临床免疫学和免疫检验第三章 免疫原和抗血清的制备讲义
免疫原和抗血清的制备PPT课件
（六）亲和层析
亲和层析是利用生物大分子的生物学特 异性，即生物分子间所具有的专一性亲 和力而设计的层析技术。例如抗原和抗 体、酶和酶抑制剂、酶蛋白和辅酶、 DNA 和 RNA 、激素和受体等 之间有特 殊的亲和力,在一定的条件下,二者能紧 密地结合成复合物。如果将复合物的已 知一 方固定在固相载体上,则可从溶液 中专一性地分离和提纯另一方。
上清液中含有 可溶性抗原
上清 1万—2万转/分，20到30分钟
沉淀
2. 组织细胞或培养细胞可溶性抗原的制备
制备抗原的细胞包括正常细胞、传代细胞或 病理细胞 ( 如肿瘤细胞 )。
(1) 反复冻融法；(2) 超声破碎法；(3) 自溶 法；(4) 酶处理法；(5) 表面活性剂处理法。
( 二 ) 超速离心分离法
绵羊红细胞、细菌、毒素、寄生虫和真 菌抗原的制备
二、可溶性抗原的制备和纯化
蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、细菌毒素、 酶、补体和核酸等都是良好的可溶性抗 原。
（一） 组织和细胞粗抗原的制备
1. 组织细胞抗原的制备所用组织必须是新鲜
的或低温保存的。
高速组织捣碎机
器官或者组织
处理
粉碎 研磨法
离心3000r/min，10分钟
一、佐剂的种类
1. 具有免疫原性的佐剂 如卡介苗、枯草 分支杆菌、短小棒状杆菌、百日咳杆菌、 革兰阴性杆菌内毒素 ( 脂多糖 ) 和细胞 因子等。
2. 非免疫原性佐剂如氢氧化铝、磷酸铝、 磷酸钙、石蜡油、羊毛脂、表面活性剂、 藻酸钙、多聚核昔酸和胞壁肽等。
1. 福氏佐剂 (Freund adjuvant,FA) 是目 前动物免疫中最常应用的佐剂 , 可分为 福氏不完全佐剂 ( 石蜡油 + 羊毛脂 ) 和福氏完全佐剂 ( 石蜡油 + 羊毛脂 + 卡介苗 ) 两种 。
临床检验免疫主管 (3)
临床检验免疫主管 (3)临床医学检验主管技师考试辅导《临床免疫学和免疫检验》第三章免疫原和抗血清的制备第一节免疫原的制备免疫原指能诱导机体产生抗体或致敏淋巴细胞，并能在体内外与抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的物质。
免疫原相当于抗原。
一.颗粒性抗原的制备颗粒性抗原：各种细胞.细菌.寄生虫。
1.细胞抗原（如绵羊红细胞）一般情况下经生理盐水或其他溶液洗净，配制一定浓度即可。
2.细菌抗原多用液体或固体培养物，经集菌后处理。
颗粒性抗原大多用静脉内注射免疫法，较少加佐剂作皮内注射二.可溶性抗原的制备和纯化（一）可溶性抗原的制备蛋白质.糖蛋白.脂蛋白.酶.补体.细菌毒素.免疫球蛋白片段.核酸等皆为良好的可溶性抗原，免疫前常需提取和纯化。
1.组织细胞抗原的制备细胞破碎方法有：（1）高速组织捣碎机法（2）研磨法，可用组织匀浆器或乳钵2.组织细胞或培养细胞可溶性抗原制备第一步单个细胞获得的方法（1）机械捣碎（2）酶处理法，常用胃蛋白酶或胰酶第二步细胞破碎方法有：（1）反复冻融法：一般—20℃反复冻融。
（2）超声破碎法：利用超声波机械振动原理使细胞破碎。
（3）自溶法：利用组织.细菌自身酶系统使之裂解。
（4）酶处理法，常用溶菌酶.蜗牛酶.纤维素酶（5）表面活性剂处理法：常用二烷基硫酸钠等表面活性剂处理。
