血液涂片检查标准操作程序
显微镜观察人血涂片实验步骤

显微镜观察人血涂片实验步骤一、实验前准备在进行显微镜观察人血涂片实验之前,需要进行一些准备工作。
1.实验材料准备–显微镜:确保显微镜正常工作,并清洁干净。
–血涂片:需要具备清晰的细胞结构,可通过医疗机构或实验室购买。
–血液涂片染色剂:例如伊红或金标染色液。
2.仪器准备–将显微镜放置在平稳、光线充足的工作台上。
–调整显微镜的放大倍数和焦距,以便观察到清晰的细胞结构。
二、制备血涂片制备血涂片是显微镜观察人血涂片实验的前提步骤。
1.取血–用消毒酒精擦拭被抽血部位,以减少感染的风险。
–使用一次性注射器抽取适量的血液,一般约为0.1毫升。
2.制备血涂片–取一片干净的载片,用火炬或酒精灯烘烤片面,以增强细胞附着力。
–将一滴血液滴在载片的一端,用另一片载片将血液平均涂抹开。
3.干燥与固定–将血涂片平放在无尘无湿的地方,自然晾干。
–可在固定前,将血涂片浸泡在无水乙醇等溶剂中,进行细胞固定。
三、染色染色是为了使细胞结构更为清晰、易于观察。
1.准备染色剂–根据实验需求,选择适合的染色剂,如伊红或金标染色液。
–根据染色剂的使用说明,配置合适的浓度。
2.染色过程–将干燥的血涂片浸入染色剂中,保持一定时间。
时间过长会导致过度染色,影响观察结果。
–取出血涂片并用水洗净,以去除过多的染色剂。
四、显微镜观察与记录准备就绪的血涂片可以通过显微镜进行观察和记录。
1.调整显微镜–根据需要,选择合适的镜头和放大倍数。
–调节焦距,使细胞结构清晰可见。
2.观察细胞结构–将染色后的血涂片放置在显微镜载片夹中,夹好后放入显微镜镜筒中。
–通过目镜观察细胞的外观、形状和结构。
3.记录观察结果–使用实验笔记录观察到的结构、数量、颜色等相关信息。
–可以使用绘图工具绘制细胞的结构示意图。
五、清洗与保存实验完成后,需要对实验仪器和材料进行清洗和保存。
1.清洗显微镜–将显微镜镜头、物镜和载片夹等部分用适当方式进行清洗,以去除污渍和残留物。
2.保存血涂片–将观察完毕的血涂片保存在干燥、无尘的地方。
血液涂片的制作与染色标准操作程序

血液涂片的制作与染色标准操作程序1 目的指导如何正确制作血液涂片与染色。
2 器材和试剂2.1器材:清洁玻片、推片。
2.2试剂:瑞氏-姬姆萨复合染色液、pH 6.4~6.8 磷酸盐缓冲液。
3 程序步骤3.1 血涂片制作取末梢血1 滴,置载玻片一端,取另一边缘光滑的推片,放在血滴前面慢慢后移,接触血滴后稍停。
血液即沿推片散开,将推片与载片保持30 ~45°角,向前平稳均匀推动推片,载片上便留下一层薄血膜。
血涂片制成后,立即在空气中挥动,使其迅速干燥,以免血细胞变形。
血膜干燥后,用铅笔在血膜的一侧写上病人姓名或编号。
3.2 血涂片染色平置玻片于染色架上,滴加染液3~5 滴,使其迅速盖满血膜,约1分钟后,滴加缓冲液5~10 滴,轻轻摇动玻片或对准血片吹气,与染液充分混合,5 ~10 分钟后用水冲去染液,待干。
4质量控制4.1 一张良好的血片,厚薄要适宜,头体尾要明显,细胞分布要均匀,膜的边缘要整齐,并留有一定的空隙。
涂片时,血滴愈大,角度愈大,推片速度愈快则血膜愈厚,反之血膜愈薄。
太薄的血膜片50 %的白细胞集中于边缘或尾部,不利于白细胞分类。
