细胞培养常用液体配置
各种培养液的配方
各种培养液的配方培养液是一种专门设计用于细胞培养的营养基质，它提供了细胞所需的营养物质和生长因子，以支持细胞的生长和增殖。
不同类型的细胞和细胞培养的特定目的可能需要不同的培养液配方。
以下是几种常见的细胞培养液配方：1. DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）：配方：- Glucose: 4.5g/L- L-Glutamine: 4mM- Sodium Bicarbonate: 3.7g/L- Sodium Pyruvate: 110mg/L- Phenol Red: 0.1%备注：DMEM是一种基础培养液，广泛用于多种哺乳动物细胞的培养，提供了细胞所需的基本营养物质，如糖、氨基酸和盐类。
2. RPMI 1640（Roswell Park Memorial Institute Medium）：配方：- Glucose: 2g/L- L-Glutamine: 2mM- Sodium Bicarbonate: 2g/L-HEPES:10mM- Phenol Red: 0.1%备注：RPMI 1640是一种适用于多种动物和人类细胞培养的基础培养液，具有类似DMEM的配方，但Glucose和L-Glutamine的浓度较低，适合一些特定的细胞类型。
3. MEM（Minimum Essential Medium）：配方：- Glucose: 1g/L- L-Glutamine: 2mM- Sodium Bicarbonate: 2.2g/L-HEPES:15mM- Phenol Red: 0.1%备注：MEM也是一种通用基础培养液，适用于多种细胞类型的培养，其配方与DMEM相似，但含有更低浓度的糖。
4. F-12（Ham's F-12 Nutrient Mixture）：配方：- Glucose: 3.15g/L- L-Glutamine: 2mM- Sodium Bicarbonate: 1.17g/L- Phenol Red: 0.03%备注：F-12是一种含有丰富营养物质的培养液，特别适用于培养多种优质的细胞系。
实验室常用液体配制标准操作规程
常用液体配制标准操作规程（SOP）国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心二〇〇八年九月修订目录一、细菌培养系统（责任人：郑子峥）二、DNA操作系统（责任人：罗文新、陈瑛炜）三、蛋白质操作系统（责任人：李少伟、顾颖、潘晖榕）四、细胞培养相关（责任人：程通、张涛）五、单克隆抗体制备系统（责任人：陈毅歆、）六、EIA系统（责任人：葛胜祥、熊君辉）一、细菌培养系统1、LB培养基:每1000mL加分析纯NaCl 10g ，蛋白胨10g，酵母粉5g，用ddH2O 配制，再用10M NaOH调pH至7.4(1000mL一般加450ul)，高压蒸汽灭菌15min冷却后使用。
2、固体培养基:LB培养基中加入琼脂至1.5％，高压蒸汽灭菌15min后使用。
3、10%(g/V) 氨苄青霉素钠（Ap）：注射用氨苄青霉素钠（粉末）50g溶于500ml无菌去离子水中，溶解后分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。
注：如果购买的氨苄青霉素粉末不是无菌包装的，溶解后需用0.22滤膜过滤除菌后再分装。
4、2.5%(g/V)硫酸卡那霉素（Kan）注射用硫酸卡那霉素（液体）通常是2ml/支，内含0.5g卡那霉素。
取25支药剂（50ml），加入450ml无菌去离子水中，分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。
注：如果购买的卡那霉素是粉末状的非无菌包装，溶解后需用0.22滤膜过滤除菌后再分装。
5、细菌培养：配制相应抗性培养基，每试管倒入3~4ml培养基（卡那霉素抗性培养采用标记试管），无菌牙签挑取单克隆至试管中，于37℃，220rpm 培养。
剩余培养基做好抗性和日期标记，置于4℃保存。
6、化学感受态制备：1）原理:：细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态，这时的菌细胞称为感受态细胞（Competent cell）。
实验室常用液体配制标准操作规程
