--微生物检验教学课件(扬州大学)第六节 链球菌检验
– 草酸钾人血浆配制： 草酸钾0.01 g放入 灭菌小试管中，再 加入5 ml人血，混 匀，经离心沉淀， 吸取上清液即为草 酸钾人血浆。
四、生化特性
1. 能发酵简单的糖类，产酸不产气，分解葡萄 糖，但对乳糖、甘露醇、水杨酸、山梨醇等 的分解，随菌株不同而不同。
2. 链球菌一般不分解菊糖。
胆汁溶菌试验
• 原理 胆盐能通过活化肺炎链球菌的自溶酶而溶解 肺炎链球菌，但不能溶解草绿色链球菌。这两个特 性可用来鉴别肺炎链球菌与α溶血性链球菌。
• 引起猪链球菌病的病原，至少有三种：马链 球菌兽疫亚种、猪链球菌2型、猪链球菌1型 等。
马链球菌兽疫亚种，过去又叫兽疫链球菌，可致 猪急性败血症及关节炎，该菌呈β溶血，兰氏血 清学分群属C群，对各种动物有致病性，人工感 染可致死小白鼠，但未见感染人并致死的报道。
猪链球菌不仅可致猪败血症、肺炎、脑膜炎、关节炎及心内膜炎，尤其
3.8%柠檬酸钠溶液
• 成分
– 柠檬酸钠 – 蒸馏水
3.8g 100ml
• 121℃，15min灭菌备 用
成分
– 含1%胰蛋白胨的牛心浸液 – 1：25000结晶紫盐水溶液 – 1：800三氮化钠溶液 – 脱纤维兔血（或羊血）
匹克氏肉汤
200 ml 10 ml 10 ml 10 ml
• 将上述已灭菌的各种成分，用无菌手 续依次混合，分装于无菌试管内，每 管内约2 ml，保存于冰箱内备用。
是其中的猪链球菌2型致病性最强，可感染特定人群并致死，是一种
人畜共患病病原。
1998年江苏分离株即为此菌。根据兰氏血清学分群，猪链球菌2型属 于R群，1型属于S群。猪链球菌2型的溶血性不甚典型，因条件而异，
可表现为α溶血或β溶血。
• 虽然鉴定链球菌一般难度不大，但要确定是否为猪链球菌就比较困难， 确诊要用专门实验室提供的猪链球菌2型或1型的抗血清作凝集试验等。 近年来，分子生物学的手段已引入链球菌的鉴定。
马链球菌马亚种 马链球菌兽疫亚种
猪链球菌2型
猪链球菌1型
3、根据抗原结构分类：（主要是
Lancefield分类法）
• 根据链球菌细胞壁中的多糖抗原的不同，将链球菌 分成A、B、C、D、E、F、G、H、K、L、M、N、 O、P、Q、R、S、T、U、V [A—H，K—V]等20 个血清群。
• 鉴于同血清群的不同种链球菌在生理生化特性上差 异较大，因此在鉴定链球菌时，不能单凭血清群的 检查，还须结合生理生化特性综合判定。
检样：25g（ml）+225ml灭菌生理盐水
葡萄糖肉浸液肉汤或匹克氏 肉汤
血平板 血平板（分纯培养）
链激酶试验
杆菌肽敏感试验
观察溶血
均为阳性 报告
革蓝氏染色
链激酶(溶纤维蛋白酶)试验
链激酶能激活正常人体血液中的血浆蛋白酶 原，使成血浆蛋白酶，而后溶解纤维蛋白。
实验步骤： 吸取草酸钾血浆0.2 ml，加0.8 ml灭菌 生理盐水，混匀， 再加入链球菌培养物0.5 ml及0.25%氯 化钙0.25 ml，震荡混匀，37 ℃水浴10 min，血浆混合物自行凝固（凝固程度至 试管倒置，内容物不流动） 然后观察凝固块完全溶解的时间，完全 溶解为阳性，如24 h不溶解即为阴性。
链球菌属分类的演变
• 原来属于链球菌属，在分类上属于 • D群的肠球菌→肠球菌属 • 和N群链球菌的乳球菌→乳球菌属。
• 根据链球菌在血平板上的溶血现象将其分类，以及 Lancefield血清学分类等传统方法仍是临床实验室 鉴定链球菌时常规使用的方株为厌氧菌； 2. 对营养要求较高，在普通培养基上生长不良，需加有血液
第六节 链球菌检验
一、形态特性
1、本属细菌呈圆形或卵圆形，直径0.5~1m，呈链状排列，
但菌链的长短与菌种及生长环境有关。 一般来说 ➢固体培养基上多为短链、成对或聚集成丛似葡萄球 菌样，而在液体培养基中常排列成长链状； ➢自败血症猪体分离的菌株多为成双或短链状；
2、G+，但老龄培养物常转呈G－。
• 试验方法
– 在1mL待鉴定菌1824h培养液中加入2滴10%去氧胆酸 钠，35℃孵育15min后鉴定管由浑浊变为透明为阳性。同 时在另一管中加无菌生理盐水为阴性对照。
CAMP试验
• 用于B群的无乳链球菌 的鉴定。
• 它能产生一种CAMP 因子，能增强金色葡 萄球菌溶血素的活性， 在两菌划线接种邻近 处出现箭头状的扩大 溶血区。
性炎症；
