生物技术遗传学实验指导
生物教案研究人类遗传特征的基因实验教案

生物教案研究人类遗传特征的基因实验教案生物教案:研究人类遗传特征的基因实验教案一、引言遗传学是生物学的重要分支,它研究的是生物遗传信息的传递与变异规律。
在人类的遗传研究中,基因实验是一种重要的手段,可以帮助我们深入了解人类的遗传特征。
本教案旨在通过一系列的基因实验,让学生了解人类遗传特征的基本原理以及实验方法。
二、实验目的通过本实验,学生将能够:1. 了解人类遗传特征的基本概念和分类;2. 学习基本的遗传实验技巧和方法;3. 掌握分析实验结果的能力。
三、实验材料1. 动物模型或植物材料(例如果蝇、豌豆等),具有不同遗传特征的个体;2. 显微镜、实验管、显色液等实验器材;3. 实验记录表。
四、实验步骤1. 了解人类遗传特征的基本概念和分类;2. 选择具有明显遗传特征的动物模型或植物材料,进行观察和记录;3. 针对不同的遗传特征,设计相应的实验方法,并进行实验;4. 分析实验结果,总结遗传规律和遗传特征之间的关系;5. 小组讨论和整理实验数据,撰写实验报告。
五、实验结果与分析在实验过程中,我们选择了果蝇作为实验模型,观察了其眼色、翅型等遗传特征。
通过交叉配对实验,我们发现果蝇眼色是由一个性连锁基因控制的,而翅型则是由多个基因共同作用所决定的。
通过各个实验结果的分析,我们可以看出某些遗传特征是由单个基因控制的,例如果蝇的眼色;而另一些遗传特征则是由多个基因的组合作用所决定的,例如果蝇的翅型。
这些实验证明了孟德尔的遗传定律和遗传规律的普遍性。
六、实验总结通过本次基因实验,我们对人类遗传特征的研究有了更深入的认识。
遗传学的发展为我们解读人类的遗传密码提供了强有力的工具和理论基础。
通过遗传实验,我们能够更加清楚地认识到基因的作用和遗传的复杂性。
在今后的学习中,我们应该进一步了解遗传学的相关知识,掌握基本的遗传实验方法,培养科学思维和实验操作能力。
只有通过不断的实践和研究,我们才能更好地理解人类遗传特征,并为人类的健康和发展做出更大的贡献。
遗传学实验报告

蚕豆微核设计实验姓名:陈婷班级:生物技术0911 组别:第六组一、实验目的1)了解微核测试的原理和毒理遗传学在实际生活与工作中的应用范围及意义。
2)学习蚕豆根尖的微核测试技术。
寻找新的测试系统或测定更多的环境因素。
二、实验原理微核简称MCN,是真核生物细胞中的一种异常结构,往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生。
在细胞间期微核呈圆形或椭圆形,游离于主核之外,大小应在主核1/3以下。
微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样。
一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的断片产生的,但有些实验也证明整条的染色体或多条染色体也能形成微核。
这些断片或染色体在细胞分裂末期被两个子细胞核所排斥便形成了第三核块。
已经证实微核率的大小是和用药的剂量或辐射积累效应呈正相关,这一点和染色体畸变情况一样,所以可用简易的间期微核数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。
三、实验思路1、香烟及其燃烧物中含有多种致癌物质和致癌前体物质,通过收集,这些致突变物主要存在于水溶液中,流行病学和细胞遗传学都证实了这些物质可引起遗传物质损伤。
蚕豆根尖细胞微核技术是目前证实遗传物质损伤的快速、有效的方法。
因此,我们选择用烟头浸出液为诱变剂。
据俄《消息报》报道,科研人员发现,制作发酵食品时所使用的乳酸菌能够释放出蛋白酶,分解部分诱变剂的特定蛋白。
乳酸菌在发酵时会合成乳酸,这种物质可抑制多种诱变剂的活性。
乳酸菌还能直接与部分诱变剂发生化学反应,使后者失去诱变能力。
所以,我们选择了取材方便且富含乳酸菌的酸奶作为拮抗剂,来验证其功能。
四、实验材料显微镜、载玻片、盖玻片、培养皿、固定液、改良苯酚品红、蚕豆、烟头浸出液(红山茶<焦油含量:12mg/根)、酸奶(味全<原味>)五、实验步骤1、将蚕豆放入盛有蒸馏水的烧杯中,25℃浸泡24h。
种子吸涨后放入加有棉花的培养基中催芽,24h左右。
2、将20根烟头处理后加至100ml蒸馏水于水浴锅60°处理1h,得20/100的浓度烟头浸出液。
高中生物遗传经典实验教案

高中生物遗传经典实验教案
实验目的:通过观察果蝇的遗传规律,让学生了解基因的传递和表现。
实验材料:果蝇、果蝇布袋、显微镜、放大镜、培养皿、果蝇培养食物、果蝇培养箱等。
实验步骤:
1. 将果蝇放入培养箱中,保持温度恒定、通风良好。
2. 选择具有不同表型特征的果蝇进行交配,如红眼和白眼果蝇。
3. 观察果蝇的后代表型特征,记录下每代果蝇的表型。
4. 根据观察结果,总结果蝇的遗传规律,包括显性和隐性遗传等。
5. 尝试进行不同表型特征的果蝇杂交,观察其后代的表型,进一步加深对遗传规律的理解。
实验讨论:
1. 为什么果蝇具有不同的表型特征?
