正交试验研究枸杞多糖的微波辅助提取
枸杞多糖的不同提取分离方法比较
枸杞多糖的不同提取分离方法比较2.1 枸杞多糖的提取方法2.1.1 溶剂提取法因为多糖在水溶液中的溶解度较高，所以可以用水、酸、碱等极性溶剂或者甲醇、乙醇等质子型溶剂溶解。
研究证明了碱性条件下会通过破坏植物细胞壁及细胞膜，从而增加了细胞内多糖的溶出度，以此枸杞多糖的提取量就提高了。
但是酸碱提取法并不常使用，原因是其法会破坏糖苷键，使多糖的构型发生改变等，并且提取过程提取的物质在酸碱条件下，会发生特殊反应，产生干扰最终结果的副反应产物，提取后液体需要中和PH，其后期处理较为繁琐[3]，所以在溶剂提取法中最适宜和应用最广泛的是热水提取法，热水有成本低、来源广等优势，所以作为最优的溶媒介质。
下文的溶剂提取法主要探究热水提取法的有关事项。
热水提取法因为其简单的操作和实验设备简易的优点，是国内外提取多糖最常用的方法，但提取效率和纯度偏低。
在这个方法中，研究表明提取温度是影响提取率的最大因素，其中影响程度大小排列为提取温度>提取时间>提取次数>料液比[4]，根据查阅资料整理如下探究不同条件下热水回流法对提取率的影响，从而发现热水回流法提取枸杞多糖最适条件为下文序号1的条件。
详见表2-1。
表2-1 热水回流法提取枸杞中多糖的提取参数对比分分析图序号提取方法优化方法提取参数提取率/％10.33[5]1热水回流法单因素，正交温度为90℃，时间为2.5h，料液比为1：25，提取3次5.4[6]2热水回流法正交实验PH为1.5，温度为80℃，提取1.5h，提取2次，料液比为1：605.53[7]3热水回流法单因素，正交温度100℃，浸提4次，时间5h，料液比1：404热水回流法提取两次，每次3h 5.17[8]3.04[9]5热水回流法提取温度为80℃，提取时间为2h 6热水回流法单因素，正交提取温度为90℃，2.96[10]提取时间为4h，料液比为1：10，提取3次2.1.2 酶解提取法酶解法提取是在溶剂提取法之上加入合适的酶，利用酶的高度专一和高效的特点，分解或降解组成细胞壁的纤维素，果胶，蛋白质等物质，破坏枸杞细胞的细胞壁，这样，细胞里的多糖就会被释放，这样多糖提取量也就得到了增加，提取率也会升高。
正交实验法优化超声-微波协同提取枸杞中总黄酮的工艺研究
正交实验法优化超声-微波协同提取枸杞中总黄酮的工艺研究王琳琳;尚冀宁;徐丽娟【摘要】采用超声-微波协同提取技术对枸杞中总黄酮进行快速提取.在单因素实验的基础上,结合正交实验优化提取条件,以总黄酮提取率为指标,得出超声-微波协同提取枸杞中总黄酮的最佳提取工艺.结果显示,最佳提取条件为:提取功率300 W,提取温度50℃,乙醇浓度60％vol,料液比1:20,提取时间20 min,在此条件下的提取率为1.98％.并在最佳条件下比较乙醇回流法、超声波提取法、微波提取法和超声-微波协同提取法总黄酮的提取率,结果显示,超声-微波协同提取法提取率最高.【期刊名称】《酿酒科技》【年(卷),期】2019(000)004【总页数】5页(P17-21)【关键词】枸杞;总黄酮;超声-微波协同提取;紫外-可见分光光度【作者】王琳琳;尚冀宁;徐丽娟【作者单位】银川能源学院石油化工系,宁夏银川750100;银川能源学院石油化工系,宁夏银川750100;银川能源学院石油化工系,宁夏银川750100【正文语种】中文【中图分类】TS261.2;TS261.7枸杞是宁夏地区名贵中药材和重要经济作物，具有滋肝补肾、益精明目的功效[1]。
枸杞一直被广泛应用于调节免疫力、预防和降低心脑血管疾病发病率、保护肝脏、抗衰老等领域[2]。
枸杞的化学成分主要为枸杞多糖、甜菜碱、色素、维生素和黄酮类化合物等活性成分[3-4]。
