疟原虫检查sop
血疟原虫检检查标准操作规程
血疟原虫(MP)厚血片检查法（手工法）标准操作规程1. 实验原理应用瑞氏染色法对制备好的厚血片进行染色后在显微镜下查找疟原虫。
2. 标本采集2.1标本采集前病人准备：间日疟及三日疟患者应在发作后数小时至10余小时采血；恶性疟患者，应在发作后20h左右采血。
2.2标本种类：全血或末梢血2.3标本要求：厚血片的溶血要及时。
3. 标本储存：厚血片的放置期限在夏季不超过48h，冬季不超过62h。
4. 标本运输：室温运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染。
6. 操作步骤6.1 在洁净玻片上，滴患者血液2滴。
6.2 用推片角将血液由内向外转涂成直径约1cm、厚薄均匀的血膜，在室温中自然干燥。
6.3 在干燥的血膜上滴加蒸馏水数滴，完全覆盖血膜，溶血数分钟。
脱去血红蛋白的血膜呈浅灰色，倾去溶血液。
6.4 不必待干，进行瑞氏染色。
6.5 干后镜检。
7. 结果判断与分析：在油镜下观察20个视野或以上才能报告“未检出疟原虫”；发现虫体后还应在薄血片上进行分类鉴别。
8. 临床意义：本实验有利于提高疟原虫的阳性检出率。
9. 操作性能：快速简便、阳性检出率高、利于人群普查初筛10. 方法局限性10.1 易受溶血不完全的影响。
10.2 经验缺乏者易受其他杂物的影响。
10.3 存在主观判断的失误10.4 不易鉴别出疟原虫的种类。
11. 参考文献中国人民共和国卫生部医政司编.全国临床检验操作规程（第二版）.1997,85-86 12. 注意事项12.1 染色后，水洗时不要先倒去染液，应让清水流进染液，使沉渣冲走。
12.2 注意区别易与疟原虫混淆的其他杂物。
血疟原虫(MP)薄血片检查法（手工法）标准操作规程1. 实验原理应用瑞氏染色法对制备好的薄血片进行染色后在显微镜下查找疟原虫，并鉴别其形态种类。
2. 标本采集2.1 标本采集前病人准备：间日疟及三日疟患者应在发作后数小时至10余小时采血；恶性疟患者，应在发作后20h左右采血。
2.2 标本种类：全血或末梢血2.3 标本要求：薄血片的血膜厚度要适度均匀以利镜检。
血疟原虫检查标准操作程序
血疟原虫检查标准操作程序1 检验目的应用瑞氏-吉姆萨染色法对制备好的血片进行染色后在显微镜下观察，判断是否感染疟原虫。
2 检测原理瑞氏染料由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成。
将适量伊红、美蓝溶解在甲醇中，即为瑞氏染料。
瑞氏染色既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。
各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样。
核与酸性染料伊红结合,染成粉红色；胞质与碱性染料美蓝或天青结合，染蓝色;胞质中含有血红蛋日白消化分解后的产物-疟色素,疟色素不着色，为棕黄色或棕褐色。
3 性能特征无4 标本要求（包括病人准备、容器、样本类型等)4.1 病人准备:间日疟及三日患者应在发作后数小时至10余小时采血，此时，早期滋养体已发育成易于鉴别形态的晚期滋养体；恶性疟患者，应在发作后20小时左右采血。
4.2 标本类型:静脉全血4.3 标本容器: EDTA-K2抗凝管4.4 标本存放:4.4.1未检测标本的存放:放在工作台标本架。
4.4.2已拉测标本的存放:检毕标本排列于样本架,置检毕标本台，由卫生员统一转入2-8℃标本冷藏库保存7天，血片用乙酸乙酯脱油保存于存片盒。
4.5 标本运输:室温条件下运输。
4.6 标本拒收标准:参照《用户手册》4.7 检测时限: 1小时。
5 仪器和试剂5.1 试剂名称:瑞姬氏染色液5.1.1瑞姬氏染色液:瑞氏染料0.5g、姬氏染料0.5g，加入500ml甲醇中，混匀溶解后备用。
5.1.2pH6.5磷酸盐缓沖液:磷酸二氢钾0.3g、磷酸氢二钠0.2g,加入100ml蒸馏水中溶解。
5.2 试剂来源:珠海贝索。
5.3 仪器:普通光学显微镜。
6 环境和安全:6.1 检测环境:应符合《显微镜标准操作程序》相关要求。
6.2 设备的安全操作:详见《显微镜标准操作程序》。
6.3 生物安全:6.3.1血液标本的运送必须保证运送过程中的生物安全，防止溢出。
血液标本溢出后，应该立即对污染的环境和设备进行消毒处理。
疟原虫检验专业技术标准
A typical Plasmodium vivax presentation
A thin film from a 22 year old male holidaying in Lombok (Indonesia) one month previously. Intermittent fevers since returning.