（2）β溶血性链球菌：致病力强，常引起人和动物
的各种链球菌病，大部分致病性链球菌属于此类；
（3）γ溶血性链球菌：一般不致病。
2、根据生理生化特性分类：
《伯吉氏系统细菌学手册》（1986，第2卷），将
本属细菌分为六大类29个正式种：
兰氏分群 A B C
R S
种名 化脓链球菌
无乳链球菌
停乳链球菌 停乳链球菌类马亚种
（或血清）、葡萄糖等才能生长良好。 3. 最适生长温度为37℃，最适生长pH7.4-7.6； 4. 在血清肉汤中形成粘稠或絮状沉淀，上液清朗； 5. 在血琼脂平板上，各种链球菌菌落基本相似，多呈细小或
露滴状、灰白色、圆而微凸、表面光滑、边缘整齐、半透 明或不透明的菌落，菌落直径大小0.5-0.75mm。
3、均无芽胞；除D群一些菌株外，也都无鞭毛不运 动；
4、A、B、C、D群中大多数菌株在血清培养基上 的幼龄培养菌或病料中的菌体常见荚膜。
二、分类
链球菌分类，迄今尚没有统一，多以其 溶血性、生理生化特性和抗原结构等加以 分类。
1、根据链球菌对绵羊红细胞的 溶血能力分为：
（1）α溶血性链球菌：致病力弱，多引起局部化脓
金色葡萄球菌
血 平 板
链球菌
重要的链球菌种
无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌 化脓链球菌 肺炎链球菌 马链球菌兽疫亚种 马链球菌马亚种
猪链球菌病的病原
猪链球菌病是世界各国常见的一种猪传染病，危害 严重。
在我国也有流行，1998年夏，江苏省等地暴发猪 病引起大批生长猪死亡，与之接触的屠宰人员，也 因伤口感染而发病死亡，经确诊为猪链球菌病，从 而再次引起人们对此病的关注。
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《微生物检验学》PPT课件
膜磷壁酸 壁磷壁酸 表面蛋白：SPA、M蛋白
Ｇ－菌细胞壁 特殊结构 (外膜)
磷脂
脂蛋白
类脂Ａ：毒性部分
脂多糖（LPS，内毒素）： 核心多糖：属和组特异
特异多糖：种和型特异
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22
Ｇ＋和Ｇ－菌细胞壁差异：
特征 强度 厚度
肽聚糖层数 肽聚糖含量
磷壁酸 外膜 结构
革兰氏阳性菌 较坚韧
厚，20～80nm
牛痘、巴斯德（霍乱、炭疽、狂犬疫苗）、白喉抗毒素动 物血清治愈白喉。
（３） 抗生素的发现：
目前遇到的问题：滥用导致耐药性增高
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9
3． 现代微生物学时期：近二、三十年
（1）新病原微生物的发现
a．传统病原卷土重来； b．新型病原。
（2）致病机理的深入研究
a．采用新技术； b. 各种致病因素的分子机理及调控。
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34
（二）细菌的变异现象
形态与结构变异 培养特性变异 毒力变异 耐药性变异
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35
（三）细菌变异的机制
突变
基因的转移和重组
转化（transformation）是受体菌直接摄取供体菌 游离的DNA片段，通过与染色体重组，获得了供体 菌的部分遗传特性。
转导(transduction)是噬菌体为媒介，把供细菌的基 因转移到受体菌内，导致后者基因改变的过程。
微生物的进化分类、生命活动规律及与动植 物、人类、自然相互关系。 按研究对象分：细菌、病毒、真菌学 按应用领域分：工业、农业、医学、兽医 按研究方向分：基础微生物、分子微生物学、
微生态学 等
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6
医学微生物学(medical microbiology)：与医 学有关病原微生物的生物性状、致病机理、免 疫性及有关技术和理论的应用。
微生物检验相关知识PPT课件
13
血液、骨髓、脑脊液标本
❖ 然后涂片革兰染色镜检，把镜检结果及时电话 通知临床医生，并填写初检结果临床通知单。
❖ 常规培养5天，认为阴性者，报告无菌生长， 正常人的血液、骨髓是无菌的，标本中检出 细菌，都应视作病原菌 ﹝需排除污染﹞
