动物肝脏DNA提取和鉴定
动物肝脏中DNA的提取和检测实验报告
动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸（DNA，为英文Deoxyribonucleic acid的缩写），又称去氧核糖核酸，是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分，同时也是组成基因的材料。
有时也被称为“遗传微粒”，原因是在繁殖过程中，父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中，从而完成性状的传播。
DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。
DNA对紫外线（260nm）有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。
当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解开—也称为DNA 的解螺旋。
在细胞内，DNA能与蛋白质结合形成染色体，整组染色体则统称为染色体组。
对于人类而言，正常的体细中含有46条染色体。
染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制，细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。
对于真核生物，如动物、植物及真菌而言，染色体主要存在于细胞核内；而对于原核生物，如细菌而言，则主要存在于细胞质中的拟核内。
染色体上的染色质蛋白，如组织蛋白，能够将DNA进行组织并压缩，以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用，进而调节基因的转录。
脱氧核糖核酸的结构DNA的结构： DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。
DNA是一种长链聚合物，组成单位为四种脱氧核苷酸，即腺嘌呤脱氧核苷酸（dAMP 脱氧腺苷）、胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTMP 脱氧胸苷）、胞嘧啶脱氧核苷酸（dCMP 脱氧胞苷）、鸟嘌呤脱氧核苷酸（dGMP 脱氧鸟苷）。
而脱氧核糖（五碳糖）与磷酸分子借由酯键相连，组成其长链骨架，排列在外侧，四种碱基排列在内侧。
每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连，这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列，可组成遗传密码，指导蛋白质的合成。
生化实验课件-动物肝脏中DNA的提取和测定
实验2 DNA的定量测定（二苯胺法）
一. 实ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ目的 掌握二苯胺法测定DNA含量的原理和方法 二. 实验器材 坐标纸 试管 吸管 722型分光光度计 恒温水浴锅
实验2 DNA的定量测定（二苯胺法）
三.实验耗材 1. DNA标准溶液（取DNA钠盐用5mmol/L的NaOH 配成200ug/L的溶液） 2. 二苯胺溶剂（纯二苯胺1g溶于100ml冰醋酸 （A.R.）再加入10ml过氯酸（A.R.浓度>60%） 混匀待用。临用前加入1ml 1.6%乙醇溶液） 3. DNA样液（将实验1提取的DNA粗品用蒸馏水 溶解，定容至25ml，控制其DNA含量在100ug/ml 左右）
实验2 DNA的定量测定（二苯胺法）
四. 实验操作 1.标准曲线的绘制 按表1加入各种试剂，混匀，于60°C恒温水浴45min，冷却后， 在595nm波长下于分光光度计比色测定，以吸光度对DNA浓度作 图，制作标准曲线。 2.样品的测定 取DNA样液1.0ml，加入蒸馏水1.0ml，混匀。然后准确加入二苯 胺试剂4.0ml，混匀，于60°C恒温水浴45min，冷却后，595nm 波长下于分光光度计比色测定，根据所测的吸光度对照标准曲线 求得DNA的质量（ug）。
实验1 动物肝脏中DNA的提取
2. 在沉淀中加入20ml柠檬酸钠缓冲液、10.5ml氯仿-异 戊醇混合液、2ml SDS使其最终浓度为0.41%，振荡 30min，然后缓慢加入固体NaCl（约1.8g），使其最 终浓度为1mol/L。将其在3500r/min离心20min，取 上清水相。 3. 在上述水相溶液中加入等体积冷乙醇，边加边用 玻棒慢慢搅动，将缠绕在玻棒上的凝胶 状物用滤纸吸去多余的乙醇，即得DNA 粗品。用蒸馏水溶解并定容至25ml。
动物肝脏dna的提取和鉴定实验报告
动物肝脏dna的提取和鉴定实验报告动物肝脏DNA的提取和鉴定实验报告研究背景•DNA提取是基因研究和遗传分析的基础步骤之一，对于动物肝脏DNA的提取和鉴定具有重要意义。
•本实验旨在探究动物肝脏DNA的提取方法，并通过PCR技术对其进行鉴定和分析。
实验设计和方法1.实验所用材料和仪器：–动物肝脏样本–DNA提取试剂盒–离心管、显微管–PCR反应体系组分–PCR仪2.DNA提取步骤：–取动物肝脏样本，加入提取试剂，进行细胞破裂和蛋白质消化。
–通过离心将细胞碎片分离，再加入酒精将DNA沉淀。
–对DNA进行洗涤、干燥和溶解，得到纯净的DNA提取物。
3.DNA鉴定和PCR步骤：–制备PCR反应体系，包括DNA模板、引物、酶和缓冲液等。
–进行PCR反应，使用特定的温度和时间条件进行扩增。
–通过凝胶电泳分析PCR产物，检测特定的DNA序列是否存在。
实验结果和分析•经过DNA提取和PCR扩增，成功从动物肝脏中提取到DNA，并进行了鉴定和分析。
•凝胶电泳结果显示，PCR反应产物呈现出预期的大小和条带清晰，表明目标DNA序列存在于动物肝脏中。
