B族链球菌检测试剂
B族链球菌快速鉴定试剂层析法使用说明书
【注意事项】
1. 本产品仅供体外诊断一次性使用，请在有效期 内使用。
2. 本产品的贮存温度为 6~28℃，请勿冻存。 3. 本试剂中的 1 号抽提液中含有少量亚硝酸钠、 2 号抽提液中含有少量乙酸，可能对皮肤有一定腐蚀 性，请避免与人体直接接触，并做好防护。 4. 为了获得最佳的检验结果，最好采用顶端为人 造纤维或者涤纶材质的塑料柄擦拭棒，因为棉签可能 有脂肪、漂白剂等的残留，对样本造成影响；同时注 意正确的样本采集方式。 5. 不同批号、不同品种的试剂组分不得混用。 6. 试剂卡开封后 2 小时可能失效，造成误诊，建 议在 1 小时内使用。 7. 所有标本、废液、拭子、抽提管等均按传染性 污染物处理。
2. 将拭子放入已加入抽提液的抽提管中，搅动拭
子数秒钟，在管壁上反复挤压，室温静置 5 分钟。 3. 摇动拭子数秒钟，在管壁上反复挤压，旋转。 4. 挤出液体后取出拭子，管内的抽提物即为检测
样本。 5. 从铝箔袋内取出鉴定卡，垂直滴入 2-3 滴样本
于样品孔中，10~15 分钟内判定结果；2h 后检测结果 无效。
B 族链球菌快速鉴定试剂（层析法） 使用说明书
【产品名称】 通用名称：B 族链球菌快速鉴定试剂（层析法） 英文名称：Group B Streptococcus Rapid
Diagnostic Kit (Chromatography)
【包装规格】 20 人份/盒，40 人份/盒，80 人份/盒
【预期用途】 用于体外鉴定女性阴道宫颈拭子样本中的 B 族
106CFU/mL、107CFU/mL 的 B 族链球菌）进行测定，
B族链球菌核酸检测试剂盒(PCR荧光探针法)
B族链球菌核酸检测试剂盒（PCR荧光探针法）B族链球菌（GBS）核酸检测试剂盒样本要求1.样本采集：采用藻酸钙、普通棉拭子或涤纶拭子采集生殖道或直肠等部位带上皮细胞的分泌物标本。
2．标本存放：待测样本在2-8℃保存不应超过24小时；-18℃以下保存不超过4天。
样品冻融6次以内无影响，但应尽量避免反复冻融。
3．标本的运输条件：冷冻4天内无影响，冷藏2天内无影响。
4.含血样本无法正常检测应避免。
5.研究显示，常用栓剂药物会对试剂检测盒造成较大影响，因此取样前应避免该药物的使用。
检验方法1.DNA提取（在样品处理区操作）（1）妊娠34―37周孕妇生殖道或直肠分泌物：取含有分泌物的生理盐水1ml，13000rpm离心10min，弃上清液，沉淀，加无菌生理盐水1ml混匀，13000rpm离心5min，弃上清。
沉淀加入50μlDNA提取液充分混匀，99℃―100℃加热处理10min，13000rpm离心10min，吸取上清至1.5ml离心管中保存，DNA提取完毕。
（2） GBS阳性对照品提取：取50μl GBS阳性对照品加入1.5ml离心管中，13000rpm离心10min，沉淀加入50μlDNA提取液充分混匀，99℃―100℃加热处理10min，13000rpm离心10min，吸取上清至1.5ml离心管中保存，DNA提取完毕。
（3）空白对照品提取：同GBS阳性对照品提取。
2.GBS PCR反应液配制（在试剂准备区进行）解冻试剂，在打开盖子之前振荡并短暂离心个试剂管。
按标本数量分装GBS PCR反应液。
按每管35μl分装至0.2mlPCR反应管中，转入样品处理区。
3.加样（在样品处理区进行）分装好的各反应管加入处理好的DNA样本5μl，阳性对照品5μl及阴性对照品5μl，短暂离心使所有试剂集中到反应管底部，确定盖好管盖或封膜后，立即进行PCR扩增反应。
