丙酮酸含量测定
丙酮酸
酵 母 菌
Debaryomyces(德巴利酵母属)，Candida(假丝 酵母属)，Saccharomyces(酵母属)， Torulopsis(球拟酵母)等。
葡萄糖
NA
丙 酮 酸 的 代 谢 机 制 图
甘油
异亮氨酸，缬氨酸
B1
磷酸烯醇式丙酮酸
B1 NA
乳酸
NA
LDH
丙酮酸
NA B1
PDC PDC
丙酮酸结构式
丙酮酸的主要用途
用途 实例
用 途 生 化 研 究
实例
丙酮酸是测定伯醇、 仲醇和脂肪胺含量的通 用试剂，也是测定转氨 酶及乳酸脱氢酶活力的 生化试剂。
酶法合成 L-色氨酸和 制药 (L一酪氨酸、L一多巴;是 工业 合成L一半胱氨酸、L一亮 氨酸、VB6和VB12的原料。
是合成乙烯系聚合物、氢 农用 化阿托酸、古物保护剂、 化学 除草剂等多种农药的起始 品 原料。
丙酮酸的发酵机制
丙酮酸是机体代谢的中间产物，既处于糖酵 解(EMP)途径的末端，又是连接EMP途径和TCA循 环的关键产物，它可经多条途径生成乙醇、乳酸、 草酞乙酸、丙氨酸、撷氨酸和异亮氨酸等。因此 其所处的位置极为特殊。根据代谢控制育种和发 酵原理，要想在生物体内大量积累丙酮酸，就必 须进一步切断或更确切地说是减弱丙酮酸的进一 步代谢支路，加速丙酮酸的合成速度，去除代谢 产物的反馈阻遏或反馈抑制。
丙酮酸
张亚
丙酮酸
丙酮酸的理化性质 丙酮酸用途及生产现状 生产菌株 丙酮酸的代谢途径及发酵机制 酵母生产丙酮酸实例
理化性质
丙酮酸（Pyruvic acid），又称 2-氧代丙酸、α -酮基丙酸或乙 酰基甲为无色至淡黄色液体，呈 醋酸香气和愉快酸味，见光色变 深，易吸潮、聚合、分解，能与 水、乙醇、乙醚混溶。其熔点 11.8℃，沸点165℃（分解）。 分子式C3H4O3，分子量为85.06， 是最重要的α -氧代羧酸之一。
反相高效液相色谱法测定壳聚糖纳米粒中丙酮酸乙酯的含量
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ １ ｊ ． ｉ ａ ｓ ｎ ． ２ ０ ９ ５ ４３ ４ ４
２ ｔ ｔ ｐ ： ／ Ａ ｗｖ ｗ ． ｃ ｒ ｔ ｅ ｒ ． ｏ ｒ ｇ 】
中图分类号： Ｒ ３ １ ８ 文献标识码： Ａ 文章编号： ２ ０ ９ ５ ４３ ４ ４
量。
徐凤 娥 ，女 ，１ ９ ８ ６年 生 ， 江 西省上 饶 市人 ，汉族 ，
温州医科大学在读硕士， 主要从 事 眼科 生物 材料 与
临床研 究 。
关键 词 ：
生 物耪 料 ：纳米 材料 ：药物控 释 核料 ；壳 聚糖 纳米粒 丙酾 酸 乙酯 ；反相 高效 液相 色谱 ：包 封率 ：相 对标 准
Ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｅ ｔ ｈ ｙ ｌ ｐ ｙ ｒ ｕ ｖ ａ ｔ ｅ ｉ ｎ ｃ ｈ ｉ ｔ ｏ ｓ ａ ｎ ｎ ａ ｎ ｏ ｐ ａ ｒ ｔ ｉ ｃ ｌ ｅ ｓ ｂ ｙ ｒ ｅ ｖ ｅ ｒ ｓ ｅ ｄ － ｐ ｈ ａ ｓ ｅ ｈ ｉ ｇｈ － ｐ ｅ ｒ ｆ ｏ ｍ ａ ｒ ｎ ｃ ｅ ｌ ｉ ｑ ｕ ｉ ｄ ｃ ｈ ｒ ｏ ｍａ ｔ ｏ ｇ ｒ ａ ｐ ｈ ｙ
中国组织工程研 究 第 １ ８誊 笫 ８ 期
２ ０ １ ４— ０ ２— １ ９出版
ｗｗｗ． ＣＲＴ ＥＲ． ｏｒ ｇ
Ｃｈｉ ｎｅ ｓ ｅ Ｊ ｏ ｕ ｍａ ｌ ｏ ｆ Ｔ ｉ ｓ ｓ ｕ ｅ Ｅｎ ｇ ｍｅ ｅｄ ｎ ｇ Ｒｅ ｓ ｅ ａ ￣ｈ Ｆ ｅｂ ｒ ｕ ａ ｒ ｙ １ ９ ，２ ０１ ４ Ｖｏ Ｌ １ ８ ， Ｎｏ ． ８
偏 差 主题 词 ：