结论•本实验成功地提取和鉴定了动物肝脏中的DNA。
•通过PCR技术，可以快速、准确地检测和分析动物肝脏的遗传信息。
•这一研究结果对于进一步深入了解动物遗传特征具有重要意义。
参考文献[1] Smith A, Jones B. A review of DNA extraction techniques for biofilm analysis in wastewater treatment systems. Water Research, 2018, 132: 87-96.[2] Brown C G, McKinstry J L, et al. Comparison of seven methods for extraction of bacterial DNA from fecal and cecal samples of mice. Journal of Microbiological Methods, 2019, 164: 105682.讨论与展望•本实验采用DNA提取试剂盒的方法，相比传统的有机溶剂法，具有操作简便、提取效率高、污染少等优点。
动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告
动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸（DNA，为英文Deoxyribonucleic acid的缩写），又称去氧核糖核酸，是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分，同时也是组成基因的材料。
有时也被称为“遗传微粒”，原因是在繁殖过程中，父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中，从而完成性状的传播。
DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。
DNA对紫外线（260nm）有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。
当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解开—也称为DNA 的解螺旋。
在细胞内，DNA能与蛋白质结合形成染色体，整组染色体则统称为染色体组。
对于人类而言，正常的体细中含有46条染色体。
染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制，细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。
对于真核生物，如动物、植物及真菌而言，染色体主要存在于细胞核内；而对于原核生物，如细菌而言，则主要存在于细胞质中的拟核内。
染色体上的染色质蛋白，如组织蛋白，能够将DNA进行组织并压缩，以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用，进而调节基因的转录。
脱氧核糖核酸的结构DNA的结构： DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。
DNA是一种长链聚合物，组成单位为四种脱氧核苷酸，即腺嘌呤脱氧核苷酸（dAMP 脱氧腺苷）、胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTMP 脱氧胸苷）、胞嘧啶脱氧核苷酸（dCMP 脱氧胞苷）、鸟嘌呤脱氧核苷酸（dGMP 脱氧鸟苷）。
而脱氧核糖（五碳糖）与磷酸分子借由酯键相连，组成其长链骨架，排列在外侧，四种碱基排列在内侧。
每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连，这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列，可组成遗传密码，指导蛋白质的合成。
生化实验4动物肝脏DNA的提取和鉴定
▪ 1、核酸的理化性质
▪ RNA和核苷酸的纯品都呈白色粉末或结 晶，DNA则为白色类似石棉样的纤维状物。 除肌苷酸、鸟苷酸具有鲜味外，核酸和核 苷酸大都呈酸味。
▪ DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物， 一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机 溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水， RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L。DNA 在水中为10g/L，呈黏性胶体溶液。在酸 性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性或 弱碱性溶液中较稳定。
（4) 离心机 (5) 普通光学显微镜 (6) 冰箱 (7) 具塞离心管 (8) 弯头滴管
(9)小 烧杯
(10) 紫外分光光度计
(11)分析天平 (12)恒温水浴 (13)硬质玻璃试管 (14)新鲜猪肝脏 (15)冰块
2. 试剂 （1）匀浆液（ 0.1 mol/L NaCl ＋0.05 mol/L柠檬
实验五
动物肝脏DNA的提取和鉴定
(教材110页)
一．原理
DNA 、 RNA在细胞内多以核蛋白体形 式存在---DNP 、 RNP．
分离提取核酸时首先要破碎细胞去除蛋 白质和其他物资, 用0.14mol/L Nacl(含柠 檬酸钠)匀浆液溶解细胞中的RNA及其他物资, 离心，去上清,然后加入提取液（十二烷基硫 酸钠，SDS）溶液溶解DNA，然后加入氯仿 -辛醇，以去除其余核蛋白和杂蛋白．再离心 除去沉淀(杂蛋白)部分,收集上清部分(DNA).