3.免疫球蛋白片段的制备五种免疫球蛋白都具抗原性，皆可提取及纯化，但如分解成片段（如Fab片段.Fc片段.轻链片段等）作为免疫原可制备出分辨力更高的特异性抗血清（1）非共价键解离法：温和条件下离析亚单位，如改变pH；用盐酸胍或脲等强变性剂将亚单位分开。
（2）共价键解离法：用还原法或氧化法解离二硫键。
（3）溴化氰裂解法：用溴化氰裂解蛋白质肽链。
（4）酶解法1）木瓜酶可将IgG裂解成2个Fab片段及1个Fc片段2）胃蛋白酶可将IgG裂解成F（ab’）2片段及数个小片段3）胰蛋白酶可将IgG切成不规则的肽链（二）可溶性抗原的纯化1.超速离心法仅适用于少数大分子抗原及一些比重较轻的抗原，而不适用于大多数中小分子抗原。
临床检验技师-临床免疫学和免疫检验讲义第三章免疫原和抗血清的制备
临床检验技师-临床免疫学和免疫检验讲义第三章免疫原
和抗血清的制备
排版整齐
本章介绍了免疫原和抗血清的制备方法，包括抗原、抗体、可溶性抗
原以及急性病毒感染的抗体制备。
一、抗原的制备
1、抗原制备的原理
抗原是用来诱导机体产生免疫反应的物质，它含有一种特异性的抗体
可以与免疫系统形成记忆，从而使抗体产生免疫应答和调节，而免疫活性
越强的抗体则可以激发更强烈的免疫应答。
抗原表面有特殊的抗原性，这
种抗原性包含多种不同的化学结构和特异性的生物活性，如糖蛋白、抗原
性多糖、尿蛋白、抗原性蒽醌和脂质体等，能够激发免疫系统的免疫反应。
这些特异性表位的分子结构，可以用于结合抗体和T细胞受体，产生免疫
应答。
2、抗原制备的方法
（1）抗原制备的原料
抗原制备需要用到异种动物的特殊细胞或组织。
例如，抗血凝抗原由
牛血清制备，抗原性多糖由牛肝、牛肾细胞制备。
（2）抗原制备的过程。
临床免疫学检验 抗血清制备PPT
标准抗原 待测抗原
Central south university department of clinical immunology Gongdaoke
多价诊断血清
标准抗原 待测抗原
Central south university department of clinical immunology Gongdaoke
Central south university department of clinical immunology Gongdaoke
Cohn乙醇分段法
pH 乙醇浓度(%) 分段
分段组分（%） 纤维蛋原 白蛋白 α球蛋白 β球蛋白 γ 球蛋白
7.2
8
Ⅰ
61
7
8
15
9
6.8
25
Ⅱ+Ⅲ 5
4
6
48
37
Fc
Central south university department of clinical immunology Gongdaoke
七)、纯化抗原的鉴定： １、免疫双扩散法 ２、免疫电泳法 ３、聚丙烯酰胺凝胶电泳法
Central south university department of clinical immunology Gongdaoke
IgM IgG
白蛋白
Sephadex G-200凝胶
Central south university department of clinical immunology Gongdaoke
Central south university department of clinical immunology Gongdaoke
临床免疫学和免疫检验第三章免疫原和抗血清的制备讲义
临床免疫学和免疫检验第三章免疫原和抗血清的制备讲义第三章免疫原和抗血清的制备概述：免疫学的研究主要涉及到两个重要的组分：免疫原和抗血清。