4.PCR扩增（在PCR检测区进行）（1）UNG反应：50℃2min （2）预变性：95℃5min（3）PCR：45个循环；60℃时分别检测FAM和HEX通道荧光信号，选择反应体系40μl. 5.阈值测定阈值设定在空白对照正常扩增区线下方，基线设定可选择3-5个循环，一般选择5.00，若是最高浓度Ct值小于5.00，则在3-5之间按照低于最高浓度Ct值设定；这类标本应稀释后再进行检测。
B族链球菌(GBS)介绍
B族链球菌（GBS）介绍一、简介B族链球菌（group B streptococcus，GBS）是革兰阳性球菌，也称无乳链球菌（S. agalactiae），常定植于成人下生殖道及胃肠道，同时也可定植于婴幼儿上呼吸道，是新生儿感染和死亡的主要原因。
GBS是围产期严重感染性疾病的主要致病菌之一，大约25%～40%孕妇的产道携带这种细菌，其中40%～70%在分娩过程中会传递给新生儿，大约有1%～3%的新生儿会出现早期侵入性感染，其中有5%会导致死亡。
二、适用人群：1．对所有孕妇于妊娠35～37周进行GBS筛查a)中华医学会妇产科学分会产科学组在《孕前和孕期保健指南（第1版）》中已将妊娠35～37周GBS筛查作为一个备查项目b)美国疾病预防控制中心在《围产期GBS预防指南》中已将GBS筛查定为普查项目2．对出现以下情况的新生儿进行GBS检测a)新生儿出现类似早发型GBS感染症状，如呼吸困难、发热等败血症迹象b)母亲在产前未做过GBS筛查的新生儿c)母亲在产前GBS筛查结果阳性的新生儿三、如何采样1.采样工具：一次性无菌拭子2.采样步骤1）在抗生素使用前取样①孕妇采样：a)生殖道分泌物采样：先拭去阴道过多的分泌物，用一支无菌拭子插入阴道至内1/3处，沿阴道壁轻轻旋转取得分泌物；b)直肠分泌物采样：用另一支无菌拭子插入肛门，在肛门括约肌以上约2.5cm处，沿肠壁轻轻旋转取得标本；c)将两支无菌拭子分别放入无菌套管中，密闭送检；（注意：“保妇康栓”等栓剂药物会对检测造成较大影响，因此建议避免在用药期采样，如无法避免，则仅单独采直肠分泌物样本送检即可）。
②新生儿取材：可在鼻孔、腋下、腹股沟和脐周等处随机采样，用一支无菌拭子旋转1周，放入无菌套管中，密闭送检。
2）无菌管标识：在相应的无菌管管壁上填写样本采集位置（孕妇生殖道/孕妇直肠/新生儿）、采样时间等。
3.样本运输：2-8℃冷藏运输，3天内送达。
四、结果解读（需要让赵翠写个专业的）1．B族链球菌核酸检测为“阴性”或测定值<1.0E+3 copies/ml：说明本次送检样品带菌量低于本试剂盒的检测限值，不需治疗，随时观察。
完整word版,B族链球菌(GBS)介绍
B族链球菌（GBS）介绍一、简介B族链球菌（group B streptococcus，GBS）是革兰阳性球菌，也称无乳链球菌（S. agalactiae），常定植于成人下生殖道及胃肠道，同时也可定植于婴幼儿上呼吸道，是新生儿感染和死亡的主要原因。
GBS是围产期严重感染性疾病的主要致病菌之一，大约25%～40%孕妇的产道携带这种细菌，其中40%～70%在分娩过程中会传递给新生儿，大约有1%～3%的新生儿会出现早期侵入性感染，其中有5%会导致死亡。
