30min可将其杀死。
我对破伤风梭菌的认识和了解
我对破伤风梭菌的认识和了解破伤风梭菌，又称为破伤风杆菌，是一种革兰氏阳性的芽孢杆菌，长约2-8微米，宽约0.4-0.8微米。
它是引起破伤风的主要病原菌，破伤风是一种危险的传染病，主要通过伤口感染引起。
对于破伤风梭菌的认识和了解，有助于预防和治疗破伤风，保障人们的健康。
破伤风梭菌主要存在于土壤、粪便、灰尘等环境中，对高温和干燥具有较高的耐受性。
当人体皮肤或黏膜受伤时，如果被破伤风梭菌侵入，就有可能导致破伤风的发生。
破伤风梭菌产生的毒素可以导致肌肉痉挛和神经系统受损，严重时甚至危及生命。
因此，及时清洁伤口、避免感染是预防破伤风的关键。
破伤风梭菌的特点主要包括芽孢的形成、产生毒素和对环境的耐受性。
芽孢是破伤风梭菌在恶劣环境下形成的一种生存形式，可以在干燥和缺乏营养的环境中存活很长时间，等待适宜的条件再次生长繁殖。
此外，破伤风梭菌还可以产生破伤风毒素，这是引起破伤风症状的主要原因。
这种毒素可以影响神经系统和肌肉，引起肌肉痉挛和僵硬。
针对破伤风梭菌的特点，预防和治疗破伤风的方法主要包括疫苗接种和抗生素治疗。
破伤风疫苗可以有效预防破伤风的发生，建议每10年接种一次破伤风疫苗来保持免疫力。
对于已经感染破伤风的患者，抗生素治疗可以帮助清除体内的病菌，减轻症状和并发症。
总的来说，破伤风梭菌是一种致命的病原菌，引起破伤风的主要原因。
了解破伤风梭菌的特点和传播途径，可以帮助我们采取有效的预防措施，保护自己和他人的健康。
及时接种破伤风疫苗，保持伤口清洁，避免感染是预防破伤风的关键。
在面对破伤风疾病时，及时就医，接受抗生素治疗也是十分重要的。
通过加强对破伤风梭菌的了解和认识，我们可以更好地预防和控制这种危险的疾病。
破伤风的知识点总结
破伤风的知识点总结1. 病因破伤风梭菌是导致破伤风的主要病原体，它存在于土壤、粪便、灰尘、动物粪便等环境中。
当人体皮肤受伤时，如果未能及时清洁和处理，破伤风梭菌可能通过伤口侵入体内，引发感染。
此外，破伤风梭菌还可通过刀、剃须刀、指甲钳等含有细菌的器械传播给人，因此在使用这些器械前需要做好消毒工作。
2. 症状破伤风的症状通常包括：1) 伤口处出现红肿、疼痛和创面排脓；2) 出现痉挛性肌肉收缩，主要表现为颈部和嘴部肌肉僵硬；3) 出现呼吸困难、吞咽困难；4) 发热、出汗等全身性症状。
3. 诊断破伤风的诊断主要依靠临床表现和病史，医生会根据患者的症状和体征来进行诊断。
此外，医生还可以通过破伤风梭菌培养来确定病原体。
血液检测和肌电图等检查也有助于诊断。
4. 治疗治疗破伤风的方法主要包括：1) 清创：清洁伤口，去除伤口内的异物和脓液，预防感染的扩散；2) 抗生素治疗：针对破伤风梭菌的抗生素治疗是非常重要的，常用的抗生素包括青霉素、红霉素等；3) 疫苗接种：疫苗接种是预防破伤风的最有效方法，一般采用破伤风疫苗，对初次接种者，应按0、1、3和6个月接种四剂，之后每10年应接种一剂。
5. 预防预防破伤风的主要措施包括：1) 注意清洁：伤口发生后应及时清洁，保持伤口干燥，防止细菌感染；2) 及时治疗：如果发现有伤口感染或疑似破伤风感染，应及时就医治疗；3) 疫苗接种：定期接种破伤风疫苗，保持免疫力。
总之，破伤风是一种严重的传染病，可能给患者带来严重的后果，因此在生活中要注意预防和及时治疗。