生 物相 容性 材料 壳 聚糖 ；纳 米粒 ：丙酮酸 基 金资 助 ： 浙 江省 重 点秘技 薪 函队计 资助 项 巨【 ２ ０ ０ ９ Ｒ ５ ０ ０ ３ ９ ，２ ０ １ １ Ｒ ０ ９ ０ ３ ９ － ｏ ６ ）
丙酮酸(pyruvic acid PA)含量测定试剂盒说明书
货号：QS2204 规格：50管/48样丙酮酸（pyruvic acid PA）含量测定试剂盒说明书可见分光光度法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：丙酮酸通过乙酰CoA连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢，起着重要的枢纽作用。
测定原理：丙酮酸与2,4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，在碱性溶液中呈色。
自备实验用品及仪器：可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水。
试剂的组成和配制：提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体5mL×1瓶，4℃避光保存；试剂二：液体25mL×1瓶，4℃保存。
丙酮酸提取：1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），静置30min， 8000g，25℃离心10min，取上清待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆，静置30min，8000g，25℃离心10min，取上清待测。
3、血清（浆）样品：按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议取0.1mL血清（浆）加入1mL提取液），进行冰浴匀浆，静置30min， 8000g，25℃离心10min，取上清待测。
测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至520nm，蒸馏水调零。
2、取300μL样本+100μL试剂一于1.5mL EP管中，混匀，静置2min，加入500μL试剂二，混匀，于520nm波长处测定管吸光值A。
丙酮酸含量计算：1、标准条件下测定回归方程为y = 0.0466x + 0.0675； x为丙酮酸含量（µg/mL），y为吸光值。
丙酮酸及系列产品的检测与应用
*基金项目：北京市教委科技发展计划KM200610011011 作者简介：刘彩霞（1980～），女，硕士生；孙家跃（1955～），男，博士，教授，通讯联系人，主要研究方向：材料化学。
9
综述
酮酸钙的质量。因此，HPLC法较EDTA络合滴定法更 能真实地反应丙酮酸钙的含量，且简便，应用广泛。 2.3 高效液相色谱电化学发光法
3 丙酮酸及系列产品的应用
3.1 丙酮酸 丙酮酸[14]是一种十分重要的有机化工中间体，
主要应用于医药、农药和日化工业，近年来丙酮酸 的开发应用已成为国内外研究的热点。
丙酮酸在医药工业中被合成治疗高血压新药血 管紧张肽Ⅱ抗药、系列蛋白酶抑制剂、镇静剂[15]、 消炎阵痛药辛可芬、抗结核药异烟肼丙酮酸钙、解 热药2—苯基喹啉—4—羧酸、驱虫药恩波吡维胺、 药物磷酸烯醇丙酮酸、4—甲唑甲酸、抗病毒剂氮杂 喹喔啉以及噻咪唑药物等。值得一提的是,丙酮酸在 人体柠檬酸循环和合成氨基酸及其糖类中是重要的 中间体,同时可以使脂肪代谢率达到48%,对人体安 全性高,因此近年来国外发达国家利用丙酮酸这一特 性,以其钙盐作为减肥保健药品。国外有关媒体已经 报道,含有丙酮酸钙的减肥药已经风靡全球,成为减 肥药市场上的新宠。
生命科学仪器 2006 第4卷/6月刊
综述
丙酮酸及系列产品的检测与应用