其中，枸杞中的黄酮类化合物具有止咳、平喘、祛痰等功效[5-6]，并且具有降低胆固醇、扩张血管、增强心脏收缩能力、减少心脏搏动次数和清除身体自由基等作用，从而引起了国内外的广泛关注[7-10]。
目前对黄酮类化合物的提取方法最主要为溶剂回流提取法[11-12]、超声波提取法[13-16]和微波提取法[17-19]。
而超声-微波协同提取法提取枸杞中的总黄酮目前尚未报道。
超声-微波协同提取法是在超声波提取和微波提取基础上发展的一种新型提取方法，它兼顾超声波和微波的优点，同时又弥补各自的不足，提取过程中利用超声波产生的强烈空化效应和微波的高选择性等作用，可使植物细胞中的有效成分快速进入溶剂，提高有效成分的提取率，有效缩短提取时间，并且避免高温对活性成分的破坏，因此超声-微波协同提取技术被广泛应用于提取植物中的生物碱、多糖、黄酮类等生物活性物质[20-23]。
超声波辅助提取枸杞多糖工艺优化
超声波辅助提取枸杞多糖工艺优化摘要：为了探索优化超声波辅助提取格尔木产枸杞（Lycium barbarum L.）多糖的最佳工艺条件，以枸杞多糖得率为指标，用单因素试验和正交试验L9（34）对料液比、提取时间、提取温度和超声波功率4个因素进行考察，确定超声波辅助提取枸杞多糖的最佳工艺，并对结果进行验证。
结果表明，超声波辅助提取枸杞多糖的最佳工艺条件为提取温度50 ℃、提取时间10 min、料液比1∶20（m/V，g∶mL）、超声波功率50 W，在该条件下，格尔木产枸杞中多糖得率为3.006%。
关键词：枸杞（Lycium barbarum L.）多糖；超声波辅助提取法；得率枸杞（Lycium barbarum L.）作为一味传统常用的中药，临床使用历史久远。
枸杞的主要活性成分枸杞多糖日益得到重视[1，2]。
现代医学表明，枸杞多糖有较强的免疫活性，是有效的免疫增强剂，在细胞免疫和体液免疫中具有重要作用，并以此为基础发挥枸杞多糖的多种功能，对机体细胞起到保护作用[3，4]。
枸杞多糖的药理作用和无不良反应展示了其在新药及功能食品研究上具有广阔的前景[5]。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 原料与试剂枸杞产自青海省格尔木市大格勒乡，甲醇（分析纯）购自天津市大茂化学试剂厂，无水葡萄糖（分析纯）购自山东省莱阳市化工实验厂，无水乙醇（分析纯）和三氯甲烷（分析纯）购自天津市北联精细化学品开发有限公司，苯酚（分析纯）购自北京化工厂。
1.1.2 仪器与设备FA2104S型电子天平购自上海精密科学仪器有限公司，LG10-2.4A型高速离心机购自北京医用离心机厂，DZX-6090B型真空干燥箱购自上海福玛实验设备有限公司，DL201-2型电热恒温干燥箱购自天津市实验仪器厂，KH-250DB型数控超声波清洗仪购自昆山禾创超声仪器有限公司，RZ-3000型旋转蒸发仪购自上海亚荣生化仪器厂，722S型分光光度计购自上海分析仪器厂。
枸杞多糖提取工艺
浸泡提取法、超声波提取法、微波提取法提取枸杞粗多糖:超声波提取多糖:用电子天平称取经预处理后的枸杞，置超声波清洗仪中，4 0 ℃恒温超声波提取1 h ，脱脂棉过滤，重复提取3 次，弃去残渣，合并滤液，浓缩，离心(3000r/min，3 0 m i n ) ，弃去残渣，上清液为多糖溶液。
微波提取枸杞多糖:用电子天平称取经预处理后的枸杞，置于微波炉中加热提取2 0 m i n ，脱脂棉过滤，重复提取3 次，弃去残渣，合并滤液，浓缩，离心(3000r/min，30min)，弃去残渣，上清液为多糖溶液。
浸泡提多糖:用电子天平称取经预处理后的枸杞，浸泡3 h ，然后用90℃的水浴提取1.5h，用脱脂棉过滤，重复提取3 次，弃去残渣，合并滤液，浓缩，离心(3000r/min，3 0 m i n ) ，弃去残渣，上清液为多糖溶液。
