迟发型变态反应(DTH)检测:足跖增厚法

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常用细胞免疫检测方法及其用途

常用细胞免疫检测方法及其用途

细胞免疫功能检测常用有哪几种方法一、迟发型过敏反应的体外检测方法皮肤试验和接触性过敏的诱发是检测迟发型过敏反应(DTH)的两种常用方法。

皮肤试验中诱发对曾经使病人致敏的抗原的再次应答,而接触性过敏是测试受者对从未接触过的物质发生致敏的能力。

1.皮肤试验用皮肤试验诊断DTH,常用的抗原有结核菌纯蛋白衍生物(PPD)、腮腺炎病毒、念珠菌素等,在人类试验时在前臂皮内注射少量可溶性抗原,24~48小后,测量红肿硬结的大小,硬结直径大于10mm即被看作为阳性。

表明受试者对该病原菌有了一定的细胞免疫能力,若皮试无反应,可用更高浓度的抗原重复试验,若仍无反应即为阴性,需排除皮试技术误差,也可能受试者从未接触过此抗原,也可能由于细胞免疫功能缺损,或由于细胞免疫功能缺损,或由于严重感染(麻疹、慢性播散性结核)造成的无反应性。

2.接触性过敏常应用低分子量化合物如二硝基氯苯(DNCB)诱发接触性过敏。

化合物与皮肤蛋白质结合而导致DTH反应。

在动物试验时,初次皮肤上涂抹DNCB后间隔7~10天再激发刺激,则皮肤出现即为阳性。

此试验人类已不使用。

二、细胞免疫的体外检测方法体外检测淋巴细胞的数量和功能,最易采集的是血标本,首先需分离或纯化淋巴细胞,一般使用萄聚糖-泛影葡胺配成比重为1.077的淋巴细胞分层液,当将血液重叠于淋巴细胞分层液之上离心时,由于红细胞(1.092)、多形核白细胞(1.090)、淋巴细胞(1.070)的比重不同而相互分开。

淋巴细胞和单核细胞在血浆和分层液交界处形成一薄层。

仔细分出这一薄层的细胞,其中淋巴细胞占80%,单核细胞占20%,淋巴细胞中T细胞占80%,B细胞占4%~10%,其作为非DT、非B细胞。

1.T细胞计数(1)E花环法:人类T细胞表面有SRBC受体(CD2)能与SRBC结合形成玫瑰花环样结构,将经分层液分离现的RBM悬液与SRBC在含有血清的平衡盐水中混合,经37℃培养5~10分钟放4℃过夜,取细胞悬计数,外周血淋巴细胞中约70%~80%淋巴细胞结成花环即为T细胞。

双歧啤酒对小鼠免疫功能的影响

双歧啤酒对小鼠免疫功能的影响

2008, Vol. 29, No. 01食品科学※营养卫生306收稿日期:2006-11-03基金项目:重庆医科大学科技创新基金项目(200533)作者简介:穆小萍(1975-),女,硕士研究生,研究方向为正常菌群及其开发应用。

E-mail:mxp721@sina.com*通讯作者:张德纯(1946-),男,教授,研究方向为医学微生物学、临床微生物学和检验以及微生态学。

E-mail:zhangdechun46@sohu.com双歧啤酒对小鼠免疫功能的影响穆小萍,张德纯*,邱 建,蒲 荣(重庆医科大学 临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室, 重庆医科大学病原生物学教研室,重庆 400016)摘 要:目的:研究双歧啤酒对小鼠免疫功能的影响。

方法:将小鼠随机分成纯净水对照组、市售啤酒对照组和双歧啤酒低、中、高三个剂量组,剂量分别为25、50、100ml/kg bw,饮水法喂饲小鼠,测定小鼠胸腺和脾脏重量、腹腔巨噬细胞吞噬功能、血清溶血素抗体水平、皮肤迟发型超敏反应(DTH)程度。