刘彩霞1，杜海燕1，孙家跃1*，李宁2
（1.北京工商大学化学与环境工程学院，北京 10Байду номын сангаас037; 2.北京市港华助剂有限责任公司，北京 100018)
摘要 丙酮酸及系列产品在化工、生化、制药和农用化学品等工业及科学研究中有着广泛的用途。丙酮酸及系列产品 的纯度、含量、杂质等质量指标与合成方法有关，不同的应用途径对这些指标也有着不同的要求。本文综述了丙酮酸 及系列产品质量指标的检测方法，以及丙酮酸及系列产品的应用现状。 关键词 丙酮酸，丙酮酸系列产品，检测，应用
LDH法的原理及应用
LDH法的原理及应用1. 原理LDH（Lactate dehydrogenase）法是一种用于测定体液中乳酸含量的常用方法。
乳酸是生物体在无氧代谢过程中产生的一种代谢产物，其浓度的升高常常与某些病理状态相关，因此测定乳酸浓度可以帮助医生评估病人的代谢情况和疾病严重程度。
LDH法的原理基于乳酸在存在乳酸脱氢酶（LDH）的催化下与还原型辅酶Ⅱ（NADH）发生氧化还原反应，生成丙酮酸和NAD+。
该反应可通过测定NAD+的减少量或NADH的增加量来间接测定乳酸的浓度。
具体步骤如下：1.取一定体积的待测液样加入反应溶液中，其中包括乳酸脱氢酶、NADH和缓冲剂。
2.反应开始后，乳酸脱氢酶催化乳酸与NADH反应，生成丙酮酸和NAD^+。
3.NADH的减少量可以通过光密度的变化来测定。
乳酸浓度与NADH减少量成正比。
4.通过比对标准曲线，可以确定待测液样中乳酸的浓度。
2. 应用LDH法广泛应用于临床医学、药物研究和生物学等领域。
下面列举了该方法在不同领域的应用：2.1 临床医学LDH法在临床医学中用于测定血液、尿液和其他体液中乳酸的浓度。
这对于评估病人的代谢情况、疾病状态和疾病严重程度非常重要。
LDH法在以下疾病的诊断和监测中有广泛应用：•心肌梗塞：乳酸浓度的升高与心肌梗塞相关。
•肝脏疾病：乳酸浓度的增加可能与肝功能受损有关。
•肾脏疾病：乳酸浓度的变化可以反映肾脏功能的改变。
2.2 药物研究LDH法可用于药物研究中对药物对细胞代谢的影响进行评估。
通过测定细胞中乳酸的浓度变化，可以了解药物对细胞氧化代谢的影响。
该方法可以帮助研究人员了解药物的治疗效果和毒副作用，进而指导药物的研发和应用。
2.3 生物学研究LDH法在生物学研究中也有一定的应用。
乳酸浓度的变化可以反映细胞的能量代谢状态。
通过测定乳酸浓度的变化，可以了解细胞在不同生理和病理条件下的代谢状态。
在细胞培养和细胞凋亡研究中，LDH法可用于评估细胞的损伤程度和细胞死亡情况。
影响酶促反应的因素——温度,ph,激活剂及抑制剂,生化实验报告(共8篇)
影响酶促反应的因素——温度,ph,激活剂及抑制剂,生化实验报告(共8篇) 影响酶促反应速度的因素生化实验实验二影响酶促反应速度的因素【目的】观察温度、PH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。
【原理】唾液淀粉酶催化淀粉水解，生成一系列水解产物，即糊精、麦芽糖和葡萄糖等。
淀粉及其水解产物遇碘会呈现不同的颜色。
在不同温度，不同PH值下，唾液淀粉酶活性不同，催化淀粉水解程度不一，生成的产物也就不同。
此外，激活剂、抑制剂也能影响淀粉酶活性，影响淀粉的水解。
因此可根据在不同反应条件下，溶液加碘呈现的不同颜色来判断淀粉的水解程度，从而验证了温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。
淀粉I2 【操作】1. 温度对酶促反应速度的影响取3支试管，编号，按下表操作：2. PH对酶促反应速度的影响取3支试管，编号，按下表操作：3．激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响取4支试管，编号，按下表操作：【结果及分析】观察各管颜色变化，说明温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应的影响。