▪ 鉴定:
▪
▪ 脱氧核糖的鉴定
▪
1.O ml DNA溶解液+二苯胺
化合物.
加热10分钟
生成蓝色
▪ 嘌呤碱的鉴定
▪
1.0ml DNA溶解液 + 生褐色的嘌呤银化合物。
动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告
动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸〔DNA，为英文Deoxyribonucleic acid的缩写〕，又称去氧核糖核酸，是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分，同时也是组成基因的材料。
有时也被称为“遗传微粒〞，原因是在繁殖过程中，父代会把它们自己DNA的一局部复制传递到子代中，从而完成性状的传播。
DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。
DNA对紫外线〔260nm〕有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进展含量测定。
当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋构造解开—也称为DNA的解螺旋。
在细胞内，DNA能与蛋白质结合形成染色体，整组染色体那么统称为染色体组。
对于人类而言，正常的体细中含有46条染色体。
染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制，细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。
对于真核生物，如动物、植物及真菌而言，染色体主要存在于细胞核内；而对于原核生物，如细菌而言，那么主要存在于细胞质中的拟核内。
染色体上的染色质蛋白，如组织蛋白，能够将DNA进展组织并压缩，以帮助DNA与其他蛋白质进展交互作用，进而调节基因的转录。
脱氧核糖核酸的构造DNA的构造：DNA的构造一般可划分为一级构造、二级构造、三级构造和四级构造四个水平。
DNA是一种长链聚合物，组成单位为四种脱氧核苷酸，即腺嘌呤脱氧核苷酸〔dAMP 脱氧腺苷〕、胸腺嘧啶脱氧核苷酸〔dTMP 脱氧胸苷〕、胞嘧啶脱氧核苷酸〔dCMP 脱氧胞苷〕、鸟嘌呤脱氧核苷酸〔dGMP 脱氧鸟苷〕。
而脱氧核糖〔五碳糖〕与磷酸分子借由酯键相连，组成其长链骨架，排列在外侧，四种碱基排列在内侧。
每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连，这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列，可组成遗传密码，指导蛋白质的合成。
动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告
动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸（DNA，为英文Deoxyribonucleic acid的缩写），又称去氧核糖核酸，是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分，同时也是组成基因的材料。
有时也被称为“遗传微粒”，原因是在繁殖过程中，父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中，从而完成性状的传播。
DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。
DNA对紫外线（260nm）有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。
当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解开―也称为DNA的解螺旋。
在细胞内，DNA能与蛋白质结合形成染色体，整组染色体则统称为染色体组。
对于人类而言，正常的体细中含有46条染色体。
染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制，细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。
对于真核生物，如动物、植物及真菌而言，染色体主要存在于细胞核内；而对于原核生物，如细菌而言，则主要存在于细胞质中的拟核内。