2. 遗传物质是如何在果蝇中传递和表现的?
3. 在实验中对果蝇的交配有何要求?交配结果出现了什么情况?
4. 遗传规律在人类中是否也存在,有何相似之处?
实验总结:
通过这次实验,我们对果蝇的遗传规律有了一定的了解,也深入了解了基因的传递和表现。
遗传规律是生物学中的重要内容,对我们理解生物学的基本原理和机制有着重要意义。
在
今后的学习和生活中,我们可以进一步探索和应用遗传规律,加深对生物学的理解和认识。
遗传学实验教学大纲

遗传学实验教学大纲一、实验目的本实验旨在通过实际操作,让学生掌握遗传学基本实验技能,深入了解遗传学的基本原理和方法,并培养学生的观察力、分析能力和解决问题的能力。
二、实验内容及步骤1. 实验前准备:- 确定实验室所需材料和设备,并检查其完好度。
- 将实验材料分类整理,确保有序,方便学生使用。
- 确定实验操作规范和安全注意事项,向学生作出详细讲解。
2. 实验一:显微镜观察染色体- 学生按照实验指导书的步骤,取得待观察的样本。
- 学生准备好显微镜和玻璃载玻片,将样本制作成干片,并放置于显微镜下观察。
- 学生观察各种细胞类型的染色体形态和数量,并记录相关数据。
3. 实验二:交配试验- 学生按照实验指导书的步骤,选择不同性状的实验材料,进行交配实验。
- 学生观察和记录各代子代的表型,并根据观察结果进行分析和推理。
4. 实验三:基因型检测- 学生准备好实验所需的基因型检测试剂和仪器。
- 学生将待测标本提取DNA,并根据实验步骤进行基因型检测。
- 学生记录检测结果,并进行数据分析和统计。
5. 实验四:变异诱发- 学生按照实验指导书的步骤,选择适当的变异诱发方法。
- 学生诱发变异,并观察和记录变异结果和表型。
- 学生根据观察结果进行数据分析和推理,探讨变异的原因和机制。
6. 实验后总结:- 学生针对每个实验进行总结和思考,分析实验结果和现象的原因,并与相关理论知识相对照。
- 学生撰写实验报告,包括实验目的、实验方法、实验结果和分析等内容。
三、实验要求1. 学生要严格遵守实验室规则和安全操作规范,确保实验过程安全。
2. 学生要准备充足,并提前预习实验内容,了解实验原理和相关背景知识。
3. 学生要认真观察实验现象,并及时记录相关数据和结果,保持实验结果的准确性。
4. 学生要积极参与实验讨论,与同学合作完成实验和分析,共同探讨问题和解决方案。
四、实验评估1. 实验报告:学生根据实验内容和观察结果撰写实验报告,包括实验目的、方法、结果及讨论等,并逻辑清晰、表达准确。
遗传学实验指导

《遗传学》实验学习指导《遗传学》是生命科学中的中心学科。
同时也是一门实践性很强的学科。
它是指导育种工作的理论基础,在传统育种、转基因育种、人体基因产物的产业化生产、各种传染性疾病病原菌的遗传分析研究及疫苗的生产、人类遗传病的基因治疗等人类面临的难题中发挥着巨大作用。
对于现代从事生命科学的人,学习和掌握遗传学基本实验方法是十分必要和有益的。
一实验要求:(一)实验前:预习实验内容,了解实验原理、实验目的,逐点分析实验操作过程,对每一个细节进行深刻的理解,不仅要知道实验该如何操作,而且要知道实验为什么要这样做,弄清实验操作过程中需要注意的细节,做到心中有数,以提高实验成功的可能性。
(二)实验操作过程中:一丝不苟,认真操作每一个环节,对实验现象和实验数据进行认真的观察记录。
(三)实验后:对实验结果和数据进行及时总结整理。
结合所学的理论对实验结果进行分析,写出实验报告。
对成功的实验可以提出改进的方法或建议。
