发酵大实验实验报告
生物实验报告_发酵现象

一、实验背景发酵现象是指微生物在无氧或低氧条件下,通过代谢活动将有机物质转化为其他物质的过程。
发酵现象在食品、药品、能源等领域有着广泛的应用。
本实验旨在探究酵母菌在发酵过程中的现象,并分析其代谢产物。
二、实验目的1. 观察酵母菌发酵现象;2. 分析酵母菌发酵产物的性质;3. 掌握发酵实验的基本操作。
三、实验原理酵母菌是一种兼性厌氧型微生物,在有氧条件下,酵母菌通过有氧呼吸将葡萄糖分解成二氧化碳和水;在无氧条件下,酵母菌通过无氧呼吸将葡萄糖分解成酒精和二氧化碳。
四、实验材料1. 实验仪器:锥形瓶、胶头滴管、玻璃棒、酒精灯、烧杯、试管、试管架、培养皿、培养箱等;2. 实验试剂:葡萄糖、酵母粉、蒸馏水、pH试纸、澄清石灰水、重铬酸钾溶液、浓硫酸等。
五、实验步骤1. 准备实验材料,将葡萄糖和酵母粉按照一定比例混合;2. 将混合好的葡萄糖和酵母粉溶解于蒸馏水中,搅拌均匀;3. 将溶液分装于锥形瓶中,用酒精灯加热至沸腾,杀死微生物;4. 冷却锥形瓶,将溶液转移至烧杯中;5. 将烧杯中的溶液用pH试纸检测,记录初始pH值;6. 将烧杯中的溶液倒入锥形瓶中,用胶头滴管滴加澄清石灰水,观察现象;7. 将锥形瓶放入培养箱中,在适宜温度下培养一段时间;8. 每隔一段时间,观察锥形瓶中的溶液变化,记录气泡产生情况;9. 培养结束后,将锥形瓶中的溶液转移至试管中,用重铬酸钾溶液检测酒精含量;10. 分析实验结果,得出结论。
六、实验结果与分析1. 初始pH值:实验开始时,溶液的pH值为6.5;2. 气泡产生:在培养过程中,锥形瓶中的溶液产生大量气泡,说明酵母菌在发酵过程中产生了气体;3. 澄清石灰水反应:在滴加澄清石灰水后,溶液中出现白色沉淀,说明溶液中含有二氧化碳;4. 酒精含量:通过重铬酸钾溶液检测,发现溶液中含有一定量的酒精。
七、结论1. 酵母菌在发酵过程中产生了大量气泡,说明酵母菌通过无氧呼吸产生了气体;2. 澄清石灰水反应结果表明,溶液中含有二氧化碳;3. 酒精含量检测结果显示,溶液中含有一定量的酒精;4. 本实验验证了酵母菌在发酵过程中产生了气体、二氧化碳和酒精,证实了发酵现象的存在。
微生物的发酵实验报告

一、实验目的1. 熟悉微生物发酵的基本原理和操作流程。
2. 掌握微生物接种、培养、发酵等实验技术。
3. 学习如何观察和记录发酵过程中的现象,分析发酵效果。
二、实验原理微生物发酵是指利用微生物的代谢活动,将有机物质转化为人类所需的产物,如酒精、有机酸、酶等。
发酵过程中,微生物通过分解底物产生能量,同时合成目标产物。
本实验以酒精发酵为例,探究微生物发酵的基本原理和操作方法。
三、实验材料与仪器材料:1. 酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)2. 葡萄糖3. 酵母膏4. 灭菌水5. 酒精计6. 硅胶仪器:1. 烧杯2. 研钵3. 玻璃棒4. 移液管5. 恒温水浴锅6. 烧瓶7. 玻璃漏斗8. 紫外线灯四、实验步骤1. 酵母菌活化:- 将酵母菌菌种接种于含有葡萄糖和酵母膏的培养基中,置于28℃恒温培养箱中培养24小时。
- 取活化后的酵母菌,用无菌移液管转移至另一无菌培养基中,继续培养。
2. 发酵液制备:- 将葡萄糖和酵母膏溶解于灭菌水中,配制成一定浓度的发酵液。
- 将活化后的酵母菌接种于发酵液中,充分搅拌均匀。
