实验七 酵母菌的形态观察和死活细胞鉴别
酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定_百替生物
实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。
2.学习鉴别死活细胞的实验方法。
二、实验原理酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。
酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。
芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。
本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。
三、实验器材1.材料：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。
2.试剂：O.1％吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。
3.器材：显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。
四、实验步骤1.美蓝浸片观察（1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑去少量酵母菌放在染液中，混合均匀，染液不宜过多。
注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。
（2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。
注：盖玻片不宜平着放，以免产生气泡。
（3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。
（4）染色约0.5h后再次观察，注意死细胞数量是否增加。
2.水-碘浸片观察在载玻片中央滴一滴碘液，然后在其上加3小滴水，取少许酵母菌苔放在水-碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。
酵母菌形态观察及死活细胞的观察
实验程序 Ⅱ1
（测定微生物数量）
1. 取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖 玻片。
2. 取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一 小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。
3. 静止5min后，用低倍镜观察并将计数室移至视 野中央。
4. 在高倍镜下计数：随机计数五个中格的平均值， 然后求得每个中格的平均值。乘上16（或25）就 得出一大格中的总菌数，最后再换算到每mL菌 液中的含菌数。
实验五
结束
酵母菌形态观察及死活细胞的观察； 微生物细胞大小和数量的测定
• 目的要求 • 实验材料 • 实验程序 • 思考题
目的要求
• 观察酵母形态，加深理解酵母的形态特征 • 美蓝染色鉴定酵母的死活 • 学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显微
镜下测定微生物大小的方法。 • 学习使用血球记数板测定微生物数量的方
法。
实验材料
• 显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、血球 记数板、酵母菌悬液、盖玻片、美蓝、无 菌滴管、吸水纸、擦镜纸、香柏油、擦镜 油。
实验程序
• 5- 1 :测定微生物的大小 • 5- 2 :测定微生物数量 • 5- 3 :酵母的形态特和美蓝
染色鉴定酵母的死活
实验5-1:酵母的形态特和美蓝染 色鉴定酵母的死活
• 菌体大小的测定：取下镜台测微尺，将细菌染色标本置于载物 台上，然后在油镜下用目镜测微尺测量菌体的长和宽。
实验5-2:测定微生物数量
实验5-2实验程序 （测定微生物数量）
• 方法：活菌计数法——平板菌落计数法；总菌计数法——血 球计数板或霍瑟（Peroff Hausser）细菌计数板（二者原 理和部件相同，只是厚薄不同而已）。
• 测定的工具：目镜测微尺 镜台测微尺
实验七 酵母菌的形态观察和死活细胞鉴别
第3组：3倍浓缩乳糖蛋白胨培养基100ml： 蛋白胨3g，氯化钠1.5g，水100ml 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液0.5ml，每管加5ml，共15管,内装倒置 小管，121℃灭菌20min。
第4-5组：普通浓度乳糖蛋白胨发酵培养基700ml：P244 蛋白胨7g，氯化钠3.5g，水700ml 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1.2ml， 每管加7ml，共45管，内装倒置小管 每管加10ml，共35管，内装倒置小管，121℃灭菌20min。