14
血液、骨髓、脑脊液标本
脑脊液： ❖ 涂片查抗酸杆菌：脑脊液
24
尿液、粪便标本
粪便 ❖ 涂片检查：当检查霍乱弧菌以及菌群失调优势
菌时需作直接涂片检查。取新鲜标本涂片革兰 染色镜检：
①有无革兰阴性呈鱼群排列的弧菌； ②各种菌在涂片中所占相对比例、推断主 要优势菌； ③有革兰阳性芽生孢子和假菌丝即报告检 出酵母样菌。真菌也可湿片检查。
25
尿液、粪便标本
❖ 一般培养：直接挑取标本中脓血部分接种SS平 板和血平板严格按照三区划线，保证有单个菌 落的分离，置35℃培养。
（正常人的眼内，中耳及鼻窦内是无菌的。）
30
脓液标本的处理
❖ 涂片检查：脓液标本在培养的同时均须涂片， 涂片的结果一方面为临床提供最初的诊治依据， 另一方面可作为分离培养的质量指标。
❖ 涂片直接做革兰染色，镜下可观察细菌和酵母 样菌。涂片做抗酸染色镜检查抗酸杆菌。
31
脓液标本的处理
❖ 注意：对无菌部位的感染，从分泌、粪便标本
❖真菌培养：将标本接种两个TTC-沙氏平板及血 平板，置25℃-30℃和35℃孵育24-48h。真菌性 腹泻多继发于抗生素治疗后，常见有白色假丝 酵母菌。
27
眼耳鼻喉拭子
❖ 根据这些部位感染细菌的特点，须用血平板和 巧克力平板作分离培养，必要时加选麦康凯， 需分区划线。巧克力平板在CO2 环境中孵育， 利于肺炎链球菌、嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟菌的 生长。
血液、骨髓、脑脊液标本
❖ 然后涂片革兰染色镜检，把镜检结果及时电话 通知临床医生，并填写初检结果临床通知单。
❖ 常规培养5天，认为阴性者，报告无菌生长， 正常人的血液、骨髓是无菌的，标本中检出 细菌，都应视作病原菌 ﹝需排除污染﹞
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血液、骨髓、脑脊液标本
脑脊液： ❖ 涂片查抗酸杆菌：脑脊液
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尿液、粪便标本
粪便 ❖ 涂片检查：当检查霍乱弧菌以及菌群失调优势
菌时需作直接涂片检查。取新鲜标本涂片革兰 染色镜检：
①有无革兰阴性呈鱼群排列的弧菌； ②各种菌在涂片中所占相对比例、推断主 要优势菌； ③有革兰阳性芽生孢子和假菌丝即报告检 出酵母样菌。真菌也可湿片检查。
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尿液、粪便标本
❖ 一般培养：直接挑取标本中脓血部分接种SS平 板和血平板严格按照三区划线，保证有单个菌 落的分离，置35℃培养。
（正常人的眼内，中耳及鼻窦内是无菌的。）
30
脓液标本的处理
❖ 涂片检查：脓液标本在培养的同时均须涂片， 涂片的结果一方面为临床提供最初的诊治依据， 另一方面可作为分离培养的质量指标。
❖ 涂片直接做革兰染色，镜下可观察细菌和酵母 样菌。涂片做抗酸染色镜检查抗酸杆菌。
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脓液标本的处理
❖ 注意：对无菌部位的感染，从分泌、粪便标本
❖真菌培养：将标本接种两个TTC-沙氏平板及血 平板，置25℃-30℃和35℃孵育24-48h。真菌性 腹泻多继发于抗生素治疗后，常见有白色假丝 酵母菌。
27
眼耳鼻喉拭子
❖ 根据这些部位感染细菌的特点，须用血平板和 巧克力平板作分离培养，必要时加选麦康凯， 需分区划线。巧克力平板在CO2 环境中孵育， 利于肺炎链球菌、嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟菌的 生长。
微生物链球菌ppt课件
A群链球菌
• 一、生物学性状
• 形态与染色 G+ 球菌，链状排列 无鞭毛、芽胞 培养早期可有荚膜。
链球菌光镜 ×1000 革兰染色
链球菌 扫描电镜 ×12000
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8
链球菌的排列
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9
第二节 链球菌属