3. 发酵:- 将发酵液置于28℃恒温培养箱中发酵,每隔一定时间取样测定酒精含量。
4. 酒精含量测定:- 用酒精计测定发酵液中的酒精含量。
- 记录酒精含量随时间的变化。
5. 发酵结束:- 当酒精含量达到预期值时,停止发酵。
- 将发酵液过滤,去除菌体。
6. 酒精含量分析:- 对发酵液中的酒精含量进行分析,确定发酵效果。
五、实验结果与分析1. 发酵曲线:实验结果表明,发酵液中的酒精含量随时间逐渐增加,并在发酵后期达到峰值。
发酵过程中,酒精含量变化曲线呈S型,符合微生物发酵的一般规律。
2. 酒精含量分析:通过酒精计测定,发酵液中的酒精含量为5.6%。
六、讨论1. 本实验成功实现了酒精的发酵,验证了微生物发酵的基本原理和操作方法。
2. 发酵过程中,酵母菌通过分解葡萄糖产生酒精和二氧化碳。
发酵工程实验报告总结

发酵工程实验报告总结发酵工程实验是一项非常重要且广泛应用的实验,通过实验,我们可以了解到发酵过程中的微生物生长和代谢规律,提高发酵过程的效率和产物质量。
本次实验主要涉及到发酵过程中的控制变量,发酵过程中微生物的生长和代谢规律的研究以及发酵过程中产物的分析等内容。
通过本次实验,我了解到了发酵过程中的一些基本原理和技术,对发酵工程有了更加深入的认识。
在实验中,我们首先进行了菌种的培养和优选。
通过实验,我们了解到菌种的选择和培养过程对发酵过程中的微生物生长和产物质量具有重要的影响。
通过对不同菌种的筛选和培养条件的优化,我们可以选择到合适的菌种,并使其生长状况良好,提高发酵过程的效率。
在实验中,我们还进行了发酵过程的控制变量的研究。
通过对发酵过程中温度、pH值、氧气供应等因素的控制,我们可以调节微生物的生长速度和产物的合成效率。
实验结果表明,控制变量对发酵过程中的微生物生长和产物质量具有明显的影响。
因此,合理地控制发酵过程中的各项参数是提高发酵效率和产物质量的关键。
在实验中,我们还对发酵过程中微生物的生长和代谢规律进行了研究。
通过对微生物数量、生物量、细胞代谢产物等指标的测定和分析,我们可以了解到微生物在不同生长阶段的代谢特点和变化规律。
实验结果表明,微生物生长和代谢过程中有明显的生长阶段和代谢阶段的变化,我们可以根据这些变化规律来调节发酵过程中的控制变量,提高发酵效率。
最后,在实验中,我们还对发酵过程中产物的分析进行了研究。
通过对发酵产物的组成、含量、纯度等指标的分析和测定,我们可以评估发酵过程的效果和产物质量。
实验结果表明,发酵产物的组成和含量与微生物的生长和代谢过程密切相关,通过调节好发酵过程中的控制变量和选择合适的菌种,我们可以获得高质量的发酵产物。
综上所述,发酵工程实验是一项非常重要和有意义的实验,通过实验,我们可以了解到发酵过程中的微生物生长和代谢规律,探索调节发酵过程的控制变量以提高发酵效率和产物质量的方法。
发酵操作实验报告

一、实验目的1. 了解发酵的基本原理和过程。
2. 掌握不同发酵方法的操作步骤。
3. 通过实验验证发酵过程中的现象和结果。
4. 分析发酵过程中可能存在的问题及解决方案。
二、实验原理发酵是一种微生物利用有机物质进行代谢的过程,产生能量和代谢产物。
根据发酵过程中微生物的需求,可分为需氧发酵和厌氧发酵。