西南科技大学: 严成严夏超声波辅助复合酶法提取枸杞多糖工艺研究枸杞多糖提取工艺流程:枸杞粉末→乙醇脱脂→超声波辅助复合酶浸提→沸水浴灭酶→离心→Sevage法除蛋白→浓缩→冷冻干燥→枸杞多糖粗品黄河三角洲京博化工研究院有限公司山东京博控股股份有限公司王杉杉马韵升姚刚刘圣鹏虞凤慧魏征枸杞多糖提取工艺优化研究枸杞多糖热水浸提法工艺流程:枸杞→烘干、粉碎→氯仿- 甲醇回流脱脂→热水浸提→抽滤→减压浓缩→无水乙醇沉淀4h→95%乙醇洗涤→丙酮洗涤→干燥→粗多糖枸杞多糖热水浸提法最佳工艺研究:用L9(34)正交试验研究温度、浸提次数( 每次4h)和料液比对枸杞多糖纯度与得率的影响, 以确定热水浸提法的最佳工艺 , 每个试验重复三次。
对正交试验所得的最佳提取工艺进行验证性试验。
四川理工学院酿酒生物技术及应用四川省重点实验室熊俐黄治国罗惠波卫春会微波辅助提取枸杞中总多糖的工艺研究提取枸杞多糖工艺流程：枸杞真空冷冻干燥→粉碎→超声波耦合（石油醚+氯仿）提取色素→提取液浓缩→残渣→乙醇提取黄酮（微波）→提取黄酮后的残渣→微波水（提）→真空浓缩提取液→醇沉（80%工业乙醇和5%氯化钠水溶液）→真空干燥→Sevage 法脱蛋白→真空干燥→枸杞总多糖兰州理工大学石油化工学院史高峰李娜陈学福李刚刚响应曲面法优化黑果枸杞多糖的超声提取工艺工艺流程预处理：取适量干燥至恒重的黑果枸杞样品，粉碎过60目筛备用→粗多糖的提取：准确称取样品3.0 g，按不同的液固比加入蒸馏水搅拌均匀，设定超声参数，离心、抽滤得到滤液，提取2次，合并提取液→脱蛋白：提取液经减压浓缩后，采用合理的方法脱除蛋白质→醇沉：缓慢加入5倍体积的95%乙醇，冷藏过夜，抽滤后得到沉淀。
微波辅助提取枸杞多糖的工艺优化及其抗氧化性研究_邱志敏
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molarity of Trolox molarity of Sample
1.2.6 抗氧化实验
1.2.6.1 枸杞多糖在植物油贮藏期间的抗氧化效果
采用Schaal烘箱法[14]，称取20g若干份大豆油，一份作
为空白，其余分别加入枸杞多糖和BHA 2g，搅拌均
匀后置于（60±0.5）℃恒温培养箱中强化保存，每隔24h
定吸光度As，以蒸馏水代替试样为空白对照A0，蒸馏
水代替DPPH溶液为样品对照Ax，每个试样作三个平
行样，取其平均值。清除自由基活性的计算公式：
P（%）=（A0-
As-Ax）×100% A0
1.2.5.2 ORAC值的测定 配制样液、各缓冲溶液与
标准溶液[13]，加20μL样品、空白、Trolox标准或200μL
料液比对多糖提取率的影响，确定各因子的影响效
果和适宜范围。单因素实验设计表见表1。
表1 微波辅助提取单因素实验设计
Table 1 Single factor experiment design of microwave-assisted
extraction
因素
水平
其他条件
微波功率（W） 200，300，400，500，600
Science and Technology of Food Industry
工艺技术
微波辅助提取枸杞多糖的 工艺优化及其抗氧化性研究
邱志敏，芮汉明* （华南理工大学轻工与食品学院，广东广州 510640）
摘 要：利用响应面法优化枸杞多糖的微波辅助水提取工艺，得到最佳提取工艺为：微波功率300W，微波时间1.8min， 液 料 比26∶1，枸 杞 粗 多 糖 得 率 可 以 达 到 9.57%（w/w）。 在 此 工 艺 条 件 下 ，微 波 提 取 枸 杞 多 糖 的 DPPH·清 除 率 比 BHA低5% 左 右 （0.1mg/mL浓 度 除 外 ），但 ORAC值 及 抗 油 脂 酸 败 能 力 略 高 于 BHA，总 体 来 说 抗 氧 化 活 性 与 水 提 多 糖 相 近 。 关键词：微波辅助提取，枸杞多糖，得率，抗氧化活性