• 培养特性 营养要求较高 在含血或血清的培养基生长好 液体培养基：沉淀生长，易形成长链 固体培养基（血琼脂平皿）： 针尖样小菌落，大多数菌株有溶血圈 根据菌型不同，溶血情况不一
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15
第二节 链球菌属
链球菌溶血毒素“O”
特点: 对O2敏感，抗原性强
遇氧 -SH-
-S-S- 失去溶血能力
抗原性强 SLO
机体
抗体（ASO）
抗体在体内存在数月至1年
临床意义： 作为链球菌新近感染指标之一或风湿热及其活动性的辅助诊断 临床称为抗“O”试验 ，ASO效价在1:400 以上有诊断价值
②中毒性疾病--由毒素引起，如猩红热、毒素休克 样综合症
③变态反应性疾病– 急性肾小球肾炎、风湿热。 （发病机制 Ⅱ型、Ⅲ型超敏反应）
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20
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22
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23
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24
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25
猩红热皮疹、舌苔
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26
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猩红热毒素
•概念：是人类猩红热的主要毒性物质，由携带溶原性噬菌体的A群链球 菌产生 •化学本质为蛋白质 •主要引起人类猩红热(皮肤红疹），也可导致毒性休克综合征
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第二节 链球菌属
• 一、生物学性状
• 形态与染色 G+ 球菌，链状排列 无鞭毛、芽胞 培养早期可有荚膜。
链球菌光镜 ×1000 革兰染色
链球菌 扫描电镜 ×12000
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链球菌的排列
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第二节 链球菌属
• 培养特性 营养要求较高 在含血或血清的培养基生长好 液体培养基：沉淀生长，易形成长链 固体培养基（血琼脂平皿）： 针尖样小菌落，大多数菌株有溶血圈 根据菌型不同，溶血情况不一
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第二节 链球菌属
链球菌溶血毒素“O”
特点: 对O2敏感，抗原性强
遇氧 -SH-
-S-S- 失去溶血能力
抗原性强 SLO
机体
抗体（ASO）
抗体在体内存在数月至1年
临床意义： 作为链球菌新近感染指标之一或风湿热及其活动性的辅助诊断 临床称为抗“O”试验 ，ASO效价在1:400 以上有诊断价值
②中毒性疾病--由毒素引起，如猩红热、毒素休克 样综合症
③变态反应性疾病– 急性肾小球肾炎、风湿热。 （发病机制 Ⅱ型、Ⅲ型超敏反应）
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猩红热皮疹、舌苔
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猩红热毒素
•概念：是人类猩红热的主要毒性物质，由携带溶原性噬菌体的A群链球 菌产生 •化学本质为蛋白质 •主要引起人类猩红热(皮肤红疹），也可导致毒性休克综合征
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第二节 链球菌属
微生物检验PPT课件
• 培养基46±1ºC水浴 保温。
• 倾注前先加TTC于营 养琼脂中,加入量比 例为1ml/1L。
• 小心旋转培养皿勿将 培养基溢出。
菌落总数测定
• 琼脂凝固后，翻转 平板，置36 ±1ºC 温箱内培养48 ±2h.