如果血膜分布不匀,主要是推片不整齐,用力不均匀,载片不清洁所致。
4.2 血膜片的质量要求是厚薄均匀适度,低倍镜下观察全片,细胞不重叠,头尾及两侧有一定的空隙,血膜头部有明确的病人标志。
4.3 有些体积较大的特殊细胞常在血膜的尾部出现,因此蜡笔划线时应注意保存血膜尾部细胞,血膜必须充分干燥,否则在染色过程中容易脱落。
4.4 配制染料须用优质甲醇,稀释染液用缓冲液,因为缓冲液的pH 对细胞染色的影响很重要。
在偏酸性环境中正电荷增多,在偏碱性环境中负电荷增多,又因为细胞着色对氢离子浓度十分敏感。
如果染色偏碱,原是紫红色的中性颗粒则染成深蓝色,造成识别困难。
冲洗须用中性水,虽亦可用自来水(但不能保持稳定)。
4.5 对所用染液应进行预染试验,新配制的染液放置一段时间后其中的美蓝逐渐氧化成天青B ,天青B 对细胞核的着色效果比美蓝好,因此,瑞氏染液放置时间越长染色效果越好,临床上称之为成熟。
血涂片的制作流程

血涂片的制作流程
血涂片是一种常见的临床检查方法,用于观察血液中的细胞形态和数量,以帮助医生诊断疾病。
下面将介绍血涂片的制作流程。
1.采集血液样本
首先需要采集患者的血液样本。
通常采用的方法是在患者的手臂上绑上一条绷带,使血管充血,然后用一根针头穿刺血管,将血液采集到一根试管中。
2.制作血涂片
将采集到的血液样本滴在玻片上,然后用另一根玻片将其涂开,使血液均匀地分布在玻片上。
这个过程需要非常小心,以避免血液样本的污染或损坏。
3.固定血涂片
将制作好的血涂片放在一个固定剂中,通常使用的是甲醛或乙醇。
这个过程可以固定细胞的形态和结构,以便更好地观察。
4.染色
将固定好的血涂片放在染色剂中,通常使用的是伊红染或吉姆萨染。
这个过程可以使细胞更加清晰地显示出来,以便更好地观察和分析。
5.观察和分析
将染好色的血涂片放在显微镜下观察和分析。
医生可以通过观察细胞的形态、大小、数量和排列方式来判断患者的健康状况,例如是否存在贫血、感染或癌症等疾病。
血涂片制作流程需要非常小心和精确,以确保获得准确的结果。
这个过程需要专业的技能和经验,只有经过专业的培训和实践,才能够熟练掌握。
血涂片的操作方法

血涂片的操作方法
血涂片是一种常见的实验技术,用于观察血液中的细胞形态和数量。
下面是血涂片的操作方法:
1. 准备材料:显微镜玻璃片、无菌注射器、血液样本(静脉血或毛细血管血)。
2. 取一只无菌注射器,将其抽空。
然后将血液样本放入注射器中,释放一到两滴血液样本到玻片中。
3. 将另一只玻片压平在已经滴有血液的玻片上,使血液样本均匀涂开。
4. 沿着玻片的一侧,将已经涂有血液的玻片平行于另一只干净的玻片上,使其逐渐移动。
5. 保持持续的均匀速度,将带有血液样本的玻片从一侧滑动到另一侧,形成一层均匀的涂片。
6. 确保血液干燥后,用染色剂(如Wright染色液)对涂片进行染色。
按照染色剂的说明操作。
7. 将涂片放在显微镜下,使用适当的放大倍率(如100倍或1000倍)观察涂
片。
注意细胞数量、形态和其他特征。
血涂片操作是一个相对简单的过程,但需要仔细操作以确保获取准确的结果。
在进行操作时,请注意实验室的安全规范,并遵守任何实验室指南。
血涂片及染色操作程序