希望本文能对大家有所帮助，更好地了解和预防破伤风。
破伤风的首要死因及病理过程
破伤风的首要死因及病理过程
破伤风病人常见的死因是:窒息
破伤风是由破伤风梭菌（一种很厉害的细菌）感染导致的。
破伤风梭菌是厌氧菌，空气中氧气含量充足，对它来说没有适宜的环境，氧气对它有很强的杀伤最用，所以被风吹了是不可能患破伤风的。
另外，只是破了点皮，创口不深，创口面能充分的与空气接触，也就是能充分的接触到氧气，也不适于破伤风梭菌生长，这种伤口一般连破伤风针都可以不注射。
破伤风梭菌在外界环境中一般存在于氧气不充足的土壤中，如果你的创口很深，并感染了破伤风梭菌，还进行包扎，从而使创口缺氧，给破伤风梭菌提供了适宜的生长环境，大量复制后侵入血液，导致破伤风梭菌菌血症，才会发病。
破伤风症发作后现有的医疗条件是没有有效的治疗方案，属于彻底的绝症，一般发病七日之内人的生命就会结束。
“铁锈里的隐藏杀手”——破伤风梭菌
当你在玩耍或工作时不小心伤到手指，尤其是被尖锐的、生锈的物体所伤后，大多数人可能只是找个纱布包扎一下，很少有人会想到，这看似不起眼的伤口可能会成为一种致命病菌的入口，这种病菌就是破伤风梭菌。
破伤风梭菌的潜在威胁常常会被人们忽视，然而，当它找到合适的入侵机会，带来的后果可能是致命的。
破伤风梭菌的生物学性状破伤风梭菌的菌体细长，长4~8微米，宽0.3~0.5微米，有周鞭毛，能运动。
此外，破伤风梭菌能形成休眠体———芽孢，芽孢呈圆形，位于菌体顶端，直径比菌体宽大，似鼓槌状。
破伤风梭菌的致病性破伤风梭菌虽然尺寸不到10微米，但可以引起一种严重的感染性疾病———破伤风。
破伤风梭菌常通过伤口进入人体内，伤口的厌氧环境是破伤风梭菌感染的重要条件。
破伤风梭菌致病的原因是能产生外毒素———破伤风痉挛毒素或称神经毒素。
这种毒素可以导致严重的神经系统损伤，表现为肌肉僵硬和痉挛，甚至可以导致死亡。
破伤风梭菌的特殊之处在于它的芽孢抵抗力非常强大，在土壤、灰尘和锈蚀的金属表面可长期存在。
这也是为什么我们称其为“铁锈里的隐藏杀手”。
破伤风梭菌的存在通常是不易察觉的，只有当细菌进入人体并繁殖时才可能引发感染。
破伤风梭菌的实验室诊断细菌培养和鉴定破伤风梭菌的培养需要特定的厌氧环境和培养基。
首先，从疑似感染的伤口或组织中取样，将样品置于适当的培养环境中。
经过一段时间的培养后，菌落开始形成。
鉴定破伤风梭菌需要利用其特殊的形态特征和一系列的生化试验。
这些试验包括但不限于：对特定糖的发酵反应、酶的产生以及对某些化学物质的反应。
毒素检测虽然破伤风梭菌的存在是导致破伤风的原因，但真正导致疾病的是它所产生的毒素。
因此，毒素检测是至关重要的。
现有的技术如酶联免疫吸附试验可以检测血清中的毒素。
分子检测聚合酶链式反应（PCR）技术是一种分子生物学技术，用于扩增和检测DNA片段。
对于破伤风梭菌，PCR可以针对其特定的基因进行检测，从而在很短的时间内准确地确认其存在。
我对破伤风梭菌的认识和了解
破伤风梭菌的危害与预防措施破伤风梭菌是一种常见的致病菌，如果不加以预防和治疗，会给人们的健康带来极大的威胁。
破伤风梭菌是一种革兰氏阳性芽孢杆菌，主要引起破伤风。
这种疾病在全球范围内都有发生，常见于不洁卫生的环境中，如乡村地区和贫困地区。
破伤风梭菌入侵人体后会产生强烈的毒素，导致肌肉痉挛、呼吸困难、心律不齐等症状，严重时可导致死亡。