5. 核可能出 现在环状 体边缘
6.
卵形疟（P. ovale）诊断要点
1. 红细胞涨大
2. 常见慧星状 ( 也称齿轮状)
3. 环粗大
4. 薛氏点明显
5. 成熟滋养体类 似三日疟原虫 但更粗大
6. 成熟裂殖体约 含4-12个裂殖 子
7.
种
周 围 血 红细胞形态
疟原虫形态
中发育
阶段
大小
点彩
胞浆
疟色素
恶性疟 P.falciparum
● 分布热带、亚热带，是非洲的重要疾病
● 我国流行区域为云南省和海南省
● 四种疟原虫中致病力最强，无免疫力者 感染后出现急性症状,不及时治疗可危及 生命
间日疟 P.vivax
● 遍布全球温带地区及大片热带地区。在热 带非洲，特别是西非则很少见
● 间日疟原虫分布于我国大部分地区,主要是中部地区 ● 病程良性, 有复发
间日疟（P. vivax ）鉴定要点
红细胞通常涨大
薛氏点明显
成熟环状体粗大
滋养体胞浆有阿米 巴样伪足
血片中可见各期的 原虫形态
成熟裂殖体约含1224个裂殖子
疟原虫检验专业技术标准
质量好的染色 : 显微镜下核呈红色,胞浆呈蓝色 如果血片偏红,说明染液偏酸性 如果血片偏蓝,说明染液偏硷性
外观吉氏染色血片
偏酸 标准 偏碱
染色过程
血片干燥后, 用甲醇固定薄血膜 血片平置于染色板上 用吸管吸取已稀释的吉氏液约2ml于厚薄血 膜上，染色10 min 清水细缓轻轻冲去染液 置玻片于插板上，自然晾干然会影响血片制作和镜检结 果．
● 用甲醇固定薄血膜时，甲醇不要接触到厚血膜 ● 血片充分干燥后染色，清水细缓冲洗。防止厚血膜脱落. ● 配置吉氏母液必须过滤除去杂质颗粒，有助于提高镜检
质量．
疟原虫密度计算
计算疟原虫密度的三种方法：
● 白细胞原虫密度计数法 (厚血膜 WHO) ● 半定量计数法 (厚血膜) ● 红细胞感染密度计算法 (薄血膜)
薄血膜再取一小滴血.将血置于第一张玻片离厚血膜适 当远的地方.将采血玻片(推片)的边缘紧贴载玻片使 血液沿边缘散开(如图示).
正确的推片姿势
标准的疟疾厚薄血膜片位置
各种不同的疟疾血片涂制法：
标准血片
门诊发热病人血片 居民普查血片
厚薄血膜的标准
●厚血膜血量适宜，不宜过多或过少 ●薄血膜平整,无皱折和空泡.红细胞单层排列
取血部位和血量
取血方法 采血部位：耳 垂或无名指，通常在耳垂 取血，先用75%酒精棉球 消毒取血部位，待酒精干 后，用左手拇指和食指紧 捏耳垂上方或无名指指尖， 右手持消毒针迅速刺入皮 肤，不宜过深或过浅。然 后用右手中指轻轻挤压出 血。厚血膜血量约一粒米 大小。
厚血膜 用推片的一角，从取血部位刮取约4微升血量 （相当于火柴头大小），使血滴与平置的载玻片 接触，再由里向外一个方向旋转，转2~4圈，涂成 直径0.8~1厘米大小圆形厚血膜。
检查疟原虫染应采集的标,本
检查疟原虫染应采集的标,本
疟疾检测方法:血涂片找疟原虫，检测流程:确定采血对象，采集标本，核对化验单，记录相关登记本，制作血涂片，最后在显微镜下找疟原虫。
1.疟疾检测流程:
(1)采血对象。
临床诊断为疟疾、疑似疟疾和不明原因的发热病人。
(2)化验单，由临床医师开具化验单，嘱咐患者到化验室血检，检验者核对患者信息。
(3)镜检人员对血检对象按照登记本要求进行登记。
(4)消毒采血部位，用75％乙醇对采血部位消毒，采血部位多在手指末端。
也可在耳垂采血。
(5)待采血部位干后，采集血标本。
(6)血膜制作，取清洗过的玻片2张，1张做载片、1张做推片，要求推片的一侧边缘光滑、用右手大拇指和食指夹持推片中部。
(7)血膜染色，建议首选姬姆萨氏染液。
先用甲醇固定薄片。
完全晾干后与厚片同时染色。
如选用瑞氏染色则先滴几滴蒸馏水在厚血膜上溶血至灰白色，倾去水滴、晾干后按说明进行染色。
(8)镜检。
2.风险提示:疟疾为乙类法定传染病，通过按蚊叮咬接触传播，血检阳性，应及时到专科医院进行规范治疗。
疟原虫血检工作制度
疟原虫血检工作制度
