微生物鉴定系统
微生物自动化鉴定系统的工作原理
微生物自动化鉴定系统的工作原理微生物鉴定的自动化技术近十几年得到了快速发展。
数码分类技术集数学、计算机、信息及自动化分析为一体，采用商品化和标准化的配套鉴定和抗菌药物敏感试验卡或条板，可快速准确地对临床数百种常见分离菌进行自动分析鉴定和药敏试验。
目前自动化微生物鉴定和药敏分析系统已在世界范围内临床实验室中广泛应用。
一、微生物数码鉴定法早在七十年代中期，一些国外公司就研究出借助生物信息编码鉴定细菌的新方法。
这些技术的应用，为医学微生物检验工作提供了一个简便、科学的细菌鉴定程序，大大提高了细菌鉴定的准确性。
目前，微生物编码鉴定技术已经得到普遍应用，并早已商品化和形成独特的不同细菌鉴定系统。
如API、Micro-ID、RapID、Enterotube和Minitek 等系统。
这种鉴定系统是自动化鉴定系统的基础。
(一)数码鉴定法基本原理数码鉴定是指通过数学的编码技术将细菌的生化反应模式转换成数学模式，给每种细菌的反应模式赋予一组数码，建立数据库或编成检索本。
通过对未知菌进行有关生化试验并将生化反应结果转换成数字（编码），查阅检索本或数据库，得到细菌名称。
其基本原理是计算并比较数据库内每个细菌条目对系统中每个生化反应出现的频率总和。
随着电脑技术的进步，这一过程已变得非常容易。
1．简要介绍计算步骤：(1)出现频率（概率）的计算：将记录成阳性或阴性结果转换成出现频率：①对阳性特征，则除以100即得。
②对阴性特征，除以100的商被1减去即可。
③说明：对“0”和“100”，因这2个数太超量，为了使结果不出现过小或过大，而用相似值0.01或0.99值代替。
(2)在每一个分类单位中，将所有测定项目的出现频率相乘，得出总出现频率。
(3)在每个分类菌群中的所有菌的总出现频率相加，除以一个分类单位的总出现频率，乘100，即得鉴定%（%id）(4)在每个菌群中，再按%id值大小顺序重新排列。
将未知菌单次总发生频率除以最典型反应模式单次总发生频率，得到模式频率T值，代表个体与总体的近似值。
微生物鉴定系统安全操作及保养规程
微生物鉴定系统安全操作及保养规程前言微生物鉴定是一项关键的工作，它需要高度谨慎的操作和精密的仪器保障。
为保证微生物鉴定系统的安全运行和维护设备的长期可靠性，制定安全操作规程和保养规程是至关重要的。
本文将从微生物鉴定系统的安全操作、设备保养、维护等方面进行详细的说明和讲解，以提高使用人员的工作效率和仪器设备的服务寿命。
安全操作规程微生物鉴定系统属于高精度仪器设备，因此在使用过程中需要特别注意以下事项：1.操作前请认真阅读用户手册，并按照操作规程正确操作仪器。
2.使用前请检查仪器外观，确认无破损、变形、松动等情况，并通知相关人员。
3.严禁在操作过程中进行任何的混乱、滑稽，严格按要求操作仪器，确保安全。
4.为了避免误操作和设备故障，操作人员应确保操作区域整洁清爽，设备周围不要放置杂物。
5.严禁在工作时进行抽烟、饮食等行为，家庭紧急情况，请尽量在非工作时间解决。
6.使用完毕后，关机、断电，清理好周边环境和操作平台，确保设备长期可靠性和安全性。
设备保养规程设备保养在设备使用寿命和工作效率方面至关重要。
本节将从设备清洁、零部件维护、运输、储存等方面对这些情况进行详细说明：设备清洁设备使用时间长，周边环境杂乱无章，难免会有锈迹、污垢等脏污物质；为了保证设备工作效率和长期可靠性，必须定期清洁设备。
1.清洁中请勿使用酒精、汽油、盐酸等有害化学物质，以避免对设备造成腐蚀等损害。
2.建议使用湿布、清洁剂、吸尘器、清洁棉等物品进行清洁，定期清洁机器内部、外部和周围环境。
3.清洁后，请勿颠倒设备、避免磨损和撞击。