为了避免感染破伤风梭菌，我们可以采取以下预防措施：
1.保持个人卫生。
坚持勤洗手、勤洗澡、勤剪指甲等个人卫生习惯，可有效减少细菌滋生的机会。
2.注重环境卫生。
经常清洁家庭和工作场所，注意杀菌消毒，可避免破伤风梭菌在环境中的传播。
3.接种疫苗。
接种破伤风类毒素疫苗可大大降低感染概率，尤其是在创伤、手术等高风险情况下，疫苗接种更是必不可少。
总之，预防破伤风梭菌感染需要从个人卫生和环境卫生两方面入手，同时加强疫苗接种是最有效的预防措施之一。
只有做好充分的预防工作，才能保障我们的身体健康。
破伤风梭菌的危害
破伤风梭菌的危害破伤风梭菌一般都是在人和动物的肠道中出现，破伤风梭菌还可以直接造成破伤风疾病的出现，而且破伤风梭菌具有很强的生存能力，根据调查发生它不仅可以在土壤中进行长期的存活，还具有很好的耐煮沸能力，可以在煮沸的水中坚持四十多分钟，下面让我们来详细的了解一下破伤风梭菌吧?第一，破伤风梭菌(clostridium tetani)是引导起破伤风的病原菌,大量存在于人和动物肠道中,由粪便污染土壤,经伤口感染引起疾病。
第二，破伤风梭菌的条件。
伤口窄而深,有泥土或异物污染;伤口局部坏死组织多,局部供血不足,造成局部缺血、缺氧的微环境;同时伴有需氧菌和兼性厌氧菌的混合感染。
总结为,有伤口,有病原菌,有厌氧条件。
细菌只在局部繁殖释放的破伤风痉挛毒素进入血流到达脊髓前角运动细胞,封闭了抑制性神经纤维释放抑制性神经介质,导致肌肉的强直性收缩,出现破伤风特有的苦笑面容和角弓反张等症状体征。
破伤风梭菌的治疗方法，抗毒素的治疗:破伤风抗毒素(TAT)能中和处于被吸收过程中的毒素,为保证疗效,治疗时必须给予大剂量的抗毒素。
入院当日静脉滴注5万U破伤风抗毒素,此后每日静脉滴注1万U,总量可用到20万U。
患者要及时的补充营养、水及电解质:对营养与水、电解质平衡必须注意。
尤其当牙关紧闭和咽部痉挛常使进食发生困难时,需要用流质饮食进行鼻饲,或给予静脉高营养。
发病时间短,症状越严重,病人的危险性也就越大。
起初先有乏力、头晕、头痛、烦躁不安、打呵欠等前驱症状。
接着可出现强烈能的肌肉收缩。
首先是面部肌肉开始,张口困难、牙关紧闭;表情肌痉挛,病人出现“苦笑”面容;背部肌肉痉挛,头后仰出现所谓的“角弓反张”;如发生呼吸肌或喷痉挛,可造成呼吸停止,病人窒息死亡。
这种全身肌肉痉挛持续几分钟不等。
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实验四厌氧菌一、破伤风梭菌、产气荚膜梭菌和肉毒梭菌（一）目的要求1. 掌握破伤风梭菌、产气荚膜梭菌、肉毒梭菌的形态特点、培养特性和鉴别要点。
2. 熟悉破伤风梭菌、产气荚膜梭菌和肉毒梭菌的分离培养过程、鉴别的一般原则和常用方法。
3. 解破伤风梭菌、产气荚膜梭菌和肉毒梭菌的外毒素毒性动物实验。
（二）器材和试剂1．菌种破伤风梭菌、产气荚膜梭菌、肉毒梭菌菌种及其形态示教片。
2．培养基疱肉培养基、血琼脂培养基、牛乳培养基、五糖（葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖）发酵管、牛心脑浸液肉汤与琼脂、脂酶培养基。
卵黄琼脂、溴甲酚紫牛乳培养基。
3. 试剂革兰染色液（一套）、芽胞染色液（石炭酸复红、95％酒精、碱性美蓝）、焦性没食子酸、100g/L氢氧化钾、溴甲酚紫；产气荚膜梭菌抗血清、肉毒梭菌多价抗血清、索氏梭菌抗血清；2０g／L尿素L-色氨酸、硝酸盐还原试剂、欧氏试剂、美蓝指示剂。