微波法提取枸杞多糖工艺研究
参考文献 ［１］林华．话说枸杞多糖．中国食品，２００１，１５：７． ［２］王航宇，刘金荣，但建明，等．新疆枸杞多糖的超声波提
取及含量的测定．中药材，２００２，２５（１）：４２－４３． ［３］倪慧，何爱华．新疆枸杞多糖的提取及含量测定．中成药，
１９９３，１５（１）：３９－４０． ［４］付志红，谢明勇，聂少平．微波技术用于车前子多糖的提
（２ ）微波法提取枸杞多糖精密称取干枸杞５ｇ，剪 碎，置于烧杯中，加入一定量的蒸馏水和一定量的碱液， 置于微波炉中调整ｐＨ值、微波功率、微波处理时间、水 料比进行提取。提取后用滤布过滤入２００ｍｌ容量瓶。用蒸 馏水洗涤滤渣，合并滤液，定容。待冷却至室温后，吸取 ５ｍｌ提取液，加入５倍体积９５％食用酒精，静置１６ｈ沉淀， 将醇沉液离心分离（３０００ｒ／ｍｉｎ，１０ｍｉｎ）。所得沉淀用 无水乙醇、丙酮、乙醚多次洗涤，得粗枸杞多糖。
由表１和表２极差及方差分析可知，影响枸杞多糖提 取率的各因素主次关系为：提取液ｐ Ｈ 值＞ 微波处理时
间＞微波功率＞料液比。由方差分析表可知，对于提取时 ｐＨ值和提取时间，Ｐ＜０．０１，说明提取时ｐＨ值和提取时 间在ａ＝０．０１的水平上存在极显著的差异。对于微波功率 与料液比，Ｐ＜０．０５，说明微波功率与料液比在ａ＝０．０５水 平上存在显著差异。最优条件为ｐＨ８，提取时间２ｍｉｎ， 微波功率４５０ｗ，料液比１∶１０，即Ｂ３Ｃ１Ｄ２Ａ２。取３份枸杞 样品以最优条件提取枸杞多糖，测得枸杞多糖提取率平 均值为１０．４９％。
由图２可知，随着微波处理时间的延长，多糖提取 率先上升，达到一定值后，出现了下降，可能是由于处
９
８
７
６
５
０
１
２
３
微波处理时间（ｍｉｎ）
图 ２ 提取时间对提取率的影响
正交分析法优化枸杞多糖提取工艺本科生
正交分析法优化枸杞多糖提取工艺本科生枸杞多糖是一种具有很多生物活性的多糖类物质，对于提取工艺的优化可以采用正交分析法。
下面我们将以本科生1200字以上的篇幅介绍如何使用正交分析法来优化枸杞多糖的提取工艺。
首先，正交分析法可以用来确定影响枸杞多糖提取的主要因素及其水平。
我们可以选择提取温度、提取时间、料液比、pH值和酶解时间作为影响因素，每个因素选择3个不同水平进行实验设计。
然后，我们需要进行实验设计。
根据正交分析法的原则，我们需要选择正交表进行实验设计。
正交表是一种根据实验结果分别计算变异和主要效应得到的多表面回归模型，可以用来评估因素对响应值的影响程度。
在本次实验中，我们选择4因素3水平的正交表L9进行实验设计。
接下来，我们进行实验数据的收集。
将正交表中的9个试验条件依次进行实验，每个试验记录下枸杞多糖的提取率。
然后，我们进行实验数据的处理。
根据实验结果，我们可以计算出每个因素在每个水平下的平均提取率。
然后，根据正交表的计算公式，可以得到每个因素在总体中的影响程度，以及不同水平之间的差异。
最后，根据实验数据的处理结果，我们可以得到枸杞多糖提取工艺的最佳优化条件。
根据正交分析的计算结果，我们可以知道哪些因素对提取率的影响更大，从而确定最佳的提取条件。
比如，如果实验数据显示提取温度在不同水平下的影响程度最大，那么我们可以选择温度作为优化的关键因素，进一步选择合适的水平来提高提取率。
总结来说，使用正交分析法可以帮助我们确定枸杞多糖提取工艺的影响因素及其水平，并通过实验设计和数据处理得到最佳的提取条件。
这种方法可以减少试验数量和试验时间，提高提取效率，对于本科生的科研项目有一定的指导意义。
枸杞多糖的提取工艺研究