结果:与对照组比较,双歧啤酒高、中剂量组能显著增强巨噬细胞吞噬功能,增加血清溶血素抗体水平和DTH程度。

结论:双歧啤酒能提高机体的免疫功能。

关键词:双歧啤酒;免疫功能;小鼠Effect of Brewing Bifidobeer on Immunological Function of MiceMU Xiao-ping,ZHANG De-chun*,QIU Jian,PU Rong(Province-state Key Laboratory of Clinic Medicine, Ministry of Education, Office of Pathogenic Biology, Chongqing University of Medical Sciences, Chongqing 400016, China)Abstract :Objective: To explore the effect of brewing bifidobeer on immuniological function of mice. Methods: Mice wererandomly assigned to 5 groups: the purified water control group, the ordinary beer control group and three brewing bifidobeergroups(drunk the purified water containing brewing bifidobeer 25,50,100 ml/kg bw). The weight of thymus and spleen, thephagocytic capability of celiac macrophage, the level of serolysin and the degree of cutaneous delayed type hypersensitivity ofmice were evaluated. Result: The phagocytic capability of celiac macrophage, the level of serolysin and the degree of cutaneousdelayed type hypersensitivity of high dose and medium dosage brewing bifidobeer groups increased significantly compared withcontrol groups. Conclusion: Brewing bifidobeer can enhance the immuniological function of mice.Key words:brewing bifidobeer;immuniological function;mice中图分类号:TS262.5 文献标识码:A 文章编号:1002-6630(2008)01-0306-03双歧杆菌是人体中很重要的益生菌,是在健康人肠道内定植且数量占优势的一种细菌,具有免疫调节、抗肿瘤、抗感染、抗衰老、降血脂、营养等一系列特殊生理保健功能。

海参油具有增强免疫力功能的科学研究

海参油具有增强免疫力功能的科学研究

海参油具有增强免疫力功能的科学研究摘要:目的探讨研究海参油具有增强免疫力功能的科学依据。

方法经口给予小鼠不同剂量的海参油30天,检测其体重增长、脾脏和胸腺体重比值以及各项免疫功能指标。

结果各组间小鼠体重增长差异无显著性(P>0.05),小鼠脾脏体重比值和胸腺体重比值差异亦无显著性(P>0.05),小鼠细胞免疫功能、体液免疫功能、NK细胞活性测定结果均为阳性,小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能测定结果为阴性。

结论海参油具有增强小鼠免疫功能的作用。

关键词:海参油;免疫功能;小鼠海参是自古以来,以名贵药材和滋补食材而广为人知[1]。

海参是高蛋白、低脂肪、无胆固醇的滋补品[2],富含多种氨基酸、微量元素及维生素,具有很高的营养价值。

海参中的脂肪含量一般低于3%,属于低脂食品。

虽然各种海参中的脂肪酸种类差异较大, 但不饱和脂肪酸含量占总脂肪酸含量的比重普遍较高[3-6]。

因此海参具有低脂肪、高不饱和脂肪酸的特性。

Liu等[4]从新西兰海参体壁和内脏中均检测到26种脂肪酸, 其中包括16种不饱和脂肪酸, 其相对含量分别为76.36%和79.57%。

李忠青等[5]对青、白刺参中的脂肪酸组成进行分析,发现青、白刺参中均含有20种脂肪酸, 其中单不饱和脂肪酸的相对含量分别为 21.65%和23.02%,多不饱和脂肪酸相对含量分别为22.67%和23.18%。

近年来关于海参研究较多,但对其脂肪酸的研究较少。

本实验主要研究海参超临界萃取后得到的海参油能否增强免疫力。

1 材料与方法1.1 材料1.1.1 实验动物选用健康SPF昆明种小鼠,体重18~22g,由本院动物实验中心提供。

1.1.2 受试物及剂量选择海参油淡黄色油状液体,具有明显海腥味。

人体推荐量为每人每日0.4g/60kg.bw,按相当于其5、10、30倍确定小鼠的低、中、高剂量,即各组小鼠每日剂量分别为33mg/kg.bw、66mg/kg.bw、200mg/kg.bw,经口每日一次灌胃,灌胃体积按10ml/kg.bw。

保健食品功能范围调整方案(上网征求意见)食药监保化函[2011]322号

保健食品功能范围调整方案(上网征求意见)食药监保化函[2011]322号

保健食品功能范围调整方案(征求意见稿)为贯彻落实《食品安全法》及其实施条例对保健食品实行严格监管的要求,进一步完善功能评价方法,提高判断标准,规范功能声称,严格准入门槛,现对保健食品功能范围调整提出以下方案:一、功能设置原则(一)以中国传统养生保健理论和现代医学理论为指导,以满足群众保健需求、增进人体健康为目的。