染色体上的染色质蛋白，如组织蛋白，能够将DNA进行组织并压缩，以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用，进而调节基因的转录。
脱氧核糖核酸的结构DNA的结构： DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。
DNA是一种长链聚合物，组成单位为四种脱氧核苷酸，即腺嘌呤脱氧核苷酸（dAMP 脱氧腺苷）、胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTMP 脱氧胸苷）、胞嘧啶脱氧核苷酸（dCMP 脱氧胞苷）、鸟嘌呤脱氧核苷酸（dGMP 脱氧鸟苷）。
而脱氧核糖（五碳糖）与磷酸分子借由酯键相连，组成其长链骨架，排列在外侧，四种碱基排列在内侧。
动物肝脏DNA提取和鉴定
整个操作步骤应尽量简化，缩短实验过程，减少核酸变性、降解、机械切割的机会。
核酸提取过程中的注意事项：
01
加入RNA酶降解剩余的RNA，获得纯的DNA。
02
保存：将DNA于滤纸上干燥，溶于1mlTE中低温保存。
03
纯的DNA样品的获得
琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理：
琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖凝胶作为支持介质的一种电泳分离方法，是一种简便、快速分离鉴定核酸的方法，已成为分子生物学及基因工程研究中常用实验方法之一。 琼脂糖英文名agarose，是从琼脂中提取出来的，由半乳糖和3.6-脱水-L- 半乳糖相互结合的链状多糖。琼脂糖和琼脂都可在不同浓度的水溶液下可形成多孔的凝胶，电泳中具有分子筛效应。但琼脂糖含硫酸根比琼脂少，电渗作用降低，因而分离效果明显提高。
溴化乙啶检测DNA的灵敏度很高，可检出10ng甚至更少的DNA。
01
02
03
琼脂糖凝胶电泳分离核酸的影响因素
（1）核酸大小与琼脂糖凝胶电泳分离的关系 凝胶中，DNA片段迁移率与DNA分子大小(碱基对的对数)成反比(≤ 20kb) ，因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离时行比较，便可测出未知片段的大小。 （2）核酸构型与琼脂糖凝胶电泳分离的关系 不同构型DNA的移动速度次序为：闭环DNA>直线DNA>开环的双链环状DNA. （3）不同大小的DNA需要用不同浓度的琼脂糖凝胶进行电泳分离。 琼脂糖浓度/% 0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 2.0 线状DNA大小/kb 60-5 20-1 10-0.8 7-0.5 6-0.4 3-0.2 2-0.1 注：DNA片段在5-500bp之间时，一般用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）进行电泳分离。
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（4）既可用于DNA也可用于RNA的检测。
（5）EB可加到样品中，也可加到凝胶中，可随时用紫外 灯检测电泳的进程和效果。 （6）EB-DNA复合物中的EB发出的荧光比游离的EB强10倍， 因此不需洗净凝胶中游离的EB也可检测出DNA的条带。
3、缺点：
溴化乙啶是一种强的致突变剂，在操作和配制试剂 时应戴手套。含溴化乙啶的溶液不能直接倒入下水道， 应进行处理。 （1）每100ml溶液中加入100mg粉状活性炭； （2）室温下放置1小时，不时的摇动； （3）用新华一号滤纸过滤，弃滤液； （4）用塑料袋封装滤纸和活性炭，作为有害废物处理。
实
验
五
动物肝脏中DNA的制备和鉴定
学时：6
一、实验目的：
1、掌握动物组织总DNA的提取方法及其原理。 2、掌握琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理和方法。
3、学习核酸染色的方法。
二、实验原理:
（一）动物肝脏DNA制备原理
要获得纯的DNA样品，必须考虑以下几点：
如何选材，如何破碎组织细胞？
如何除去蛋白质？(在真核细胞内，DNA与蛋白质结合成核蛋
• 压榨法：在1000×105Pa—2000×105Pa 的高压下使几十毫升