免疫原是引发免疫反应的物质，抗血清则是由免疫反应产生的抗体。
制备免疫原和抗血清是研究免疫学的基础，也是开展临床免疫学和免疫检验的前提。
一、免疫原的制备1.病原体免疫原的制备（1）整活病原体的制备：将病原体培养至足够数量，收集后经过消毒杀菌处理，用于动物免疫或制备抗血清。
（2）灭活病原体的制备：将病原体培养至足够数量，用热、化学物质或辐射等方法使其失去活性，避免感染动物或人员，用于动物免疫或制备抗血清。
（3）病原体抗原的提取和纯化：通过培养病原体，收集其代谢产物，经过提取、纯化等步骤得到纯净的抗原物质。
2.细胞免疫原的制备（1）原代细胞制备：从动物或人体中采集组织或器官，通过细胞培养技术将细胞分离并进行传代，得到大量的细胞用于动物免疫或制备抗血清。
（2）细胞株制备：将细胞分离后，在适当的培养环境中进行无限传代，得到大量同源的细胞，用于动物免疫或制备抗血清。
（3）细胞裂解物制备：将细胞离心沉淀后，用适当的缓冲液裂解细胞释放细胞内的免疫原物质，进行纯化处理后得到制备的免疫原。
3.蛋白质免疫原的制备（1）从细胞裂解物中分离：将细胞裂解，经过离心等步骤得到细胞内的蛋白质物质，可以经过分子筛、电泳等技术得到纯净的蛋白质免疫原。
（2）基因工程蛋白质的制备：利用克隆技术将目标蛋白质的基因导入到表达系统中，通过大量表达和纯化，得到目标蛋白质。
二、抗血清的制备抗血清是由免疫原引发的免疫反应产生的抗体。
下面介绍几种常见的抗血清制备方法。
1.动物抗血清的制备选择适宜的动物（如小鼠、兔子、小鸡等），先注射免疫原，然后通过多次免疫，免疫记忆细胞对免疫原做出反应，最后采集动物血液得到抗血清。
2.单克隆抗体的制备将B细胞与病原体或免疫原细胞融合，形成杂交瘤细胞。
杂交瘤细胞能够无限制地分裂，并能够产生单一抗体。
2024年主管检验技师考试临床免疫学和免疫检验讲义第三章免疫原和抗血清的制备
1.免疫原的定义和分类2.免疫原的制备方法(1)分离纯化法：通过分离、提取和纯化病原体或其他免疫原物质，得到纯净的免疫原。
(2)生物合成法：通过重组DNA技术或合成化学方法，产生具有免疫原性的物质。
(3)化学修饰法：通过对免疫原物质进行化学修饰，使其具有较强的免疫原性。
(4)特异抗原表达法：将目标抗原的基因导入表达宿主中，使宿主细胞内产生该抗原，并通过表达产物进行免疫。
3.抗血清的制备方法(1)动物免疫法：将免疫原注射给动物，刺激其产生抗体，收集动物体内的抗体血清作为抗血清。
(2)体外免疫法：将免疫原与体外培养的淋巴细胞或骨髓细胞等进行细胞融合，产生混合细胞瘤细胞，该细胞具有免疫能力，可大量产生抗体。
(3)重组技术法：通过将重组DNA导入真核细胞，使细胞表达抗原表位，收集细胞培养上清液得到抗血清。
4.抗血清的性质与应用(1)抗血清的性质：抗血清含有一种或多种单克隆抗体或多克隆抗体，具有特定性和亚型特异性。
(2)抗血清的应用：抗血清可用于免疫组化检测、免疫印迹、免疫染色、酶联免疫吸附分析、流式细胞术等临床检验技术中。
同时，抗血清还可以用于治疗疾病、研究疾病发生机制以及制备诊断试剂等。
5.免疫原和抗血清的质量控制(1)免疫原的质量控制：免疫原的质量控制应包括其纯度、活性、稳定性和安全性等方面的检验。
(2)抗血清的质量控制：抗血清的质量控制包括对其纯度、特异性、活性、稳定性等方面的检验，同时还需进行反应特异性和特异性等的检测。
6.免疫原和抗血清的保存和保管(1)免疫原的保存：免疫原需要在低温和干燥的条件下保存，以保持其稳定性和活性。