零部件维护维护零部件是设备保养的重要环节之一。
因为，设备中零部件一旦出现故障，将会对设备的正常使用产生严重影响。
为了保证设备长期可靠性，建议注意以下维护细节：1.设备维护需由专业维护人员进行，不得随意拆卸、维修和更换零部件。
2.定期检查和更换机器内部部件、系统软件和硬件。
3.配件、工具、零部件、软件等存储在干燥、通风，无灰尘的环境中。
API鉴定系统
API试剂选择
API试剂盒及其配套试剂
石腊油(容量: 125ml) 覆盖在指定小孔上
悬浮液 (容量: 5ml) 用於调菌液
安培架
附加试条 加进指定的生化孔内
培养盒 保持潮湿环境
PSIpettes 接种管 挑菌落，混匀及接种
API 试条 每个小孔载有风乾的底物
操作步骤1 (API 20E)
ADH ODC H2S URE
把培养盖盖上
操作步骤 3 (API 20E)
把试条放进孵育箱内，利用指
定温度及时间 API20E : 35 - 37oC，18-24 小时
18-24 小时後
按操作说明书规定，将附加试剂 加进适当小孔内
api20E 试剂
API 试剂条
24小时出结果
API结果判断
Hale Waihona Puke 生化结果组合跟资料库內的典型条目(Taxa)作出比较 经计算後，
鉴定百比率（%Id）＝机会率，指示出不同菌类
T值（T index）=指示出在同一个菌类的相似程度 跟据T值及%Id的组合，作出评语：
极好的鉴定结果
很好的鉴定结果 好的鉴定结果
%Id >99.9及T>0.75
%Id >99.0及T>0.50 %Id >90.0及T>0.25
API微生物鉴定系统
API鉴定原理
API 微生物鉴定系统以微生物生化理论为基础,借助微生物 信息编码技术,为微生物检验提供了简易、方便、快捷、科 学的鉴定程序。 生理生化鉴定：根据微生物对各种生理条件（温度、pH、氧 气、渗透压）、生化指标（唯一碳氮源、抗生素、酶、盐碱 性）代谢反应进行分析，并将结果转化成软件可以识别的数 据，进行聚类分析，与已知的参比菌株数据库进行比较，最 终对未知菌进行鉴定的一种技术。
磷脂脂肪酸(PLFA)微生物鉴定系统
Characterization of bacterial isolates from springs by fatty acid analysis. Abst 95th Ann Mtg Amer SocMicrobiol p 442. Meldrum, J.R. & Stetzenbach,
3. 从未知的微生物中萃取出脂肪酸而后自动化的被定量 且利用Sherlock的软件来鉴定检测出脂肪酸的成份.
脂肪酸鉴定与传统微生物鉴定比较的优势：
脂肪酸鉴定方法 操作过程
将菌分为嗜氧，厌氧及酵母在 对应培养条件下培养一定时间 （24-48h），通过2小时的脂肪 酸抽提工作后，进行气相色谱， 全自动分析，得到结果。操作 简单。
Sherlock ® MIS为美国MIDI公司依据自20世纪60年代以来对微 生物细胞脂肪酸的研究经验，开发的一套根据微生物中特定短链 脂肪酸（C9-C20）的种类和含量进行鉴定和分析的软件。
权威
分获美国CDC、国土安全局和FDA认证
独一无二
唯一脂肪酸微生物鉴定系统产品 唯一采用氢气做载气的脂肪酸分析系统
• 15 challenge organisms
目标
产品优势
速度快、 精度高
微量样 品 操作简 便 检测成 本低 独创21 种细菌 武器数 据库
采取了其它方法进行验证
DNA-based identification
菌株溯源
2-D Plot clustering Dendrogram clustering
生物标记物—脂肪酸
细菌细胞内有300多种脂肪酸成分 细菌脂肪酸成分相对稳定