需氧发酵是指微生物在有氧条件下进行代谢,如酵母菌发酵;厌氧发酵是指微生物在无氧条件下进行代谢,如乳酸菌发酵。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:- 酵母菌:干酵母粉- 糖:葡萄糖- 水浴锅- 锥形瓶- 移液管- 玻璃棒- 温度计- 纱布- 石灰水- 橙色的重铬酸钾溶液2. 实验仪器:- 培养皿- 酵母菌接种环- 恒温培养箱- 量筒- 试管- 滤纸四、实验方法与步骤1. 酵母菌发酵实验:(1)将葡萄糖溶解于水中,制成葡萄糖溶液。
(2)将葡萄糖溶液倒入锥形瓶中,加入适量的干酵母粉。
(3)将锥形瓶放入水浴锅中,保温在30-40℃。
(4)观察酵母菌发酵过程中气泡的产生,记录气泡产生的时间。
(5)发酵结束后,将产生的气体通过澄清石灰水,观察石灰水的变化。
2. 乳酸菌发酵实验:(1)将葡萄糖溶液倒入锥形瓶中,加入适量的干酵母粉。
(2)将锥形瓶放入水浴锅中,保温在30-40℃。
(3)待酵母菌发酵结束后,取出锥形瓶,加入适量的乳酸菌。
(4)将锥形瓶放入恒温培养箱中,保温在37℃。
(5)观察乳酸菌发酵过程中气泡的产生,记录气泡产生的时间。
(6)发酵结束后,将产生的气体通过澄清石灰水,观察石灰水的变化。
五、实验结果与分析1. 酵母菌发酵实验结果:在实验过程中,酵母菌发酵产生了大量气泡,表明酵母菌在葡萄糖溶液中进行了代谢。
发酵结束后,将产生的气体通过澄清石灰水,石灰水变浑浊,说明产生了二氧化碳。
2. 乳酸菌发酵实验结果:在实验过程中,乳酸菌发酵产生了少量气泡,表明乳酸菌在葡萄糖溶液中进行了代谢。
发酵结束后,将产生的气体通过澄清石灰水,石灰水未变浑浊,说明未产生二氧化碳。
模拟发酵试验实验报告(3篇)

第1篇一、实验目的1. 了解发酵的基本原理和过程。
2. 掌握模拟发酵试验的操作步骤。
3. 通过实验,观察并分析发酵过程中物质的变化。
二、实验原理发酵是一种生物化学过程,在无氧条件下,微生物(如酵母菌、乳酸菌等)将有机物质分解产生能量、气体、酸等代谢产物。
本实验模拟了酵母菌在无氧条件下对蔗糖的发酵过程,通过观察气泡产生、pH值变化等现象,了解发酵的基本原理。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:- 蔗糖:50g- 温水:500ml- 干酵母:5g- pH试纸:1张- 玻璃棒:1根- 玻璃杯:1个- 药勺:1个2. 实验仪器:- 电子天平:1台- 秒表:1个- pH计:1台四、实验步骤1. 称取50g蔗糖,加入500ml温水中,用玻璃棒搅拌至完全溶解。
2. 称取5g干酵母,用药勺加入溶解好的蔗糖溶液中,继续搅拌。
3. 用pH试纸检测溶液的pH值,记录初始pH值。
4. 将搅拌好的蔗糖酵母溶液倒入玻璃杯中,用玻璃棒蘸取少量溶液滴在pH试纸上,观察pH值变化。
5. 记录实验开始时间,每隔10分钟观察并记录溶液的气泡产生情况、pH值变化。
6. 实验进行60分钟,记录实验结束时间。
五、实验结果与分析1. 实验过程中,溶液中开始出现少量气泡,随着时间的推移,气泡数量逐渐增多,表明酵母菌开始进行发酵作用。
2. 实验开始时,溶液的pH值为6.5,随着发酵过程的进行,pH值逐渐下降,说明发酵过程中产生了酸性物质。
3. 实验结束时,溶液的pH值下降至5.0,说明发酵产生的酸性物质使溶液的酸性增强。
六、结论1. 通过本实验,我们成功模拟了酵母菌在无氧条件下对蔗糖的发酵过程。