4. 其他小白鼠、家兔、无菌注射器、无菌吸管、滴管、中、小试管、消毒纱布块；固体石蜡或凡士林、酒精灯、三角架、碘酒、酒精、生理盐水、蒸馏水；剪刀、镊子、玻片、药勺、钯粒；厌氧袋、厌氧罐、离心机、水浴锅等。
（三）步骤和方法1．破伤风棱菌（1）形态观察观察破伤风梭菌示教片，其繁殖体型为革兰阳性细长杆菌，散在排列，芽胞型的芽胞呈正圆形，位于菌体顶端，直径大于菌体，使芽胞和菌体呈鼓槌状；该菌鞭毛为周身鞭毛。
（2）培养物观察破伤风梭菌在疱肉培养基中生长缓慢，厌氧培养2～7天后其生长现象为培养液变混浊，产酸，肉渣部分消化微变黑，有少量气体。
生成的甲基硫醇、H２S等使培养物变臭。
破伤风梭菌在血琼脂平板上形成圆形、扁平的菌落。
菌落中心结实，周边疏松似“羽毛状”。
菌落周围有α溶血环，培养时间延长可变为β溶血环。
（3）生化反应将五糖发酵管与牛乳培养基置水浴锅中加热。
热煮沸10min，迅速冷却。
以无菌吸管吸取破伤风梭菌纯培养物，分别滴加。
于牛乳培养基与五糖发酵管中，接种毕，在液面上加一薄层熔化的石蜡。
经37℃孵育24～48h，观察结果。
结果破伤风梭菌五糖（葡乳麦甘蔗）均不分解，牛乳培养基无变化。
”（4）破伤风梭菌芽胞染色法①原理芽胞具有厚而致密的壁，透性低，不易着色，芽胞染色法就是根据芽胞既难以染色而一旦染上后又难以脱色的特点设计的。
所以芽胞染色法都基于同一个原则，采用着色力强的染料，并加热以促进标本着色，然后使菌体脱色，而芽胞上的染料仍保留，经复染后，菌体和芽胞呈现不同的颜色。
②方法：a.用破伤风梭菌培养物涂片，干燥，火焰固定；b.滴加石炭酸复红液于涂片上，用微火加热至染料冒蒸汽（切勿煮沸）维持3～5min，加热过程要随时添加染液，勿让标本干涸，待玻片冷却后，水洗；c.用95％酒精脱色30s～1min，水洗：④滴加碱性美蓝液复染30s～lmin，水洗。
⑤干燥后，镜检。
③结果：芽胞染呈红色，菌体染呈蓝色。
2. 产气荚膜梭菌(1)形态观察产气荚膜梭菌镜下检查为革兰染色阳性粗大杆菌，两端钝圆，散在或短链状排列；荚膜染色法可见肥厚荚膜；芽胞卵圆形，与菌体等宽，位于菌体中央或次未端。
(2)培养物观察产气荚膜梭菌在疱肉培养基中呈现混浊生长，肉渣呈粉红色，不被消化，产气甚多；在血琼脂平板上多数株有双层溶血环；高层葡萄糖琼脂培养管中，可见气体产生，使琼脂有断裂分层现象。
(3)生化反应①五糖发酵试验：将五糖发酵管置水浴中加热煮沸10rnin，迅速冷却。
以无菌吸管吸取产气荚膜梭菌纯培养物，分别滴加于五糖发酵管中，接种后，在液面上加一薄层熔化的石蜡。
经35℃孵育24～48h，观察结果。
结果葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖均分解，产酸产气。
1汹涌发酵现象a.原理：产气荚膜梭菌能迅速分解乳糖产酸，使酪蛋白凝固，并产生大量气体，将凝固的酪蛋白冲散形成分散的海绵状碎块，并将培养基表面的石蜡冲至试管塞处。
此为汹涌发酵现象。
b.方法：甩无菌吸管（或接种环）取产气荚膜梭菌疱肉培养物接种于溴甲酚紫牛乳培养基，置35℃孵育18～24h，观察结果。