对于不成功的实验要分析失败的原因。
(四)强调动手能力的培养:在实验分组上,多数实验是以1人为组,单独操作。
对学生实验成绩的评定上,包括实验操作。
二实验教材及学时(一)实验教材:以《遗传学实验》刘祖洞江绍慧编为主,根据理论课所学内容,也采用了其它教材的个别实验。
如:《遗传学手册》第三章“遗传学教学实验”的内容。
(二)实验总学时:30三实验内容及注意事项:(一)实验内容:见下表:(二)实验目的意义及注意事项1 植物有丝分裂的观察目的:观察染色体在有丝分裂中的动态变化过程,识别有丝分裂各个时期特点,加深对有丝分裂遗传学意义的理解。
掌握观察植物根尖有丝分裂的压片方法。
注意事项:(1)根尖解离时间适合;(2)取材部位一定要准确,只有分生区的细胞才有分裂相(部位准);(3)取材料要少,有利于着色和细胞分散。
2 染色体的核型分析目的:学习植物染色体核型分析的过程,掌握植物染色体组型分析的方法。
注意事项:(1)核型分析的关键需要较多的染色体分散好、形态好的细胞,因此,要求根尖的预处理要好,保证有较多的中期分裂相;(2)根尖的预处理应根据不同的药物,注意预处理药物的浓度、温度和时间;(3)制片时,细胞尽可能分散,压片时用力均匀,勿搓动;(4)测量数据尽可能接近染色体的实际长度;3 减数分裂装片的制片与观察目的:(1)观察染色体在减数分裂中的行为和变化过程,识别减数分裂各个时期特点,加深对减数分裂遗传学意义的理解;(2)掌握观察植物减数分裂的制片技术。
初中生物遗传模拟实验教案

初中生物遗传模拟实验教案
实验目的:通过模拟实验,让学生了解遗传规律,并掌握基本的遗传知识和实验操作技能。
实验材料:
1. 黄豌豆种子
2. 红豌豆种子
3. 水
4. 透明玻璃容器
5. 棉花
实验步骤:
1. 将黄豌豆种子和红豌豆种子分别放入两个透明玻璃容器中,并加入适量水泡发。
2. 每天观察豌豆种子的生长情况,记录并比较两种豌豆的生长速度和形态特征。
3. 在豌豆生长过程中,观察红豌豆和黄豌豆颜色的表现。
4. 在实验过程中,教师引导学生思考为什么红豌豆和黄豌豆生长速度和颜色表现不同,引
导学生总结遗传规律。
实验总结:通过本次实验,学生了解到遗传规律会影响个体的生长发育和性状表现,为今
后进一步探讨遗传学知识打下基础。
拓展实验:
1. 使用不同颜色和形态的豌豆种子进行交配实验,观察后代的表现情况。
2. 根据植物的有性繁殖方式进行实验,探究遗传规律在不同繁殖方式下的表现。
实验注意事项:
1. 实验过程中要注意个人安全,不得乱扔实验器材。
2. 实验后要及时清理实验场地,保持教室整洁。
3. 学生在实验过程中要认真观察,及时记录实验数据。
2015级生物技术《遗传学实验》课程教学大纲

《遗传学实验》课程教学大纲课程名称:遗传学实验课程英文名称:课程代码: SH2I06 课程性质:专业方向课总学时: 24 学时总学分: 1 开课学期: 4 适用专业:生物技术大纲执笔人:舒咏明参加人:舒咏明、陈艳荣审核人:编写时间: 2015 年 3 月编写依据:生物技术专业人才培养方案( 2015 )年版一、实验教学目的与基本要求1.实验教学的指导思想和教学目的(1)指导思想:《遗传学》是研究生物遗传和变异规律、探索生命奥秘的理论科学,是动、植物和微生物育种及相关课程的理论基础,是生物类各本科专业的必修专业基础课之一。
通过本课程的学习,学生掌握对动、植物和微生物进行遗传分析的一般原理、方法和基本的实验操作技能,了解现代遗传学发展的最新成就。
为了使学生能够理论联系实际,培养学生在遗传学实验设计和操作等方面的动手能力,我们开设了遗传学实验。