Biolog 自动微生物鉴定系统
应用领域
BIOLOG 微生物鉴定系统能鉴定超过 2650 种常见的好氧细菌、厌氧菌、酵母和 丝状真菌等微生物，几乎覆盖了所有重要的与人类、动物、植物相关的微生 物，特别是以鉴定环境微生物见长，被广泛应用于各种与微生物相关的领域， 包括林业、农业、环境生态、从事微生物研究的大学和科研院所、菌种保藏中 心、白酒啤酒行业、食品行业、临床与疾控中心、环保、检验检疫机构及质检 部门等均成为 BIOLOG微生物鉴定系统的用户。现在，美国半数以上的州立实 验 室和 国家 疾控 中心 （ CDC）都 在使 用 BIOLOG公司 的产 品， 十 几年 来， BIOLOG 公司在全球六十多个国家和地区共销售了 3000 多套微生物鉴定系统。 进入中国几年来，在中国的用户已经达到近300个，具体分布在以下领域：
好氧细菌鉴定更加简单：不需革兰氏染色，无需做氧化酶、三糖铁和过氧化物酶实 验，一个细胞浓度，一块板，一个培养温度，无需附加试验
可鉴定一些传统鉴定方法不易鉴定的重要的革兰氏阳性好氧菌，如芽孢菌114种。
可鉴定分枝杆菌24种(mycobacterium)
可鉴定革兰氏阴性好氧放线杆菌15种，革兰氏阳性好氧放线菌8种，厌氧放线菌14种。
［美国BIOLOG］
自动微生物鉴定系统
GEN III MicroStation 自动微生物鉴定系统 MicroLog-M 手动微生物鉴定系统
GEN III OmniLog ID /GEN III OmniLog Plus ID全自动微生物鉴定系统
中国总代理
美国 BIOLOG 公司致力于微生物鉴定领域新技术新产品的开发、生产和销售， 是 全 球 高 新 技 术 百 强 之 一 ， 其 独 创 的 碳 源 利 用 方 法 已 获 美 国 FDA认 可 。 BIOLOG 鉴定系统可鉴定包括细菌、酵母和真菌在内超过 2650 种微生物，用于 各领域的微生物实验室对微生物进行鉴定； BIOLOG的智能软件和独特设计的 基于表型测定的微孔板特别适用于生态功能多样性研究领域；用于政府检验机 构、科研院所等研究单位及工业生产领域进行微生物鉴定、微生物代谢研究、 微生物群落分析及新产品开发与质量控制。
Biolog微生物鉴定系统鉴定步骤
Biolog微生物鉴定步骤一检测原理Biolog微生物鉴定系统测试的是微生物在鉴定板中利用或氧化化和物的能力。
测试会产生特征性的紫色孔模式，组成代谢指纹。
所有必需的营养物质和生化试剂都预先加进96孔板中，四唑紫是一种氧化还原染料，指示碳源的利用情况。
.鉴定步骤非常简单，纯化分离到的菌株经扩大培养，再制成接种液加到鉴定板中。
在培养过程中，一些孔中的化学物质能被氧化并将显色物质成紫色，对照孔（A-1）和阴性孔仍然为无色。
鉴定板在相应的培养条件下培养4-6小时或16-24小时即可形成代谢模式。
系统软件自动和数据库对比，如果能找到合适的匹配，就可以得出一个鉴定结果。
二所需器材和消耗品：培养基、接种液、巯基乙酸钠、长棉签、接种棒、储液槽、八道移液器、移液器头、浊度仪、浊度标准品、控温培养箱和相应的鉴定板。
其中接种液自行配制，接种棒、储液槽可选用国产品牌代替。
三鉴定步骤：第一步：在用户自己的培养基上纯化菌株，如果菌株为冻干或冷冻样品，需要传代培养2-3代，让菌株恢复活力。
对纯化好的菌株做革兰氏染色，确定菌株是革兰氏阴性还是阳性。
观察菌落外部形态或用显微镜观察菌株形态，确定是酵母还是丝状真菌，是球菌还是杆菌。
如果是革兰氏阴性菌，还需要最终确认是肠道菌、非肠道菌或苛生菌。
方法是，氧化酶阳性或氧化酶阴性但三糖铁实验为K/K或K/A w，则该菌株为非肠道菌(GN-NENT)，氧化酶阴性以及三糖铁实验为A/A或K/A，则该菌株为肠道菌(GN-ENT)。