c.结果和意义：一般于孵育6h后即可发生，产气荚膜梭菌迅速分解乳糖，产酸产气，酪蛋白被酸凝固，形成凝块与乳清，凝块被产生的大量气体冲击，形成分散的海绵状碎块，将部分培养基冲至试管口塞处。
这种气势凶猛现象，为本菌的重要特征之一。
③卵磷脂酶试验和奈格尔试验a.原理：产气荚膜梭菌能产生卵磷脂酶，在卵黄琼脂平板上，能将培养基中可溶性的磷脂酞胆碱分解生成磷酸胆碱和不溶性的二脂酞甘油酯，后者在菌落周围形成不透明区（有乳白色环），此为卵磷脂酶试验阳性。
奈格尔（Naglar）试验是抗原抗体中和试验用产气荚膜梭菌抗血清，实际是卵磷脂酶抗血清（抗体）涂在琼脂上，由于抗原（卵磷脂酶）抗体中和反应，使菌落周围不形成不透明区，即无乳白色环，则为奈格尔（Nag1ar）试验阳性。
这样可确证该菌能产生卵磷脂酶。
b.方法：将卵黄琼脂平板底部划分两个区，琼脂的一半均匀涂上产气荚膜梭菌抗血清，置37℃待干后，将待检细菌先在未涂抗血清区划线接种，然后在有血清区划线接种，置37℃厌氧孵育24～48h、观察结果。
c.结果：未涂抗血清的一半平板，菌落周围形成较大的混浊不透明区，表示卵磷脂酶试验阳性；涂抗血清的一侧，菌落周围无不透明区（无乳白色环），表示卵磷脂酶活性已被抗毒素所中和，为奈格尔试验阳性；如两侧菌落周围均无不透明区，表示该菌不产生卵磷脂酶。
产气荚膜梭菌卵磷脂酶试验为阳性，破伤风梭菌、肉毒梭菌为阴性。
(4)动物实验①原理：产气荚膜梭菌接种小白鼠腹腔后，可使小白鼠各脏器肿胀、并有许多气泡，尤以肝脏为甚，故又称为海绵肝或泡沫肝。
②方法：将产气荚膜梭菌培养液0．2～1．0ml注射小白鼠腹腔，5min后断髓处死，置37℃孵育5～8h，观察小白鼠腹腔是否膨胀有气肿现象，然后解剖小白鼠，观察各脏器，尤其是肝脏的变化。
③结果：剖检可见各脏器肿胀，并有许多气泡，尤以肝脏为甚，称海绵肝或泡沫肝。
如果取内脏组织涂片，革兰染色、镜检，可见具有荚膜的革兰阳性梭菌。
3.肉毒梭菌(1)形态观察肉毒梭菌为革兰染色阳性、两端钝圆的粗大杆菌，单独或成双排列；菌体的芽胞为卵圆形，宽于菌体，位于菌体次未端，使细菌呈“网球拍”状；鞭毛染色可见周鞭。
(2)培养物观察肉毒梭菌在扈肉培养基中生长旺盛，呈均匀混浊，产生少量气体，肉渣被消化变黑色，看腐败性恶臭；在血琼脂平板上呈现半透明、有光泽、边缘薄、弥散而不规则的菌落，有β溶血环。
(3)生化反应①五糖发酵试验：将五种糖发酵管与牛乳培养基置水浴中加热煮沸10rnin，迅速冷却。
以无菌吸管吸取肉毒梭菌培养液，分别滴加于五糖发酵管与牛乳培养基中，接种后在液面上加一薄层熔化的石蜡。
经35C孵育24～48h，观察结果。
结果：肉毒梭菌能分解葡萄糖，麦芽糖与蔗糖，不分解乳糖与甘露醇，牛乳培养基一般无变化。
②脂酶试验a.原理：肉毒梭菌能产生脂酶，它作用于卵黄中游离脂肪，产生甘油和不溶性游高脂肪酸，在菌落的周围形成局限的不透明区，并于菌落表面产生一层珠光层。
为一薄层脂肪酸，可与卵磷脂的分解产物（二脂酰甘油酯）区别。
b.方法：将肉毒梭菌接种于卵黄平板，置35℃厌氧孵育48～72h，观察结果。
c.结果：菌落表面有珠光层，菌落的周围有不透明区者为脂酶阳性，各型肉毒梭菌（G型除外）脂酶试验阳性，破伤风与产气荚膜梭菌该试验为阴性。
(4)动物试验①原理：肉毒梭菌培养液注入小白鼠腹腔后其毒素作用于颅脑神经核、外周神经肌接头以及植物神经末梢，使小白鼠出现四肢麻痹、呼吸困难，眼睑下垂，瞳孔散大、流涎，最后因心力衰竭或呼吸困难而死亡。