(2)抗血清的保管：抗血清需储存在冷库中，以确保其长期保存时不发生抗体失活和细菌污染，同时还需注意避免光照和震荡等不良影响。
本章介绍了免疫原和抗血清的制备方法、性质与应用，以及质量控制与保存保管的要点。
了解免疫原和抗血清的制备与使用对临床检验工作具有重要意义，有助于提高免疫学和免疫检验技术的应用水平。
第3章免疫原和抗血清的制备
二、免疫程序
免疫原的剂量
中间剂量范围内，免疫原剂量增加可获得高效价抗体 特异性要求高，应小量短程，可溶性抗原加用佐剂。对效价 要求高，则可大量长程加佐剂。
免疫间隔时间
第一次和第二次间隔10～20天，三次及以后间隔7～10天
免疫途径
皮内、皮下、肌肉、静脉、腹腔、淋巴结
一、特异性IgG抗体
盐析法：硫酸铵盐析法、硫酸钠盐析法 凝胶过滤法：常结合盐析法 离子交换层析法：DEAE纤维素、QAE-sephadex、QAE纤维 素 亲和层析法：纯化抗原或SPA交联Sepharose 4B制成亲和层 析柱
二、单价特异性抗血清
亲和层析法：杂抗原交联Sepharose 4B柱 吸附剂方法：借助双功能试剂用不含特异抗原的抗
使包膜的渗透压改变而溶解。
优点是: 作用温和 适用于:破碎细菌、破碎细胞（提取核酸)
3、免疫球蛋白片段的制备： 非共价键解离法－改变pH 、利用强变 性剂 共价键解离法－氧化法和还原法 溴化氰裂解法 酶解法－木瓜酶 、胃蛋白酶
IgG片段的制备
1.酶裂解法：
IgG
木瓜酶
Fc+2Fab
Fc段可用于制备抗重链血清。
透析除去未反应
的半抗原
得人工免疫原 （半抗原+载体）
2.戊二醛法：
半抗 原氨 基
N-CH-(CH2)3-CH-N
载体 氨基
第二节 免疫佐剂
免疫佐剂（immunoadjuvant）：预先或与 抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原 的免疫应答或改变免疫应答的类型的物质 称为免疫佐剂,简称佐剂（adjuvant）。
小结
免疫原是诱导机体产生抗体并能与抗体发生反应的 物质。半抗原是指仅有抗原性而无免疫原性的物质， 与载体结合后可具有免疫原性。
第三章免疫原和抗血清的制备- 临床免疫学检验教案
了解：免疫原和抗血清的基本概念，免疫佐剂增强免疫应答的机制
内容与时间安排，教学方法：
内容：
抗原和抗体是免疫学检测的两个重要因素，也是整个免疫反应的基本条件。制备高效价和高特异的抗血清必须有理想的免疫原、适宜的动物和科学的方法，其中抗原的纯化是制备特异性抗体的先决条件。抗体类型有杂交瘤技术制备的单克隆抗体、免疫动物制备的多克隆抗体(抗血清)和基因工程抗体(单链抗体)。本章仅叙述抗原纯化和多克隆抗体制备技术。时间安排：2.0学时
一、佐剂的种类
二、佐剂的作用机制
第三节 抗血清的制备
一、免疫动物的选择
二、免疫程序
三、动物采血法
第四节 抗血清的鉴定和保存
一、抗血清的鉴定
二、抗血清的保存
第五节 抗血清的纯化
一、特异性IgG抗体
二、单价特异性抗血清
简图
简表
示意图
设问
讨论
讲解免疫原的制备 20 min
讲解免疫佐剂 20 min
讲解抗血清的制备 20 min
特异性IgG抗体的纯化方法有盐析法、凝胶过滤法、离子交换层析法、亲和层析法等；制备单价特异性抗血清可采用亲和层析法和吸附剂方法。
复习思考题、作业题
1．什么是免疫原？
2．如何制备可溶性抗原？
3．常用的细胞破碎方法有哪些？
4．连接半抗原的载体有哪些？制备半抗原性免疫原的方法有哪些？
5．纯化抗原的鉴定包括有哪些内容？