如果菌株①需要在巧克力培养基上或需要6.5% CO2培养，②在BUG+B培养基上生长非常差，形成针尖大小的菌落，那么可以认为这些菌是苛生菌(GN-FAS)。
大多数苛生菌都是从哺乳动物的呼吸道里分离出来的，如Actinobacillus, Alysiella, Brucella, Capnocytophaga, CDC Group DF-3, CDC Group EF-4, Eikenella, Haemophilus, Kingella, Moraxella, Neisseria, Simonsiella, Suttonella,和Taylorella。
API细菌鉴定系统
氧化酶 +
非发酵菌鉴定 API 20NE
革兰氏阴性杆菌
氧化酶 -
乳糖发酵 +
乳糖发酵 -
肠道杆菌鉴定 API 20E
API 20E 及 API 20NE
革兰氏阴性杆菌例子 (大肠杆菌 x 1000)
革兰氏阴性弧菌例子 (x 1000)
革兰氏阳性杆菌分类
触酶 +
革兰氏阳性杆菌
细小不透光菌落
短球杆菌
微生物鉴定
完整的鉴定谱
杆菌
球菌
接触酶
革兰氏
革兰氏
氧化酶
杆菌
球菌
API 鉴定范围
庞大资料库 15种试条 >600种细菌可被鉴定 研究用试条： 乳酸杆菌，芽胞菌，弯曲菌
API 试剂类别
• API 20E /RapiD 20E革兰氏阴性杆菌鉴定 • API 20NE非发酵菌鉴定 • API STAPH葡萄球菌及微球菌 • API STREP链球菌鉴定 • API 20C AUX酵母菌 • API 20A厌氧菌 • API LISTERIA李斯特菌 • API CAMPY弯曲菌属 • API CORYNE棒状杆菌 • API CH芽胞杆菌/乳酸杆菌
api20E 试剂
API 试剂条 24小时出结果
阅读结果
根据说明书上， 或彩图的指示， 记录结果於报告 单上。
利用编码手册 或APILAB PLUS软件进出分析
全Windows操作界面，多种语言。
API 结果
跟据T值及%Id的组合，作出评语：
(i) 极好的鉴定结果
%Id >99.9及T>0.75
，鉴定系统的发源生化测试＞750 - ＞1500多篇使用文献
全自动微生物鉴定及药敏监测系统技术参数
5、拥有快速药敏报告功能，可在试验开始后约3小时陆续把部分已完成的抗生素结果自动报告。总共鉴定/药敏平均5～6小时报告结果。
6、鉴定过程：无需附加实验及附加试剂，无需覆盖石蜡，无需氧化酶、触酶等定向实验。
★14、板条分类：革兰氏阴性鉴定药敏复合板、革兰氏阳性鉴定药敏复合板、链球菌复合板、真菌鉴定板，必须提供SFDA认证。
★15、有高级专家系统Epicenter：将有关药敏的实际经验等自动与检验结果相比较，进行准确度评估，并指导选用最合理的抗生素。
16、备有中文报告操作系统。
17、配置可维持30分钟后备电不间断电源(UPS)以保证计算机的程序存储。
附件：全自动微生物鉴定及药敏监测系统技术参数
序号
名称
参数
数量
单位
1
全自动微生物鉴定及药敏监测系统
1、仪器及检测用鉴定、药敏板均已通过美国药品食品管理局（FDA）核准以及SFDA批文。
2、仪器能对革兰阴性菌、革兰阳性菌、酵母样真菌及阳性芽孢杆菌、肺炎链球菌进行鉴定与药敏试验。
★3、细菌鉴定值标准：源于国际细菌鉴定标准，为实测MIC值的检测。
11、药敏试验符合CLSI、CASFM、等监测标准。
12、其他：仪器自动校正、孵育、检测及报告结果，上机后毋需人工干预。设备具备打印功能，可直接打印出检测结果。
★13、板条：采用鉴定药敏复合板、独立鉴定，无需用户手工填写或打印条码。
1
台
7、药敏反应：采用连续对倍稀释的抗生素浓度，每种抗生素检测3－7个浓度。