②方法a.准备滤液：取培养5天的肉毒梭菌液体培养物，离心3000r／min，30min，取上清经滤菌器除菌，取滤液作试验。
b.将动物分为三组：1组：取上述滤液0.5m1，注入小白鼠腹腔。
2组：同法注入加热100℃30mm 的滤液于第二只小白鼠，3组：第三只小白鼠在注射肉毒梭菌多价抗毒素的同时再。
注射不加热的滤液。
c.结果：注射后1小时（也有延至3～7天），第1组小白鼠出现四肢麻痹、呼吸困难、眼睑下垂、瞳孔散大、流涎等中毒症状，最后因心衰或呼吸困难而死亡。
剖检，内脏可见明显充血，大量出血与血栓形成等，第2乃组动物不发病，存活。
4.临床意义：破伤风芽胞梭菌又称破伤风杆菌，广泛存在于自然界，在土壤和人与动物的肠道中都有存在。
当机体受创伤时或新生儿接生时使用不洁用具断脐带，破伤风梭菌可侵入伤口生长繁殖，分泌外毒素，引起机体痉挛性抽搐，称为破伤风，新生儿破伤风又称为脐带风。
产气荚膜梭菌是气性坏疽的主要病原菌。
本菌可产生外毒素及多种侵袭性酶类。
此菌的致病条件与破伤风梭菌相同，主要是大面积创伤、局部供血不足，组织缺氧坏死，氧化还原电势下降）菌体产生芽胞，产生毒素和侵袭性酶，引起感染致病。
所致疾病主要是气性坏疽，某些型别也可引起食物中毒和坏死性肠炎，也常与兼性厌氧菌混合感染，引起深部脓肿，腹腔、盆腔、胸腔感染、败血症、心内膜炎以及胆道、泌尿道、女性生殖道感染等。
肉毒梭菌广泛存在于自然界，土壤中常可检出，偶尔存在于动物粪便中。
在厌氧环境中，此菌分泌极强烈的肉毒毒素，引起特殊的神经中毒症状，病死率极高。
本毒素尚可使婴幼儿感染与中毒。
本病与典型的食人肉毒毒素引起的食物中毒不同，属于感染性中毒。
5.注意事项(1)对预采集标本部位应首先清除污物、再用2％～2．5％碘酒75％酒精消毒，防止皮肤表面污染菌（需氧菌）混入标本而影响检测结果；所盛容器必须在用前进行灭菌。
(2)对不同部位的标本采集，应分别采取，如系瘘管应取部分坏死碎片，对闭锁性脓肿应以无菌注射器穿刺抽取脓汁和分泌物，取材后尽量排出注射器内空气，并将针头插入无菌橡皮塞内，避免空气进入。
(3)对厌氧菌的分离培养、鉴定的全过程中均应防止氧气进入。
二、艰难梭菌（一）目的要求1.掌握艰难梭菌的形态特点及培养特性。
2.熟悉鉴别艰难梭菌的一般原则和常用方法。
3.了解艰难梭菌毒素对动物的毒性试验。
（二）器材和试剂1.菌种艰雅梭菌。
2.培养基疱肉培养基、CCFA（环丝氨酸、头孢甲氧噻吩、果糖、琼脂）平板培养基、卵黄琼脂培养基、五糖发酵管、七叶灵柠檬酸铁琼脂、20％胆汁心脑浸液、明胶培养基。
3.试剂芽胞染色液、焦性没食子酸、100g／L氢氧化钾、索氏梭菌抗血清、20g／L尿素、L一色氨酸、硝酸盐还原试剂、欧氏试剂、美蓝指示剂。
4.其他家兔、无菌注射器及针头、无菌吸管、滴管、中小试管、消毒纱布块；固体石蜡、酒精灯、三角架、消毒用碘酒、酒精、生理盐水、蒸馏水、剪刀、镊子、钯粒、产气袋、厌氧罐、水浴锅等。
（三）步骤和方法1.形态观察艰难梭菌为革兰阳性粗长杆菌；芽胞为卵圆形或长方形，位于次极端或极端、运动性菌株为周鞭毛。
2.培养物观察在CCFA平板上，经48h厌氧培养后，产生特征性马厩（horsestable）气味，菌落直径3～5rnm，圆形、略凸起、白色或淡黄、不透明、边缘不整齐、表面粗糙或毛玻璃样菌落。