2. 发酵过程中,酵母菌将蔗糖分解为酒精和二氧化碳,同时产生酸性物质,使溶液的pH值下降。
3. 本实验为后续发酵实验提供了基础,有助于我们深入了解发酵的原理和应用。
七、实验反思1. 在实验过程中,应注意控制实验条件,如温度、pH值等,以确保实验结果的准确性。
初中生物发酵现象实验报告

初中生物发酵现象实验报告实验名称:发酵现象实验实验目的:通过观察和研究,探究发酵现象的产生原因和过程。
实验器材:盐、砂糖、水、面粉、酵母、酸性物质(例如柠檬汁)、透明塑料瓶、气球、温度计、试管。
实验原理:发酵是一种生物过程,是酵母菌等微生物在缺氧条件下分解有机物质产生能量的过程。
酵母菌利用糖类分解产生的能量进行生长和繁殖,过程中产生的副产物主要是二氧化碳和酒精。
实验步骤:1. 准备实验材料:取一小块酵母,将其放入温水中搅拌溶解,待酵母彻底溶解后备用。
2. 制作发酵液:取透明塑料瓶,倒入适量的温水,加入适量的盐、砂糖和面粉,搅拌均匀。
3. 添加酵母:将溶解的酵母液加入发酵液中,再加入适量的酸性物质(柠檬汁),搅拌均匀。
4. 观察和记录:将气球套在塑料瓶口上,使瓶口与气球完全密封。
观察气球的变化并记录。
实验结果:在观察的过程中,我们发现气球逐渐膨胀并充满气体,同时气球表面也产生了一些水珠。
经过一段时间的观察,我们可以明显看到气球变得更加膨胀,有些甚至会突破气球的容量,酵母发酵液也会溢出。
实验分析:通过这个实验我们可以发现,当酵母菌处于适宜的环境下,例如温度适宜、有机物质供给充足等条件下,它们会开始进行呼吸发酵。
这些酵母菌分解酵母发酵液中的糖类物质,产生能量和二氧化碳。
由于气球的密封性不允许气体逸出,所以二氧化碳被逐渐积聚,导致气球膨胀。
此外,由于发酵过程中产生了酒精,它也会渗透到气球内部,与气球表面的水珠形成一种混合物。
这也是为什么观察到气球表面出现水珠的原因。
实验总结:通过这个实验,我们对发酵现象有了初步的了解。
发酵是一种常见的生物过程,通过酵母菌等微生物的活动,有机物质分解产生能量和二氧化碳。
在实际生活中,发酵现象被广泛应用于面包、酒类等食品的制作中。
然而,需要注意的是,在进行发酵实验时要保持实验环境的卫生,尽量避免污染。
同时,也要注意酵母的使用量和实验溶液的配比,以免产生剧烈的反应。
通过这个实验,我对发酵现象有了更深入的了解,并对科学实验的设计和观察有了更多的体会,从而激发了我对科学研究的兴趣。
最新发酵大实验实验报告

最新发酵大实验实验报告实验目的:探究不同温度和pH条件下酵母菌发酵效率的变化,并分析其对面团发酵过程的影响。
实验材料:- 活性干酵母- 面粉- 温水- 糖- 盐- pH试纸- 温度计- 计时器- 密封容器- 称重设备实验方法:1. 准备五个密封容器,分别标记为A、B、C、D和E。
2. 每个容器中加入等量的面粉(100克)、糖(5克)和盐(2克)。
3. 在A容器中加入30°C的温水(约50毫升),B容器加入冷水(室温),C容器加入热水(约50°C),D和E容器分别加入调整为酸性和碱性的水(pH值分别调整为3和9)。
4. 使用pH试纸检测并记录每个容器中混合物的pH值。
5. 向每个容器中加入等量的活性干酵母(约5克)。
6. 密封容器,放置在恒温箱中,分别设置为不同的温度条件:A容器30°C,B容器室温,C容器50°C,D容器37°C,E容器45°C。
7. 使用计时器记录发酵时间,每隔30分钟观察并记录面团体积变化。