v1.0 可编辑可修改常用液体配制标准操作规程（SOP）国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心二〇〇八年九月修订目录一、细菌培养系统（责任人：郑子峥）二、DNA操作系统（责任人：罗文新、陈瑛炜）三、蛋白质操作系统（责任人：李少伟、顾颖、潘晖榕）四、细胞培养相关（责任人：程通、张涛）五、单克隆抗体制备系统（责任人：陈毅歆、）六、EIA系统（责任人：葛胜祥、熊君辉）一、细菌培养系统1、LB培养基:每1000mL加分析纯NaCl 10g ，蛋白胨 10g，酵母粉5g，用ddH2O 配制，再用10M NaOH调pH至(1000mL一般加450ul)，高压蒸汽灭菌15min冷却后使用。
2、固体培养基:LB培养基中加入琼脂至％，高压蒸汽灭菌15min后使用。
3、10%(g/V) 氨苄青霉素钠（Ap）：注射用氨苄青霉素钠（粉末）50g溶于500ml无菌去离子水中，溶解后分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。
注：如果购买的氨苄青霉素粉末不是无菌包装的，溶解后需用滤膜过滤除菌后再分装。
4、%(g/V)硫酸卡那霉素（Kan）注射用硫酸卡那霉素（液体）通常是2ml/支，内含卡那霉素。
取25支药剂（50ml），加入450ml无菌去离子水中，分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。
注：如果购买的卡那霉素是粉末状的非无菌包装，溶解后需用滤膜过滤除菌后再分装。
5、细菌培养：配制相应抗性培养基，每试管倒入3~4ml培养基（卡那霉素抗性培养采用标记试管），无菌牙签挑取单克隆至试管中，于37℃，220rpm 培养。
剩余培养基做好抗性和日期标记，置于4℃保存。
6、化学感受态制备：1）原理:：细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态，这时的菌细胞称为感受态细胞（Competent cell）。
03细胞培养 第三章 培养用液
PBS（Phosphate-Buffered Sallines）
KCl KH2PO4 NaCl 0.20g 0.20g 8.00g
Na2HPO4·7H2O
2.16g
DPBS（Dulbecco’s Phosphate-Buffered Sallines）标准型
CaCl2(anhyd.)(无水氯化钙) KCl KH2PO4 MgCl2· 2O 6H NaCl Na2HPO4· 2O 7H 0.10g 0.20g 0.20g 0.10g 8.00g 2.16g
血清中的沉淀物
絮状物：血清中的脂蛋白变性及解冻后血 清中纤维蛋白造成，这些絮状物不会影响 血清本身的质量。可用离心3000rpm, 5 分钟去除，也可不用处理 显微镜下“小黑点”：经过热处理过的血 清，沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀 物在显微镜下观察象“小黑点”，常误认 为血清受污染。一般情况下，此小黑点不 会影响细胞生长，但如果怀疑血清质量， 则应立即停止使用，更换另一批号的血清
D-Hanks’ 平衡盐溶液(D-Hanks Balanced Salt Solutions, D-HBSS)
KCl KH2PO4 NaCl NaCO3 Na2HPO4
0.40g 0.06g 8.00g 0.35g 0.048g
D-Glucose
Phenol Red
1.00g
0.01g
第二节
培养基
：
精氨酸、胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、 苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、组氨酸、酪氨酸和缬氨酸 （均为Ｌ型）。
2.碳水化合物：葡萄糖 3.维生素：叶酸、肌醇、烟酰胺、吡哆醛、核黄素、
硫胺素等。
4.无机离子与微量元素：
培养用液的配制
实验一培养用液的配制、除菌与分装【实验目的】1. 掌握常见培养用液的配制方法。
2. 掌握常用的灭菌方法。
3. 了解每种培养用液的作用。
【实验原理】常用细胞培养用液包括磷酸盐平衡盐溶液（Phosphate Buffered Saline，PBS）、液体培养基、胰蛋白酶（Trypsin）和EDTA溶液。
PBS用于清洗细胞、配制胰蛋白酶和EDTA。
培养基含有细胞生长需要的各种营养元素，使用时通常还需填加血清和抗生素。
鱼类细胞培养的培养基常用种类是MEM 和L-15；用于动物的一般是DMEM和RPMI-1640。
胰蛋白酶可将贴壁的细胞从培养瓶壁上消化下来，通常使用浓度为0.25%或0.125%。