实验七 酵母菌的形态观察 与死活细胞鉴别
目的要求
1、观察酵母菌的形态及出芽生殖方式 2、学习区分酵母菌死活细胞的方法
实验原理
酵母菌是单细胞真核微生物， 其大小为常见细菌的几倍至几 十倍。大多数酵母采用出芽方 式进行繁殖。 美蓝是一种弱氧化剂，其氧化 态呈蓝色，还原态呈无色。用 美蓝对酵母细胞进行染色时， 由于新陈代谢，活细胞具有较 强的还原能力，可使美蓝由蓝 色的氧化型转变为无色的还原 型，染色后细胞呈无色。死细 胞或代谢能力弱的衰老细胞其 还原能力弱，染色后细胞呈蓝 色。
• 第8组：蛋白胨水培养基：250ml，p244 蛋白胨2.5g，氯化钠1.25g，水250ml，每管7ml， 121℃ 灭菌20min
实验材料
• 1. 培养2d的面包酵母斜面培养物 • 2. 0.1%吕氏碱性美蓝染液
实验方法
美蓝染液水浸片法
1. 滴一滴吕氏碱性美蓝染液于载玻片中央，无菌操作取酵母培 养物置于染液中，混合均匀。 2. 取盖玻片，将盖玻片一端与菌液接触，缓慢将盖玻片倾斜并 盖在菌液上。 3. 3min后，镜检。观察酵母菌形态及出芽情况，并根据细胞 颜色区别死活细胞。 4. 30min后，再次观察。
• 第6组：固体淀粉培养基：600ml，P243 蛋白胨6g，氯化钠3g，牛肉膏3g，可溶性淀粉1.2g，水 600ml，琼脂10g， 121℃灭菌20min。 • 第7组：明胶培养基，500ml，P243 蛋白胨5g，氯化钠2.5g，牛肉膏1.5g，明胶80g，水500ml ，每管7ml， 121℃灭菌20min。
实验7_酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别
二、基本原理——美蓝染色液 基本原理——美蓝染色液
美蓝为无毒性染料，其氧化型为蓝色， 美蓝为无毒性染料，其氧化型为蓝色，而还原型为无 用它对酵母菌染色时， 色。用它对酵母菌染色时，由于活细胞的新陈代谢作 使细胞内具有较强的还原能力， 用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色 的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色； 的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色； 对于死细胞或代谢缓慢的老细胞， 对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原 能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。 能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。 因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态， 因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以 区分死、活细胞。 区分死、活细胞。
四、操作步骤——美兰染色 操作步骤——美兰染色
在载玻片中央加一滴0.05%吕氏碱性美蓝染色液， 在载玻片中央加一滴0.05%吕氏碱性美蓝染色液，用接种环 0.05%吕氏碱性美蓝染色液 染液不宜过多或过少） 挑取少量酵母菌苔，混合均匀； 挑取少量酵母菌苔，混合均匀；（注：染液不宜过多或过少） 用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触， 用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖 玻片放下使其盖在菌液上； 盖玻片不宜平着放下） 玻片放下使其盖在菌液上；（注：盖玻片不宜平着放下）
二、基本原理——酵母菌形态 基本原理——酵母菌形态
酵母菌为单细胞真核微生物， 菌体比细菌大。 酵母菌为单细胞真核微生物 ， 菌体比细菌大 。 无 性繁殖主要是出芽生殖 出芽生殖， 性繁殖主要是 出芽生殖 ， 仅裂殖酵母属是以分裂 方式繁殖； 有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。 方式繁殖 ； 有性繁殖是通过接合产生子囊孢子 。 本实验通过用美蓝染色浸片 美蓝染色浸片来观察生活的酵母形 本实验通过用 美蓝染色浸片 来观察生活的酵母形 态和出芽生殖方式。 态和出芽生殖方式。
实验七 酵母菌的形态观察、死活细胞鉴定及血球计数法
实验七 酵母菌的形态观察、死活细 胞鉴定及血球计数
（三）显微镜计数 3、加样品 将清洁干燥的血细胞计数板先盖上盖玻片，再 用无菌的毛细滴管将摇匀的酵母菌悬液由盖 玻片边缘滴一小滴，沿缝隙靠毛细渗透作用 自动进入计数室，再用镊子轻压盖玻片，以 免菌液过多将盖玻片顶起而改变了计数室的 容积。加样后静置5min，使细胞自然沉降。
二、实验原理
以25个中方格的计数板为例，设5个中方格中的 总菌数为A，菌液稀释倍数为B，则：