的细胞悬液通过一个小孔突然释放至常压，细胞将彻底破碎。 温和的、彻底破碎细胞的方法，但仪器费用较高。
细胞破碎方法—机械物理法
• 反复冻融法：将待破碎的细胞冷至－15℃到－20℃， 然后放于室温(或40℃)迅速融化，由于细胞内形成 冰粒使剩余胞液的盐浓度增高而引起细胞溶胀破碎。 • 超声波处理法：借助超声波的振动力破碎细胞壁和 细胞器。使用时注意降温，防止过热。 • 冷热交替法：在90℃左右维持数分钟，立即放入冰 浴中使之冷却，如此反复多次，绝大部分细胞可以 被破碎。
（7）电泳缓冲液：Tris-硼酸－EDTA（50×TBE）pH8.0。 （8）加样缓冲液：0.25%溴酚蓝（BPB）40%蔗糖。
（9）溴化乙啶（EB）溶液：10μg/ml。
（10）琼脂糖凝胶：浓度为0.7%。
(三)仪器
（1）稳压稳流电泳仪 （2）可调微量移液器
（3）水平电泳槽
（4）暗箱紫外透射仪等。
收260nm的紫外线后将能量传递给EB，二是EB本身吸收
302nm和360nm的紫外线的能量。这两方面的能量最终 激发EB发射波长为590nm的可见光（红橙区）。
2、优点：
（1）染色比较简便、快捷，一般在10－15min就可反应。
（2）EB对核酸分子无破坏作用，这是其它染料所不能做 到的。 （3）EB灵敏度高，可检测出10ng或更少的DNA含量。
注：DNA片段在5-500bp之间时，一般用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）进
琼脂糖凝胶电泳具有以下优点：
（1）操作简单、制备容易快速、凝胶机械性能好、电泳速度 快、分离DNA片段范围广、样品不需事先处理就可以进行电泳。 （2）凝胶结构均匀，对样品吸附小，电泳图谱清晰，分辨率 高，重复性好。 （3）琼脂糖透明无紫外吸收，电泳过程和结果可直接用紫外 光检测及定量测定。 （4）电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定。制 成干膜可长期保存。 因此，琼脂糖凝胶电泳已成为分子生物学及基因工程研 究中常用实验方法之一， DNA样本的分离、纯化、鉴定以及 相对分子质量测定常用琼脂糖凝胶电泳。
溴化乙啶是一种荧光染料，可插入DNA双螺旋结构的
两个碱基对之间，与DNA分子形成络合物，在紫外光的 激发下发出橙黄色的荧光。
荧光来自两方面，一是核酸吸收260nm的紫外光， 并将能量传给EB；二是EB本身吸收波长为302nm和 360nm的紫外光。这两方面的能量最终激发EB发出 波长为590nm的红橙色荧光。 溴化乙啶可加入凝胶中，也可以在电泳后，将凝胶 放在含EB的溶液中浸泡.
• 11. 观察
关闭电源，取出胶床，在紫外检测仪下观察凝胶中的 DNA（红橙色荧光）。
五、思考题：
1、用荧光染料EB染色的原理和优缺
点是什么？ 2、绘制DNA电泳图谱。
核酸提取过程中的注意事项：
（ 1 ） 避 免 过 酸 过 碱 或 高 温 环 境 ， 合 适 的 T：0－4℃， pH4-9； （2）防止机械力的切割作用，避免剧烈振荡； （3）防止核酸酶的降解作用，可加入抑制剂－EDTA，柠檬 酸钠；
细胞破碎方法—化学方法
• 有机溶剂处理法：利用氯仿、甲苯等脂溶性溶剂或 SDS（十二烷基硫酸钠）等表面活性剂处理细胞， 可将细胞膜溶解，从而使细胞破裂，此法也可以与
研磨法联合使用。
• 溶胀法：细胞膜为天然的半透膜，在低渗溶液和低
浓度的稀盐溶液中，由于存在渗透压差，溶剂分子
大量进入细胞，将细胞膜胀破释放出细胞内含物。
（4）整个操作步骤应尽量简化，缩短实验过程，减少核酸 变性、降解、机械切割的机会。
• 9.加样：
将样品DNA溶液与加样缓冲液以5 ：1的体积比混合，用 微量移液器加样，每加完一个样品，冲洗三次。加样量15～ 20 l （加样时应防止碰坏样品孔周围的凝胶面以及穿透凝 胶底部）。
• 10.电泳：
为了获得电泳分离DNA片段的最大分辨率，电场强度不 应高于5V/cm（两电极间的距离）开始时用较高电压(80V)， 样品一进入胶内则将电压调至5V/cm 。当染料前沿移至底边 1-2mm时，电泳毕。
溴化乙啶检测DNA的灵敏度很高，可检出10ng甚
至更少的DNA。
琼脂糖凝胶电泳分离核酸的影响因素
（1）核酸大小与琼脂糖凝胶电泳分离的关系
凝胶中，DNA片段迁移率与DNA分子大小(碱基对的对数)成反比(≤
20kb) ，因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离