二、适用人群：1．对所有孕妇于妊娠35～37周进行GBS筛查a)中华医学会妇产科学分会产科学组在《孕前和孕期保健指南（第1版）》中已将妊娠35～37周GBS筛查作为一个备查项目b)美国疾病预防控制中心在《围产期GBS预防指南》中已将GBS筛查定为普查项目2．对出现以下情况的新生儿进行GBS检测a)新生儿出现类似早发型GBS感染症状，如呼吸困难、发热等败血症迹象b)母亲在产前未做过GBS筛查的新生儿c)母亲在产前GBS筛查结果阳性的新生儿三、如何采样1.采样工具：一次性无菌拭子2.采样步骤1）在抗生素使用前取样①孕妇采样：a)生殖道分泌物采样：先拭去阴道过多的分泌物，用一支无菌拭子插入阴道至内1/3处，沿阴道壁轻轻旋转取得分泌物；b)直肠分泌物采样：用另一支无菌拭子插入肛门，在肛门括约肌以上约2.5cm处，沿肠壁轻轻旋转取得标本；c)将两支无菌拭子分别放入无菌套管中，密闭送检；（注意：“保妇康栓”等栓剂药物会对检测造成较大影响，因此建议避免在用药期采样，如无法避免，则仅单独采直肠分泌物样本送检即可）。
②新生儿取材：可在鼻孔、腋下、腹股沟和脐周等处随机采样，用一支无菌拭子旋转1周，放入无菌套管中，密闭送检。
2）无菌管标识：在相应的无菌管管壁上填写样本采集位置（孕妇生殖道/孕妇直肠/新生儿）、采样时间等。
3.样本运输：2-8℃冷藏运输，3天内送达。
四、结果解读（需要让赵翠写个专业的）1．B族链球菌核酸检测为“阴性”或测定值<1.0E+3 copies/ml：说明本次送检样品带菌量低于本试剂盒的检测限值，不需治疗，随时观察。
荧光PCR体系检测B族链球菌的性能验证
资料与方法
１ 一般资料 选取从 ２０１７年 １０月至 ２０１８年 ７月来北京市石 景山医院产科门诊就诊的孕产妇 ２０例，采集患者肛 拭子。 ２ 仪器与试剂 ＳＬＡＮ９６Ｐ型荧光定量 ＰＣＲ仪（上海宏石医疗 科技有限公司），Ｂ族链球菌核酸检测试剂盒Ⅰ和Ⅱ
ＤＯＩ：１０．１１７４８／ｂｊｍｙ．ｉｓｓｎ．１００６－１７０３．２０１９．０６．０４１ 收稿日期：２０１８０５２９；修回日期：２０１８０７０９ 作者简介：刘玉兰，女，检验技师，主要从事分子生物学检验研究。 通讯作者：孙艳艳。Ｅｍａｉｌ：ｓｊｓｙｙｊｙｋ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
标记免疫分析与临床 ２０１９年 ６月第 ２６卷第 ６期
１０７１
荧光 ＰＣＲ体系检测 Ｂ族链球菌的性能验证
刘玉兰，吴允凤，高川川，孙艳艳
（首都医科大学石景山教学医院 北京市石景山医院，北京 １０００４３）
摘要：目的 对荧光聚合酶链式反应（ＰＣＲ）体系检测 Ｂ族链球菌（ｇｒｏｕｐＢＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ，ＧＢＳ）的精密度、准确性和检测限 进行验证。方法 取 １例 ＧＢＳＤＮＡ为阳性的临床样本重复扩增 １０次，以验证精密度；扩增 ２０例结果已知的临床样本， 将结果与实际结果比对，以验证准确性；将阳性对照参考品稀释至 １０４ＣＦＵ／ｍＬ，重复扩增 １０次以验证检测限。结果 重 复扩增 １０次的检测结果均为阳性，且所有通道的 ＣＴ值变异系数 ＣＶ＜５％；２０例标本的检测结果比对完全相符，符合率为 １００％；稀释到检测限的 １０次重复实验结果均为阳性。结论 荧光 ＰＣＲ体系检测 ＧＢＳ结果稳定、可靠，适用于医学实验 室对 ＧＢＳ的检测。 关键词：荧光 ＰＣＲ； Ｂ族链球菌； 性能验证
第一医院进行检测，比对实验结果，应有≥９５％样本 结果一致为合格。 ３．３ 检测限 将试剂盒中提供的阳性对照参考品稀释至 １０４ ＣＦＵ／ｍＬ（试剂说 明 书 声 称 的 检 测 限 ），稀 释 后 样 品 重复扩增 １０次，以阴性结果不大于 结果均为阳性，且所有通道的 ＣＴ值变 异 系 数 ＣＶ＜５％ （ＣＶＧＢＳ ＝０．１６％，ＣＶ内标 ＝ ０．３３％），１０次的扩增曲线见图 １。