教学方法：CAI讲授结合板书
教学重点、难点：
重点：
1．免疫佐剂的特性及应用原则。
2．抗血清鉴定方法的选择。
难点：免疫佐剂增强免疫应答的机制。
手段
课堂设计和时间分配
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第三章免疫原和抗血清的制备第一节免疫原的制备免疫原指能诱导机体产生抗体或致敏淋巴细胞，并能在体内外与抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的物质。
一、颗粒性抗原的制备细胞、细菌、寄生虫等皆为颗粒性抗原。
细胞抗原（如绵羊红细胞）一般情况下经生理盐水或其他溶液洗净，配制一定浓度即可。
细菌抗原多用液体或固体培养物，经集菌后处理。
颗粒性抗原大多用静脉内注射免疫法。
二、可溶性抗原的制备和纯化（一）组织和可溶性抗原的粗提蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶、补体、细菌毒素、免疫球蛋白片段、核酸等皆为良好的可溶性抗原。
1.组织匀浆的制备通常需要先将来源于人和动物的组织和细胞破碎，再经一定的方法纯化，才能获得所需的抗原。
细胞破碎方法有：（1）高速组织捣碎机法；（2）研磨法：组织匀浆液要离心沉淀，沉淀物为组织和细胞碎片，上清液为提取可溶性抗原的材料。
2.细胞的破碎除上述机械捣碎获取外，尚有酶处理法，常用胃蛋白酶或胰酶，可获得游离的单个细胞。
细胞抗原分膜蛋白抗原、细胞质抗原（主要为细胞器）、细胞核与核膜抗原，制备这些抗原前均需将细胞破碎，方法有：（1）反复冻融法：-20℃冷冻，30～37℃融化（2）超声破碎法（3）自溶法（4）酶处理法：胃蛋白酶或胰酶（5）表面活性剂处理法：十二烷基硫酸钠3.免疫球蛋白片段的制备五种免疫球蛋白都具抗原性，皆可提取及纯化，但如分解成片段（如Fab片段、Fc片段、轻链片段等）作为免疫原可制备出分辨力更高的特异性抗血清。
制备方法有：（1）非共价键解离法：改变pH环境或用变性剂（2）共价键解离法（3）溴化氰裂解法（4）酶解法：木瓜蛋白酶、胃蛋白酶或胰蛋白酶.木瓜酶可将IgG裂解成2个Fab片段及1个Fc片段；胃蛋白酶可将IgG裂解成F（ab′）2个片段及数个小片段；胰蛋白酶可将IgG切成不规则的肽链。
（二）可溶性抗原的提纯和纯化1.超速离心法：适用于少数大分子抗原或比重较轻的抗原，不适用于大多数中小分子抗原。
2.选择性沉淀法：选择沉淀法是采用各种沉淀剂或某些条件使抗原成分沉淀的方法。
核酸去除法、盐析法、有机溶剂沉淀法、聚合物沉淀法。
其中盐析法是最常被采用，通过硫酸铵使蛋白抗原进行初筛，提取丙种球蛋白及进行抗原浓缩。
3.凝胶过滤法：根据分子大小进行分离纯化。
4.离子交换层析法：根据所带电荷不同进行纯化分离。
5.亲和层析法：与生物分子间不同的亲和性进行分离。
6.电泳法：蛋白质在同一pH环境中，分子量和电荷不同，在电场中迁移速率不同进行分离。
（三）纯化抗原的鉴定1.蛋白质含量测定：常用的是紫外光吸收法，该法测定280nm和260nm的吸光度（A）值。
2.分子量测定采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）法、凝胶过滤法等。
3.纯度鉴定采用醋酸纤维膜电泳、SDS-PAGE、毛细管电泳、等电聚焦、高效液相层析法等。
4.免疫活性鉴定采用双向免疫扩散法、免疫电泳法或ELISA法等。