血涂片及染色操作程序集团企业公司编码:(LL3698-KKI1269-TM2483-LUI12689-ITT289-1.目的规范血涂片及染色操作程序,确保检测结果准确度。
2.标本种类人体静脉血或末梢血。
3.适用范围操作区的血涂片及染色。
4.染色原理血涂片染色过程既有物理吸附作用,又有化学亲和作用。
由于血细胞内不同结构所含有的化学成分不同,对瑞氏染料亲和力也不同,涂片经染色后,各类细胞呈现不同的着色,从而达到辨别其形态、特征的目的。
5.试剂与器材5.1一次性采血针、末梢采血器、棉签、碘酒等。
5.2标准级显微镜载玻片、推片、瑞氏染液、OLYMPUSCH20双目显微镜(日本OLYMPUS公司)6.操作步骤6.1薄血膜推片法取血标本一滴置载玻片的一端1cm处或载玻片一侧的3∕4处。
以边缘平滑的推片端,从血滴前沿方向接触血液,使血液沿推片散开,推片与载玻片保持25~30o的平面夹角,平稳地将血向前推动,血液即在载玻片上形成一薄层血膜;将制成的血膜在空气中挥动,使迅速干燥,以免血细胞皱缩。
天气寒冷或潮湿时,应置于37℃温箱中保温促干,以免细胞皱缩。
最后在载玻片的一端用记号笔编号。
6.2厚血膜涂片法取新鲜血液1滴于载玻片的中央,用推片的一角将血滴由内向外旋转涂布,制成厚薄均匀、直径约1.5cm的圆形血膜,待自然干燥后,滴加数滴蒸馏水,使红细胞溶解,脱去血红蛋白,倾去水,血涂片干燥后即可染色并用显微镜检查。
本方法特别适合检查疟原虫、微丝蚴等。
6.3染色平置玻片于染色架上加瑞氏染液3~5滴染色,使其迅速盖满血膜。
约1分钟后滴加缓冲液布满,轻轻摇动玻片,使染色液充分混合。
5~10分钟后,用水冲去染液,待干。
7.标本要求7.1玻片必须清洁、干燥、中性且无油腻。
7.2最好使用非抗凝血,也可使用EDTA抗凝血,但必须在采集后4小时内制成血涂片。
7.3使用抗凝血标本不宜冷藏,用前必须混匀。
8.注意事项8.1推制的涂片应厚薄适宜,血膜应呈舌状,头、体、尾清晰可分。
实验6-人血永久涂片

实验6-人血永久涂片实验目的:能够运用显微镜观看人血永久涂片,识别红细胞、白细胞和血小板。
操作步骤:三、操作注意事项安放显微镜中的“7cm ”是指距身前的边缘,而非实验台左侧边缘,那个距离与手掌的宽度相仿;手绝对不能接触目镜和物镜镜头的玻璃部分,镜头只能用擦镜纸擦拭;取用器材 1、一手握镜臂,一手托镜座,镜筒向前,镜臂向后,将显微镜从显微镜箱中取出;将显微镜安放在实验台距身前边缘7cm 左右处,略偏左。
安装镜头2、安装好物镜和目镜。
对光3、转动粗准焦螺旋,使镜筒上升。
4、转动转换器,使低倍物镜正对通光孔。
5、转动遮光器,选择较大光圈对准通光孔。
6、左眼凝视目镜内,右眼睁开,用手转动反光镜(要能依照光线强弱选择镜面),看到明亮视野。
用低倍镜 观看人血永久涂片7、用洁净的纱布将人血永久涂片擦洁净后放在载物台上,使涂片尽量正对通光孔的中心,用压片夹固定。
8、两眼从一侧凝视物镜;双手顺时针方向转动粗准焦螺旋;使镜筒慢慢下降,直到物镜头接近涂片为止。
9、两眼睁开,左眼凝视目镜;双手逆时针方向转动粗准焦螺旋,使镜筒慢慢上升,直至看到物像;若物像不在视野中央,移动装片使物像移到视野中央。
识别红细胞、白细胞和血小板10、能够清晰的看到物像,并能辨论出红细胞、白细胞和血小板,必要时可转动细准焦螺旋。