GBS介绍
对于青霉素过敏的产妇的用药
----摘自美国CDC《围产期GBS预防指南》2010修订版
对于那些对青霉素过敏的妇女，若无高危过敏，头孢唑 林是最好的选择
如果孕妇对青霉素有高危过敏，针对GBS的抗生素治疗 可选用克林霉素和万古霉素，但是相关数据表明有效性 略差 应避免血管神经性水肿，呼吸窘迫，或荨麻疹症状的出 现，同时严格把控青霉素或头孢菌素过敏症。 在2010GBS预防指南里，尚未提及红霉素
对于青霉素过敏的产妇的用药
----摘自美国CDC《围产期GBS预防指南》2010修订版
若对于青霉素或头孢菌素都存在高危过敏，倘若对于红
霉素的耐药阻力测试为负，则可选用克林霉素作为GBS的 抗生素治疗
对于青霉素或头孢菌素过敏反应，若对克林霉素产生耐
药，或者对红霉素的耐药阻力测试敏感性未知，可选用
《围产期GBS预防指南》指出
自发性早产的或胎膜早破早产的妇女都应该入院时进行 GBS的筛查，如果某些条件允许，可以延长胎膜早破早 产的潜伏期 所谓条件允许：即母亲符合接受抗生素治疗的条件，给 予：氨苄青霉素2克静脉注射（IV）随后48小时内每6 个小时1克静脉注射（IV）
GBS的筛查与预防
孕35~37周取阴道和直肠拭子作GBS检测 未作检测 GBS-PCR 检测（-） 产时高危因素；产时发 热≥38 ℃，胎膜早破≥18 小时,进行GBS检测 GBS-PCR 检测（+） GBS-PCR 检测（+） 给以青霉素预防
给以青霉素预防
无
不需要药物预防
GBS的取样部位和方法
1、取样部位：阴道和直肠
阴道口1 / 3 肛门括约肌2~5cm
GBS的取样部位和方法
GBS-DNA试剂准备 (2)
GBS-DNA试剂准备标准操作规程
1.目的
规范B族链球菌核酸DNA定性检测的试剂准备操作。
2.范围
GBS-DNA 定性检测实验的PCR 反应液配制。
3.操作人员
PCR室在岗工作人员。
4. 操作步骤
4.1 GBS—DNA试剂准备
4.1.1 试剂复融：从冰箱中取出B族链球菌核酸检测试剂盒，从试剂盒中取出GBS- PCR 反应液、酶混合物、UNG，提取固形物、浓缩清洗液。
GBS - PCR 反应液置于室温复融，复融后把试剂震荡混匀并放于掌式离心机上离心5 秒。
酶混合液不需复融，震荡混匀后放于掌式离心机上离心5 秒，立即放回4 ℃冰箱。
4.1.2 排PCR 管：在PCR 管盒上排列n 个PCR 管（n ＝标本数＋阴性对照＋阳性对照)，并盖上PCR 盒盖。
4.1.3 配液：取出GBS-PCR反应液，将n×44.3μL GBS-PCR反应液，n×0.5μL Taq DNA Polymerase，n×0.2μL UNG加入一个离心管并振荡混匀，瞬时离心后，分装至n个PCR反应管，每管45μL，盖上管盖后转移到样本处理区的传递窗内。
4.1.4 清洗液制备：取出10×浓缩清洗液与灭菌纯化水按1:9进行稀释。
4.1.5 配液结束后立即把PCR 主反应液、酶混合物、UNG置于一20 ℃冰箱，将提取固形物、清洗液及阳性对照、阴性对照、内参照转移到样品处理区的传递窗内。
b族链球菌显色鉴定培养基说明书
b族链球菌显色鉴定培养基说明书一、引言B族链球菌是一类常见的细菌，它们广泛存在于自然界中，包括土壤、水体、动植物体内等。
B族链球菌对人类和动物的健康有着重要的影响，因此对其进行准确的鉴定和检测具有重要意义。