(2)教学目的:使学生掌握遗传学实验基本技术,提高学生分析问题和解决问题的能力,为了今后独立进行科研工作打下坚实的基础。
2.实验教学的基本要求(1)通过遗传学实验课的学习,要求学生掌握遗传学研究的基本技能,熟悉有关的研究方法技术,培养科学务实的精神。
(2)在实验过程中,要求学生认真预习实验讲义,上课亲自动手操作,作好实验记录,实验结束后详细整理、统计、分析实验结果。
写出实验报告。
培养端正的科研态度和独立思考解决问题的能力。
二、实验项目设置及学时分配三、主要仪器设备及场地四、实验内容及教学要求实验项目1:黑腹果蝇的的雌雄鉴别及突变体性状的观察(共3学时)1.教学目标(1)掌握鉴别果蝇成虫性别的方法;(2)认识黑腹果蝇的某些突变体。
2.教学内容(1)观察果蝇形态特征(2)制作果蝇装片(3)果蝇装片显微观察和绘图实验项目2:大蒜根尖有丝分裂标本制作与观察(共3学时)1.教学目的(1)对组织、细胞的固定、离析、和压片方法(2)观察有丝分裂过程和染色体的动态变化。
2.教学内容(1)大蒜根尖培养(2)大蒜根尖染色体装片制作(3)装片观察和绘图实验项目3:染色体核型及分析(共3学时)1.教学目的(1)了解人类染色体形态和分组特征;(2)学习染色体组型分析方法。
遗传学实验操作指导

遗传学实验操作指导天津科技大学遗传学课程组2006.12目录遗传学实验教学大纲(修订稿) (1)实验一:摇蚊唾腺染色体观察 (4)实验二:小鼠骨髓细胞染色体标本制作 (6)实验三:人类染色体组型分析 (8)实验四:植物细胞有丝分裂观察及多倍体的诱发与鉴定 (10)附 录 (13)1.实验规则 (13)2.显微镜的使用方法 (14)3.显微镜的维护与保养 (15)4.实验报告的写作 (16)遗传学实验教学大纲一、制定本大纲的依据根据2006级生物技术专业培养计划和遗传学课程教学大纲制定本实验教学大纲。
二、本实验课程的具体安排实验项目的设置及学时分配序号 实验项目名称 内容简介(50字左右)实验学时实验要求实验类型实验类别每组人数1 摇蚊唾腺染色体的观察学习分离摇蚊幼虫唾腺的技术及其染色体的制片方法。
观察摇蚊唾腺染色体的结构特点。
3 必修综合基础 32 小鼠骨髓细胞染色体标本制作掌握小鼠骨髓细胞染色体标本的制作方法。
6 必修综合基础 33 人的染色体组型分析了解人类染色体形态大小和分类,掌握染色体核型分析的基本方法。
3 必修综合基础 34 植物细胞有丝分裂观察及多倍体的诱发与鉴定学习对植物组织、细胞的固定、解离、压片方法。
观察有丝分裂各时期的动态变化。
应用秋水仙素溶液诱发植物多倍体及掌握对多倍体的细胞学鉴定方法。
6 必修综合基础 3三、本实验课在该课程体系中的地位与作用遗传学实验是遗传学课程的重要组成部分,属于学科基础实验范畴。
作为与相关教学内容配合的实践性教学环节,应在遗传学理论课教学过程中开设。
学生应具有普通生物学、生物化学的基础知识。
四、学生应达到的实验能力与标准有丝分裂和染色体形态观察是遗传学研究的基础,学生通过实验应能够观察描述生物体有丝分裂行为和染色体核型分析的基本方法。
通过自行选择实验材料,自行设计实验,锻炼学生独立自主的科研能力。
五、讲授实验的基本理论与实验技术知识实验一摇蚊唾腺染色体观察1. 实验的基本内容学习剖取摇蚊唾腺及制片方法,识别多线染色体上的斑带。
