肥料中粪大肠菌群的测定
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肥料中粪大肠菌群的测定
一：前期准备
一次性帽子、口罩、脚套
1， 移液管10ml 量筒100ml ｝
玻璃珠 三角瓶 培养皿
2， 乳糖胆盐发酵培养基（用于乳糖发酵） 乳糖发酵培养基（用于复发酵）
伊红美蓝培养基（用于分离培养） } 121℃，15min
无菌水 } 121℃，15min
二：实验过程
无菌条件下进行：
10.0g 固体样品/10ml 液体样品
↓
三角瓶（带玻璃珠，90ml 无菌水）1:10=10-1
↓
200r/min 振荡30min
↓
吸取10-1—5ml ，加入45ml 无菌水（提前准备）1:100=10-2
↓
吸取吸取10-2—5ml ，加入45ml 无菌水（提前准备）1:1000=10-3
↓
……依次稀释得到10-4，10-5等浓度稀释液（每个稀释度必须更换无菌移液管）
↓
选取三个连续适宜稀释液，分别吸取1.0ml 加入到乳糖胆盐发酵管内（装有乳糖胆盐发酵培
养基）（每一稀释度接种3支发酵管）
↓
培养箱45℃，24h
↓
结果：产酸，颜色变；产气，导管有气泡
不产酸，不产气，为粪大肠菌群阴性
↓
分离培养：从产酸产气或只产酸的发酵管中挑取发酵液在伊红美蓝培养基平板上划线
↓
培养箱36℃，18-24h
↓
证实实验：从平板上挑取可以菌落，进行革兰氏染色。
结果：染色反应阳性者为粪大肠菌群阴性
↓
革兰氏阴性无芽孢杆菌，则挑取同样菌落接种在乳糖发酵管中（装有乳糖发酵培养基）
↓
培养箱44.5℃，24h
↓
结果，不产气为粪大肠菌群阴性，产气为粪大肠菌群阳性
↓
证实为粪大肠菌群阳性的，根据粪大肠菌群阳性发酵管数，查MPN 检索表，得出每克（毫
升）肥料样品中的粪大肠菌群数 ｝160℃，4h ｝115℃，15min