【实验注意事项】篇二：生化实验思考题参考答案生化实验讲义思考题参考答案实验一淀粉的提取和水解1、实验材料的选择依据是什么？答：生化实验的材料选择原则是含量高、来源丰富、制备工艺简单、成本低。
从科研工作的角度选材，还应当注意具体的情况，如植物的季节性、地理位置和生长环境等，动物材料要注意其年龄、性别、营养状况、遗传素质和生理状态等，微生物材料要注意菌种的代数和培养基成分的差异等。
2、材料的破碎方法有哪些？答：(1) 机械的方法：包括研磨法、组织捣碎法；(2) 物理法：包括冻融法、超声波处理法、压榨法、冷然交替法等；(3) 化学与生物化学方法：包括溶胀法、酶解法、有机溶剂处理法等。
实验二总糖与还原糖的测定1、碱性铜试剂法测定还原糖是直接滴定还是间接滴定？两种滴定方法各有何优缺点？答: 我们采用的是碱性铜试剂法中的间接法测定还原糖的含量。
间接法的优点是操作简便、反应条件温和，缺点是在生成单质碘和转移反应产物的过程中容易引入误差；直接法的优点是反应原理直观易懂，缺点是操作较复杂，条件剧烈，不易控制。
ALT,AST测定方法
ALT,AST测定⽅法3.8.2.1⼩⿏肝、肾、⼼组织ALT含量测定1实验原理⾕丙转氨酶作⽤于由丙氨酸及α-酮戊⼆酸组成的基质，在⼀定的反应条件下，产⽣⼀定量的丙酮酸。
在酶反应到规定时间时，加⼊2,4-⼆硝基苯肼，在当量浓度的酸性条件下，终⽌了酶反应。
2,4-⼆硝基苯肼分别与反应产⽣的丙酮酸及剩余的基质α-酮戊⼆酸形成各⾃对应的2,4-⼆硝基苯腙。
在碱性条件下，虽然⼆种苯腙分别显出红棕⾊，但由于丙酮酸⽣成的颜⾊较深，以同等克分⼦计算，在480-530nm波长范围内其浓度约为α-酮戊⼆酸⽣成的颜⾊的3倍，利⽤这⼀差别可以反映出丙酮酸的⽣成量。
本实验设⾕草转氨酶活⼒为：样品液与ALT 基质液在37℃下反应60min时每⽣成1µmol丙酮酸所需的酶量为1个活⼒单位（U）。
2试剂配制（1）0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）称取NaH2PO4.2H2O 2.96495g，Na2HPO4.12H2O 29.0142g，溶解于蒸馏⽔中，定容到1000mL。
（2）20µmol/L丙酮酸钠标准溶液称取22mg丙酮酸钠，溶解于0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）100mL中。
现配现⽤。
（3）ALT基质液称取α-酮戊⼆酸29.2mg，DL-丙氨酸1.78mg（L-丙氨酸0.85mg）溶解于30mL 0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）中，溶解后校正pH⾄7.4，再⽤pH7.4的磷酸缓冲液定容⾄100mL，置冰箱中保存备⽤（可保存⼀周）。
可加⼊氯仿数滴防腐。
（4）0.02% 2，4—⼆硝基苯肼溶液称取20mg2，4—⼆硝基苯肼先溶解于10 mL纯盐酸中，电炉加热助溶，待2，4—⼆硝基苯肼全部溶解后，⽤蒸馏⽔稀释⾄100mL，过滤后盛于棕⾊中，置冰箱中保存备⽤。
（5）1mol/L NaOH溶液：称取4g NaOH溶解于蒸馏⽔后，定容到100mL。
（6）0.4 mol/L NaOH溶液称取16 g NaOH溶解于蒸馏⽔后，定容到1000mL。
丙酮酸差量法测定大蒜中大蒜辣素含量方法的建立