EDTA 用于清洗细胞表面，螯合Ca2+等二价离子，使细胞易于为胰蛋白酶消化。
细胞培养用的试剂必需是无菌的，PBS 和EDTA 可以采用高压灭菌，而培养基和胰蛋白酶溶液含生物活性物质，配制好后通过过滤除菌。
【试剂、材料与仪器】试剂：NaCl ；KCl；Na2HPO4；KH2PO4；EDTA；胰蛋白酶；HEPES；碳酸氢钠；MEM或PRMI-1640 培养基干粉；GPS材料：三蒸水，蒸馏水瓶，精密天平，药匙，称量纸，烧杯（250 mL、1000 mL），玻棒，精密pH 试纸（6.8-8.0），容量瓶（250 mL、1000 mL），一次性注射器，一次性过滤器，普镊，酒精灯，打火机，医用酒精，消毒纱布，酒精喷壶，已高压灭菌试剂瓶（500 mL、250 mL、100 mL），记号笔，标签纸，橡胶手套，移液管（5 mL、10 mL），封口膜仪器：超净工作台，加液枪，4℃冰箱【实验分组】实验分组进行，每组4人，每班20人，共分5组。
第1组配制PBS并高压灭菌，第2组配制胰蛋白酶溶液并过滤除菌和分装，第3组配制EDTA溶液并分装高压灭菌，第4组配制培养基，第5组过滤除菌培养基并分装。
每个实验小组需准备试剂有：胰酶50 mL；EDTA 50 mL；培养基90 mL（使用前加入10 mL血清）。
实验室常用液体配制标准操作规程
常用液体配制标准操作规程（SOP）国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心二〇〇八年九月修订目录一、细菌培养系统（责任人：郑子峥）二、DNA操作系统（责任人：罗文新、陈瑛炜）三、蛋白质操作系统（责任人：李少伟、顾颖、潘晖榕）四、细胞培养相关（责任人：程通、张涛）五、单克隆抗体制备系统（责任人：陈毅歆、）六、EIA系统（责任人：葛胜祥、熊君辉）一、细菌培养系统1、LB培养基:每1000mL加分析纯NaCl 10g ，蛋白胨 10g，酵母粉5g，用ddH2O 配制，再用10M NaOH调pH至(1000mL一般加450ul)，高压蒸汽灭菌15min冷却后使用。
2、固体培养基:LB培养基中加入琼脂至％，高压蒸汽灭菌15min后使用。
3、10%(g/V) 氨苄青霉素钠（Ap）：注射用氨苄青霉素钠（粉末）50g溶于500ml无菌去离子水中，溶解后分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。
注：如果购买的氨苄青霉素粉末不是无菌包装的，溶解后需用滤膜过滤除菌后再分装。
4、%(g/V)硫酸卡那霉素（Kan）注射用硫酸卡那霉素（液体）通常是2ml/支，内含卡那霉素。
取25支药剂（50ml），加入450ml无菌去离子水中，分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。
注：如果购买的卡那霉素是粉末状的非无菌包装，溶解后需用滤膜过滤除菌后再分装。
5、细菌培养：配制相应抗性培养基，每试管倒入3~4ml培养基（卡那霉素抗性培养采用标记试管），无菌牙签挑取单克隆至试管中，于37℃，220rpm 培养。
剩余培养基做好抗性和日期标记，置于4℃保存。
6、化学感受态制备：1）原理:：细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态，这时的菌细胞称为感受态细胞（Competent cell）。
将细菌置于0℃，低渗CaCl2 溶液中时，菌细胞壁和膜的通透性增强，菌体膨胀成球型。
液体配制及实验方法
液体配制及实验方法（一）液体配制1.完全培养基DMEM+10%FBS+1%双抗+（1%HAPS液）若放置时间长于2周加1%谷氨酰胺2.PBS1000ml去离子水中溶解8.0gNaCl、0.2gKCl、2.89gNa2HPO4、0.26gNaH2PO43.胰酶用之前调节PH值至7.64.CaCl2将0.165gCaCl2粉末溶于10ml去离子水中配制成50X的溶液每5ml胶原酶中加入100μl CaCl2溶液（终浓度3μmol/L）用于激活胶原酶的活性5.双抗终浓度：青霉素100万U/100ml 链霉素100万U/100ml青霉素0.6μg为1个单位链霉素1.2195μg为一个单位称取青、链霉素粉末各0.6、1.2195g溶于10mlPBS中再定容至100ml6.两性霉素B100mg两性霉素B粉末溶于40mlPBS中，制成浓度为2.5mg/ml(1000X)的浓缩液每100ml完全培养基中加入100μl 浓缩液，稀释为终浓度2.5μg/ml7.细胞冻存液20%DMSO+80%FBS(1mlDMSO+4mlFBS)8STZ溶液STZ溶于柠檬酸和柠檬酸三钠的盐溶液中称取柠檬酸0.105g溶于5mlPBS 称取柠檬酸三钠0.145g溶于5mlPBS中混合两者制成10毫升的溶解液. 再将100mgSTZ粉末溶于该溶解液中制成浓度1%的STZ溶液，调节PH值至4.5，4°避光保存，由于STZ水溶性不稳定，溶液最好在半小时内使用完毕.9油红O原液：油红O 0.6g溶于异丙醇（99% ）100ml 。