• 若有太多水珠在皿盖 上，应先倒置打开， 以免湿度大使菌成片 状生长。
菌落总数测定ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
• 乳糖发酵管36 ±1ºC下培养24 ±2h -----不产气------大肠菌群阴性------报 告
大肠菌群测定
• 革兰氏染色------呈现阴性 • 乳糖发酵管36 ±1ºC下培养24 ±2h ------
产气------大肠菌群阳性------报告
沙门氏菌检验
• 需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性，最适生 长温度37 ºC，对营养要求不高,能在普通 培养基上生长.
• 同一来源的链状菌落 作为一个菌落。
霉菌、酵母菌计数
• 检样-----做成几个适当倍数的稀释液-----选择3个适宜稀释度,各取1ml分别加入灭 菌培养基内------每皿内加入适量培养基----- 25~28ºC下培养5d ------菌落计数-----报告
菌落总数PK霉菌、酵母菌
• 营养琼脂
• 报告表示：100mg（ml）检样内大肠菌 群最可能数（MPN)
大肠菌群测定
• 检样------稀释------乳糖胆盐发酵管9支 36 ±1ºC下培养24 ±2h ------不产气-----大肠菌群阴性
产气------分离培养
大肠菌群测定
• 以无菌操作将检样25g（ml）加入225ml 灭菌生理盐水中，充分振摇或使用匀浆 机制成1：10的均匀稀释液。吸取1ml该 稀释液沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理 盐水中，混合均匀，制成1：100的稀释 液。
微生物学检验PPT课件
神经毒素： 细胞毒素 肠毒素
内毒素毒性作用
致热作用 白细胞反应 内毒素血症及内毒素性休克 弥漫性血管内凝血（DIC）
细菌内、外毒素的比较
区别要点 来源
化学成分 稳定性 抗原性
毒性作用
外毒素
内毒素
G+菌和少数G－菌，多分 G－菌细胞壁，菌
泌至菌体外
体裂解后释放
蛋白质
脂多糖
不稳定，
稳定
强，刺激机体产生抗毒素，经甲醛处理不能制 可被甲醛脱毒制成类毒素 成类毒素
革兰阳性菌 染色结果图
革兰阴性菌
染色原理
★渗透学说：与肽聚糖结构有关 ★化学学说：与细菌细胞质中核糖核酸镁盐
有关 ★等电点学说：与细菌所带电荷有关
革兰染色意义
★有助于鉴别细菌 ★有助于选择用药 ★有助于了解细菌的致病性
影响革兰染色的因素
操作因素 ★涂片的厚薄 ★脱色时间的长短
染液因素 ★卢戈碘液放置时间过长 ★ 95％乙醇挥发 ★结晶紫与草酸铵混合时间太长
对胞内寄生菌感染的免疫：主要依靠细胞 免疫抗感染
医院感染
医院感染的概念
广义上讲，医院内感染包括在医院内各 类人群所获得的感染，主要指病人在住 院期间有又发生的其它感染。
感染率：
发生感染的病人数
感染率＝
出院病人数
×100％
一、二、三级医院总的医院感染率应低于 7％、8％、10％
医院感染的流行病学
败血症：病原菌侵入血流，生长繁殖，造成明显 损害，出现全身中毒症状。
脓毒血症：化脓性细菌由病灶侵入血流后，在其 中大量繁殖，并随血流向全身扩散，在组织中形 成多发性化脓性病灶。
毒血症：病原菌在机体局部生长繁殖，不入血， 但其释放的毒素可入血，引起特殊临床症状。
内毒素毒性作用
致热作用 白细胞反应 内毒素血症及内毒素性休克 弥漫性血管内凝血（DIC）
细菌内、外毒素的比较
区别要点 来源
化学成分 稳定性 抗原性
毒性作用
外毒素
内毒素
G+菌和少数G－菌，多分 G－菌细胞壁，菌
泌至菌体外
体裂解后释放
蛋白质
脂多糖
不稳定，
稳定
强，刺激机体产生抗毒素，经甲醛处理不能制 可被甲醛脱毒制成类毒素 成类毒素
革兰阳性菌 染色结果图
革兰阴性菌
染色原理
★渗透学说：与肽聚糖结构有关 ★化学学说：与细菌细胞质中核糖核酸镁盐
有关 ★等电点学说：与细菌所带电荷有关
革兰染色意义
★有助于鉴别细菌 ★有助于选择用药 ★有助于了解细菌的致病性
影响革兰染色的因素
操作因素 ★涂片的厚薄 ★脱色时间的长短
染液因素 ★卢戈碘液放置时间过长 ★ 95％乙醇挥发 ★结晶紫与草酸铵混合时间太长