本说明书旨在介绍一种新型的B族链球菌显色鉴定培养基，以帮助实验室进行准确的鉴定工作。
二、材料与方法1. 培养基配方：- 蛋白胨：10克- 葡萄糖：5克- 氯化钠：5克- 磷酸二氢钾：2克- 氯化钾：0.2克- 溴酚红：0.02克- 纯化水：1000毫升2. 培养基制备：a. 将蛋白胨、葡萄糖、氯化钠、磷酸二氢钾、氯化钾溶解于纯化水中，加热至沸腾，搅拌均匀。
b. 将溴酚红溶解于适量的纯化水中，加入到培养基中，搅拌均匀。
c. 调整pH值至7.2-7.4。
d. 用适当容器装入培养基，高压灭菌。
三、结果与讨论B族链球菌显色鉴定培养基是一种基于显色反应的鉴定方法。
该培养基中的溴酚红能够与B族链球菌产生的酸性代谢产物发生反应，使培养基呈现红色。
通过观察培养基的颜色变化，可以初步判断是否存在B族链球菌。
在实际应用中，我们可以将待测样品接种于B族链球菌显色鉴定培养基上，然后进行培养。
如果培养基在24小时内呈现红色，说明存在B族链球菌。
如果培养基保持黄色，说明不存在B族链球菌。
需要注意的是，B族链球菌显色鉴定培养基只能初步判断是否存在B族链球菌，不能确定具体的菌种。
因此，在鉴定结果为阳性的情况下，还需要进行进一步的鉴定工作，如形态学观察、生化试验等。
四、结论B族链球菌显色鉴定培养基是一种简单、快速的鉴定方法，能够初步判断是否存在B族链球菌。
该培养基的制备方法简单，成本低廉，适用于实验室中的常规鉴定工作。
然而，需要注意的是，该培养基只能初步判断是否存在B族链球菌，不能确定具体的菌种，因此在实际应用中还需要结合其他鉴定方法进行综合分析。
通过本说明书的介绍，相信读者对B族链球菌显色鉴定培养基有了更深入的了解。
希望这种新型培养基能够在实验室中得到广泛应用，为B族链球菌的鉴定工作提供便利和准确性。
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B族链球菌检测试剂
检测原理
产品采用胶体金免疫层析（双抗体夹心法）的原理。
B族链球菌的抗原经化学抽取后，加入到样品孔,流经结合垫时与胶体金标记的抗B族链球菌抗体反应。
此混合物流向包被有另一株抗B族链球菌抗体的硝酸纤维素膜时与之反应并形成“抗体-抗原-抗体-胶体金”复合物。
样本中含有B族链球菌时，在膜上显现出红色检测线（T）当样本为不含B族链球菌或其浓度低于本产品灵敏度时，T线不显示。
在检测线上方的包被有羊抗鼠IgG二抗，捕获胶体金结合物并形成质控线（C）,即此试剂有效。
主要组成成分
1.B族链球菌检测试剂由试纸条鹤塑料壳组成，试纸条上主要成分有：
a）胶体金标记的抗B族链球菌抗体（固定在玻璃纤维上）
b）C线：羊抗鼠IgG多克隆抗体（固定在硝酸纤维素膜上）
c）T线：抗B族链球菌抗体（固定在硝酸纤维素膜上）
d）PVC底板和卡壳
2.1号抽取液（2M亚硝酸钠）2号抽取液（IM乙酸）
储存条件及有效期
检测试剂在4-30℃密封保存，有效期12个月，检测试剂铝袋开封后，请即刻使用。
试剂如不能即刻使用，建议在4-30℃,湿度小于40%的环境下放置不超过1小时。
样本要求
1.主要样本为阴道宫颈拭子，样本采集不受临床症状及用药的影响。
2.采样拭子最好采用顶端为人造纤维或者涤纶材质的塑料柄擦拭棒。
3.将无菌拭子置入女性阴道下1/3,旋转3-5圈即可。
4.如果检测前24小时内发生性交、盆浴、阴道灌洗等情况，可能导致假阴性。
5.如果阴道出血，建议先用无菌拭子将血擦拭干净，再取样。
6.取样后样本应尽快进行测试，如不能及时测试可将样本置4C冰箱储存,超过3天在-20℃保存，测试前注意恢复至室温，临床标本在运输过程中要避免反复冻融，应该在2-8°C运输。