枸杞多糖的提取工艺研究[摘要]枸杞为茄科植物枸杞的干燥成熟果实，主产于河北与宁夏，是一种食药两用植物，味甘、性平、入甘、肾经，具有多种药理作用和生物功能。
枸杞多糖是枸杞中的主要活性成分之一。
其中有关枸杞多糖的化学、药理与临床研究十分瞩目，已有不少研究报道枸杞多糖具有增强免疫力、抗癌、防衰老、增强造血功能、防止遗传损伤、抑制肿瘤生长和细胞突变等作用。
鉴于枸杞多糖具有多种药理作用和生理功能，引起了人们的广泛关注。
本试验研究超声辅助提取法在枸杞多糖提取中的应用，采用正交实验的方法筛选出提取枸杞多糖的最佳提取条件。
当加水量为20倍，提取时间为40min，提取温度为80℃，超声功率为250W 时枸杞多糖得率最高，可达到3.06%。
[关键词]枸杞多糖；超声辅助提取；正交实验多糖（Polysaccharide）又称多聚糖，由是由十个以上的单糖基通过普键连接而成的一类结构复杂的大分子化合物。
多糖类一般不溶于水，无甜味，不能形成结晶，无还原性和变旋现象。
多糖可以水解，最终水解得到单糖。
枸杞多糖是枸杞的有效成分之一，经研究发现，枸杞多糖既是保健功能因子，又是一种非特异性免疫增强剂，具有调节免疫功能、降血糖、抗疲劳、抗衰老、抗肿瘤、增加造血功能、防止遗传损伤等作用。
本实验采用正交试验方法研究超声辅助提取法在枸杞多糖提取中的应用，并筛选出提取的最佳工艺条件。
1 实验材料与仪器2实验步骤与方法2.1 多糖含量标准曲线的绘制：采用H2SO4苯酚法对其加以改良。
精密称取无水葡萄糖标准品25.0mg，置于25ml容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，配成1mg/ml的储备液，分别精密吸取储备0、0.5，1.0，1.5，2.0，2.5ml，置25ml 容量瓶中，加5%苯酚溶液1.0ml，摇匀，用移液管迅速垂直滴加浓硫酸各5.0ml，再用蒸馏水稀释至刻度，沸水浴中煮沸15min；冷却后用分光光度计在490nm波长处测定其吸光度值；以试样糖含量C（mg/ml）为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程。
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第27卷第1期 宁夏大学学报(自然科学版)2006年3月 Vol.27No.1 Journal of Ningxia University(Natural Science Edition)Mar.2006文章编号:025322328(2006)0120072203正交试验研究枸杞多糖的微波辅助提取张自萍, 黄文波, 王玉炯(宁夏大学生物技术重点实验室,宁夏银川 750021)摘 要:以枸杞多糖相对含量为考察指标,采用正交试验法考察微波火力、提取时间及提取温度对枸杞多糖提取效率的影响,并与常规热水回流提取法进行了比较.结果表明,微波辅助提取的最佳条件为提取温度120℃,微波火力为3,在此条件下提取2次,每次24min.与常规提取法相比,微波辅助提取技术具有提取时间短、提取率高等优点.关键词:微波辅助提取;枸杞多糖;正交试验分类号:(中图)R284.2 文献标志码:A 宁夏枸杞子是茄科植物宁夏枸杞(L yci um barbarum L.)的成熟果实,具有滋补肝肾、益精明目之功效,现代临床广泛用于调节免疫功能、降血脂、降血糖、保肝、抗肿瘤及抗衰老等[1],一般认为其药理作用与主要生物活性成分枸杞多糖(L yci um barbarum Polysaccharides,LB P)密切相关[2-3].现有枸杞多糖的提取工艺多为传统的热水浸提法或有机溶剂(乙醚、乙醇、石油醚等)脱脂后热水浸提法[4],这些常规方法中溶剂用量大、耗时长且提取率低.