对胞内寄生菌感染的免疫：主要依靠细胞 免疫抗感染
医院感染
医院感染的概念
广义上讲，医院内感染包括在医院内各 类人群所获得的感染，主要指病人在住 院期间有又发生的其它感染。
感染率：
发生感染的病人数
感染率＝
出院病人数
×100％
一、二、三级医院总的医院感染率应低于 7％、8％、10％
医院感染的流行病学
败血症：病原菌侵入血流，生长繁殖，造成明显 损害，出现全身中毒症状。
脓毒血症：化脓性细菌由病灶侵入血流后，在其 中大量繁殖，并随血流向全身扩散，在组织中形 成多发性化脓性病灶。
毒血症：病原菌在机体局部生长繁殖，不入血， 但其释放的毒素可入血，引起特殊临床症状。
链球菌属及其检验「微生物检验」(一篇)
链球菌属及其检验「微生物检验」(一篇)链球菌属及其检验「微生物检验」 1链球菌属及其检验「微生物检验」⒈分类链球菌的分类方法尚未统一。
常用下列两种方法。
⑴根据溶血现象：分为3类。
①甲型溶血性链球菌(α-hemolytic streptococcus)：菌落周围有1～2mm宽的草绿色溶血环，称甲型溶血或α溶血，该类菌又称草绿色链球菌，为条件致病菌。
②乙型溶血性链球菌(β-hemolytic streptococcus)：菌落周围有2～4mm宽的透明溶血环，称乙型溶血或β溶血，该类菌又称溶血性链球菌，致病性强，常引起人和动物多种疾病。
③丙型链球菌(γ-streptococcus)：菌落周围无溶血环，因而又称不溶血性链球菌，一般不致病。
⑵根据抗原结构：按链球菌细胞壁中多糖抗原不同，可分成A、B、C、D 。
等20个群。
同群链球菌间，因表面蛋白质抗原不同又分若干型。
如A群根据其M抗原不同，可分成约100个型;B群分4个型。
对人致病的链球菌菌株，主要是A群，多数呈现乙型溶血。
⒉细菌特性⑴链球菌① 形态染色球形或椭圆形，直径0.5～1.0μm，链状排列，链的长短与细菌的种类和生长环境有关，在液体培养基中形成的链较长。
无芽胞，无鞭毛。
多数菌株在培养早期(2～4h)形成透明质酸的荚膜。
革兰染色阳性。
②分离培养营养要求较高，培养基中需加入血液或血清、葡萄糖、氨基酸、维生素等物质。
多数菌株兼性厌氧，少数为专性厌氧。
在液体培养基中呈沉淀生长，在血平板上，37℃18～24h 后可形成灰白色、圆形、凸起、光滑、直径为0.5mm～0.75mm 的细小菌落，菌落周围出现不同类型的溶血环。
③生化反应触酶阴性、一般不分解菊糖，不被胆汁溶解，这两特性可用来鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌。
④抗原构造主要有三种：蛋白质抗原：或称表面抗原。
具型特异性有M、T、R、S 4种，位于C抗原外层。
与致病性有关的是M抗原。
多糖抗原：或称C抗原。
为群特异性抗原，位于细胞壁。
微生物检验(ppt版)
•芽胞抗原：
有免疫原性和血清学诊断价值
14
第十四页，共七十五页。
炭疽(tànjū)毒素：
--保护性抗原〔PA)、致死因子〔LF〕、 水肿
因子〔EF〕三个组分
--单独皆无致病性，与PA结合才显示出致 病性
--具有抗吞噬和免疫原性
15
第十五页，共七十五页。
抵抗力：
--芽胞抵抗力很强，煮沸10min或干热(ɡàn rè)140℃ 3h才能杀灭
在，亦可自甲壳动物、蝇、蜱中别离出 能引起多种野生动物和家畜感染〔羊、马、狗、猫、
鸟、鱼等〕 正常人粪便带菌率达10%左右，70%的人可短期带 菌。新生儿、免疫功能降低者，易受该菌感染
42
第四十二页，共七十五页。
致病物质： 李斯特菌溶血素O(LLO)——主要毒力因子 内在素——外表(wàibiǎo)蛋白〔侵袭性蛋白〕 磷脂酶C
(yìzhì)
噬菌体裂解(liè jiě)
(shēnɡ huà)
动 响生 串
荚 青毒
力
化珠
观
试
膜 霉力 肿 素试
确定报告
察
验
胀 抑验
试制
反
验
第二十一页，共七十五页。
21
痰、呕吐物、CSF及 炎症分泌物
2%兔血清肉 汤快速增菌 37℃4h
0.2ml注射小白鼠 腹腔，8h后解剖
荚膜肿胀试验
直接涂片
荚膜染色 G染色 初步报告
食物中毒在国内、外均为常见 中毒食物大多无腐败、变质现象，感官性
状正常，应引起注意
30
第三十页，共七十五页。
二、微生物特性(tèxìng)