8. 持续观察2小时,记录最终发酵结果。
实验结果:- 容器A:面团体积显著膨胀,发酵时间约1小时。
- 容器B:面团体积膨胀较慢,发酵时间约2小时。
- 容器C:面团体积膨胀不明显,发酵时间超过2小时。
- 容器D:面团体积略有膨胀,发酵速度较慢。
- 容器E:面团体积基本无变化,发酵效果差。
实验分析:实验结果显示,酵母菌的发酵效率受温度和pH值的影响显著。
在适宜的温度(30°C)和接近中性的pH值条件下,酵母菌活性最高,发酵效率最佳。
过高或过低的温度以及极端的pH值都会抑制酵母菌的活性,从而影响发酵效果。
这些结果与酵母菌生长的生物学特性相符,为食品工业中的发酵工艺提供了重要的参考依据。
气球酵母发酵实验报告(3篇)

第1篇一、实验背景发酵现象是微生物在特定条件下,将有机物质分解产生新的物质的过程。
酵母菌作为一种常见的微生物,其在发酵过程中能够产生二氧化碳和酒精。
本实验旨在通过观察酵母菌发酵过程,了解其发酵现象,并探究发酵条件对实验结果的影响。
二、实验目的1. 观察酵母菌发酵过程,了解其产生二氧化碳和酒精的现象。
2. 探究不同温度、不同浓度糖溶液对酵母菌发酵的影响。
3. 分析酵母菌发酵过程中气体的生成和消耗情况。
三、实验原理酵母菌在适宜的条件下,能够将葡萄糖分解成酒精和二氧化碳。
在有氧条件下,酵母菌进行有氧呼吸,产生大量能量、水和二氧化碳;在无氧条件下,酵母菌进行无氧呼吸,产生少量能量、酒精和二氧化碳。
四、实验材料与仪器1. 实验材料:酵母、白糖、瓶子、气球、温水、漏斗、温度计、计时器。
2. 实验仪器:锥形瓶、胶塞、胶管、大烧杯、玻璃棒、滴管。
五、实验步骤1. 准备实验材料:将酵母、白糖、瓶子、气球等实验材料准备好。
2. 配制糖溶液:取一定量的白糖,加入适量温水溶解,配制成不同浓度的糖溶液。
3. 设置实验组:将锥形瓶清洗干净,分别加入不同浓度的糖溶液,并加入适量酵母。
4. 设置对照组:在锥形瓶中加入等量的清水,作为对照组。
5. 观察记录:将锥形瓶密封,放入温暖环境中,观察记录不同实验组中气球的膨胀情况。
6. 测量气体体积:使用滴管将产生的气体收集到集气瓶中,测量气体体积。
7. 分析实验结果:对比不同实验组中气球的膨胀情况,分析发酵条件对酵母菌发酵的影响。
六、实验结果与分析1. 观察记录:在实验过程中,观察到不同浓度的糖溶液中,气球膨胀情况有所不同。
随着糖浓度的增加,气球的膨胀速度加快,膨胀程度也更大。
2. 测量气体体积:通过测量气体体积,发现随着糖浓度的增加,产生的气体体积也相应增加。
3. 分析实验结果:实验结果表明,酵母菌发酵过程中,糖浓度对发酵产物的生成和气体体积有显著影响。
高浓度糖溶液有利于酵母菌发酵,产生更多的二氧化碳和酒精。
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2010级发酵大实验(1)实验报告任课老师:姓名:专业:生物技术班级:学号:日期:2013年6月实验报告一、目的要求:了解筛菌的基本操作,包括:培养基配制,灭菌,接种,涂板,摇菌,紫外分光光度计的使用等。
二、实验材料1、菌种来源:英语公园葡萄树下土壤和生物学院院楼门口土样。
2、培养基:(1)淀粉液体培养基:可溶性淀粉1%、蛋白胨1% 、葡萄糖0. 5%、NaCl 0. 5%、牛肉膏0. 5%(2)淀粉固体培养基: 可溶性淀粉1%、蛋白胨1% 、葡萄糖0. 5%、NaCl 0. 5%、牛肉膏0. 5%、琼脂粉1.5% 。