为提高宁夏枸杞子的经济效益,提高枸杞子中有效成分的提取率,寻找快速而有效的枸杞多糖提取方法是宁夏枸杞产业化发展的一个重要研究课题.微波辅助提取技术是近年来发展起来的一种新方法,具有快速、高效、安全、节能等优点,已被用于一些植物成分的提取[5].有关枸杞多糖微波辅助提取的研究尚未见报道,本文首次报道了微波辅助提取技术在枸杞多糖提取中的应用,并采用正交试验优化了枸杞多糖的微波辅助提取条件.1 仪器、试剂及样品1.1 仪器UV22102PC型紫外可见分光光度计(上海尤尼柯仪器有限公司),M E23000型微波萃取仪(上海屹尧分析仪器有限公司),PB3032E电子天平(M ET TL ER2TOL EDO仪器公司),恒温水浴锅(北京长源实验设备厂),电热恒温鼓风干燥箱(上海佳胜实验设备有限公司),索氏提取器.1.2 试剂及样品宁夏枸杞子采自道地产区宁夏中宁县,于2003年秋季采摘并晒干,实验时于60℃烘干至恒重,再用研钵研碎.葡萄糖标准品购自中国药品生物制品检定所,其余试剂均为分析纯.2 实验方法与结果2.1 加热回流法提取枸杞多糖精确称取研碎的枸杞子0.200g,置于索氏提取器中,以φ=95%的乙醇溶液脱脂2次,每次2.5h,直至溶液无色.脱脂后的残渣挥干溶剂后,用15mLφ=80%的乙醇溶液加热回流提取1h,过滤,以去除单糖及一些苷类.在过滤后的残渣中加入蒸馏水15mL,于90℃水浴中加热回流提取2次,每次3h,过滤后合并滤液.将合并后的滤液移入50mL 容量瓶中,加水至刻度线,即为待测枸杞粗多糖溶液.2.2 微波辅助提取正交试验根据前期摸索实验得知在固体质量与液体体积配比固定的前提下,影响微波辅助提取的主要因素有微波火力、微波加热时间及微波提取温度.因此,本实验采用三因素三水平正交试验设计L9(34),考察上述3个因素对枸杞多糖提取效率的影响,实验因素水平如表1所示.收稿日期:2005203223基金项目:宁夏国际合作基金资助项目;宁夏自然科学基金资助项目(B0092004);宁夏大学自然科学基金资助项目作者简介:张自萍(19702),女,副教授,博士,研究天然产物及质量评价分析.表1 正交试验因素水平表水平因素火力提取时间/min提取温度/℃138602616903924120 注:1个火力相当于微波加热功率100W. 实验步骤为精确称取研碎的枸杞子0.200g,置于索氏提取器中,以φ=95%的乙醇水浴回流脱脂2次,每次2.5h.残渣挥干溶剂后,置于回流装置中,加入φ=80%的乙醇15mL,水浴回流1h,过滤,除去单糖及一些苷类.过滤后的残渣根据正交试验设计进行微波辅助提取得待测液.2.3 2.3.1 标准曲线的绘制[6] 精密称取于105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品50.0mg,加入50mL容量瓶中,用水溶解至刻度.分别精密移取该溶液1.0,2.0, 3.0,4.0,5.0mL于50mL容量瓶中,加水稀释至刻度,然后各取1.0mL于10mL比色管中,分别加入w=5%的苯酚溶液1.0mL,摇匀后加入5.0mL浓硫酸(加入浓硫酸时,将移液管口悬于试管口,使浓硫酸垂直冲入液面),立即摇匀,在沸水浴中加热10min,再用冰水冷却至室温.根据预实验在400～550nm进行波长扫描,发现本实验条件下485nm处有最大吸收,故选择测定波长为485nm.以蒸馏水为空白参比,在485nm处测吸光度值A.以吸光度值为横坐标,浓度为纵坐标,绘制标准曲线,得线性方程c=0.0979A-0.0001,相关系数r=0.9986.