开展血检工作是基本消除疟疾重点检测手段，它对监测疟疾疫情动态，及时发现病人，及时根治，及时制定相应防治措施，控制疟疾流行均有十分重要的意义，为一步加强我镇的疟疾防控工作，提高疟疾涂片的质量，成立疟疾血检工作制度。
一、临床医生、检验科医生应严格按照登记本项目内容，详细登记，不得漏项，检验科医生负责将开据疟疾血检申请单的临床医生姓名登记到患者相关信息一栏。
二、检验科医生应严格按照疟原虫镜检操作规程进行疟原虫镜检工作。
三、对前来进行疟疾血检的患者采血，并按操作规程开展疟原虫镜检工作，做好血片编号。
四、阴、阳性血片要分类存放、长期保存，以备上级部门检查复核。
五、院防保科定期不定期就疟疾涂片完成情况及质量开展督导检查并对结果进行通报。
疟原虫检验技术
正确的推片姿势
标准的疟疾厚薄血膜片位置
各种不同的疟疾血片涂制法：
标准血片
门诊发热病人血片 居民普查血片
厚薄血膜的标准
●厚血膜血量适宜，不宜过多或过少
●薄血膜平整,无皱折和空泡.红细胞单层排列
血片染色
两种染色方法: ●吉氏染色法 ●瑞氏染色法
常用吉氏染色法
吉氏染液(原液)的配置
吉氏染粉 (Azure B typ来自) 5g疟原虫人类四种疟原虫的 基 本特征
感染人的疟原虫有四种:
恶性疟原虫 P. falciparum 间日疟原虫 P. vivax 三日疟原虫 P. malariae 卵形疟原虫 P. ovale
恶性疟 P.falciparum
● 四种疟原虫中致病力最强 ● 无免疫力者感染后出现急性症状,不及时治
疗可危及生命 ● 在我国主要流行云南省和海南省
2. 显微镜下选择红细胞排列整齐密集，无重迭的视 野（ 300-500红细胞/视野）
3. 按一定顺序移动血片记数红细胞的同时，记录疟 原虫数
4. 如果能见到疟原虫，但是记数5000～10000个红细胞 时却没有感染红细胞，那么设定感染率为＜１％
如何确定疟原虫血片为阴性
● 检查全部厚血膜未查见疟原虫 ● 最少检查100个厚血膜油镜视野未查见
感染红细胞边 缘破碎状
薛氏点明显疟 色素棕黄色,类 似间日疟原虫
种
周 围 血 红细胞形态
疟原虫形态
中发育
阶段
大小
点彩
胞浆
疟色素
裂殖子数
恶 性 疟 原 环状体
虫
配子体
正常
常见 茂氏 点
环状体钎细， 常见２个核
粗黑，配子 体中明显
疟原虫镜检规章制度
疟原虫镜检规章制度第一章总则第一条为规范疟原虫镜检工作，提高疟疾诊断准确率，保障患者健康，特制定本规章制度。
第二条本规章制度适用于医疗机构、检验检测机构开展疟原虫镜检工作。
第三条疟原虫镜检应遵守相关法律法规和相关标准，确保检测结果准确可靠。
第四条医疗机构和检验检测机构应建立健全疟原虫镜检管理制度，保证检测人员熟练掌握检测技术。
第五条疟原虫镜检工作应当严格遵守检验检测质量管理规范，确保检测结果准确。
第六条医疗机构和检验检测机构应当配备专业的技术人员从事疟原虫镜检工作。
第七条疟原虫镜检工作应当遵循“安全、准确、迅速”的原则，保证检测工作质量和效率。
第八条医疗机构和检验检测机构应当建立健全疟原虫镜检的质量控制和质量保证体系，确保检测结果可靠。
第二章疟原虫镜检设备和耗材第九条医疗机构和检验检测机构应当购置标准符合要求的疟原虫镜检设备，并定期维护和保养设备。
第十条医疗机构和检验检测机构应当使用符合要求的疟原虫镜检耗材，保证检测过程的质量和准确性。
第十一条疟原虫镜检设备和耗材应当定期检测和校准，确保检测结果准确可靠。
第三章疟原虫镜检人员第十二条从事疟原虫镜检工作的人员应具有相应的专业技能和执业资格，熟练掌握检测技术。
第十三条疟原虫镜检人员应当遵守相关法律法规和相关标准，保证检测结果的准确性和可靠性。
第十四条疟原虫镜检人员应当接受规范的培训，不断提升自身的专业水平和技能。
第十五条疟原虫镜检人员应当定期进行健康体检，确保身体健康，保障检测工作的顺利进行。
第四章疟原虫镜检流程第十六条疟原虫镜检工作应当遵循严格的操作流程，确保检测过程准确无误。