3、器皿:试管,量筒,烧杯,移液管,培养皿,洗耳球,玻璃棒,酒精灯,接菌环,三角瓶,玻璃棒等。
4、仪器:高压蒸汽灭菌锅,水浴锅,恒温培养箱,摇床,天平、紫外可见分光光度计等。
5、试剂:1%碘液、1M NaOH、DNS、pH 5.6 0.05M 乙酸/乙酸钠缓冲液、1%淀粉溶液、1mg/mL的麦芽糖,结晶紫溶液。
6、其他:封口膜、纱布,棉花,试管架等。
三、实验步骤:1、初筛:(1)配制培养基:按照上述培养基成分及数量称取各物质,放入三角瓶中,加水到100ml,包扎。
和包扎好的试管、移液管、涂布器、培养皿等一起放入灭菌锅中121℃高压灭菌20min。
然后干燥后使用。
(2)倒平板:把培养基置于无菌工作台上,待冷却到55℃左右后,倒入灭菌后的平板中,每个平板中约15-20ml,之后待冷却凝固。
(3)菌悬液制备:我们组分别从英语公园的葡萄树下和生物学院院楼门口采集土样,各称取10g,放入装有90mL无菌水的三角瓶中,震荡20min后静置5min。
(4)浓度稀释:在无菌试验台上进行浓度梯度稀释,把土样摇匀,从中吸取1ml 置于事先灭好菌的试管中,再加入9 ml无菌水,再从该试管中吸取1ml土样置于另一只无菌试管中,加入9ml无菌水,依次稀释到10^-5、10^-6、10^-7、10^-8待用。
(5)涂布平板:在超净工作台中,分别在10^-5、10^-6、10^-7、10^-8浓度下各取1 ml两种土壤稀释液倒入已冷却的平板中(因有一根试管破裂所以第二组土壤缺少10^-7浓度的稀释液,不过不影响之后的实验)。
用涂布器涂布均匀,在平板上标注土样的浓度。
把标注好的培养皿放入37 ℃培养箱中培养16-18h 。
(6)加碘筛选:取出培养好的平皿,放入冰箱中培养24h,取出后在长出的菌落上滴加碘液,菌落周围如有无色透明圈出现,说明淀粉被水解,即该菌株能产生淀粉酶。
2、复筛:平板划线:用上述配制培养基和到平板的方法再制得培养基,用灭过菌的接菌环从上述培养皿中挑去菌落周围透明圈和菌落直径比值较大的菌落在新配置的培养基上进行划线分离,之后进行浓度标注。
将标注好的培养皿放入37 ℃培养箱中培养16-18h。
3、检测菌种淀粉酶酶活:(1)配培养基:配置上述液体培养基,分装到多个100ml锥形瓶中,灭菌。
(2)接种:再次滴加碘液,挑选得到的周围透明圈较大的菌落,刮取1环接种至灭菌的含30/25mL液体培养基的三角瓶中。
并做好标记,方便后续菌种的保存接种后的培养基至于摇床中培养,培养条件为:30℃,180r/min、6小时后即可。
(3)测麦芽糖标准曲线:1)浓度为1mg/mL的麦芽糖标准液的配制:准确称取50mg麦芽糖于50mL小烧杯中,用少量蒸馏水溶解后,移入50mL容量瓶中用蒸馏水定容至50mL,充分混匀。
待用。
2)取8支洗净烘干的10mL具塞刻度试管,编号后按表2加入标准麦芽糖(G)溶液和蒸馏水,配制成一系列不同浓度的麦芽糖溶液。
充分摇匀后,向各试管中加入2.0 mL DNS溶液,摇匀后沸水浴5min,取出冷却后用蒸馏水定容至10mL,充分混匀。
在540nm波长下,以1号试管溶液作为空白对照,调零点,测定其它各管溶液的光密度值并记录结果。
以麦芽糖含量(mg)为横坐标,以对应的光密度值为纵坐标,绘制出麦芽糖标准曲线。