检验方法
1.在抽取管中加入1号抽取液和2号抽取液各5滴，充分混匀。
2.将阴道拭子放入已加入抽取液的抽取管中，室温静置5分钟。
3.摇动拭子数秒钟，在管壁上反复挤压，旋转。
4.挤出液体后取出拭子，管内的抽取物即为检测样本。
5.从铝箔袋内取出检测卡，垂直滴入2滴样本于样品孔中，10分钟判定结果，15分钟后检测结果无效。
6.质量控制程序：试剂都有质控区（C）,质控区内所显示的红色条带是判定是否有足够样本,层析过程是否正常的标准，同时也是作为试剂内控的标准（质控区内出现条带表示试剂有效；否则试剂无效）
阳性判断值
本产品能够检出不低于105CF U∕mL的B族链球菌
检验结果的解释
阳性：在检测线（T）及控制线（C）各出现一条明显可见的红色条带，检测结果为阳性，提示样本中含有B族链球菌。
阴性：仅在控制线（C）出现一条红色条带，检测结果为阴性，提示样本中不含有B族链球菌或其浓度低于本试剂的灵敏度。
无效：在控制线（C）未出现红色条带，表明试验失败或试剂无效，请另取试剂重新检测。
检验方法的局限性
1.本试剂仅用于B族链球菌感染的初步筛选，检测结果仅供参考，不得作为临床诊治的唯一依据，对患者的临床管理应结合其症状/体征、病史、其他实验室检查及治疗反应等情况综合考虑。
2.若样本量不足或细菌浓度小于检测灵敏度，可能会获得阴性结果。
如果检测前24小时内发生性交、盆浴、阴道灌洗等情况，可能导致假阴性；若以上原因造成结果出错，建议按说明书要求进行确认试验。
产品的性能指标
1.最低检测限：不大于105CFU∕mL
2.阳性符合率：检测5*105、5*1。
6、1*性7、5*107CFU∕mL的B族链球菌，结果均为阳性。
3.阴性符合率：检测浓度均为KfCFU/mL的A族链球菌、粪肠球菌、白色念珠菌与金黄色葡萄球菌菌株，检测浓度为107CFU∕mL的阴道加德纳菌、ICfiFWmL沙眼衣原体、
IO7个∕r11L阴道毛滴虫和107cFU∕mL淋病奈瑟菌，结果均为阴性。
4.重复性：取同一批号试剂，检测106CFU∕mLB族链球菌,结果均为阳性,显色度一致。
5.批间差：取三个试剂批号，检测106CFU∕mLB族链球菌，结果均为阳性,显色度一致。
6.干扰反应：血液、浓度为0.12ug∕mL的青霉素、0.25ug∕mL的克林霉素和035ug∕mL的万古霉素、浓度为500mg∕mL的甲硝哇、500mg∕mL的替硝噗、200mg∕mL 的米康嘎、IoOmg∕mL的克霉哇，1：5比例稀释的妇炎洁、洁尔阴、妇阴洁及达妇宁对本试剂均无干扰。
7.钩状效应（HOOK）：出现钩状效应时B族链球菌抗原的最低浓度为IO9CFUZmLo
8.不同步那个血清型的炎症：本试剂对血清型la、Ib、II、10、IV、V、VI、V11>VIIl 和IX的B族链球菌均能检出。
注意事项
1.本产品仅供体外诊断一次性使用，请在有效期内使用。
2.本产品的贮存温度为4-30℃,请勿冻存。
3.本试剂中的1号抽取液中含有少量亚硝酸钠、2号抽取液中含有少量乙酸，可能对皮肤有一定腐蚀性，请避免与人体直接接触，并做好防护。
4.为了获得最佳的检验结果，最好采用顶端为人造纤维或者涤纶材质的塑料柄擦拭棒，因为面前可能有脂肪、漂白剂等的残留，对样本造成影响；同时注意正确的样本采集方式。
5.不同批号、不同品种的试剂组分不得混用。
6.试剂卡开封后2小时可能失效，造成误诊，建议1小时内使用。
7.所有标本、废液、拭子、抽取管等均按传染性废物处理。