形态与染色：
- G+大杆菌 -生长6h后即形成(xíngchéng)圆形芽胞、
有免疫原性和血清学诊断价值
14
第十四页，共七十五页。
炭疽(tànjū)毒素：
--保护性抗原〔PA)、致死因子〔LF〕、 水肿
因子〔EF〕三个组分
--单独皆无致病性，与PA结合才显示出致 病性
--具有抗吞噬和免疫原性
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第十五页，共七十五页。
抵抗力：
--芽胞抵抗力很强，煮沸10min或干热(ɡàn rè)140℃ 3h才能杀灭
在，亦可自甲壳动物、蝇、蜱中别离出 能引起多种野生动物和家畜感染〔羊、马、狗、猫、
鸟、鱼等〕 正常人粪便带菌率达10%左右，70%的人可短期带 菌。新生儿、免疫功能降低者，易受该菌感染
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第四十二页，共七十五页。
致病物质： 李斯特菌溶血素O(LLO)——主要毒力因子 内在素——外表(wàibiǎo)蛋白〔侵袭性蛋白〕 磷脂酶C
(yìzhì)
噬菌体裂解(liè jiě)
(shēnɡ huà)
动 响生 串
荚 青毒
力
化珠
观
试
膜 霉力 肿 素试
确定报告
察
验
胀 抑验
试制
反
验
第二十一页，共七十五页。
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痰、呕吐物、CSF及 炎症分泌物
2%兔血清肉 汤快速增菌 37℃4h
0.2ml注射小白鼠 腹腔，8h后解剖
荚膜肿胀试验
直接涂片
荚膜染色 G染色 初步报告
食物中毒在国内、外均为常见 中毒食物大多无腐败、变质现象，感官性
状正常，应引起注意
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第三十页，共七十五页。
二、微生物特性(tèxìng)
形态与染色：
- G+大杆菌 -生长6h后即形成(xíngchéng)圆形芽胞、
微生物检验 PPT课件
技术逐渐推 广应用
第一节 免疫荧光抗体技术检测食品微生物
二、基本原理
抗体与荧光素结合后，并不影响其和相应抗原
发生特异性结合反应，事先将待测抗原固定于载玻
片上，滴加荧光标记抗体，若荧光标记抗体与相应 抗原发生特异性结合反应，不能被缓冲液冲掉，在 荧光显微镜下可观察到荧光，否则荧光抗体被缓冲 液冲掉，在荧光显微镜下观察不到荧光。
四乙基罗丹明 (RB200) 570
四甲基异硫氰酸罗丹明 (TRITC) 550
最大发射 光波长
520～530
595～600
620
荧光颜色
黄绿色
橘红色
橙红色
4.荧光抗体的制备
荧光抗体的制备程序： 制备免疫血清或McAb ↓ 抗体纯化 ↓ 抗体标记： 搅拌法、透析法 方法 ↓ 标记物提纯：去除游离荧光素 去除过度标记或未结合抗体 ↓ 标记物鉴定：含量、特异性、效价、F/P 鉴定 ↓ 实际应用
3.荧光色素的要求
（1）应具有能与蛋白质分子形成共价键的化学基因 （2） 荧光效率高 （3）荧光色泽与背景组织的色泽对比鲜明 （4）与蛋白质结合后不影响蛋白质原有的生化与免疫性质 （5）标记方法简单，安全无毒 （6）与蛋白质的结合物稳定，易于保存
异硫氰酸荧光素 ( FITC) 最大吸收 光波长 490～495
第一节 免疫荧光抗体技术检测食品微生物
经典的免疫分析技术
凝集反应、沉淀反应、溶血反应、补体结合实验 特点：成本低、技术简单、结果易于判断，但不易于实 现自动化。
现代的免疫分析技术
荧光免疫标记、放射性免疫标记、酶免疫标记、镧系 （稀土）元素免疫标记、临床化学免疫分析技术、发光免 疫标记、流式免疫微球技术及生物传感器技术等。 特点：灵敏、特异、快速、易于测定及实现自动化。
微生物学检验链球菌属肠球菌属PPT课件
+
+ +/－ +
甲 圆形、短链、 针尖状、草绿
链 无荚膜
色溶血环
－
－
－－
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乙型溶血性链球菌的鉴定
• β-溶血环 • 包括A、B、C、D、F、G群 • C群可采用血清学鉴定 • 其它群采用生化反应或其他鉴定试验