整理器材11、实验终止后,先提升镜筒,取下人血永久涂片、目镜,盖上镜头盖,转动转换器,把两物镜偏到通光孔两旁,使镜筒降到最低位置,反光镜竖立存放,显微镜外表用纱布擦拭,镜头用擦镜纸擦拭,将显微镜放回显微镜箱。
12、整理好仪器,清理好桌面,将人血永久涂片放回原处并合理存放废品(整理不到位要扣分)。
不能用手扳物镜转换镜头,要转动转换器(安装镜头的部位,大金属圆盘);对光后会看到视野专门明亮,打开实验台上的灯对光后甚至会专门耀眼;对光后,不能移动显微镜;不能单手转动准焦螺旋,尽量不在高倍镜下转粗准焦螺旋;安放涂片时,需要用两个压片夹压住涂片;由于血液中白细胞的数量最少,需要学生认确实全方位的观看人血永久涂片;区分开杂质和红细胞、白细胞、血小板。
血涂片及染色操作程序

1.目(d e)规范血涂片及染色操作程序,确保检测结果准确度.2.标本种类人体静脉血或末梢血.3.适用范围操作区(de)血涂片及染色.4.染色原理血涂片染色过程既有物理吸附作用,又有化学亲和作用.由于血细胞内不同结构所含有(de)化学成分不同,对瑞氏染料亲和力也不同,涂片经染色后,各类细胞呈现不同(de)着色,从而达到辨别其形态、特征(de)目(de).5.试剂与器材5.1一次性采血针、末梢采血器、棉签、碘酒等.5.2标准级显微镜载玻片、推片、瑞氏染液、OLYMPUSCH20双目显微镜(日本OLYMPUS公司)6.操作步骤6.1薄血膜推片法取血标本一滴置载玻片(de)一端1cm处或载玻片一侧(de)3∕4处.以边缘平滑(de)推片端,从血滴前沿方向接触血液,使血液沿推片散开,推片与载玻片保持25~30o(de)平面夹角,平稳地将血向前推动,血液即在载玻片上形成一薄层血膜;将制成(de)血膜在空气中挥动,使迅速干燥,以免血细胞皱缩.天气寒冷或潮湿时,应置于37℃温箱中保温促干,以免细胞皱缩.最后在载玻片(de)一端用记号笔编号.6.2厚血膜涂片法取新鲜血液1滴于载玻片(de)中央,用推片(de)一角将血滴由内向外旋转涂布,制成厚薄均匀、直径约1.5cm(de)圆形血膜,待自然干燥后,滴加数滴蒸馏水,使红细胞溶解,脱去血红蛋白,倾去水,血涂片干燥后即可染色并用显微镜检查.本方法特别适合检查疟原虫、微丝蚴等.6.3染色平置玻片于染色架上加瑞氏染液3~5滴染色,使其迅速盖满血膜.约1分钟后滴加缓冲液布满,轻轻摇动玻片,使染色液充分混合.5~10分钟后,用水冲去染液,待干.7.标本要求7.1玻片必须清洁、干燥、中性且无油腻.7.2最好使用非抗凝血,也可使用EDTA抗凝血,但必须在采集后4小时内制成血涂片.7.3使用抗凝血标本不宜冷藏,用前必须混匀.8.注意事项8.1推制(de)涂片应厚薄适宜,血膜应呈舌状,头、体、尾清晰可分.8.2涂片(de)好坏与血滴大小、推片与载片之间角度、推片时(de)速度有关,血滴大、角度大、速度快,则血膜厚;反之则血膜薄.8.3血膜分布不匀,主要是推片边缘不齐、用力不匀或载玻片不清洁所致.8.4瑞氏染液使用后,要迅速盖好,避免挥发.8.5血膜要干透后才能染色,否则染色时易脱落,应在1小时内染色.8.6染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关,冬季室温过低时,染色时间要适当延长.8.7冲洗时不能先倒掉染液,应以流水冲,防染料沉着.冲洗时间也不能长.8.8染色过淡,可复染.染色过深可用水冲洗或浸泡,还可用甲醇脱色.参考文献1.中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程(第3版).南京:东南大学出版社,2006.2.江苏省卫生厅.医院检验科建设管理规范(第2版).南京:东南大学出版社,2013.。