(二)功能定位应为调节机体功能,降低疾病发生的风险因素,针对特定人群,不以治疗疾病为目的。

(三)功能声称应被科学界所公认,具有科学性、适用性、针对性,功能名称应科学、准确、易懂。

(四)功能评价方法和判断标准应科学、公认、可行。

(五)功能调整和管理应根据科学发展、社会需求和监管实际,按照相关程序,实施动态管理。

二、功能调整原则(一)符合保健食品功能设置的原则。

(二)对现有功能进行调整,坚持平稳过渡,逐步推进,暂不增加新功能。

(三)合并相近功能,规范功能名称,使其更符合保健食品功能特性,更具针对性。

(四)根据科学发展,完善评价方法,适当提高判断标准,强化人体试食试验和科学文献依据。

(五)取消或调整功能定位不够准确、声称科学性不强、易与疾病治疗相混淆和易误导消费者的功能;取消缺乏客观指标评价、缺乏社会需求的功能。

(六)根据功能定位和评价方法,调整适宜人群范围。

三、具体调整方案根据上述功能设置和调整的原则,现有27项功能取消5项,涉及胃肠道功能的4项合并为1项、涉及改善面部皮肤代谢功能的2项合并为1项,予以保留,最后确定为18项功能。

具体调整情况如下:建议保留的功能:(一)增强免疫力保留理由:1.功能名称修改为有助于增强免疫力。

2.免疫功能评价试验采用小鼠淋巴细胞转化试验、迟发性变态反应、抗体生成细胞、血清溶血素试验、小鼠碳廓清、NK细胞活性的等项免疫检测指标,与当前免疫学的基础理论相一致,涵盖细胞免疫、体液免疫和非特异性免疫等机体免疫功能的主要机制,所选择的模型和指标在国内外广泛应用,在有关功效评价中的可行性也得到普遍认可。

梅花鹿茸和马鹿茸增强免疫力功能的研究

梅花鹿茸和马鹿茸增强免疫力功能的研究

梅花鹿茸和马鹿茸增强免疫力功能的研究【摘要】目的:研究梅花鹿茸和马鹿茸增强免疫力的功能。

方法:将梅花鹿茸和马鹿茸分别按传统方法煎煮,得到的提取物分别按梅花鹿茸提取物6.25、12.5、37.5mg/kg BW 及马鹿茸提取物6.0、12.0、36.0mg/kg BW,各3个剂量,依照《保健食品检验与评价技术规范》增强免疫力功能检验方法,灌胃给予实验小鼠,同时设阴性对照组(蒸馏水),每天灌胃1次,连续30天。

结果:在小鼠迟发变态反应中,梅花鹿茸和马鹿茸的高剂量组与阴性对照组比较,具有统计学意义(P<0.05),能增强细胞免疫功能,在小鼠单核-巨噬细胞的碳廓清能力试验中,低、中、高剂量组与阴性对照组比较,具有统计学意义(P<0.05),即能增强单核-巨噬细胞功能;在抗体生成细胞数、巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力、ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力、NK细胞活性试验中,各剂量组与阴性对照组比较,无统计学意义(P>0.05)。

结论:梅花鹿茸和马鹿茸均具有增强免疫力功能作用,梅花鹿茸在增强免疫力方面略优于马鹿茸的作用。

鹿茸为脊索动物门哺乳纲鹿科的动物梅花鹿(Cerv us Nippon Temminck)或马鹿(C.elaphus L.) 雄鹿未骨化密生茸毛的幼角,是我国传统的名贵中药之一[1-3],也是我国特有的药用资源。

鹿茸具有壮肾阳、益精血、强筋骨、调冲任、托疮毒等功效,用于肾阳不足、精血亏虚、阳痿滑精、宫冷不孕、赢瘦、神疲、畏寒、眩晕、耳鸣、耳聋、腰脊冷痛、筋骨痿软、崩漏带下、阴疽。

根据鹿茸的来源,可分为梅花鹿茸和马鹿茸;为了考察两种鹿茸增强免疫力功能的差异,进行了如下研究。

1 材料和方法1.1 样品:梅花鹿茸和马鹿茸的水提取物(分别用梅花鹿茸和马鹿茸饮片8倍量的水提取3次,每次提取2小时,提取后过滤,合并提取液,干燥得提取物,梅花鹿茸和马鹿茸的提取率分别为12.5%和12.0%)。

1.2 实验动物:雄性小鼠240只,体重18g~22g,生产许可证号:2016-0004。

保健食品功能检测收费标准

保健食品功能检测收费标准
保健食品功能检测收费标准
序号
项目
方法
单位
收费标准(元)
文件依据
1
果蝇生存试验

15000.00
京价(收)字[2000]399号
2
小鼠血清LPO测定

5200.00
3
GSH-Px(全血)