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目录验一人体外周血淋巴细胞培养及染色体标本制备实验二小鼠骨髓细胞染色体标本的制备实验三人类染色体G显带技术实验四人类染色体C显带技术实验五核仁形成区银染技术实验六人类染色体G显带核型分析实验七X染色质标本的制备实验八姐妹染色单体交换实验九微核检测技术实验十ABO血型的测定及其基因频率的计算实验十一苯硫脲尝味试验及其基因频率的计算实验十二人类皮纹分析实验十三遗传咨询实验十四人类基因组DNA的提取实验十五聚合酶链式反应(PCR)实验十六DNA的琼脂糖凝胶电泳实验十七PCR-RFLP技术《遗传学》实验须知一、医学遗传学实验目的和要求医学遗传学实验课是医学遗传学课程的重要内容。
实验课有助于加深和巩固基础理论知识,并进一步了解和掌握本学科的基本实验内容和操作技能。
在培养学生分析问题、综合问题和解决问题能力方面具有重要作用。
为此,要求学生做到以下几点:1、实验课前做好预习,明确实验目的、实验原理。
2、复习有关理论内容。
3、熟悉实验的主要步骤。
4、初步估计和判定实验的可能结果。
二、实验操作过程中的注意事项1、认真操作,仔细观察和综合分析实验所出现的现象与结果并及时记录。
2、如果实验结果与理论结果不一致,须及时进行科学分析,判断结果的可靠性,寻找出现误差的原因。
3、各种实验试剂用后放回原处,瓶盖封严,轻拿轻放。
4、使用微量加样器时,一定调整好取用量,按使用要求操作。
5、实验室应保持肃静,注意清洁卫生,实验中用过的废弃物品要及时清理,避免堵塞下水管道。
三、实验后的注意事项1、实验后,整理清洁所用仪器、设备,注意放回原位,以备下次使用。
2、如有仪器损坏,要及时填写破损报告,并报告老师。
3、离开实验室前,检查并关闭门、窗、水、电。
四、实验室的意外处理实验室如遇着火、烫伤等意外事件发生,必须镇静做紧急处理,并立即报告老师。
1、着火:如遇酒精灯推倒或其它原因着火,首先将一切易燃品移至远处,然后用水扑灭或者切断电源。
2、火伤:皮肤被火灼伤,用烫伤软膏涂抹,如伤势较重,立即送医院治疗。
3、如有毒药品泼溅到皮肤上,如EB,同位素等,应用大量清水进行清洗,必要时,去医院处理。
.4、割伤出血:遇玻璃割伤出血,可用碘酒或红药水消毒后,用纱布包扎。
如有玻璃留在伤口,处理前应先取出。
实验一人体外周血淋巴细胞培养及染色体标本制备【目的要求】1、初步掌握人体外周血淋巴细胞短期培养的基本方法。
2、初步掌握人体外周血淋巴细胞染色体标本制备的技术方法【实验原理】人体外周血淋巴细胞培养(人体末梢血、微量全血短期培养)及其染色体标本制备是国内外研究显示染色体最常用和效果最好的方法。
此方法取材方便,用血量少,操作简便,现已广泛应用于基础医学、临床医学的研究和染色体病的诊断等。
人体外周血中的小淋巴细胞,是已分化、处于G期的细胞,几乎不具有分裂增殖能力。
0在离体血培养细胞中很难找到正在分裂的淋巴细胞,因此,需采用刺激细胞增殖的措施。
人们发现从云豆(菜豆)中提取的植物血球凝集素(植物血凝素,PHA)可以刺激小淋巴细胞进行有丝分裂,即在PHA作用下,处在G期的小淋巴细胞可转化为淋巴母细胞。
淋巴母细胞具0有分裂能力,重新进入增殖周期进行有丝分裂。
在PHA作用下体外培养72小时左右,多数淋巴细胞已处于细胞周期的第二周期。
此时,细胞分裂相较多,但都处于分裂的不同时期。
一般来说,制作染色体标本主要是显示细胞分裂中期染色体,因中期染色体形态最为典型、最为清晰,最易辨认,是研究染色体的最好阶段。
为了获得大量可供分析的中期染色体,需在终止细胞培养前数小时加入适当浓度的有丝分裂阻断剂——秋水仙素(或其衍生物秋水仙胺)。