血液涂片检查标准操作程序

SOP_09-1 血液涂片检查标准操作程序一、目的:统一项目操作规程,严格检验质量标准,为临床提供及时、可靠的结果报告。
二、适用范围:血液寄生虫检验。
三、操作人员:检验科授权工作人员。
四、操作步骤:1 原理:血液制成细胞分布均匀的膜涂片或厚涂片经溶血后,运用复合染料染色,观察细胞形态、结构、内容物等,以鉴别、判断血液中的异常细胞和寄生虫。
2 试剂:由台湾贝索公司提供。
2.1 瑞氏-姬姆萨复合染色液:2.2 碱性亚甲兰染液:2.3 煌焦油蓝生理盐水溶液:3 方法:3.1 红细胞检查:正常红细胞呈圆形,中央略凹陷,大小较为一致,直径为 6~9μm。
3.1.1 大小异常红细胞:各种贫血时,红细胞可出现大小不一,凡直径>10μm者称大红细;>15μm者称巨红细胞,常见于巨幼细胞性贫血、肝脏疾病等;直径<6μm者称为小红细胞,多见于缺铁性贫血等疾病。
3.1.2 形态异常红细胞:3.1.2.1 球形红细胞:红细胞直径通常<6μm,厚度增加,通常>2.6μm,因而红细胞呈小圆球形,细胞中心区血红蛋白含量较正常红细胞多,常见于:遗传性球形细胞增多症;自身免疫性溶血性贫血;异常血红蛋白病(HbS及HbC病等)。
3.1.2.2 椭圆形红细胞:红细胞呈椭圆形,横径缩短,长径增大,有时可呈畸形。
正常人血液中也可见到,但最多不超过15%。
增多见于:遗传性椭圆形细胞增多症,一般要高于25%~50%才有诊断价值;大细胞性贫血,可达25%;其他各类贫血都可有不同程度的增多。
3.1.2.3 靶形红细胞:比正常红细胞扁薄,中心有少许血红蛋白,部分可与周围的血红蛋白连接,边缘部染色深,故呈靶状。
主要见于:地中海贫血;严重缺铁性贫血;一些血红蛋白病(血红蛋白C、D、E、S病);肝病、脾切除后及阻塞性黄疸等。
3.1.2.4 镰形红细胞:细胞狭长似镰刀,也可呈麦粒状或冬青叶样,主要见于遗传性镰形红细胞增多症。
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SOP_09-1 血液涂片检查标准操作程序一、目的:统一项目操作规程,严格检验质量标准,为临床提供及时、可靠的结果报告。
二、适用范围:血液寄生虫检验。
三、操作人员:检验科授权工作人员。
四、操作步骤:1 原理:血液制成细胞分布均匀的膜涂片或厚涂片经溶血后,运用复合染料染色,观察细胞形态、结构、内容物等,以鉴别、判断血液中的异常细胞和寄生虫。
2 试剂:由台湾贝索公司提供。
2.1 瑞氏-姬姆萨复合染色液:2.2 碱性亚甲兰染液:2.3 煌焦油蓝生理盐水溶液:3 方法:3.1 红细胞检查:正常红细胞呈圆形,中央略凹陷,大小较为一致,直径为 6~9μm。