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非β-溶血性链球菌鉴定
包括 • 肺炎链球菌 • 牛链球菌 • 无乳链球菌 • 草绿色链球菌 • 营养变异链球菌
孢、无鞭毛、有菌毛 触酶试验（+） 氧化酶试验（+） • 种类：脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等9种 • 致病菌：脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌
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脑膜炎奈瑟菌
• 是引起流行性脑脊髓膜炎的病原菌
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脑膜炎奈瑟菌电镜图
形态染色
• 革兰阴性、肾形、成双排列 • 新分离菌株有菌毛和荚膜 • 在患者脑脊液中位于中性粒细胞内
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肠球菌临床意义
• 引起的医院感染仅次于葡萄球菌 • 肠球菌感染以粪肠球菌为主 • 以尿路感染多见 • 有不同程度耐药
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肺炎链球菌电镜图
2021/3/12
肺炎链球菌光镜图
2021/3/12
肺炎链球菌 Gram’s染色镜检图
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奈瑟菌属
• 共同点： • 革兰阴性球菌、单个或成双排列、无芽
发生凝集
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快速鉴定试验
• 荧光抗体法 荧光素-流脑抗体 +待检物－－荧光
（直接法）
流脑抗体 +待检物 +羊抗兔荧光抗体－－荧光
10微生物学检验课稿PPT课件
蔗糖（sucrsoe）
海藻（trehalose）
纤维二糖（cellobiose）
蜜二糖（melibiose）
多糖类（（C6H10O5）3 ） 菊糖（inulin） 淀粉（starch）
肝糖（glycogen）
糊精（dextrin）
.
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糖类
名称
三元醇（C3H5（OH）3） 甘油（glycerol） 四元醇（C4H6（OH）4） 赤霉糖醇（erythitol） 五元醇（C5H7（OH）5） 核糖醇（adonitol） 六元醇（C6H7（OH）6） 阿拉伯胶醇（Arabitol）
甘露醇（mannitol）
半乳糖醇（dulcitol）
山梨醇（sorbitol）
环己六醇（（CHOH）8） 肌醇（inositol）
糖苷类
水杨苷（salicin）
七叶苷（aescukin）
松柏苷（.coniferin）
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（二）甲基红（MOR）试验 （三）V－P（Voges-Proskauer）试验 （四）β－半乳糖苷酶试验
常用培养基
基础培养基 选择性培养基 鉴别培养基
. 特殊培养基
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二、微生物接种与培养
（一）微生物接种
常用方法：涂布法、划线法、倾注法、点植法、 穿刺法和浸洗法等。
（二）微生物的培养
需养培养 厌氧罐法
加组织的培养基培养法
厌氧培养 焦性没食子酸法 共栖培养法
享盖特厌氧操作技术
二氧化碳培养法 .
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三、培养结果观察
二、蛋白质及氨基酸代谢试验
（一）靛基质（吲哚）试验 （二）硫化氢试验 （三）尿素酶 （四）氨基酸脱氢酶试验 （五）苯丙氨酸脱氨试验
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