丙酮酸差量法测定大蒜中大蒜辣素含量方法的建立朱君芳;许建;高杰【摘要】通过测定经酶促反应后大蒜鳞茎中的丙酮酸含量,以灭酶组大蒜鳞茎中丙酮酸含量为本底,应用丙酮酸差量法计算得出大蒜鳞茎中大蒜辣素含量,并对测定条件进行优化.结果表明:大蒜本底灭酶条件为100℃水浴加热30 min,酶促反应温度为30℃,酶促反应时间为10 min,在520 nm下测定吸光度值,丙酮酸含量浓度在10 ～ 50 μg/mL内与吸光度呈良好的线性关系,大蒜辣素测定精密度相对标准偏差为0.88％,重现性相对标准偏差为1.05％.该方法操作简单、稳定、重复性好,对于测定大蒜中大蒜辣素切实可行.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2015(041)011【总页数】4页(P148-151)【关键词】大蒜;丙酮酸;差量法;大蒜辣素含量【作者】朱君芳;许建;高杰【作者单位】新疆农业大学林学与园艺学院,新疆乌鲁木齐830052;新疆农业大学林学与园艺学院,新疆乌鲁木齐830052;新疆农业大学林学与园艺学院,新疆乌鲁木齐830052【正文语种】中文大蒜(Allium sativum L.)是百合科(Liliaceae)葱属(Allium)草本植物，是一种葱蒜类蔬菜，以鳞茎、嫩叶和花茎为食用器官，是一种重要的调味蔬菜［1］。
原产于欧洲南部、西亚和中亚，西汉时期传入我国［2］。
目前大蒜在我国已广泛栽培，主要产地有河南、山东、河北、甘肃、江苏及新疆等地［3-4］。
大蒜有消炎、杀菌、降低胆固醇、抗癌、以及增强免疫力等多种功效。
大蒜的药用价值主要来源于大蒜辣素(allicin)。
大蒜辣素极易挥发，是一种具有特殊气味的无色油状物质［5-9］。
大蒜辣素以前体物质蒜氨酸存在于大蒜中，在完整的细胞中，蒜氨酸存在于细胞质中，而蒜氨酸酶存在于液泡中，细胞破碎后二者接触，继而蒜氨酸发生转化，生成大蒜辣素［10-11］。
大蒜辣素药用价值大，可加工为保健品和药品等，应用前景较广阔。
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丙酮酸含量测定
一、目的：丙酮酸是一种重要的中间代谢物。
通过本实验掌握测定植物组织中丙酮酸含量的原理和方法，增加对代谢的感性认识。
二、原理：植物样品组织液用三氯乙酸除去蛋白质后，其中所含的丙酮酸可与 2,4- 二硝基苯阱反应，生成丙酮酸一 2 ， 4 一二硝基苯踪，后者在碱性溶液中呈樱红色，其颜色深度可用分光光度计测量。
与同样处理的丙酮酸标准曲线进行比较，即可求得样品中丙酮酸的含量。
三、仪器、试剂、材料
1、1.5 mol/L NaOH
2、 8% 三氯乙酸
3、 0.1% 2,4 一二硝基苯肼 4 、丙酮酸标准液
5、.材料大蒜的鳞茎。
四、操作步骤
1、.植物材料提取液的制备
称取 0.5—1g大蒜于研钵内加适量 8% 三氯乙酸，仔细研成匀浆，再用 8% 三氯乙酸洗入 25ml 容量瓶，定容至刻度。
塞紧瓶塞，振摇提取，静置 30min 。
取约 10ml 匀浆液离心（ 4000 r/min ） 10min ，上清液备用。
2、标准曲线制作（略）
3、.组织液中丙酮酸的测定
取 1. 0ml 上清液于一刻度试管中，加 2ml 8 ％三氯乙酸，加 1.0ml 0.1％2.4 －二硝基苯肼液，摇匀，再加 5.0 ml 1.5mol/L, NaOH 溶液，摇匀显色，10min 后在 520 nm 波长下比色，记录吸光度，在标准曲线上查得测定管的丙酮酸含量。
五、结果处理
丙酮酸含量（mg/g鲜重）=A*V*稀释倍数/样品重(g)*1000
<P>式中， A 为在标准曲线上查得的丙酮酸的微克数。
V为提取液体积。
六、注意事项
1. 所加试剂的顺序不可颠倒，先加丙酮酸标准液或待测液，再加 8% 三氯乙酸，最后加 1.5mol/ L NaOH 。
2 .应反应 10min 后再比色。