稀释液：油红O 原液20ml ，蒸馏水20ml ，过滤后使用。
10茜素红称取0.1g茜素红粉溶于100mlPBS，调节PH值到7.2，过滤后使用.11成骨诱导液配方：DMEM(H)+10%FBS+10mmol/Lβ-甘油磷酸钠+0.1μmol/L地塞米松+50mg/LVitC1）β-甘油磷酸钠分子量：216 溶于水10mmol/L=216mg/100ml称取216mgβ-甘油磷酸钠粉末溶于100ml低糖完全培养基中2）地塞米松分子量：392.5 在无水乙醇中的溶解度为1mg/ml.0.1μmo l/L=0.04mg/L将100mg地塞米松溶于100ml无水乙醇中制成25000X的浓缩液每100ml低糖完全培养基中加入4μl地塞米松浓缩液3）VitC分子量176.1 溶于水称取5mgVitC粉末溶于100ml低糖完全培养基中12成脂诱导液配方：DMEM(L)+10%FBS+10μmol/L地塞米松+200μmol/L吲哚美辛+0.5mmol/L3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（IBMX）+10mg/L胰岛素1）每100ml高糖完全培养基中400μl地塞米松浓缩液2）吲哚美辛分子量：357.79 在无水乙醇中的溶解度为1g/50ml PH 7.4以下0.2mmol/L=7.16mg/100ml称取720mg吲哚美辛粉末溶于50ml无水乙醇制成200X的浓缩液每100ml高糖完全培养基中加入500μl吲哚美辛浓缩液3）IBMX分子量：222.25 在DMSO中的溶解度为1M(222.25mg/ml)0.5mmol/L=1.1mg/100ml将100mgIBMX粉末溶于1mlDMSO 制成100mg/ml(9100X)浓缩液每100ml高糖完全培养基中加入11μlIBMX浓缩液4）Insulin浓缩液浓度为10mg/ml(1000X)每100ml高糖完全培养基中加入Insulin浓缩液100μl.溶解粉末时均需先用少量液体溶解，再定容。
细胞培养相关常用液体配制标准SOP操作规程样本
细胞培养相关常用液体配制标准SOP操作规程样本（一）胰酶的配制：（浓度为1‰，1L）1、认真清洗配制容器，自来水20遍，去离子水5遍，超纯水润洗3遍。
2、称取牛胰蛋白酶1.0g；EDTA 2 g；3、用超纯水溶解；4、磁力搅拌器搅拌至胰酶完全溶解，溶液变得澄清；5、超纯水定容至1L；6、不锈钢滤器加0.22um滤纸两张高温灭菌后，在超净工作台过滤；7、在血清瓶中加入少量滤好的胰酶，置于细胞培养箱中检测是否染菌，其余置于4℃待用；8、过滤后洗净滤器再次灭菌，避免残留的胰酶降解蛋白。
（二）DMEM配制：1、所需试剂及材料：试剂：DMEM干粉（GIBCO 10L）、超纯水（Milli-Q）、Na2CO3 （Sigma）材料：10L玻璃瓶、500ml盐水瓶（灭菌）、0.22um滤膜、滤器（事先放好两层滤膜并高压灭菌）、磁力搅拌器大号搅拌子蠕动泵胶塞2、操作步骤：(1)10L玻璃瓶洗涤，自来水20遍，去离子水5遍，超纯水润洗3遍。
(2)在10L玻璃瓶中加入超纯水9.5L，将DMEM干粉倒入，在磁力搅拌器上搅拌溶解。
(3)按照3.7g/L 加入Na2CO3 。
(4)调节pH值至7.2~7.4。
(5)过滤分装，并注明名称及配制日期。
此过程注意无菌操作！(6)最后用血清瓶取10ml左右置于细胞培养箱中检测是否染菌。
(7)清洗滤器，10L玻璃瓶，软管，将所有实验器具归位。
（三）1640、MEM培养基的配制同上，Na2CO3的用量见包装说明（四）细胞间100×双抗（青霉素、链霉素）的配制青霉素及链霉素配制的终浓度为1万单位/毫升。
配制的步骤以400ml为例：1.认真清洗配制容器，自来水20遍，去离子水5遍，超纯水润洗3遍。
2.准备5瓶青霉素（80万单位/瓶）、4瓶链霉素（100万单位/瓶）。
3.加入1-2ml细胞间专用PBS进入青霉素、链霉素的瓶子内，浸泡后吹吸数次至全部溶解，溶解后的液体吸入配制容器内。
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【精华】细胞培养常用液体配置细胞冻存！/bbs/post/view?bid=66&id=1075571&sty=1&tpg=1&age=0求助：1%的胰蛋白酶如何配置成0。