将1mL1.0mg/mL的葡萄糖对照品溶液定容至25mL,取该溶液0.5mL于10mL比色管中,再加入已知多糖含量的微波辅助提取供试品液0.5mL,按2.3.1中方法显色,测定吸光度值,测得其平均回收率为96.46%,RSD=1.09%(n=5).2.3.2 样品含量的测定 精密吸取待测液1.0mL,置于10mL比色管中,按2.3.1中方法显色,测定A 值,按下式计算多糖含量.多糖含量=cD fw×100,式中c为样品溶液的葡萄糖质量浓度(mg/mL),D 为样品溶液的稀释倍数,f=3.17为换算因素[7],w 为样品质量(mg).2.3.3 加热回流和微波辅助提取所得枸杞多糖含量的测定 由2.1中加热回流法所得枸杞多糖的平均含量为5.170%,RSD=0.98%(n=5).按L9(34)正交试验设计,采用微波辅助提取所得枸杞多糖含量的测定结果如表2所示.两种提取方法所得实验结果的比较如表4所示.表2 微波辅助提取L9(34)正交试验方案及结果实验号火力萃取时间/min提取温度/℃微波加热时间/s多糖含量/% 11(3)1(8)1(60)190 3.184 21(3)2(16)2(90)468 4.968 31(3)3(24)3(120)1082 6.574 42(6)1(8)2(90)252 5.205 52(6)2(16)3(120)515 6.291 62(6)3(24)1(60)208 3.370 73(9)1(8)3(120)265 4.995 83(9)2(16)1(60)103 3.390 93(9)3(24)2(90)291 5.003 T114.72613.38412.865T214.86614.64915.176T313.38814.94714.939 T=42.980T1/3 4.909 4.461 4.288T2/3 4.955 4.883 5.059T3/3 4.463 4.982 4.980表3 方差分析结果变异来源离均差平方和自由度均方F P 火力0.53020.265 2.524<0.05提取时间0.26820.134 1.276<0.05温度10.8912 5.44651.8673<0.01误差0.20920.105总变异11.8988 注:F0.05(2,2)=19,F0.01(2,2)=99;3为差异性显著.表4 两种提取方法所得枸杞多糖含量的测定结果(n=5)含量/%RSD/%热水回流法 5.1700.98微波辅助提取法 6.5740.943 讨论由正交试验结果可知,在火力为3,提取温度为120℃的条件下微波辅助提取24min,提取效果最好.由表3可知,在微波辅助提取过程中,温度对提取率的影响显著,温度越高提取率越高.同时,由表2可知,在火力为3,于120℃提取24min的最佳条件下,其所对应的微波实际加热时间也最长(1082s).其原因主要是由于设定的微波火力越小,温度越高,微波实际辐照的时间越长,因此提取率就越高;而微波火力越大达到相同的温度时,微波实际辐照的时间就越短,因此提取率就较低.由此可知,在实验过程中上述3个因素是紧密联系的,为达到最佳的提取条件,必须综合考虑确定最优工艺参数.由表4可知,与传统方法相比,在微波辅助提取的最佳组合条件下,枸杞多糖的含量明显提高(由传统方37 第1期 张自萍等:正交试验研究枸杞多糖的微波辅助提取法的5.170%提高到6.574%).同时,微波辅助提取可极大地缩短反应时间(由传统回流方法的6h缩短到48min),说明微波辅助提取能显著提高枸杞多糖的提取效率.本实验旨在以枸杞粗多糖的相对含量为考察指标比较微波辅助提取法和传统提取法,而不精确测定枸杞多糖的实际含量,因此对2种方法所提取的多糖没有进一步进行醇沉精制纯化.对实际所测的枸杞样品也没有测定其实际换算因子,而是采用文献报道的枸杞换算因子来比较2种方法所得枸杞多糖的相对含量.再者,枸杞多糖中含有多种杂多糖,仅以葡萄糖为标准测定结果必然存在一定误差,但这并不影响2种方法的比较.