三、半抗原性免疫原的制备半抗原指只具有抗原性而无免疫原性的物质。
多见于分子量小于4000的有机物质。
半抗原与载体相结合具有免疫原性。
（一）载体1.蛋白质：以牛血白蛋白最常见2.多肽聚合物：常用多聚赖氨酸3.大分子聚合物和某些颗粒聚乙烯吡咯烷酮、药用炭、羧甲基纤维素等皆常用。
（二）半抗原与载体的连接方法1.物理方法：通过电荷和微孔吸附半抗原。
2.化学方法：通过功能基团将半抗原与载体连接。
（三）半抗原性免疫原的鉴定20个以上半抗原连接在一个载体分子上，才能有效刺激免疫动物产生抗体。
第二节免疫佐剂一、佐剂的种类1.化合物：包括氢氧化铝、矿物油、吐温-80、弗氏不完全佐剂（羊毛脂与液状石蜡的混合物）以及人工合成的多聚肌苷酸：胞苷酸、脂质体等。
2.生物制剂：①经处理改造的细菌及其代谢产物，如卡介苗、脂多糖（LPS）和类脂A、源于分枝杆菌的胞壁酰二肽等；②细胞因子及热休克蛋白等。
最常用于免疫动物的佐剂是弗氏佐剂，弗氏佐剂分为弗氏完全佐剂（弗氏不完全佐剂加卡介苗）和弗氏不完全佐剂两种。
使用时加入水溶性抗原并充分乳化，使抗原与佐剂形成油包水乳剂。
佐剂和抗原的比例为1:1。
乳化的方法有两种：①研磨法。
②搅拌混合法：本法优点是无菌操作，节省抗原或佐剂，且可用此注射器直接注射。
缺点是不易乳化完全。
二、佐剂的作用机制1.改变抗原的物理性状，延缓抗原降解和排除，从而更有效地刺激免疫系统；2.刺激单核-巨噬细胞系统，增强其处理和提呈抗原的能力；3.刺激淋巴细胞增殖和分化；4.改变抗体的产生类型和诱导迟发型超敏反应。
第三节抗血清的制备抗血清的制备是将制备好的免疫原按照一定的免疫程序接种给所选择的动物，该动物在含有多种抗原表位的抗原刺激下，体内多个B细胞克隆被激活并产生针对某一抗原多种不同表位的抗体，其混合物为多克隆抗体。
采集动物血液，分离含有抗体的血清，即为抗血清。
一、免疫动物的选择常用的有家兔、绵羊、豚鼠、鸡、山羊和马。
1.抗原来源与动物种属差异越大，免疫原性越强，免疫效果越好。
2.抗体需求量大时，可选用马、绵羊等大动物。
抗血清需求量少时，可选用家兔、豚鼠和鸡等小动物。
3.抗血清分为R型和H型4.对于蛋白质抗原大部分动物皆适合，常用的是山羊和家兔。
在某些动物体内有类似物质时，蛋白质抗原对这些动物免疫原性极差，如IgE对绵羊、胰岛素对家兔、多种酶类对山羊，免疫后均不易产生抗体。
二、免疫程序1.免疫原的剂量：由免疫原性的强弱、动物的个体状态和免疫时间确定。
免疫原剂量过大或过小都可使动物产生免疫耐受，在一定剂量范围内，免疫原剂量越大，产生的抗体效价越高。
2.免疫途径：有皮内、皮下、肌内、静脉、腹腔、淋巴结等途径。
皮内或皮下免疫时一般采用多点注射。
初次免疫一般选择皮内接种，加强免疫和颗粒性抗原一般选择静脉注射。
宝贵抗原可选择淋巴结内微量注射法。
3.间隔时间：第1次与第2次免疫间隔时间以10～20天为好，第3次及以后的间隔一般为7～10天。
三、动物采血法动物经免疫3～5次后，如抗血清鉴定合格，应在末次免疫后5～7天及时采血。
目前较常用的动物采血方法有3种：颈动脉采血法；心脏采血法；静脉采血法。
动物采血后，应尽快分离血清，分离血清的方法常采用室温自然凝固，然后置37℃或4℃使血块收缩后，收集血清。
第四节抗血清的鉴定和保存一、抗血清的鉴定1.抗体特异性的鉴定常用双向免疫扩散法。
观察沉淀线，若粗抗原及纯抗原之间皆出现一条沉淀线，且两者互相融合，则证明动物已产生单价特异性抗体；若纯化抗原出现一条，而粗抗原出现多条线，且其中一条沉淀线与纯抗原沉淀线相连接，也是成功的免疫，待取血后将杂抗体吸收去除，可以成为单价特异性抗体。