25%的？急！/bbs/post/view?bid=66&id=1601091&sty=1&tpg=1&age=0求助海马神经元的培养基配方/bbs/post/view?bid=66&id=1876036&sty=1&tpg=1&age=0【求助】活性碳-葡聚糖苷处理过的胎牛血清问题/bbs/post/view?bid=66&id=1566352&sty=1&tpg=1&age=0谁知道加了小牛血清的1640还能过滤吗？/bbs/post/view?bid=66&id=1936251&sty=1&tpg=1&age=0求助！/bbs/post/view?bid=66&id=1730359&sty=1&tpg=1&age=0小急！乳鼠心肌细胞培养时配胰蛋白酶没调PH值/bbs/post/view?bid=66&id=1949765&sty=1&tpg=1&age=0配ＤＭＥＭ时直接添加粉剂ＮＡＨＣＯ３可以吗？/bbs/post/view?bid=66&id=1949670&sty=1&tpg=1&age=0冻存液怎么配置？/bbs/post/view?bid=66&id=1633674&sty=1&tpg=1&age=0求助乳鼠心肌细胞培养的D-HANKS液配方DMEM液和DMEM/F12液/bbs/post/view?bid=66&id=1888172&sty=1&tpg=1&age=0请教心肌细胞的消化！/bbs/post/view?bid=66&id=1913926&sty=1&tpg=1&age=0求助：急需知道/bbs/post/view?bid=66&id=1941147&sty=1&tpg=1&age=0胞内钙测定/bbs/post/view?bid=66&id=1130119&sty=1&tpg=1&age=0<共享>双抗的配置方法/bbs/post/view?bid=66&id=1933663&sty=1&tpg=1&age=0请教0.1%透明质酸酶的配制/bbs/post/view?bid=66&id=1927260&sty=1&tpg=1&age=0请教高人：关于PBS配方及浓度的问题/bbs/post/view?bid=66&id=1655901&sty=1&tpg=1&age=0【请教】培养基、血清长时间放在37度水浴箱内，还能用吗？/bbs/post/view?bid=66&id=1922789&sty=1&tpg=1&age=0关于1640液的配置/bbs/post/view?bid=66&id=1096940&sty=1&tpg=1&age=0 弱弱地问：EDTA《资源》说明书上关于1640的配置/bbs/post/view?bid=66&id=1906137&sty=1&tpg=1&age=0细胞培养常用液体配制/bbs/post/view?bid=66&id=400040&sty=1&tpg=1&age=0细胞培养用的PBS应该如何处理。
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Buffer如何配制/bbs/post/view?bid=66&id=1842090&sty=1&tpg=2&age=0请教缺氧溶液的配制/bbs/post/view?bid=66&id=1819044&sty=1&tpg=2&age=0EDTA怎么溶不了？急问！/bbs/post/view?bid=66&id=1232295&sty=1&tpg=2&age=0Gln的配制/bbs/post/view?bid=66&id=1819847&sty=1&tpg=2&age=0请问哪里有买Matrigel的？/bbs/post/view?bid=66&id=1818133&sty=1&tpg=2&age=0胚胎干细胞的培养液/bbs/post/view?bid=66&id=1782849&sty=1&tpg=2&age=0菜鸟告急！！！/bbs/post/view?bid=66&id=1000431&sty=1&tpg=2&age=0【紧急求助】关于percoll溶液求助！！！/bbs/post/view?bid=66&id=1741360&sty=1&tpg=2&age=0冻存细胞的时候，用的二甲基亚砜是什么纯度的啊？Microlab？ 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