8、能对各种最新的细菌耐药模式进行检测，可提示997种耐药机制，可检测2000种耐药表型以及20000万个以上MIC分布图。以细菌对抗生素的结果监测鉴定结果。
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分离纯化（单个纯菌落）
鉴
定
确定菌株（类型、定位实验）
平板扩大培养（富集培养）
制备菌悬液
调整浊度 接种鉴定板上培养
获取结果
分离纯化
通用培养基： BUY (Biolog Universal Yeast) BUG (Biolog Universal Growth) BUA (Biolog Universal Anaersal) 注：B (5%的羊血)
药机制，并对不符合CLSI规则的结果予以提示，防止 误报。
优势:
1． 新一代表型检测技术：利用代谢指纹技术和数值分类法，技术 源自美国BIOLOG公司。/p-41757394.html
2． 数据库最大，可鉴定2000多种微生物，覆盖临床重要致病
菌600多种，更可以检测其他系统检测不出来的条件致病菌，包括人
YT MicroPlate
AN MicroPlate
FF MicroPlate
不仅可用于临床检测、疾病控制、动物疫病防治，也可 用于工业、农业、环境等多领域的微生物检测与科研活 动。
适用范围： 鉴定菌种数量：＞ 2000种
仪器读数方法：比色 生化反应数量：47或95个生化反应 辅助实验：不需辅助实验或添加补充试剂
原理--代谢指纹法
代谢指纹法根据细菌对碳源（或氮源）利用的差异来区 别和鉴定细菌。不同细菌会利用不同种类的碳源（或氮 源）进行新陈代谢，将一系列碳源（氮源）按特定顺序 排列组合，在反应体系中加入指示剂，根据反应的阴阳 性得到某一细菌的反应图谱。检测时，将待检菌的反应 结果与数据库中的代谢图谱进行对照，从而得到该细菌 的检测结果。
GN-NENT
培养基 BUG+B 或
TSA+B
GN-ENT
BUG+B 或
TSA+B
GN-FAS
CHOC
GP-COCCUS
GP-ROD GP-ROD SB
BUG+B
BUG+M+T
PLUS streaking
AN
BUA+B
YT
BUY
培养环境
Air
Air
6.5%CO2 Air/6.5%CO2
Air
ANA
Air
培养温度 Typically
30℃
Typically 35-37℃
Typically 35-37℃
Typically 35-37℃
Typically 30℃
Typically 35-37℃
26℃
霉菌
FF
2%ME
Air Typically
26℃
接种液种类 GN/GP-IF GN/GP-IF+T GN/GP-IF+T GN/GP-IF+T GN/GP-IF
4-6, 16-24
4-6, 16-24
4-6, 16-24
20-24
24,48,72 24,48,72,96
操作流程：
真菌鉴定：
BIOFOSUN系统的操作简便，与细菌的检测流程相仿，主要有以下几 个步骤： 1、 真菌的培养：将待测的真菌接种到麦芽浸出液培养基，26℃培养 5~10天； 2、 配制菌液：利用标准比浊管，将待测真菌加入专用的鉴定培养液 中，配制成一定浓度的菌液； 3、 加板和孵育：将配制好的菌液加入FF鉴定板条中，将板条密封后 放26℃孵育； 4、 读取结果：在加板后24、48、72、96、168小时依次读取结果， 直到得出有效的鉴定结果。 5、 将得到的结果与软件中的标准图谱进行比对，确认鉴定结果。
Biolog微生物自动分析系统_细菌鉴定操作规程的研究_程池.pdf
Biolog微生物自动分析系统_丝状真菌鉴定操作规程的研究_姚粟.pdf