1ml菌液中的总菌数=A/5×25×104×B=50 000AB
以16个中方格的计数板为例，设5个中方格中的 总菌数为A，菌液稀释倍数为B，则：
1ml菌液中的总菌数=A/5×16×104×B=32 000AB
实验七 酵母菌的形态观察、死活细 胞鉴定及血球计数
一、实验目的
1、观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学 习区分酵母菌死活细胞的实验方法； 2、掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌 的区别；
3、明确血细胞计数板计数的原理，以及使 用血细胞计数板进行微生物计数的方法。
实验七 酵母菌的形态观察、死活细 胞鉴定及血球计数
实验七 酵母菌的形态观察、死活 细胞鉴定及血球计数
五、实验操作 （三）显微镜计数 5、清洗 使用完毕后，先用自来水冲洗血细胞计数板及 盖玻片，再用95%的乙醇棉球清洗，吸水纸 吸干后，放回盒中，以备下次使用。
实验七 酵母菌的形态观察、死活细 胞鉴定及血球计数
六、实验作业 1、将显微计数的结果记录于表1中，A表示5个中方格 中的总菌数，B表示菌液的稀释倍数。
二、实验原理 计数室的容积：
1mm（大方格的边长）×1mm（大方格的边长）×0.1mm（盖 玻片与载玻片之间的厚度）=0.1mm3（10-4ml）
酵母菌形态观察及死活细胞鉴定2
一、目的要求:
1、显微镜下观察细菌个体的形态。
2、学习环境中微生物的检查方法，并加 深对微生物分布广泛性的认识。
二、基本原理:
形态观察主要包括群体的形态和个体的形态观察。
细菌的基本形态主要分为球菌、杆菌、螺旋菌三大类，近 年还发现星状和四方形细菌等。细菌形态受培养时间、培养 基成分、浓度、培养温度、培养时间等发生变化。
死活细胞鉴定原理
美蓝是一种无毒性的染料。 美蓝有氧化型和还原型两种状态。 氧化型为蓝色，还原型无色。 酵母活细胞由于体内的新陈代谢作用，细胞内
具有较强的还原能力，能使美蓝由氧化型变为 还原型。 酵母死细胞或者代谢作用微弱的细胞，还原能 力弱，不能使美蓝由氧化型转变为还原型。
实验步骤
在载玻片中央加一滴0.1％美蓝染色液，染色 液过多会溢出，过少会在盖玻片下出现大量气 泡。
简单染色是利用单一染料对细菌进行染色。 细菌在中性、碱性或弱酸性溶液环境中通 常带负电荷，碱性染料（解离时分子的染 色部分带正电荷）如美兰、结晶紫等易与 细菌结合使其着色。
操作方法
1、涂片—枯草芽孢杆菌 2、干燥：室温自然干燥 3、固定：有菌膜的一面向上，通过火焰2－3次，
细 胞质凝固
4、染色：滴加染液(美蓝或者番红或者结晶 紫）染色时间为两分钟
细菌菌落大多表面光滑湿润，有光泽，一般菌落较小，质 地颜色均匀，同培养基结合不紧密。菌落特征与组成菌落的 细胞结构、生长状况、排列方式、好气性和运动性直接相关。
细菌个体微小，较透明，必须染色方可呈现。根据细菌个 体形态观察的不同要求，可将染色分为3种类型：简单染色、 鉴别染色、特殊染色。
简单染色法原理:
吸取少量酵母菌液，稀释后滴半滴在载玻片的 美篮染色液中，混合均匀；
酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别
南京林业大学实验报告实验四酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别（一）实验目的1、观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式；2、学习掌握区分酵母菌死、活细胞的染色方法；3、掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。
（二）实验原理酵母菌是多形的、不运动的单细胞真核微生物。
无性繁殖主要是出芽生殖。
本实验通过用美蓝染色浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。
美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的，用它来对酵母的活细胞进行染色。
三）实验器材1、菌种：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）培养约2d的麦芽汁斜面培养物；2、染色液和试剂：0.1% 吕氏碱性美蓝染液；3、器材：载玻片、盖玻片、酒精灯、擦镜纸、显微镜等。
(四）实验方法（美蓝浸片）在载玻片中央加一滴0.1％吕氏碱性美蓝染色液，用接种环挑取少量酵母菌苔放入上述液滴里，混合均匀；用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上；将制片放置约3min，先低倍镜后高倍镜观察酵母形态和出芽情况，并根据颜色区别死活细胞。
（五）注意事项1、加染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察；2、盖玻片不宜平着放下，以免产生气泡影响观察。