表1 麦芽糖标准曲线制作(4)测菌液浓度(比浊法):以参比液为空白对照,测定待测液OD590nm处的吸光值,以OD值标示枯草芽孢杆菌的生物量。
OD值最好等于1.(5)稀释菌液:通常用去灭菌去离子水稀释稀释到50-200倍,但因为我们组的菌液测浓度较低,故并没有进行稀释直接用的原液。
(6)、淀粉酶活力的测定:1)取10mL刻度试管2支(标记为A、B),分别加入0.5mL已稀释的待测酶液。
2)在B管中加入0.5mL 1M NaOH灭酶活,A管中加入0.5 mL pH 5.6 0.05M 乙酸/乙酸钠缓冲液。
然后在两管同时加入0.5 mL 1%淀粉溶液作为反应底物。
3)40℃恒温水浴锅准确反应5 min4)A管加入0.5 mL 1M NaOH灭酶活,B管中加0.5 mL pH 5.6 0.05M 乙酸/乙酸钠缓冲液。
两管加显色剂DNS试剂2.0 mL,沸水反应5 min,反应后迅速冷却定容至10mL。
5)用分光光度计再540nm处比色,用B管作为对照,测定OD540nm值。
6)根据麦芽糖标准曲线计算麦芽糖含量(G)和发酵液中酶活力。
酶活力定义:40℃,每分钟催化可溶性淀粉水解生成1 mg麦芽糖所需要的酶量为一个活力单位(U)计算公式:酶活力=y/生物量OD值/5×20×菌液稀释倍数可得(7)结果分析:若发酵液酶活性<0.1U,基本可视为杂菌污染。
四、实验结果:1、初筛结果:图1.梯度10-5的土壤菌种初筛结果图2.梯度10-6的土壤菌种初筛结果图3.梯度10-7的土壤菌种初筛结果图3.梯度10-8的土壤菌种初筛结果2、初筛加碘液结果:图1.梯度10-8的土壤菌种结果图2.梯度10-8的土壤菌种结果注:因为其他梯度出现的透明圈几乎可以忽略,只有10-8出现了很明显很大的透明圈,故我们组主要进行这个梯度的后续实验,故其他梯度的结果忽略不计,故未照相。
3、复筛结果:图1.梯度10-8的土壤菌种复筛结果经过平板划线,只有梯度为10-8只有的菌种分离了,其他梯度的菌种仍是以线性存在,可惜的是我们组当时没有想到要照相,只留了10-8这个梯度的结果,加完碘液后仍然具有很大的透明圈,这个菌很有可能就是我们的目的菌。
4、麦芽糖标准曲线:表2 麦芽糖标准曲线管号1 2 3 4 5 6 7 8试剂麦芽糖标液(mL)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4蒸馏水(mL)2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6麦芽糖含量(mg)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.40 0.210 0.511 0.999 1.381 1.815 2.026 2.249OD540可得标准曲线为:y=0.0564x+0.0048,其中y为麦芽糖含量,x为OD值。
5、菌浓度的测定:表3 菌浓度测定编号菌种梯度OD值1 0.000 0.0002 10-70.0563 10-8(1)0.1914 10-8(2) 1.5776、酶活测定实验:表4 酶活测定实验编号菌种梯度OD值1 10-70.0222 10-8(1)0.0113 10-8(2)0.0947、计算麦芽糖含量根据麦芽糖标准曲线,计算所得麦芽糖含量。