Biolog微生物自动分析系统_酵母菌鉴定操作规程的研究_李金霞.pdf
药敏----耐药菌（需氧菌和部分兼性厌氧菌）
1.检测方法：肉汤微量稀释法 2.仪器读数方法：比浊 3.抗菌药物浓度：每种抗菌药物都有6~8个浓度梯度 4.结果报告：报告准确MIC值及S、I、R结果 5.专家分析系统：对药敏结果进行监测，提示常见的耐
为什么要严格控制浊度？ biolog原理与氧气含量有很大关系，而菌悬液浓度
又决定了氧的含量，而且其数据库是在一定菌悬液浓度 下建立的，为获取准确的鉴定结果，务必严格控制接种 菌悬液的浓度。
鉴定步骤总览
微生物
好氧菌 GN
GP 厌氧菌 酵母菌
Oxi +
Oxi －
TSI=K/K TSI=A/A or K/A or K/A
3.自定义数据库：对于新发现的 细菌，用户可以将该菌的特征性 代谢图谱输入用户自定义数据库， 当再次遇到同种细菌或真菌时， 就可以利用用户自定义数据库和 原数据库一起进行鉴定。
应用：
主要功能是对临床分离的细菌进行菌种鉴定和耐药性试 验，以指导临床医师正确实施抗感染个体化治疗。药敏 分析仪的使用有利于控制院内感染和耐药菌株的流行， 有利于指导临床合理使用抗生素。
操作方法：
1.开机:打开电脑电源，双击桌面图标ATB NEW ,输入用 户名和密码,进入ATB NEW软件,打开读数仪的开关(O N),放下读数仪的前门板,打开打印机,然后将要检测的鉴 定试条放于试条托架上,然后点击软件中开始键,即可对 其进行检测.
2.关机:按门板上rarriage in 图标,使试条托架缩回.关闭 读数仪开关(OFF),合上读数仪前门板,点击退出图标,退 出ATB NEW 软件,关闭电脑,关闭打印机
BIOFOSUN 微生物鉴定药敏分析系统
制作人:张金凤
BIOFOSUN微生物鉴定药敏分析系统
上 海 复 星 佰 珞 生 物 技 术 有 限 公 司
配置：
仪器
读数仪 浊度计 加样器 计算机
数据库软件
1.全中文软件系统
2.设有查询统计功能：可以以多 种方式（如按照标本来源、送检 科室或病区、检测日期等）对致 病菌的种类、药敏结果等进行统 计和查询，帮助医院进行耐药检 测和院感控制。
M (0.25%的麦芽糖)
确定菌株
1.革兰氏染色 用来确定该微生物是细菌还是酵母菌，是阴性菌还是阳性菌，是球菌还是杆
菌，是否产芽孢。
2.定义好氧菌特征
菌悬液
什么是浊度？ 浊度是指透光率的值，用以表示接种细胞的浓度。
标准液、菌悬液、浊度之间有什么关系？ 标准液是用来校准菌悬液的浓度即浊度。
嗜血杆菌）、棒状杆菌、葡萄球菌、链球菌等。
6． 系统具备自定义数据库，可以认为添加新增菌株的数据库，
扩大鉴定的菌种范围，如军团菌的检测。
GN2 MicroPlate
GP2 MicroPlate
Wells With Tetrazolium
Violet
Wells Without Tetrazolium Violet
AN-IF
Water
FF-IF
菌悬液浊度 52%T
61%T
20%T
20%T28%T源自65%T47%T75%T
接种量 GN2-150μl GN2-150μl GN2-150μl GP2-150μl
GP2-150μl
AN-100μl YT-100μl FF-100μl
培养时间 4-6, 16-24 4-6, 16-24
畜共患病原菌。
3． 评估结果，与API符合率95%以上，在非发酵、弧菌、沙
门志贺等肠道菌方面更准确（鉴定到种）。举例，国家CDC肠道病研
究所使用。
4． 可以鉴定其他系统鉴定不出来的疑难菌株，唯一可以鉴定
丝状真菌的系统。
5． G染色后就可以直接选板，两块板就可以鉴定500多种需
氧菌，包括肠杆菌、非发酵菌、弧菌、芽孢杆菌、苛养菌（奈瑟氏、