第十七条疟原虫镜检工作应当按照标准操作规程进行，规范操作步骤，确保检测结果的可靠性。
第十八条疟原虫镜检的检测和分析过程应当记录详细，以备查证。
第十九条疟原虫镜检工作完成后应及时整理和归档相关资料，保证检测结果能够有效利用。
第五章疟原虫镜检质量控制第二十条医疗机构和检验检测机构应当建立健全疟原虫镜检的质量控制和质量保证体系，加强对检测工作的监督和管理。
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4.7注意易与疟原虫混淆的其他杂物区别，特别是厚血片检查时，应在薄片上仔细寻找证实才能报告。
除上述3种疟原虫外，在我国云南曾发现过少数卵形疟原虫引起的病例。卵形疟原虫的形态基本上与三日疟原虫相似，但虫体稍大，受感染的红细胞略胀大，且红细胞边缘是不整齐锯齿状，滋养体后期及裂殖体前期的原虫呈圆形或卵圆形。
结实，深红色，位于一边
结实，深红色，位于中央
疟色素
沿边分布
沿边分布
黑褐色，集于中央
红细胞
胀大，色较淡
正常或缩小
正常，偶然缩小，色深
附图：镜下所见疟原虫形态：
间日疟原虫
三日疟原虫
恶性疟原虫
环
状
体
滋
养
体
——
——
裂
殖
体
——
配
子
体
很大
较小
在末梢血液中查不到
细胞浆
松散，比较不规则
坚实较圆
裂殖子数目
12-24个，平均16个
6-12个
裂殖子形态
排列不规则
排列不规则或呈花朵状
配 子 母 体
虫体大小
圆形，
约为红细胞1/2以上
圆形，
与红细胞等大或较小
半月形，两端钝圆（雄），两端较尖（雌）
细胞浆
深蓝色
深蓝色
蓝色
染色质
结实，深红色，位于一边
与间日疟原虫同
红色小点，1个环状体具有1-2个-或更多
晚 期 滋 养 体
虫体大小
可很大，甚至充满整个红细胞
较小
末梢血液中查不到
细胞浆
呈阿米巴状，变化很多
呈坚实带状，变化不多
疟色素
棕黄色，呈微小短杆状，四散分布
黄绿色，呈较粗颗粒状，四散分布
斑点
薛氏小点，鲜红细小，均匀分布
齐氏小点，红色
裂 殖 体
虫体大小
3.2.3在干燥的血膜上滴加蒸馏水数滴，完全覆盖血膜，溶血约5min。脱去血红蛋白的血膜呈浅灰色，倾去溶血液。
3.2.4不必待干，进行染色，染色法同薄片。
3.2.5干后镜检（结果见附表和附图）
4.注意事项：
4.1采血时间间日疟及三日疟患者应在发作后数小时至10h左右采血，此时，早期滋养体已发育成易于鉴别形态的晚期滋养体；恶性疟患者，应在发作后20h左右采血。
4.2厚血片的溶血要及时，溶血不完全，会影响检验质量。厚血片的存放期限在夏季不超过48h，冬季不超过72h。
4.3染色后，水洗时不要先倒去染液，应让流水把染液带走，使沉渣漂浮冲走。
4.4油镜检查，薄片须至少检查100个视野，厚血片至少检查20个视野，才能报告“未检出疟原虫”。
4.5疟原虫必须分类报告。找到环状体后，须再仔细寻找更为成熟的阶段，以便分类；如确实未找到更为成熟的疟疾原虫，可报告为“检出环状体疟原虫”。
附表：薄血片上3种疟原虫形态特点：
形态特点间日疟Leabharlann 虫三日疟原虫恶性疟原虫
（ 环 状 体）
早 期 滋 养 体
虫体大小
较大，
约为红细胞的1/3
较大，
约为红细胞的1/3
较小，
约为红细胞的1/6
细胞浆
浅蓝色，
呈较薄之环状
浅蓝色，
呈较厚之环状
浅蓝色，环状较细，常位于细胞边缘，有时1个细胞内有2个环状体
染色质
可很大，甚至充满整个红细胞
1．目的：
检测有无疟原虫感染。
2．取材：
静脉穿刺抽取外周血，EDTA抗凝。
3．操作：
3.1.薄血片法
3.1.1.取外周血1滴于载玻片上，以常法推制成薄涂片。
3.1..2血膜完全干燥后即可染色。用瑞氏-姬姆萨复合染色或瑞氏染色法均可。干后镜检。
3.2厚血片法
3.2.1在洁净玻片上，滴患者血液2滴。
3.2.2用推玻片将血液由内向外转涂成直径约1cm厚薄的血膜，在室温中自然干燥。