5200.00
4
小鼠血清SOD测定

5200.00
5
心肌脂褐质测定

5200.00
6
小鼠游泳试验

8700.00
7
小鼠爬杆试验

8700.00
8
血乳酸测定

12000.00
9
糖原测定

9400.00
10
尿素氮测定

9400.00
11
小鼠免疫器官脏体比值测定

4700.00
12
抗体生成细胞(PFC)测定
Jeme改良玻片法

8700.00
13
迟发型变态反应(DTH)测定
足跖增厚法

6200.00
14
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能测定

10000.00
22
增加阈下剂量戊巴比妥钠诱导睡眠时间试验

20000.00
23
巴比妥钠诱导睡眠潜伏期试验

10000.00
24
润肠通便作用检测

20000.00
25
调节肠道菌群作用检测

30000.00
26
调节血糖功能检测

35000.00
27
改善记忆功能检测

蚕蛹蛋白多肽保健功效的研究

蚕蛹蛋白多肽保健功效的研究

摘要实验研究蚕蛹蛋白多肽的保健功效,包括抗疲劳作用和免疫调节作用两个部分。

抗疲劳实验将蚕蛹蛋白多肽分为高、中、低剂量组,分别为2.4、1.2、0.6g/kg·d 喂饲小鼠28d,观察小鼠爬杆时间、负重游泳时间,测定血清尿素氮、肝糖原和肌糖原含量,测定游泳前、游泳后0、15、60min血清乳酸含量的变化。

实验结果表明蚕蛹蛋白多肽能显著增加小鼠爬杆时间和负重游泳时间,增加小鼠运动过程中肝糖原和肌糖原含量,较少血清尿素氮的含量,并能显著降低游泳后血清乳酸的增加量;免疫调节实验也将蚕蛹蛋白多肽分为高、中、低剂量组,分别为5.0、2.6、0.5g/kg·d喂饲小鼠40d,观察小鼠免疫器官指数变化、迟发型变态反应(DTH)、抗体生成细胞数和碳廓清能力等四个实验项目。

实验结果表明与阴性对照组比较,蚕蛹蛋白多肽能显著增加小鼠胸腺指数,增加小鼠足跖肿胀度,增加小鼠抗体细胞生成数量,增加单核-巨噬细胞吞噬能力。

实验得到如下结论:蚕蛹蛋白多肽具有明显的抗疲劳作用和免疫调节作用。

关键词:蚕蛹蛋白;多肽;抗疲劳;免疫调节- I -AbstractThe experimental study on health function of silkworm pupa protein peptides, including anti-fatigue effect and immune regulation effects of two parts. Silkworm pupa protein polypeptide anti-fatigue is divided into high, medium, and low dose groups, respectively, 2.4, 1.2, 0.6g/kg ·d mice fed 28D, observation of climbing time, loaded swimming time in mice, determination of urea nitrogen, serum liver glycogen, and muscle glycogen content, determination of swimming, swim back before changes of serum lactic acid content of 0, 15 g. Experimental results indicates that silkworm pupa protein more peptide can significantly increased small rats climbing Rod time and loading swimming time, increased small rats movement process in the liver glycogen original and muscle glycogen content, less serum urea nitrogen of content, and can significantly reduce swimming Hou serum lactic acid of increased volume; immune regulation experimental also will silkworm pupa protein more peptide is divided into high, and in the, and low dose group, respectively for 5, and 2.6, and 0.5G/kg · d feed feeding small rats 40D, observation small rats immune organ index changes, and late hair allergy (DTH), and antibody generated cell number and carbon clearance ability, four a experimental project. Experimental results show that- II -compared with the negative control group, SilkWorm pupa protein or peptide can significantly increase the mouse thymus index, increase mouse Plantar foot swelling, increase the number of antibodies in mice cells, increase the phagocytosis of mononuclear-macrophage. Experimental come to the following conclusion: silkworm pupa protein polypeptide has obvious anti-fatigue effect and immune regulation effects.Keywords: silkworm pupa protein; peptide; anti-fatigue; immune regulation- III -目录摘要 (I)Abstract ·····························································································································I I1.概述 (1)2.材料与方法 (2)2.1材料、试剂与仪器 (2)2.2蚕蛹蛋白多肽的制备 (2)2.3 实验动物及分组 (2)2.4实验方法[8] (3)2.4.1负重游泳实验 (3)2.4.2爬杆实验 (3)2.4.3血尿素的测定 (3)2.4.4血乳酸的测定 (3)2.4.5肝糖原的测定 (4)2.4.6肌糖原的测定 (4)2.4.7小鼠免疫器官指数的测定 (5)2.4.8迟发型变态反应[足跖增厚法(DTH)] (5)2.4.9抗体生成细胞数检测(Jerne改良玻片法) (5)2.4.10小鼠碳廓清实验 (6)2.5统计分析 (6)3.结果与分析 (6)3.1蚕蛹蛋白多肽对小鼠游泳时间、爬杆时间的影响 (6)3.2蚕蛹蛋白多肽对小鼠血清尿素氮、肝糖原和肌糖原含量的影响 (7)3.3蚕蛹蛋白多肽对小鼠血乳酸的影响 (8)3.4蚕蛹蛋白多肽对小鼠免疫器官指数的影响 (9)3.5蚕蛹蛋白多肽对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响. (9)3.6蚕蛹蛋白多肽对小鼠抗体生成细胞数的影响 (10)3.7蚕蛹蛋白多肽对小鼠碳廓清能力的影响 (10)4.结论 (11)参考文献: (12)- IV -2011年“挑战杯”吉林省竞赛作品蚕蛹蛋白多肽保健功效的研究1.概述我国是养蚕大国,蚕蛹资源十分丰富,而且蚕蛹具有较高的营养价值。