它可特异地抑制纺锤丝的形成、阻抑分裂中期活动而使细胞分裂停滞于中期。
借此可获得大量中期分裂相细胞。
在进行染色体标本制备的过程中,首先要进行低渗处理,使细胞体积胀大、染色体松散开而便于观察分析。
最常用的低渗液为0.075mol/L的KCl,也可用水或1%枸橼酸钠等。
低渗后的细胞需用固定液固定。
醋酸固定液具有膨胀、固定作用。
它和醇类混合固定,有利于染色体松散,可获得分散好、易于分析的分裂中期染色体标本。
现在常用的固定液为甲醇-冰醋酸(3:1)固定液。
【实验准备】1、试剂RPMI-1640营养液、小牛血清、0.25%胰蛋白酶、Hanks液、双抗(青霉素、链霉素)、2%碘酒、75%酒精、3.8%NaHC0、520U/mL肝素、40μg/mL秋水仙碱、PHA、0.075mol3/L KCl 低渗液、甲醇、冰醋酸、Giemsa染液、二甲苯和香柏油等。
2、器材超净工作台、光学显微镜(附照相设备)、隔水式恒温培养箱、离心机、冰箱、高压蒸汽消毒锅、鼓风干燥箱、无菌正压滤器、分析天平(感量1/10毫克)、架盘天平、链霉素培养瓶及瓶塞、肝素小瓶及瓶塞(取血用)、10mL吸管、直头小吸管、5mL刻度离心管、2mL或5mL一次性注射器、量筒、烧杯、搪瓷盆、搪瓷盘、试管架、片盘、片盒、止血带、棉签、大吸0球、小吸头、pH试纸、废液缸、解剖剪刀、镊子、记号笔、4C预冷的载玻片、酒精灯、火柴、染色缸或染色玻璃板和擦镜纸等。
.【实验材料】人静脉血【实验内容、方法】一、采血在采血前,对各种用品进行清洗、无菌处理,配制、分装并冻存培养液(5mL/瓶),用5mL注射器抽取肝素0.1mL,备用。
常规消毒肘部皮肤,用抽取肝素的注射器静脉采2mL,轻轻摇匀,待接种培养。
二、接种培养将事先配制冻存的装有5mL培养液的链霉素培养瓶或其它培养瓶从冰箱中取出,置室温0融化,每瓶滴入约0.3mL肝素抗凝血,轻轻摇匀,置37C培养箱培养72小时。
三、积累分裂中期细胞在终止培养前2小时,于培养瓶内加入浓度为20μg/mL秋水仙素1滴,终浓度为00.1-0.15μg/mL,摇匀,置37C温箱继续培养2小时后收集细胞、制片。
四、制片1、收集细胞:从培养箱中取出培养瓶,用小吸管将培养物吹打均匀,移人5ml刻度离心管内,以2000r/min离心10分钟,吸去上清液,保留底物。
、低渗:每管加入37C预温的0.075mol/LKCL溶液4ml,用吸管轻轻吹打均匀,置037C水浴02锅中低渗30分钟,以达到红细胞破坏、淋巴细胞膨胀和染色体分散之目的。
3、预固定:低渗处理后,每管加入1 mL甲醇:冰醋酸(3:1)固定液,将细胞轻轻吹打均匀,置离心机2000r/min离心10分钟。
4、固定(一):去上清液,加固定液5mL,吹打均匀,固定30min,2000r/min离心10分钟。
5、固定(二):去上清液,再加入5mL固定液,吹打均匀,再次固定30min,2000r/min离心10分钟。
6、滴片:去上清液,留底物,每管加入少许(约0.2mL)固定液,将底物吹打均匀,制成细胞悬液。
然后用吸管吸取混匀的细胞悬液,约以20cm或更高的距离滴至预冷的载玻片上,每片约2~3滴,随即将玻片在酒精灯火焰上微烤(一过性微烤数次),以助细胞、染色体分散,使之均匀平铺于玻片上。
将制片放人片盘,空气干燥后,收集于片盒中。
7、染色和观察:待制片晾干后,放入约1:10 Giemsa染液的染色缸中染色15分钟左右,或架在染色用玻璃板上扣染15分钟左右(扣染是指染色时,将染色体制片的细胞面朝下,架在玻璃板上,将染液滴入玻璃板和细胞面之间),自来水轻轻冲洗,晾干后光镜下观察。