3.1.1 大小异常红细胞:各种贫血时,红细胞可出现大小不一,凡直径>10μm者称大红细;>15μm者称巨红细胞,常见于巨幼细胞性贫血、肝脏疾病等;直径<6μm者称为小红细胞,多见于缺铁性贫血等疾病。
3.1.2 形态异常红细胞:3.1.2.1 球形红细胞:红细胞直径通常<6μm,厚度增加,通常>2.6μm,因而红细胞呈小圆球形,细胞中心区血红蛋白含量较正常红细胞多,常见于:遗传性球形细胞增多症;自身免疫性溶血性贫血;异常血红蛋白病(HbS及HbC病等)。
3.1.2.2 椭圆形红细胞:红细胞呈椭圆形,横径缩短,长径增大,有时可呈畸形。
正常人血液中也可见到,但最多不超过15%。
增多见于:遗传性椭圆形细胞增多症,一般要高于25%~50%才有诊断价值;大细胞性贫血,可达25%;其他各类贫血都可有不同程度的增多。
3.1.2.3 靶形红细胞:比正常红细胞扁薄,中心有少许血红蛋白,部分可与周围的血红蛋白连接,边缘部染色深,故呈靶状。
主要见于:地中海贫血;严重缺铁性贫血;一些血红蛋白病(血红蛋白C、D、E、S病);肝病、脾切除后及阻塞性黄疸等。
3.1.2.4 镰形红细胞:细胞狭长似镰刀,也可呈麦粒状或冬青叶样,主要见于遗传性镰形红细胞增多症。
3.1.2.5 口形红细胞:红细胞淡染区呈裂口状狭孔。
正常<4%。
增高见于:口形细胞增多症;急性乙醇中毒。
3.1.2.6 棘形红细胞:是一种带刺状的红细胞,刺呈针刺状或尖刺状,见于:棘细胞增多症(遗传性血浆β-脂蛋白缺乏症),可高达70%~80%;严重肝病或制片不当。
3.1.2.7 皱缩红细胞:红细胞表面有圆形棘刺样突起,可见于干燥太慢的血片,也可见于急性铅中毒、尿毒症等病人的血片上。
3.1.2.8 锯齿细胞:也称刺毛细胞,形态和皱缩细胞相似。
主要见于尿毒症、微血管病性溶血性贫血、丙酮酸激酶缺乏症、阵发性睡眠性血红蛋白尿症等。
3.1.2.9 裂片细胞:指红细胞碎片,包括盔形红细胞等,多见于DIC、微血管病性溶血性贫血和心原性溶血性贫血等红细胞破碎综合征。
其他也见于化学中毒、肾功能不全、血栓性血小板减少性紫癜等。
3.1.3 染色异常:3.1.3.1 着色过浅:红细胞中心淡染区扩大,多见于缺铁性、地中海贫血及其他血红蛋白病。
3.1.3.2 着色过深:中心淡染区不见,着色较深,见于先天性溶血性贫血及大细胞性贫血。
3.1.3.36 嗜多色性红细胞:红细胞染成灰蓝色、灰红色、淡灰色,较正常红细胞稍大。
这是一种尚未完全成熟的红细胞,多染性物质是核糖体,随着细胞的成熟而逐渐消失,主要见于增生性贫血。
3.1.4 结构异常:3.1.4.1 嗜碱性点彩红细胞:(1).按常法制成薄血片,自然干燥后,用甲醇固定3min。
(2).用碱性亚甲基蓝染液染色1~2min,水洗待干。
(3).用油镜计数1000个红细胞中嗜碱性点彩红细胞数,以百分率报告。
附注:①用碱性亚甲基蓝液染色后,红细胞呈浅蓝绿色,嗜碱性点彩呈深蓝色。
也可用瑞氏染色,嗜碱性点彩呈蓝黑色。
由于点彩红细胞分布不匀,必要时扩大计数红细胞数。
②参考值<0.01%(<1OO/106RBC)。
增高:铅、汞、银、铋等金属中毒及硝基苯、苯胺等中毒时显著增高;溶血性贫血、巨幼细胞性贫血、恶性贫血、恶性肿瘤等可增高。