牛初乳粉中免疫球蛋白IgG增强免疫力功能的研究

牛初乳粉中免疫球蛋白IgG增强免疫力功能的研究

牛初乳粉中免疫球蛋白IgG增强免疫力功能的研究作者:秦兰霞来源:《现代食品》 2018年第17期摘要:本文依据《保健食品功能学评价程序和检验方法》的要求,对市售的一款IgG 含量达到10% 的牛初乳粉产品进行功能性评价。

结果表明,该牛初乳粉产品可明显增强小鼠的迟发型变态反应,提高小鼠的半数溶血值(HC50),增加小鼠的碳廓清功能,增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能和NK 细胞的活性。

由此可见,该牛初乳粉可增强细胞免疫功能、体液免疫功能、单核- 巨噬细胞吞噬功能和NK 细胞活性,即该牛初乳粉具有增强免疫力功能的作用。

关键词:免疫球蛋白;IgG;增强免疫力Abstract:This article conducted functional evaluation on a kind of bovine primary milk powder with anIgG content of 10%,and it is based on the requirementsof the Health Food Functional Evaluation Proceduresand Test Methods. The results showed that the bovinecolostrum powder could significantly enhance thedelayed type hypersensitivity, HC50, phagocytosis ability of macrophage and activity of NK cellin mice, thebovine colostrum powder can enhance cellular immunity, humoral immunity, mononuclear-macrophagephagocytic function and activity of NK cell, that is, the bovine colostrum powder has the function ofenhancing immunity.Key words:Immunoglobulin; IgG; Enhanced immunity中图分类号:TS252.1牛初乳通常是指母牛分娩后7 天内所分泌的乳汁[1]。

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迟发型变态反应(DTH)检测:足跖增厚法绵羊红细胞(SRBC)诱导小鼠DTH(足跖增厚法)
一、原理
SRBC可刺激T淋巴细胞增殖成致敏淋巴细胞,4天后,当再以SRBC攻击时,即可见攻击部位出现迟发型变态反应。

二、材料
游标卡尺(精密度0.02mm)、SRBC、微量注射器(50μL)。

三、实验步骤
(1)致敏
小鼠用2%(v/v)SRBC腹腔或静脉免疫,每只鼠注射0.2mL(约1×108个SRBC)。

(2)DTH的产生与测定
免疫后4天,测量左后足跖部厚度,然后在测量部位皮下注射20%(v/v)SRBC,每只鼠20μL(约1×108个SRBC),注射后于24h测量左后足跖部厚度,同一部位测量三次,取平均值。

四、数据处理和结果判定
一般采用方差分析,但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验,方差齐,计算F值,F值< F0.05,结论:各组均数间差异无显著性;F值≥F0.05,P≤0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计;对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换,待满足正态或方差齐要求后,用转换后的数
据进行统计;若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的,改用秩和检验进行统计。

以攻击前后足跖厚度的差值来表示DTH 的程度。

受试样品组的差值显著高于对照组的差值,可判定该项实验结果阳性。

五、注意事项
测量足跖厚度时,最好由专人来进行。

卡尺紧贴足跖部,但不要加压,否则会影响测量结果。

攻击时所用的SRBC要新鲜(保存期不超过1周)。

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