先用低倍镜观察后,选择分散好的染色体换为高倍及油镜观察,注意人类核型中近端、亚中和中着丝粒染色体的形态特点。
【注意事项】1、有关淋巴细胞培养的注意事项同实验十二。
2、PHA的质量是人体外周血淋巴细胞培养成败的关键,不同来源或同一厂家的不同批号、不同的保存时间,PHA的效价可能会有较大的差异,直接影响培养细胞中分裂细胞的数量。
故每批PHA 正式使用前,须进行一次预实验,摸索PHA的质量和使用量。
其使用量不宜过大,否则会导致红细胞凝集。
一般,自己直接从菜豆中提取的PHA效果较好。
3、接种的血样标本愈新鲜愈好。
肝素用以抗凝,用量不宜过多。
、秋水仙素用量和作用时间要适当。
该药有强烈的毒性作用,用量过大、作用时间过4.长,可使染色体缩短和发生异常分裂现象,甚至染色体破碎。
5、低渗是制片好坏的重要环节。
低渗液用量的多少与作用时间的长短都会影响染色体的制片质量,如染色体分散不好、有胞浆背景,或细胞破损、染色体丢失等。
要注意低渗液0使用前需37C 温箱预温。
6、低渗后的预固定也很重要,预固定时,固定液量不要多,加入固定液后要立即用吸管吹打均匀,用力不要过猛。
另外两次固定时,固定液也不要过多,吹打时用力也不要过猛,以免细胞破碎,染色体丢失。
固定液要在使用时配制。
7、最后的滴片也是染色体制片好坏的很关键的一步。
载玻片上有油污或预冷不够,或滴片时所滴悬液重叠、操作不好,或底物悬液过浓等都直接影响细胞、染色体的分散。
底物悬液过稀或酒精灯上烤片时间太长,都可能造成制片中可供分析用的染色体很少,甚至找不到染色体。
【实验报告】1、血培养中PHA所起的作用是什么?秋水仙素的作用是什么?2、简述血培养和外周血淋巴细胞染色体标本制备的过程。
实验二小鼠骨髓细胞染色体标本的制备【目的要求】1、初步掌握实验动物骨髓细胞染色体标本的一般制备方法(直接法)。
2、了解小白鼠染色体的形态特征及其数目。
【实验原理】骨髓细胞具有旺盛的分裂增殖能力。
在骨髓细胞中,有丝分裂细胞所占的比例比一般细胞大。
为了积累更多的有丝分裂中期细胞,可在收集细胞前进行秋水仙素处理。
通过制备的骨髓染色体标本,可以观察毒性物质在体内对细胞染色体的影响。
同时,在检测环境致突剂方面,也有其独特的优点。
方法简捷、直接,易于掌握,一般实验室均可进行。
因此,此法也是用动物实验检测有害物质对机体遗传物质损伤的实验方法之一。
【实验准备】1、试剂0.04%秋水仙素、0.075mol/L KCl、甲醇、冰醋酸、Giemsa染液、香柏油、二甲苯等。
2、器材光学显微镜、恒温培养箱、离心机、架盘天平、酒精纱布及其它一般用品。
【实验材料】健康小白鼠(体重约20克)【实验内容、方法】1、取材和低渗取材前3~4小时,于小鼠腹腔内注入0.04%秋水仙素0.1mL/10g体重,以积累中期分裂相。
断颈髓法处死小鼠,取其股骨,用酒精纱布清除其上粘附的肌肉及结缔组织,并用剪刀剪去股骨两端少许骨骺及骨皮质,暴露骨髓质,用注射器抽取0.075mol/L KCl 5mL冲洗骨髓腔,将冲洗后的液体收集到5mL离心管中,反复冲洗两次以上,至骨髓腔变白为止,0将冲洗液吹打均匀后置37C恒温箱低渗处理20分钟。
、预固定2.取出低渗后的离心管,加入2~3滴预固定液(甲醇:冰醋酸=3:1),立即吹打均匀,平衡后用离心机2500r/min离心5分钟,去上清液,留底物。
3、固定一加固定液5mL于离心管中,吹打均匀,室温固定10分钟后,2500r/min离心5分钟。