3.1.4.2 卡波环:成熟红细胞胞浆内有染成紫红色的细线状环,呈圆形或8字形,可能是残留核膜所致,见于恶性贫血、溶血性贫血、铅中毒等。
3.1.4.3 豪-周小体和核碎块:成熟红细胞中含有紫红色圆形小体,大小不等,数量不一,可能是残留的核染色质微粒。
见于增生性贫血、脾切除后、巨幼细胞性贫血、恶性贫血等。
3.1.4.4 有核红细胞:溶血性贫血、急慢性白血病、红白血病、髓外造血及严重缺氧等常见。
3.1.5 网织红细胞百分数:(1).于小试管中滴加1滴煌焦油蓝生理盐水溶液或煌焦油蓝ACD溶液。
(2).加入末梢血2滴于上述试管中,混匀。
(3).静置15~20min后,取用1滴制成薄片。
(4).油镜下检查1000个红细胞中网织红细胞数,以百分率或绝对值报告。
附注:①活体染色时间不能过短,室温低时,放37℃温箱。
②最好制片2张,每张计数500个红细胞,避免分布不均引起的误差。
涂片要薄而均匀,不使红细胞重叠。
③为计数方便,可于目镜中放一个中间有孔之硬纸片,缩小视野,便于计数。
④因操作误差大,不宜用玻片直接染色法。
⑤参考值成人:O.005~O.015(O.5%~1.5%);新生儿:O.03~O.06(3%~6%)增加:表示骨髓造血功能旺盛,各型贫血均可增多,溶血性贫血增加尤为显著,恶性贫血或缺铁性贫血应用维生素B12或供铁质后显著增多,表示有疗效。
减少:再生障碍性贫血。
⑥网织红细胞绝对值计算:网织红细胞绝对值=(网织红细胞% 红细胞/μl)/100⑦仅用网织红细胞相对值或绝对值表达还不够确切。
若贫血时骨髓生成红细胞增多,大量尚未成熟红细胞释放入血,而这些网织红细胞在外周成熟时间需2天,而正常生理情况下骨髓释放到外周的网织红细胞仅一天后其胞质中RNA即消失。
为此Finch提出在贫血时用网织红细胞生成指数(reticulocyte production index,RPI)报告,它代表网织红细胞的生成相当于正常人的多少倍。
3.2 白细胞检查:3.2.1 白细胞分类计数:(1).采血后推制厚薄适宜的血膜片,血膜应呈舌状,头、体、尾清晰可分。
(2).推好的血膜在空气中晃动,以促使快干。
天气寒冷或潮湿时,应置于37℃温箱中保温促干,以免细胞变形缩小。
(3).染色:瑞氏-姬姆萨染色法或快速染色法。
(4).选择涂片的体尾交界处染色良好的区域,在油镜下计数100个白细胞,按其形态特征进行分类计数,求出各类细胞所占比值(百分率)。
附注:①要避免重复计数,玻片应由血膜边缘向中央依次上下呈曲线移动。
②白细胞总数超过20×109/L,应计数200个细胞。
明显减少的血片,可检查多张血片。
③快速染色法无法确定的细胞,应该用瑞氏-姬姆萨染色复查,以免漏诊血液病。
④白细胞形态变化较大,应经常由高年资检验人员进行核实,以减少误差。
3.2.2 异常白细胞形态:外周血象中,除各类幼稚细胞外,常能见到细胞形态上的异常变化。
3.2.2.1 中性粒细胞:(1).核象变化:反映中性粒细胞的成熟程度。
正常血象中有少量杆状核细胞出现,它与分叶核细胞之间的比值约占1:13。
①核左移:是指杆状核细胞增多,常见感染。
极度左移,多见于类白血病反应或白血病。
伴白细胞总数增高的核左移:称再生性左移,常见于急性化脓性感染(大叶性肺炎等)。
白细胞总数不增加或减低的核左移:称退行性左移,常见于严重感染、机体抵抗力低下。