酵母菌死活细胞区别图（10×40倍下观察）死细胞（呈蓝色或淡蓝色）活细胞（无色）（六）心得体会：在制片的时候，先将盖玻片一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上，并且要避免产生气泡。
在用美篮染色的时候，注意染色液和菌液不宜过多或过少，并且应该尽量等量而且要混匀。
酵母菌形态观察及死活鉴别
酵母菌形态观察及死活鉴别
一、实验目的
1.认识并观察酵母菌的形态特征，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。
2.学习鉴别死活细胞的实验方法。
二、实验原理
1、酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。
2、本实验是通过美蓝染液浸片和碘液浸片来观察酵母的形态
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞
三、实验器材
酵母悬液、美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液、显微镜、载玻片、盖玻片
四、实训步骤
1、水-碘浸片观察
在载玻片中央滴一滴碘液，取一滴酵母悬液放在碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。
2、美蓝浸片观察
（1）在载玻片中央加一滴美蓝染色液，滴加一滴酵母菌放在染液中，混合均匀，染液不宜过多。
注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。
（2）将制片放置约3min 后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。
五、实验报告
绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征
六、注意事项
1、染色液不宜过多或过少，否则在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量的气泡，影响观察。
2、盖片时斜着放不易产生气泡。
1。
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实验材料
• 1. 培养2d的面包酵母斜面培养物 • 2. 0.1%吕氏碱性美蓝染液
实验方法
美蓝染液水浸片法
1. 滴一滴吕氏碱性美蓝染液于载玻片中央，无菌操作取酵母培 养物置于染液中，混合均匀。 2. 取盖玻片，将盖玻片一端与菌液接触，缓慢将盖玻片倾斜并 盖在菌液上。 3. 3min后，镜检。观察酵母菌形态及出芽情况，并根据细胞 颜色区别死活细胞。 4. 30min后，再次观察。
• 第6组：固体淀粉培养基：600ml，P243 蛋白胨6g，氯化钠3g，牛肉膏3g，可溶性淀粉1.2g，水 600ml，琼脂10g， 121℃灭菌20min。 • 第7组：明胶培养基，500ml，P243 蛋白胨5g，氯化钠2.5g，牛肉膏1.5g，明胶80g，水500ml ，每管7ml， 121℃灭菌20min。
• 第8组：蛋白胨水培养基：250ml，p244 蛋白胨2.5g，氯化钠1.25g，水250ml，每管7ml， 121℃ 灭菌20min
实验七 酵母菌的形态观察 与死活细胞鉴别
目的要求
1、观察酵母菌的形态及出芽生殖方式 2、学习区分酵母菌死活细胞的方法
实验原理
酵母菌是单细胞真核微生物， 其大小为常见细菌的几倍至几 十倍。大多数酵母采用出芽方 式进行繁殖。 美蓝是一种弱氧化剂，其氧化 态呈蓝色，还原态呈无色。用 美蓝对酵母细胞进行染色时， 由于新陈代谢，活细胞具有较 强的还原能力，可使美蓝由蓝 色的氧化型转变为无色的还原 型，染色后细胞呈无色。死细 胞或代谢能力弱的衰老细胞其 还原能力弱，染色后细胞呈蓝 色。
实验报告
• 绘的形态特征
• 第1组：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，1000ml，121℃灭菌 20min，P241 • 第2组：伊红美蓝培养基（EMB培养基）：伊红美蓝琼脂 22.5g, 水600ml, 121℃灭菌20min 20%乳糖水溶液120ml：24g加水120ml，115℃灭菌20min
第3组：3倍浓缩乳糖蛋白胨培养基100ml： 蛋白胨3g，氯化钠1.5g，水100ml 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液0.5ml，每管加5ml，共15管,内装倒置 小管，121℃灭菌20min。
第4-5组：普通浓度乳糖蛋白胨发酵培养基700ml：P244 蛋白胨7g，氯化钠3.5g，水700ml 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1.2ml， 每管加7ml，共45管，内装倒置小管 每管加10ml，共35管，内装倒置小管，121℃灭菌20min。