另外,本实验所用枸杞子为农户秋季采收果,可能由于采收季节、产地等因素使测定结果相对偏低,但也不会影响2种提取方法的比较.然而,如果实验的目的是为了获得不同产地、不同季节枸杞子中多糖的实际含量,则必须进行多糖的提纯及换算因子的精确计算.4 结语与传统提取法相比,微波辅助提取可快速、高效地提取枸杞多糖.由于微波辅助提取技术具有快速、高效、节能等优点,因此在中药现代化研究中越来越引起人们的重视.尽管该技术在中草药提取方面的应用大多仍局限于实验室中,但其在工业化提取植物有效成分方面有着广阔的应用前景.参考文献:[1] 王金章,王秀娟.枸杞子的化学成分和药理研究概况[J].天津药学,1999,11(3):4215.[2] 方建国,丁水平,田庚元.枸杞多糖药理作用与临床应用[J].医药导报,2004,23(7):4842485.[3] 曲红,王德山.枸杞多糖的药理及临床研究概况[J].山东医药工业,2002,21(4):36237.[4] 白寿宁.宁夏枸杞研究:上册[M].银川:宁夏人民出版社,1999.[5] 马长雨,杨悦武,郭治昕.微波萃取在中药提取和分析中的应用[J].中草药,2004,35(11):附7210.[6] 倪慧,何爱华.新疆枸杞多糖提取及含量测定[J].中成药,1993,15(1):39240.[7] 常新全,丁丽霞.中药活性成分分析手册:下册[M].北京:学苑出版社,2002.Study on Microw ave2Assisted Extraction of L ycium B a rba r umPolysaccharides by Orthogonal T estZhan g Zi pi ng, H uang W enbo, W ang Yuj iong(Key Laboratory of Biotechnology,Ningxia University,Y inchuan750021,China)Abstract:To st udy microwave2assisted extractio n(MA E)of L yci um barbarum polysaccharide(LB P)f rom L yci um barbarum L,t he content of LB P was served as indicating index,t he ext raction conditions were optimized by ort hogonal test to investigate t he key factors,such as extraction temperat ure,microwave power,and ext raction duration.Result s showed t hat t he optimal condition was extracting twice under t he condition of120℃,microwave pared wit h conventional water extraction, MA E is less time2consuming,higher ext ract yield,and p romises to be a rapid and efficient ext raction met hod for ext racting LBP from L yci um barbarum L.K ey w ords:microwave2assisted ext raction;L yci um barbarum polysaccharides;ort hogonal test(责任编辑、校对 李 琼) 47宁夏大学学报(自然科学版) 第27卷 。