表5 麦芽糖含量编号梯度OD值x 麦芽糖含量y1 10^-7 0.022 0.00602 10^-8(1)0.011 0.00543 10^-8(2)0.094 0.01018、计算酶活表6 酶活计算编号梯度麦芽糖含量y 酶活(U/mL)1 10^-7 0.0060 0.42862 10^-8(1) 0.0054 0.11313 10^-8(2) 0.0101 0.0256五、结果分析:本实验的设计方案具有一定的理论依据,如果操作得当,各方面条件满足,会得到产淀粉酶的活性芽孢杆菌高产菌株,及该菌株的最佳摇瓶发酵条件。
但操作过程存在很多缺陷,导致结果失败,主要问题有:1、分离芽孢杆菌时,稀释度不够导致水解圈粘连;2、DNS法测OD值时,一部分数据显著偏大,可能是稀释倍数不够所致;3、DNS法测OD值时,由于操作失误,忘记每个试管做平行测量,造成结果不精确;4、取样过于随意,所取土壤中含酶活的细菌不多;5、无菌操作不是很标准,可能造成染菌。
6、富集培养时未除去土壤。
效果同加入过多的葡萄糖一样,土壤中有一部分营养物质,致使长过多的杂菌,实验时应该出去土壤,但是当时又怕细菌都吸附在土壤颗粒上,除去土壤的同时会除去细菌。
应该注意大胆尝试,做一组试试看,说不定结果会很好。
7、培养基中加入葡萄量可能颇多,导致细菌利用较多利用葡萄糖,产生的淀粉水解圈不明显。
培养基中加入葡萄糖,原因是芽孢萌发时加葡萄糖以利生长,但是可能是当时加入葡萄糖的量偏多,使不能利用淀粉的细菌芽孢也萌发,致使有较多杂菌不利于检验,同时又使可利用淀粉的细菌芽胞萌发成营养细胞后利用葡萄糖,而不是利用淀粉,致使产生的淀粉水解圈太小。
下次实验时应注意仔细查阅资料及询问老师,控制好加入的营养物质的量。
六、个人心得:在自然界的土壤中存在能产生淀粉酶的芽孢杆菌,通过土样稀释、加热土样悬液、杀死非芽孢细菌、平板分离可获得疑似芽胞杆菌的单菌落,将单菌落点接含有淀粉的平板,具有产淀粉酶能力的芽孢杆菌,水解淀粉生成小分子糊精和葡萄糖,在淀粉平板上菌落周围也会出现水解圈,但肉眼不易分辨,用碘液染色法染色后显现出透明圈,未水解的淀粉呈蓝色,水解圈无色。
由此可将产淀粉酶能力的菌株分离。
透明圈与菌落直径比值的大小在一定程度上反映了菌落纯度和产淀粉酶的活力菌株产生淀粉酶的能力:前者与后者的比值越大,表明分泌的淀粉酶越多,水解淀粉的能力也就越强。
土壤中存在产淀粉酶的细菌,然而,土壤中存在的产淀粉酶的细菌在整个土壤细菌中所占的比例是较小的,土壤中绝大多数的细菌是不能产生淀粉酶的。
高温对于土壤中的不耐热的细菌具好的消灭效果,却对产淀粉酶的细菌没有影响。
所以,可以通过高温处理来提高分离出来的产淀粉酶细菌的纯度。
由于受实验设备及实验操作等方面的影响,经初步筛选出的含淀粉酶细菌中仍混有其它杂菌。
所以,我们应该对初步筛选出的细菌再次进行筛选,筛选出纯度较高的含淀粉内细菌,并用显微镜观察其菌落的特征,对照辨别其所属菌种。
针对该菌种的特性,对其淀粉酶的活性、生长周期、最适温度、最适PH、耐酸性、耐碱性、发酵条件等一系列问题进行深入的研究,探究其在工业生产以及其他领域的中的应用。
通过亲自体验本次试验,能够真正了解到微生物发酵的过程,将课本上的东西都结合到实验来,并且对一些不理解的器具也有了充分的认识,包括对发酵罐各个部件的,各个管路的认识以及他们的作用。
在操作过程中我们要严格自己的操作,实验测量的数据要保持真实性。