若不出现沉淀线，表示免疫失败。
2.抗体效价的测定颗粒性抗原采用凝集试验，可溶性抗原采用双向免疫扩散试验、ELISA等方法。
测定抗体效价有两种稀释方法，一种是将经过系列稀释的血清分别与一个浓度的抗原反应；另一种是同时稀释抗原和抗血清，分别与不同浓度的抗血清进行双向免疫扩散试验（称为棋盘滴定）。
3.抗体纯度的鉴定采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、双向免疫扩散试验、免疫电泳等。
4.抗体亲和力的鉴定二、抗血清的保存1.2～8℃保存：用于短期保存；2.冷冻保存：是常用的抗体保存方法。
将抗体分为小包装，在-80～-20℃保存，一般可保存5年，效价不会明显下降，但应避免反复冻融；3.真空干燥保存：用真空冻干机进行干燥，封装后可长期保存，一般在冰箱中可保存5～10年。
第五节抗血清的纯化抗血清纯化的目的是除去不相关成分，防止抗血清中的其他杂抗体干扰试验结果。
最常见的是提取抗血清中的特异性IgG或单价抗体。
一、特异性IgG抗体1.盐析法多采用硫酸铵盐析法或硫酸钠盐析法。
2.凝胶过滤法血清蛋白的分级分离常用凝胶过滤法，该法过滤条件温和，不影响IgG活性。
常结合盐析法提取IgG，盐析法可以去除大部分杂蛋白，提高凝胶过滤法的分离效果。
3.离子交换层析法4.亲和层析法二、单价特异性抗血清单价特异性是指血清只与其特异性抗原发生反应。
免疫得到的抗血清总是有抗白蛋白等杂抗体存在。
杂抗体的去除有两种方法：1.亲和层析法2.吸附剂方法制备蛋白质抗原时破碎组织细胞最简便的是A.反复冻融法B.超声破碎法C.表面活性剂处理法D.自溶法E.酶处理法『正确答案』A『答案解析』制备蛋白质抗原时破碎组织细胞最简便的是反复冻融法。
需制备10ml抗血清，应选择何种动物A.家兔B.小白鼠C.马D.绵羊E.猴『正确答案』A『答案解析』抗体需求量大时，可选用马、绵羊等大动物。
抗血清需求量少时，可选用家兔、豚鼠和鸡等小动物。
下列佐剂中具有免疫原性的是A.脂多糖B.氢氧化铝C.石蜡油D.羊毛脂E.多聚核苷酸『正确答案』A『答案解析』生物制剂具有免疫原性，所以具有免疫原性的是脂多糖。
厂家生产的抗IgG制剂一般的保存方法为A.液体4℃保存B.液体-10℃保存C.真空干燥保存D.25℃保存E.加叠氮钠保存『正确答案』C『答案解析』抗血清的保存：①2～8℃保存：用于短期保存；②冷冻保存：是常用的抗体保存方法。
将抗体分为小包装，在-80～-20℃保存，一般可保存5年，效价不会明显下降，但应避免反复冻融；③真空干燥保存：用真空冻干机进行干燥，封装后可长期保存，一般在冰箱中可保存5～10年。
最常用的半抗原载体是A.牛血清白蛋白B.牛甲状腺球蛋白C.人血清白蛋白D.人甲状腺球蛋白E.球蛋白『正确答案』A『答案解析』半抗原载体常用的有人血白蛋白、牛血白蛋白、血蓝蛋白、牛甲状腺球蛋白等。
以牛血白蛋白最常用。
A.盐析沉淀法B.有机溶剂沉淀法C.凝胶过滤D.离子交换层析E.亲和层析1.经典的蛋白质抗原纯化分离方法为『正确答案』A『答案解析』经典的蛋白质抗原纯化分离方法为盐析沉淀法。
2.根据抗原分子大小进行纯化分离的方法为『正确答案』C『答案解析』凝胶过滤法：根据分子大小进行分离纯化。
3.根据抗原所带电荷不同进行纯化分离的方法为『正确答案』D『答案解析』离子交换层析法：根据所带电荷不同进行纯化分离。