②核右移:是指不仅分叶核粒细胞增多,且分叶过多,常见4叶、5叶(正常时多分3叶),这是造血功能衰退或造血物质缺乏的表现。
常见于营养性巨幼细胞性贫血和使用抗代谢药物后。
此外,在疾病进行期突然出现核象右移,表示预后不良。
(2).毒性变化:严重感染、恶性肿瘤、各种重金属或药物中毒、大面积烧伤等症时,中性粒细胞可出现形态变异。
①细胞大小不均:为骨髓内幼稚粒细胞发生不规则的分裂增殖所致。
②毒性颗粒:胞浆中部分或全部颗粒变粗,着色深,颗粒的分布及大小不等。
可能为中性颗粒成熟过程中发生变性所致。
③空泡:可在胞浆或核中出现,常为多个,被认为是细胞脂肪变性后未能着色所致。
④ Dohle体:胞浆内出现嗜碱性点、线、梨形或云雾状物质,可能为核浆发育不平衡所致,为细胞严重毒性变的表现。
⑤核棘突:胞核有各种形态的芽状突出,临床意义尚不明确,可能与中毒、癌转移、严重放射损伤等有关。
(3).退行性变:表现为胞体肿大,结构模糊,边缘不清。
胞核可呈固缩、肿胀、破碎、溶解等变化,退行变可以是细胞衰老死亡的表现。
3.2.2 2 淋巴细胞:淋巴细胞形态变异在多种疾病如各种病毒感染、传染性单核细胞增多症最为常见。
此外,疟疾、过敏性疾病、淋巴结炎等亦可见,统称为异型淋巴细胞。
传染性单核细胞增多症患者血液中常可出现3种异型淋巴细胞,即空泡型、不规则型和幼稚型。
3.3 红斑狼疮细胞检查:红斑狼疮患者血液内的红斑狼疮因子为一种抗核蛋白的IgG抗体,它作用于细胞核抗原决定簇,并使细胞核胀大,失去原有的染色质致密结构,形成一种均匀无结构的圆形烟雾状物质,称均匀体。
这种均匀体蛋白在补体作用下,被成熟的中性多核白细胞吞噬后即为红斑狼疮细胞。
这种现象在体外形成,故须在抽取静脉血后给予一定的条件和在适当的温度下放置一定时间,促使其形成。
(1).抽取患者血液2~3ml,注于干燥洁净试管内,于室温待凝。
(2).于凝固刚形成时,用竹签将凝块搅碎,并将残余凝块除去。
(3).以2000r/min离心沉淀10min,使白细胞聚集在同一层面,以利于狼疮细胞形成。
(4).置37℃温箱内温育2h。
(5).取出白细胞层及其上下各少许,置红细胞比积管内,以2000r/min离心,沉淀10min。
(6).吸去上层液,轻轻吸取白细胞层,制成薄片3~4张。
(7).以瑞氏染液染色、镜检。
附注① 操作时间不能超过3h 。
过短,狼疮细胞形成不佳;反之,细胞溶解过多,影响检出。
② 注意与果馅细胞鉴别,果馅细胞多为单核细胞吞噬淋巴细胞的核所形成,核仍然保持染色质结构和染色特性(着紫红色)。
③ 多出现于系统性红斑狼疮,其活动期较缓解期阳性率高;胶原性疾病如风湿病、类风湿性关节炎、结节性动脉炎、硬皮病及皮肌炎等有时也可查到此种细胞;④ 未找到狼疮细胞并不能否定红斑狼疮的诊断,应进一步作免疫学(抗核抗体等)检查。
3.4 寄生虫检查: 3.4.1 疟原虫检查: (1).薄血片法① 以常法推制成薄片。
② 血膜完全干燥后即可用瑞氏-姬姆萨复合染色液染色检查。
(2).厚血片法① 在洁净玻片上,滴患者血液2滴。
② 用推片角将血液由内向外转涂成直径约1cm 、厚薄均匀的血膜,在室温中自然干燥。
③ 在干燥的血膜上滴加蒸馏水数滴,完全覆盖血膜,溶血数分钟。
倾去溶血液。