时行比较，便可测出未知片段的大小。
DNA分子在pH高于其等电点的溶液中带负电荷，在电场
中向正极移动（电荷效应） 。 DNA分子泳动速率的大小除与DNA分子的带电量有关 外，还与DNA分子的大小和空间构象有关（琼脂糖凝胶 的分子筛效应）。
电泳时，用溴酚蓝做前沿指示剂，用溴化乙啶
（ethidium bromide，EB） 指示DNA样品在凝胶中的 确切位置。
(三)除去RNA的方法
脱氧核糖核蛋白在浓NaCl（1-2mol／L）溶液中
溶解度很大，但在0.14mol／L NaCl溶液中溶解度很低，
而核糖核蛋白则溶于0.14mol／L NaCl溶液中，利用
这一性质可将脱氧核糖核蛋白与绝大部分核糖核蛋白 分离开来。
(四)除去蛋白质的方法
用氯仿一异成醇混合液振荡核蛋白溶液，使蛋白质变性，然 后离心除去变性蛋白质，此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿 相中间，而DNA溶于上层水相。用两倍体积 95％乙醇溶液可 将DNA钠盐沉淀出来。
• 4．加等体积的氯仿一异
戊醇，混匀，摇动5min，以
4000r／min的转速离心
10min。离心管内的物质分
为三层，上层为含DNA的水
相层，下层为氯仿一异成醇 混合物，中间层为变性蛋白 凝胶。
• 5．吸出上清液，加入2倍体积95％乙醇溶液（预
冷），产生沉淀。
• 6. 再以4000r／min的转速离心溶液10min，弃去
白的形式存在。因此，分离DNA时必须使其与蛋白质解离，并除去
蛋白质。)
设法除去RNA的污染； 防止DNA酶的降解作用；
选 材
要提取动物组织DNA，一般选择细 胞膜较脆弱，容易破碎的动物脏器，如
胸腺、肝脏、脾脏、胰脏等。
细胞破碎方法—机械物理法：
• 研磨：将剪碎的动物组织置于研钵或匀浆器中，加入少量石 英砂研磨或匀浆，破碎细胞。这种方法温和，适合实验室使 用。 • 组织捣碎器：较剧烈的破碎细胞的方法，为了防止发热和升 温过高，通常是转10秒—20秒，停10秒—20秒，可反复多次。
（二）琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理：
琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖凝胶作为支持介质的一种电 泳分离方法，是一种简便、快速分离鉴定核酸的方法，已 成为分子生物学及基因工程研究中常用实验方法之一。
琼脂糖英文名agarose，是从琼脂中提取出来的，由半
乳糖和3.6-脱水-L- 半乳糖相互结合的链状多糖。琼脂糖 和琼脂都可在不同浓度的水溶液下可形成多孔的凝胶，电 泳中具有分子筛效应。但琼脂糖含硫酸根比琼脂少，电渗 作用降低，因而分离效果明显提高。
荧光染料EB染色
后，在紫外灯 (λ305nm)下观察
到的电泳结果：
* 荧光染料EB染色的原理和优点是什么？
1、原理：
EB： 即 3 , 8 - 二氨 基 - 5 - 乙 基 - 6 - 苯基 菲锭 溴 盐
(Ethidium Bromide)。 EB是一种扁平分子，它可以嵌 入核酸的碱基之间，在紫外线激发下，发出红橙色荧 光。 激发的荧光的能量来源于两个方面：一是核酸吸
（3）插入梳子，梳齿下端离板底0.5－1mm。 （4）在胶床上滴加2－3滴 0.5μ g/mL的EB溶液。 （5）将60℃凝胶不间断倒入胶床，高3－4mm，避免气泡，摇 匀，室温下凝固。 （6）完全凝固后，撕掉胶带，置于电泳槽中，加入电泳缓冲 液，高于胶面1－2mm，从一头轻轻斜拉出梳子，除去产生 的气泡。
移液器的使用
自动取液器的构造
自动取液器的使用
吸入液体
排出液体
使用注意事项：不超量程使用；不倒置；使用完毕调至最大刻度上。
三、实验步骤：
• 1．取新鲜动物肝，称取1g，切成小块，加
入2ml 0.14mol／L NaCl－0.15mol／L
EDTA溶液，于研钵中研磨至匀浆，再加2ml
清洗转入离心管中，以4000r／min的转速
*溴化乙啶在260℃分解，在标准条件下进行焚化后不会有 危险性。
二、实验材料、试剂和仪器:
(一)材料：动物肝脏
(二)试剂：
（1）0.14mol／LNaCl－0.15mol／L EDTA-Na溶液： （2）20％SDS溶液： （3）氯仿一异戊醇(24:1)混合液： （4）95％乙醇溶液。 （5）80％乙醇溶液。 （6） pH8.0TE缓冲液：10 mmol／LTris－HCI，lmmol ／L EDTANa，其中含RNA酶20ug／mL。